JPS63254980A - 凍結乾燥培養物の生活力増大法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は改良された微生物培養物の製造に、特に大気温
度又は僅かに低温において長期間にわたりその生活力を
保持する乳酸生産バクテリヤ［乳酸菌（ｌａｃｔｉｃ　
ｂａｃｔｅｒｉａ）の乾燥した生活培養物の製造に関す
る。

食品工業は、風味／舌ざわりの発現及び保存のために生
活乳酸菌を種々の食品生成物中に導入する。従って簡単
に使用でき、価格が低く且つ維持の容易である保存乳酸
菌培養物に対しては実質的な需要がある。これらのバク
テリヤの保存は通常深冷凍結又は凍結乾燥によって達成
される。液体′窒素中での深冷凍結は効果的で、比較的
費用がかからない。しかしながら凍結した培養物の貯蔵
及び輸送は、ドライアイスを含む断熱された運搬車を用
いるような培養物を凍結状態に保つ必要性のために複雑
である。凍結乾燥した培養物はホイル包装物中に包装し
、常温又は僅かに低温で貯蔵することができるが、凍結
乾燥中に生活力（細胞数）が減少し、更に貯蔵中に細胞
数が低下する。

凍結乾燥した培養物中の細胞数を高く維持するために、
典を的には培養濃厚物に凍結保護剤（ｃｒ−ｙｏｐｒｏ
ｔｅＬａｎｔ）及び安定剤が凍結前に添加される。

例えばバルデズ（Ｖ　ａｌｄｅｚ）らはクリオバイオロ
ジ−（ＣｒｙｏｂｉｏｌｏｇＹ）　、２０−１５６０〜
５６６　（１９８３）において、凍結乾燥中の乳酸菌に
対する安定剤としてシスティン、アスパラギン及びグル
タミン酸ナトリウムを用いることを議論している。

これらの化合物を凍結乾燥前に液体培養濃厚物に添加し
た。更に特にこの参考文献は次の溶液の微生物濃厚物へ
の添加を報告している： ａ）１０％脱脂乳固体＋０．０４％Ｌ−システィンｂ）
２０％脱脂乳固体＋０．０４％Ｌ−システィンＣ）蒸留
水 溶液のｐＨをＮａＯＨ又はＨＣＩで６．８〜７．０に調
節し、懸濁液をアンプル中に入れ、凍結乾燥した。これ
らの研究は、Ｌ−システィンが凍結乾燥中の凍結保護性
を示すということを示唆しているものの、貯蔵安定性に
及ぼす有利な効果について何も言及していない。

本発明は、乳酸生産バクテリヤを安定化量のシスチンと
一緒に食品級増量剤と組合せることを含んでなる凍結乾
燥した乳酸生産バクテリヤの生活力を増大させる、即ち
生活細胞数を保持する方法を包含する。

シス７（７Ｈ５ＣＨ２ＣＨ（ＮＨｚ）ＣＯＯＨは、シス
チンＨＯＯＣＣＨ（Ｎ　Ｈ２）　ＣＨａ　Ｓ　Ｓ　ＣＨ
ｚＣＨ（ＮＨりＣ０ＯＨの分解に由来しうるアミノ酸で
ある。システィンは凍結乾燥前に乳酸菌の溶液に導入し
た時ある凍結保護効果を有することが示されたけれど、
凍結乾燥したバクテリヤと組合せた時に安定化効果を付
与することは報告されていない。凍結乾燥したバクテリ
ヤは普通その培養濃厚物の容量を増量し或いはその生活
力（ＣＦＵ　／　ｍｇ）を所望の値まで希釈する目的に
役立つ増量剤と組合せられる。適当な増量剤はラクトー
ス、カゼイン、脱脂乳固体、スィート・ホエイ（ｓｗｅ
ｅｔｗｈｅｙ）　、マルトデキストリン、キサンタンゴ
ム、又はこれらの組合せ物を含む。本発明の実施におい
て、シスチンは凍結乾燥した乳酸菌に、それを増量剤と
混合する前又は後に添加することができ、或いは２つの
混合物を乳酸菌調製物に添加することができる。好適な
具体例では、シスチンを加熱し、次いで増量剤と混合す
る、或いは増量剤とシスチンを予備混合し、次いで加熱
する。続いて得られた混合物を凍結乾燥した乳酸菌と一
緒にする。

そのような組合せは、典を的にはホバート（Ｈｏｂ−ａ
ｒｔ）混合機のような適当な乾燥成分混合装置を用いて
シスチン−増量剤混合物をバクテリヤと混合することに
よって達成される。好適な具体例において典型的には増
量剤／シスチン組合せ物を５〜２０分間６０〜１００℃
の温度に加熱する。随意の加熱時間は温度を１００℃へ
上昇するにつれて短くなる傾向があり、その逆も真実で
ある。

凍結乾燥後の生活力が本方法によって高められる乳酸生
産バクテリヤは、乳酸連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐ−ｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ　１ａｃｔｉｓ）、Ｓ、クレモリス（ｃｒｅｍ
ｏｒｉｓ）、Ｓ、ジアセチラクチス（ｄｉａｃｅｔｙｌ
ａｃｔｉｓ）、Ｓ、テルモフィルス（ｔｈａｒｍｓｐｈ
ｉ　１ｕｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃ
ｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、Ｌ。

アシドフィルス（ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｌ、ヘル
ベチクス（ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、Ｌ、ビフィズス（
ｂｉｆ　１ｄｕｓ）、Ｌ。

カセイ（ｃａｓｅｉ）、Ｌ、ラクチス（ｌａｃｔｉｓ）
、Ｌ、プランタルム（ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、Ｌ、デル
プルエラキイ（ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、１．−７ｚ
ルメンツム（ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ペジコックスーセ
レビシｘ　（Ｐ　ｅｄｉｃｏｃｃｕｓ　ｃｅｒｅｖｉ−
ｓｉａｅ）、Ｐ、アシジラクチシ（ａｃｉｄｉｌａｃｔ
ｉｃｉ）及びリューコノストク・メセンテロイドス（Ｌ
　ｅｕｃｏｎｏ−ｓｔｏｃ　ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅ
ｓ）、ビフィドバクテリウム・ビスフィズム（Ｂ　ｉｆ
ｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｉｆｉｄｕｍ）、Ｂ。

テルモフィルム（ｔｈｅｒｍｏｐｈｉ　ｌｕｍ）を含む
。

シスチン（Ｄ、Ｌ又はＤＬのいずれか）の量は厳密でな
いけれど、増量剤及び安定化される乳酸菌の組合せ物を
少くとも約１．５％（ｗ　／　ｗ　）使用することが好
ましく、最大量的５％（ｗ　／　ｗ　）の増量剤が典を
である。乳酸菌と増量剤の重量比は典型的には約１：ｌ
”ｌ：１００である。

次の実施例は本発明の実施法を更に例示する。

実施例　Ｉ 粉砕した凍結乾燥ラクトバチルス・アシドフィルスの試
料を、脱脂乳固体との乾式混合物中に混合すべく秤り取
った。１つの培養物試料を脱脂乳固体４５ｇと均質に混
合した。

Ｌ−シスチン［シグマ・ケミカル社（Ｓ　ｉｇｍａＣｈ
ｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）］　　１　、６９を、脱脂乳固
体４３゜５ｇに添加し、１００℃に８分間加熱し、室温
まで冷却した。次いで粉末培養物５．０９を添加し且つ
混合して、１０％（ｗ　／　ｗ　）を含む均質な配合物
を得た。この混合物を、ナス力（Ｎ　ａｓｋａ）ポリプ
ロピレン・バッグを用いて空気中で包装し、安定性の評
価のために４℃及び２２℃で貯蔵した。

窒素でのフラッシング或いは上部空間の真空のいずれも
使用しなかった。

生活細胞の数は、混合物を無菌ペプトン水（０゜１％Ｗ
／Ｖ）で連続的に希釈し、そしてディフコ万能ツウィー
ン［Ｄ　１ｆｃｏ　Ａ　１１　Ｐ　ｕｒｐｏｓｅ　Ｔｗ
ｅｅｎ（ＡＰＴ）］媒体上に表面接種することによって
決定した。１０％二酸化炭素雰囲気中において３７℃で
４８時間培養した後、コロニー形成単位／ｇ（ＣＦＵ／
ｇ）を数えた。この場合３０〜３００のコロニーを含む
プレートだけを数えた。

培養物の、脱脂乳固体（ＮＦＭＳ）及びＬ−シスチンで
処理した脱脂乳固体との乾燥混合物に対する貯蔵結果を
第１表に例示する。４℃、１５日間の貯蔵で１．８倍の
改善、また２２℃で７日後に２．５倍の改善が明白であ
る。

第１表 ４℃貯蔵 ０　　２．１Ｘ１０”　　　　　　　　　２．ｌＸ１０
”　　　　　−７１，９Ｘｌｏ”　　　　９０．５　　
　１．９Ｘ１０”　　　　１００１５　　４．９Ｘ１０
”　　　　２３．２　　　８．８Ｘ１０”　　　　　４
１．９２２℃貯蔵 ０　　２、ｌＸ１０”　　　　　　　　　２．１Ｘ１０
”　　　　　−７２，４ｘｌＯ’°　　　１１．４　　
　６．０ＸＩＯ’６　　　２３．６１０　　５．３Ｘ　
１０’　　　　　　２．５　　　７．４Ｘ　ｔｏ”　　
　　　　　３．５実施例　■ ビフィドバクテリウム・テルモフィルムの凍結乾燥した
種を用いて実施例Ｉの方法を行った。生活細胞を数える
際に、ラクトバシリ（Ｌ　ａｃｔｏｂａｃ−ｉｌｌｉ）
　Ｍ　ＲＳ媒体を用いた。嫌気性雰囲気中３７℃で４８
時間後にコロニーを数えた。貯蔵結果を第■表に示す。

Ｌ−シスチン処理の結果として、４℃で１５日間貯蔵後
に４倍の改善が、また２２℃で１５日後に３．５倍の改
善が観察された。この実験の結果を第■表に示す。

第　　■　　表 ４℃貯蔵 ０　７．０Ｘ１０”　　　　　　　　７．０ＸＩＯ”　
　　　　−７３，２Ｘ１０１１　　　　　　　４６　　
　　　９．８ＸｌＯ”　　　　　　　　１００１０　１
．０ＸｌＯ”　　　　　１４　　６．ｌＸ１０１’　　
　　　８７１５　６．６ｘｌＯ”　　　　　９　　２．
５ｘｌＯ”　　　　　３６２２℃貯蔵 ＮＦＭＳ混合物　　　　ＮＦＭＳ＋１〜シスチン混合物
見　　ＣＦＵ／ＧＭ　　　咀叉五　　ＣＦ　Ｕ／ＧＭ　
　　咀叉莢０　　７．０Ｘ１０１１７．０ＸＩＯ”　　
　　　　　−７４，６Ｘ１０′。６．６　　　９．８Ｘ
ＩＯ”　　　　　　　１４１０’　　　７．６ｘｌＯ”
　　　　　　１１．０　　　１．２ｘｌＯ”　　　　　
　１７１５　　２．８Ｘ　ｔｏ”　　　　　　　４．０
　　　９．８Ｘ　ｔｏ”　　　　　　　１４実施例　■ ３種の粉砕した凍結乾燥培養物［ペジコックス・アシジ
ラクチシ、ラクトバチルス・クルバラス（ｃｕｒｖａｔ
ｕｓ）　及びストレプトコックス・フェシウム（Ｓ　ｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃｉｕｍ）を、ｌ：１
：１の生活力比を与えるように比活性に基づいて秤量し
、次いで脱脂乳固体と共に乾燥混合物に混合した。

各秤量した培養物試料を脱脂乳固体と均質に混合して約
６Ｘ１０’″′の合計ＣＦ　Ｕ／ｙを得た。

加熱したＬ−シスチン及び脱脂乳固体を混合し、培養物
を実施例Ｉに記述した方法に従って配合した。生活細胞
を数えるのに、ラクトバシリＭＲ５媒体を用いた。ｌＯ
％二酸化炭素雰囲気中３７℃で４８時間培養した後、コ
ロニーを数えた。

３種の培養物の、脱脂乳固体及び脱脂乳固体キし一シス
チンでの乾燥混合物に対する貯蔵安定性の結果を第■表
に例示する。この表から、Ｌ−シスチン処理の結果とし
て、４℃で６０日間貯蔵後に１．８倍の改善が、また２
２℃で６０日後に２゜５倍の改善が観察された。

第■表 ４℃貯蔵 ０　６．１ＯＸｌＯＩ０６．１３Ｘ１０１’　　　　−
３０３，６５Ｘ１０１０６０　　５．４０ＸｌＯ”　　
　　８９６０　２．８９Ｘ１０′。４７　　５．１８Ｘ
ｌＯ”　　　　８５２２℃貯蔵 ０　　６．１０ＸｌＯ”　　　　　　　　　６．１３Ｘ
１０”　　　　　−３０４，１０ＸｌＯ”　　　　　６
７　　　４．９５ＸＩＯ’。　　　　８１６０　　１．
７６ｘｌＯ１０２９４，４０ｘｌＯＩ０７２本発明の主
なる特徴および態様は以下のとおりである。

１、凍結乾燥した乳酸生産バクテリヤを安定化量のシス
チンと一緒に食品級の増量剤と組合せることを特徴とす
る該凍結乾燥した乳酸生産バクテリヤ培養濃厚物の製菓
力を増大させる方法。

２、増量剤がラクトース、脱脂乳固体、カゼイン、スィ
ート・ホエイ（ｓｗｅｅｔ　ｔｈｅｙ）　、マルトデキ
ストリン、キサンタンガム又はこれらの組合せ物である
上記第１項記載の方法。

３、シスチンを乳酸生産バクテリヤと組合せる前にシス
チンを加熱する上記第１項記載の方法。

４、シスチンを増量剤と組合せ、次いで加熱する上記第
３項記載の方法。

５、増量剤／シスチン組合せ物を５〜２０分間６０〜１
００℃の温度に加熱する上記第４項記載の方法。

６、シスチンの量が乳酸生産バクテリヤ及び増量剤の組
合せに基づいて少くとも約１．５％（ｗ／Ｗ）である上
記第１項記載の方法。

７、乳酸生産バクテリヤが、乳酸連鎖球菌（Ｓｔｒ−ｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｃｔｉｓ）、Ｓ、タレモリス
（ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、Ｓ、ジアセチラクチス（ｄｉａ
ｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ）、Ｓ、テルモフィルス ブルガリクス（Ｌ　ａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｂｕｌ
ｇａｒｉｃｕｓ）、Ｌ。

アシドフィルス（ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｌ．ヘル
ベチクス（ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、Ｌ．ビフィズス（
ｂｉｆ　ｉｄｕｓ）、Ｌ。

カセイ（ｃａｓｅｉ）、Ｌ．ラクチス（ｌａｃｔｉｓ）
、Ｌ．プランタルム（ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、Ｌ．デル
ブルエツキイ（ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、Ｌ．フェル
メンツム（ｆｅｒａ＋ｅｎｔｕｍ）、ペジコックス・セ
レビシェ（　Ｐ　ｅｄｉｃｏｃｃｕｓ　ｃｅｒｅｖｉ−
ｓｉａｅ）、Ｐ．アシジラクチシ（ａｃｉｄｉ　ｌａｃ
ｔｉｃｉ）及びリューコノストク・メセンテロイドス（
　Ｌ　ｅｕｃｏｎｏ−ｓｔｏｃ　＋＋＋ｅｓｅｎｔｅｒ
ｏｉｄｅｓ）、ビフイドＩくクテリウム・ビスフィズム
（Ｂ　ｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｉｆｉｄｕ＋
ｍ）、Ｂ。

テルモフィルム（ｔｈｅｒ＋ｍｏｐｈｉ　ｌｕｍ）の群
から選択される上記第１項記載の方法。

８、乳酸生産バクテリヤの生活細胞、シスチン及び増量
剤を含むことを特徴とする組成物。

９、シスチンが増量剤及び乳酸生産バクテリヤの組合せ
の約１．５〜５％（　ｗ　／　ｗ　）の量で存在し、ま
たバクテリヤと増量剤の重量比が約１：１〜１：１００
である上記第８項記載の組成物。

１０、　ａ）　Ｌ−シスチンを脱脂乳固体と１：１〜１
：１００の重量比で一緒にし； ｂ）工程ａ）で生成した組合せ物を約５〜２０分間約６
０〜１００℃の温度まで加熱し；そして Ｃ）工程ｂ）で加熱した組合せ物を、培養濃厚物と脱脂
乳固体の重量比が１＝１−ｌ：１００であり、そしてシ
スチンが脱脂乳固体と培養濃厚物の組合せの１．５〜５
％（　ｗ　／　ｗ　）の量で存在する割合で培養濃厚物
と一緒にする、 工程を含んでなる乳酸生産バクテリヤ培養濃厚物の生活
力を増大させる方法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、凍結乾燥した乳酸生産バクテリヤを安定化量のシス
   チンと一緒に食品級の増量剤と組合せることを特徴とす
   る該凍結乾燥した乳酸生産バクテリヤ培養濃厚物の製菓
   力を増大させる方法。 ２、乳酸生産バクテリヤの生活細胞、シスチン及び増量
   剤を含むことを特徴とする組成物。 ３、ａ）Ｌ−シスチンを脱脂乳固体と１：１〜１：１０
   ０の重量比で一緒にし； ｂ）工程ａ）で生成した組合せ物を約５〜２０分間約６
   ０〜１００℃の温度まで加熱し；そして ｃ）工程ｂ）で加熱した組合せ物を、培養濃厚物と脱脂
   乳固体の重量比が１：１〜１：１００であり、そしてシ
   スチンが脱脂乳固体と培養濃厚物の組合せの１．５〜５
   ％（ｗ／ｗ）の量で存在する割合で培養濃厚物と一緒に
   する、 工程を含んでなる乳酸生産バクテリヤ培養濃厚物の生活
   力を増大させる方法。