JPS63245406A - 固相ペプチド合成用樹脂 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は固相ペプチド合成のための樹脂支持体及びこの
樹脂支持体を合成する方法に関する。

ペプチドの合成は一般にアミノ酸のカルボキシル基と別
のアミノ酸のアミノ基の縮合（又はカップリング）によ
って行われてペプチド結合を形成する。段階的な伸長で
個々のアミノ酸の縮合を繰返すことによジ、又はある場
合には二つの予め作られたペプチドフラグメント間の縮
合（フラグメント縮合）により一連のものを構成できる
。両型式の縮合において、この反応に関与しないアミン
基とカルボキシル基は保護基でブロックされ又は保護さ
れねばならない。更に、またアミノ酸の反応性側鎖官能
基も保護する必要がある。

一連の縮合反応による大きなペプチドの成功した合成は
各化学段階に対して殆ど定量の回収を得なけれはならな
い。この要件はＲ，Ｂ、　Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄにより
開発された固相ペプチド合成により満足されている。こ
の合成において、ペプチド鎖は通常には不溶性ポリスチ
レン樹脂にベンジル型カルボキシル保護基によって付着
される。第一のアミノ酸はベンジルエステル結合を介し
てこの樹脂に付着され、そのアミン位置で脱保護化しそ
して保護されたα−アミノ基を保有する第二のアミノ酸
と結合する。この保護基はトリフルオロ酢酸で除去され
、塩基で遊離アミンを形成するように中和されそして第
二〇Ｎ−保護アミノ酸に結合する。これらの段階を多く
繰返した後に、酸処理により樹脂から完成したペプチド
が開裂される。この不溶性樹脂支持体全使用して、樹脂
を濾別することセしてそれに副生物と過剰の出発物質を
含まないように洗浄することによって各カップリング反
応の生成物を分離することが可能である。Ｂａｒａｎ７
　ａＧ及びＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ　ａ　Ｒ，Ｂ、　ａ　
＠Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　を第２巻”アカデミツク
プレス、ニューヨーク。

１９７９年、第１−２８４頁：及びＫｅｍｐ　−Ｖ６１
１ａｃＣｊＯ＃″’　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ″第１０３０−１０３２頁（１９８０年）。

固相ペプチド合成において、このペプチド−樹脂結合は
合成工程にとって１要である。この結合は代表的には濃
酸の使用を伴うアミノブロッキング基の脱保護に対して
安定でなければならない。

この結合が脱保護条件に安定でない場合には、ペプチド
が樹脂から早まって開裂されよう。更に、この結合は好
ましくは回収されるペプチドを損傷しない条件下で、ペ
プチドの合成の完成時に容易に切れなけれはならない。

ペプチド−樹脂結合を改良するために多くのアプローチ
がなされた。メリフィールドはアミン基を脱保護する・
ために必要な強酸条件により安定であるフェニルアセト
アミドメチル結合を開発した。

（Ｓｔｅｗａｒｔ　、　Ｊ、Ｍ、及びＹｏｕｎｇ　ｔ　
Ｊ、Ｄ、　５ｏｌｉｄＰｈａＢｅ　Ｐｅｐ　ｔ＋ｊ　ｄ
ｅ　５ｙｎｔｂｅ　Ｓ　ＩＳ　を第２版、　Ｐｉｅｒｃ
ｅＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、＊ロックフォード、イリノ
イ、第１１及び第１２頁及びＧｒｏｓｓ、　Ｅ、及びＭ
ｅ］ｅｎｈｏｆｅｒ　ＩＪ、　　Ｔｈｅ　　Ｐｅｐｔｌ
ｄｅｓ　　ｌ　　ＡｎａｌｙＳＩＳ　　ｒ　　　５ｙｎ
ｔｈｅｓコｓ　　ａＢ１０１０ｇｙａ第２巻、アカデミ
ックグレス、１９８０年、第３−２５０頁）。

何故ならば、ペプチドがより大きくかつ実に複雑になる
ので脱保護しそして開裂するのに必要な酸性条件に安定
性が劣り、研究者はより温和な試剤によって開裂できる
ペプチド樹脂結合を開発した。Ｗａｎ　ｇはジクロロメ
タン中２５％トリフルオｐ酢酸によジ開裂できるｐ−ア
ルコキクベンジルアルコール樹脂を開発した。Ｓｔｅｗ
ａｒｔ　＃　Ｉｄ　＋第１２及び１６頁。

開裂のためより温和な条件を発見する試みの中で、Ｔａ
ｎ　（米国特許第４，５０７，２３０号）は結果の酸性
条件下で主として未プロトン化でかつ求核性のままであ
る適当な弱塩基の使用によって、開裂に使用される強酸
、代表的には無水フッ化水素の酸性度機能を減する方法
を開発した。

前記の参照文献の何れもが酸安定性並びに温和な酸条件
下で容易な開裂の組合わせを与える固相ペプチｒ合成の
ためのペプチド−樹脂結合を開示していない。

Ｊ、Ｍ、　Ｓａｍａｎｅｎ及びＥ、　Ｂｒａｄｅｌｉｓ
は彼等の論文”　Ｔｈｅ　ｐ　−Ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆ
ｚｎｙｌｂｅｎｚｙｌ　Ｇｒｏｕｐ　　ｅ　　ＡＳｅｌ
ｅｃｔｊｖｅｌｙ　　Ｃ１，ｅａｖａｂｌｅ　’Ｃａｒ
ｂｏｘ７１　　ＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇＧｒｏｕｐ　”　
９ｔｈ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｐｅｐｔｉ、ｄｅ　Ｓｙｍ
ｐｏｓｉｕｍ　１ｎＴｒｏｎｔｏ　、　１９８５年６月
２３−２８日、において、溶液相ペプチド合成に使用さ
れるべきカルボキシル保護基として有用であるｐ−メチ
ルスルフィニルベンジル基を開示する。このスルホキシ
ドに換ベンジリックエステル結合はアミノ基金脱保護す
るため使用されるトリフルオロ酢酸条件に対して安定で
おる。スルホキシドがスルフィドに還元される時には、
このエステル基は１アンロツクされ（ｕｎｌｏｃｋｅｄ
）″そして無水トリフルオロ酢酸で開裂可能である。こ
の保護基は固相ペプチド合成に使用することについて開
示されていない。

本出願人は強酸条件に対する安定性及びペプチドを提供
する比較的温和な条件下での容易な開裂の両方を供する
固相ペグチド合成のための樹脂そしてこの樹脂全合成す
る方法を発見した。

樹脂 本発明は固相ペプチド合成のための樹脂及びこの樹脂全
合成する方法を含む。この樹脂は構造（式中Ｒ１は１か
ら２０の炭素原子を有する゛アルキルであり、Ｒ２は水
素、アシル又はカルボキシル末端Ｎ−ブロックドアミノ
酸であり、Ｐはλ合体支持体でありセしてｎはＯから２
０である）を含む。

合成■ 同相ペプチド合成のための樹脂を合成する方法は （１）構造 （式中Ｘはハロダンであシ、ｎは１から２０であジ、Ｒ
１は１から２０の炭素原子を有するアルキルでありセし
てＲは酸保護基である）のエステルをメルカプトベンジ
ルアルコールと反応させて構造 のスルフィドを形成すること、 （２）　　このスルフィドを酸化して構造のスルホキシ
ドを形成すること、 （３）　　このスルホキシげをカルボキシル末端Ｎ−ブ
ロックドアミノ酸Ｒ２でエステル化して構造のエステル
を形成すること、 （４）　　このエステルから酸保護基Ｒを除去して構造 の酸全形成すること、そして （５）　　このスルホキシドを官能化重合体Ｐにアンカ
ーして構造 の樹脂を形成するととを含む。

工程Ｈのニステルハ（ハロメチル）フェニルアルキルカ
ルがン酸をＲ−保護基と反応させることによって容易に
得られる： 合成Ｉを下記に要約する： スルフィド スルホキシド Ｈ Ｈ Ｈ Ｈ Ｈ １合体（Ｐ）にアンカーする Ｈ 合成■ 固相ペプチド合成のための樹脂全合成する方法は （１）　　構造 （式中、Ｘはハロゲノであり、ｎは０から２０であり、
Ｒ１は１から２０の炭素原子を有するアルキルでありそ
してＲは酸保護基である）のエステルをメルカプトドベ
ンジルアルコールと反応させて構造 のスルフィドを形成すること、 （２）　　このスルフィドを酸化して構造のスルホキシ
ドを形成すること、 （３）　　このスルホキシド金酸、エステル又は無水物
でアシル化して構造 （式中、Ｒ３はアシル基である）のエステルを形成する
こと、 （４）　　このエステルから保護基Ｒ全除去して式の酸
を形成すること、 （５）　　このスルホキシド全官能化１合体Ｐへアンカ
ーして式 ％式％ の樹脂全形成すること、 （６）　　アシル基Ｒ３を除去して式 のアルコールを形成すること、そして （７）　　スルホキシドのアルコールをカルボキンル床
端Ｎ−ゾロツクドアミノ酸Ｒ２でエステル化して式 の固相ペプチド合成のための樹脂を形成すること、を含
む。

工程（１）のエステルは（ハロメチル）フェニルアルキ
ルカルボン酸ｉＲ−保膿基と反応させることによって得
られる： ｔル 合成■を下記に袂約する： スルフィド に付宸する ＨＨ 工程（２）及び（３）、酸化及びアシル化を各々逆にし
てもよい。

樹脂 本発明の樹脂は構造 （式中、ｐｆｉ’：Ｍ合体支持体、そしてＲ１は１がら
２０の炭素原子を有するアルキルである）を有する。好
適なアルキルはメチレンである。Ｒ２は水素、アシル又
はカルホキクル末端Ｎ−ブロックドアミノ酸であり、そ
してｎは０がら２０、好ましくは１である。

１合体支持体は多くの重合体、共重合体又はポリアミド
、ポリスルファミド、置換ポリエテレにポリエチレング
リコール、フェノール樹脂、多糖類又はポリスチレンの
ような１合体の組合わせの何れでもよい。この１合体支
持体はまたペプチド合成に使用される溶媒に不溶性かつ
不活性である何れの固体、例えはガラスピーズでもよい
。好適な１合体支持体はスチレン及び約１％のｍ−ジビ
ニルベンゼン又は架橋剤の懸濁共１合により製造された
デルである。この架橋したデルはその乾燥容量の約５か
ら６倍に有機溶媒中で膨潤する。この膨潤は重合体上の
反応位置へ溶媒と反応体が接近することをトしそして１
合体の内部並びに外部表面で反応を許す。

クロロメチルメチルエーテルを使用することに伴なわれ
るクロロメチル化により官能基全重合体に導入できる。

このクロロメチル化架橋ポリスチレンデルを当業者はメ
リーフィールド樹脂と称する。このメリーフィールド樹
脂は更に詳細にロックフォード、イリノイに記載され、
これをここで参照として挿入する。好適な官能基はメＩ
Ｊ　−フィールドの方法により導入できるアミンメチル
である。Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ　、第４３巻、第１４号、１９７８、第
２８４５〜２８５２頁。

好適な樹脂は式 ％式％ （式中、Ｐｌは架橋したポリスチレン樹脂でありそして
Ｒは水素、アシル又はカルボキシル末端Ｎ−ブロックド
アミノ酸である）を有する。

固相ペプチド合成にこの樹脂を使用する。固相ペプチド
合成の方法は米国特許出願５ｅｒｊ−ａ１／に９４６．
５５８に詳細に記載され、これはここに参照として挿入
する。この樹脂にＮ−保護カルボキシル末端アミノ酸全
アンカーすること、アンカーしたアミノ酸を脱保護し、
アミノ酸を中和してアミンに変換し、第二〇Ｎ−保護ア
ミノ酸をアミンにカップルし、脱保護とカップリング工
程を繰返して所望のペプチドを合成し、スルホキノドを
スルフィドに還元しそしてこの樹脂からペプチド全開裂
することによりペプテＶを合成する。

樹゛脂合成Ｉ （式中、Ｒ１は１から２０の炭素原子金有するアルキル
でありセしてｎは０から２０である）の（ハロメチル）
フェニルアルキルカルボン酸を保護Ｒと反応させてエス
テルを形成することにより工程（１）のエステルが容易
に得られる。エステル化（７）　一方法（ｔｉ　（、ハ
ｏ　メーｙ−ル〕フェニルアルキルカルボン酸全塩化チ
オニル又はハロゲン化リンのようなハロゲン供源と反応
させて酸ハロゲン化物全形成することである。この酸ハ
ロビン化物を当業者に公知の任意の酸保護基Ｒ１例えば
２−トリメチル７リルエタノール又は９−フルオレネメ
タノールとピリジン、トリエチルアミン、Ｎ、Ｎ−ジメ
チル−４−アミノピリジン、イミダゾール又はジイソプ
ロピルエチルアミンのような塩基の存在で反応させてエ
ステルを形成する。エステル化の別の方法はカルボン酸
をトリ置換クロロシラン、例えば塩化トリメチルシリル
、塩化トリエチルシリル又は塩化ｔ−ブチルジメチルシ
リルと前記のような塩基の存在で反応させることである
。カルがン酸をエステルに変換する他の方法はここで参
照として挿入するＴ、Ｗ、Ｇｒｅｅｎｅ　ｌ　Ｐｒｏｔ
ｅｃｔｌｖｅＧｒｏｕｐｓ　ｊｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５
ｙｎｔｈｅｓｊｓ　、ウィリー　アンド　リング、１９
８１、第１５２〜１８５頁に見られる。エステルのハロ
メチルのハロゲノは前記の塩基の存在でｐ−メルカプト
ベンジルアルコール又は０−メルカプトベンジルアルコ
ールのようなメルカプトベンジルアルコールで置換され
てスルフィドを形成する。このスルフィドｔＷ化して酸
化の当業者の公知の方法の何れかによりスルホキシド金
形成する。過酸化水素、過酸、ヨードベンゼンジクロリ
ド及び過ヨウ素酸ナトリウムのような酸化化合物を使用
できる。酸化の好適な方法は０から２５°Ｃで塩化メチ
レン中のｍ−クロロ過安息香酸全使用する。このスルホ
キシドをここで参照として挿入するＳｔｅｗａｒｔ他、
同上に記載される方法によりＮ−ブチルオキシカルボニ
ル−Ｌ−フェニルアラニン又はＮ−ブチルオキシ力／ｌ
／　ＺＫニル−０−ベンジル−Ｌ−チロシンのようなカ
ルボキシル床端Ｎ−ブロックドアミノ酸のカルボキシル
基と反応させる。ケイ素を含む酸保護基をテトラアルキ
ルアンモニウムフッ化物又はアルカリ金属フッ化物のよ
うな求核性フッ化物イオンの供源で加水分解することに
よって除去して酸を形成できる。次にスルホキシドの酸
をアミノメチルポリスチレン又はガラスのような官能化
１合体へアンカーして樹脂を形成する。

樹脂金成田 樹脂合成Ｈの最初の三つの工程（例えばスルフィドの酸
化まで）、並びに官能化１合体ｐヘスルホキソドのアン
カーリングそしてスルホキシＶのアルコールのエステル
化は合成１と同一である。

このスルホキシドを無水酢酸又は無水トリフルオロ酢酸
のような無水物、酢酸、トリフルオロ酢酸又は安息香酸
のような酸又は酢酸エチル又は酢酸メチルのようなエス
テルでアシル化する。好適なアシル化剤は無水酢酸であ
る。このアシル化は塩化メチレン、クロロホルム、ベン
ゼン又はトルエンのようなスルホキシドと反応しない溶
媒及び樹脂合成Ｉに前記したような塩基の存在で行なわ
れる。好適な溶媒は塩化メチレンである。

保護基Ｒｉ合成Ｉに記載したように除去する。

更に、Ｒをトリフルオロ酢酸のような強酸で除去できる
。

水酸化物、例えは水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム
又はヒドラジンのような求核性試剤を使用することによ
りアシル基全除去する。好適な求核性試剤はヒドラジン
である。樹脂を膨潤させる溶媒、例えばＮ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）、塩化メチレン、ＴＨＦ、ベ
ンゼン又バドルエンの存在でこのアシル基を除去する。

好適々溶媒はＤＭＦである。

下記の例は例示目的のためのみでありそして何れにして
も本発明ｆｔ限定するつもりはない。

例　　１ 樹脂合成１ 本例はスルホキシド化合物の調裂全例示し、これにカル
ボキシ末端Ｎ−ブロックドアミノ酸（本例においてはＮ
−ブチルオキシ−カルボニル（Ｂｏｃ　）　−Ｌ−フェ
ニルアラニン）を結合させ、そして続いてアミン置換支
持体（本例においてはアミノメチル化ポリスチレン／１
％ジビニルベンゼン）に結合させた。これは固相ペプチ
ド合成に適した支持体を供し、樹脂への結合前に第一の
アミノ酸がスルホキシド部分に結合した。

１、　β−（トリメチルシリル）エテル−パラ−（メル
カプト−４−ヒドロキクメチルフェニル）−メチルフェ
ニルアセテートの調製。

クロロホルム１００勘中の４−　（−ｙ”ロモメテル）
フェニル酢酸２０．０’　２．９　（０，０８７モル）
の懸濁液全窒素雰囲気下に置きそして５分間にわたって
塩化チオニル１２１１１１９．４Ｐ、　０．１６モル）
を加えた。塩化チオニルの添加後に、Ｎ、Ｎ−ジメチル
ホルムアミド０．５ＩＩＬｅｅ一度に加えそして反応混
合物全１．５時間還流させた。室温に冷却後、揮兄物ヲ
減圧下除去して黄色固体を得た。そのＩＨＮＭＲスペク
トルは酸塩化物の５５　：　４５混合物を示しくＸ＝Ｂ
ｒ及びＣＬ　）　；　ＩＨＮＭＲ（δ、　ＣＤＣｔ：５
）７．４５−７．Ｉ　Ｏ（ｍ、４Ｈ’）、４．５５及び
４．４２（シングレット、２Ｈ）及び４．１１（ｓ、２
Ｈ）Ｕｐ−ハロメテルフェニルアセテルクロリトト同定
された。

この黄色固体ｔＮ２雰囲気下で乾燥テトラヒドロフラン
６０紅中浴解しそして０〜５℃の範囲内に冷却した。乾
燥テトラヒドロフラン６５Ｎ中にピリシン８ｍ（７，８
，９、０，１０モル）及び２−トリメチルシリルエタノ
ール１６．４μ（１１，６，９。

０．１０モル）の溶液’に１５分間にわたって加えた。

１時間室温でかきまぜた後に、ピリジニウムヒドロクロ
リドの沈殿を濾過しそして乾燥テトラヒドロフランで洗
浄した。組合わせた濾液を減圧下ストリップしそして塩
化メチレンに俗解した。０．２Ｎ塩化水素酸水溶液と次
に水で各々２回洗浄後に、硫酸マグネシウムで有機相を
乾燥し、濾過しそして減圧下ストリップして黄色油２６
．８６９′ｆｒ、得た。

これはＨＰ−５３０メチルシリコンカラムでガスクロマ
トグラフィーにより分析して（１０Ｘ　Ｏ，５３ｎ、注
入温度−２８０；測定温度−２８０：カラム温度プログ
ラム−分当り１０℃で８０から２８０°Ｃ）、エステル
の混合物（Ｘ−Ｂｒ及びＣｔ　）であることが判り、面
積百分率積分により測定すると９２％の全純度を有した
。粗生成物の”ＨＮＭＲ（δ、　ＣＤＣ２５）　　７．
３８（ｓ　、　４Ｈ）−４，６０及び４．５１　（シン
グレットｅ　２　Ｈ）　１４．３６〜４．１５　（ｍ、
　２Ｈ）　、　３．６８（ｓ　、２Ｈ）。

１．１９−０．９７　（ｍ　、　２　Ｈ）及び０．０８
　（ｓ　。

９Ｈ）によジβ−（トリメチルシリル）エチル−ｐ−ハ
ロメチルフェニルアセテートと同定された。

乾燥テトラヒドロフラン１００成中の前記の粗生成物２
０．口０．９　に０．０６５モｔｖ”）ｔＤ浴液ニ窒素
雰囲気下かつ０℃で乾燥テトラヒドロフラン６０ｍ！；
中の４−（メルカプト）ベンジルアルコール１０．１　
＆　（０，０７２モル）の溶液を加えた。得られた浴液
に１５分間にわたってトリエチルアミン１５Ｍ（１０，
９，９、０，１１モル）を加えた。水浴を取除いた後に
、反応混合物を１時間量ユでかきまぜ、沈殿全濾過しそ
して減圧下溶媒を除去して黄色油２６．５　ｇｅ得た。

Ｗａｔｅｒ　Ｐｒｅｐ　５００　Ａクロマトグラフを使
用し、２０％エチルアセテート／ヘキサンで溶離するシ
リカｒ／Ｉ／のクロマトグラフにかけて透明な無色の油
１４．１９　（４２％全収率）を得た。これは放置する
と結晶化し、融点４１−４２°Ｃ；　”ＨＮＭＲ（δ、
　ＣＤＣｌ３　）　　７．４０−７．１０　（ｍ　、　
８　Ｈ）　、　４．６０　（ｓ　、　２　Ｈ）　、　４
．３０−４．０８（ｍ−２Ｈ）、４．０８（ｓ、２Ｈ）
。

３．５７　＜、　ｓ　、　２　Ｈ）、　２．３５　（ｓ
　、　Ｉ　Ｈ）、　１．１１−０．９０　（、ｍ　、　
２　Ｈ）及び０．０７　（Ｓ　、　９　Ｈ）　；マスス
ペクトル（ｍ／ｅ）３．８８（、ｍ”）、３６０゜３４
５．２８７，２４９（Ｉ　００％）及び７６によりβ−
（トリメチルシリル）エテル−パラ−（メルカプト−４
−ヒドロキシメチルフェニル）−メチルフェニルアセテ
ートと同定された。

２、　β−（トリメチル−シリル）エテル−パラ−（ス
ルフィニル−４−ヒドロキシメチルフェニル）−メチル
フェニルアセテートの調製。

０°Ｃで塩化メチレン２７０Ｍ中の前記からの精製スル
フィド１２．００７　＆　（、０，０３０９モル）の溶
液に２０分間にわたって８６．６％のメタークロ口過安
息香酸６．６６４６　Ｆ　Ｃ５，３０１７。

０．０３０５モル）を徐々に加えた。１時間氷温でかき
まぜた後に、この反応全７℃の冷室へ移しそして２０時
間夜通しかきまぜた。この反応に飽和重炭酸ナトリウム
水浴液１００成を加え、層全分離しそして有機層全飽和
ｌ炭酸ナトリウム１００ｎｔｔ、及び水１００Ｍで洗浄
した。硫酸マグネシウムで乾燥しそして濾過した後に、
減圧下済媒を除去して白色粉末、融点１３２−１３４℃
、１２．５０ｇ（１００％）を得た；　ｌＨＮＭＲ（δ
、　ＣＤＣｌ３　）７．４９−７．２５　（Ａ　Ｂクワ
ルテット、４Ｈ）。

７．２　ｓ　−６，９０（ＡＢクワルテット、４Ｈ）。

４．７０　（ｓ　、　２　Ｈ）　、　４．３１−４．１
２　（ｍ　、　２Ｈ）−４，０口（ブロードｓ　、　２
　Ｈ）　、　３．８３　（ブロードｓ、１Ｈ）ｔ３．５
９（ｓ、２Ｈ）、１．１４−０．９１（ｍ、２Ｈ）、及
び０．０９　＜、　ｓ　＋　９Ｈ）　；マス、ｒ。

ベクトル（ｍ／ｅ）４０５（Ｍ＋Ｈ）、３７７及び２４
９（１００％）によってβ−（トリメチルシリルエテル
）−パラ−（スルフィニル−４−とドロキシメチルフェ
ニル）−メチルフェニルアセテートと同定された。

６、　スルホキシド化合物へ第一のアミノ酸の結合。

塩化メチレン７ＦＩＬ＆’中の前記からのスルホキシド
２．０２　＆　（４，９９７＋１モル）、Ｎ−１，−ブ
チルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニン及びＮ。

Ｎ−ジメチル−４−アミンぎリジン６１．８Ｉｎ９（０
，５１ｍモル）の溶液に室温でかつ窒素雰囲気下７．５
〜の１　ｐ　３−　ジシクロへキシルカルボジイミドの
１．０Ｍ溶液（７，５ｒｎモル）を加えた。１時間後に
、酢酸１．０ａｌｌニー加えそして別に０．５時間この
混合物をかきまぜた。反応混合物を濾過し、飽和重炭酸
ナトリウム水溶液１００Ｎで２回そして０．２Ｎ塩酸溶
液１００ｄで２回洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥し
そして濾過した後に、減圧下塩化メチレンを除去して白
色固体ヲ得て、これを酢酸エチル１ＯＮに溶解し、濾過
しそしてｏｏｃに冷却した。再び濾過後に、酢酸エチル
全滅圧下除去して白色固体３．２６　ｇ（９０％収率）
を得た。

？ニー（Ｄ４．）ＩｄｌＨＮＭＲ（ａ　、　ＣＤＣｔｓ
　）　７．３０−６．８８（ｍ−１３Ｈ）、５．１２　
（ｓ、２Ｈ）、５．０８（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、ＩＨ，ＮＨ
）４．７０−４．４０（ｂｒ　ｍ　、　　ｉ　Ｈ）　ｐ
　　４．３０−４．０５　（ｍ　ｅ　　２　Ｈ）＊４．
００　（ｓ　、　　２　Ｈ）　、　　３．５７　（ｓ　
、　２　Ｈ”）　　。

３−０９（ｄ＋Ｊ＝７Ｈｚ、２Ｈ）−１，４３（ｓｊ９
Ｈ）、１．１３−０．９１　（ｍ、２Ｈ）、及び０．０
９（ｓ、９Ｈ）；−ｒススペクト／ｌ／　（ＦＡＢ　。

ｍ／ｅ　）６５８　（Ｍ＋Ｌｉ　）５５２及び５２４に
ょ９、Ｎ−１−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フェ二／
’７；７＝／（７）（β−トリメチルシリルエチル−ハ
ラ−（スルフィニル−４−ヒドロキシメチルフェニル）
−メチルフェニルアセテ−トコエステルと同定された。

４、　β−トリメチルシリル保護基イオンの除去。

乾燥テトラヒドロフラン１５ｍＪ中の前記からのＢｏｃ
−フェニルアラニンスルホキシド化合物６．０８．９　
（４，７２ｍモル）の溶液に０℃でかつ窒素雰囲気下で
テトラヒドロフラン中のテトラブテルアンモニウムフル
オリドの１．０Ｍ溶液１３．５祷（１３，５ｙ７１モル
）ｔ−加えた。直ちに赤色があったがこれは約５分後に
消失し友。水浴を除去しそして６時間室温で反応物をか
きまぜた。減圧下テトラヒドロフランを除去し、塩化メ
チレンを加え、この有機相を肌２Ｎ塩酸で３回そして水
で６回洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥しそして濾過
した後に、有機相を減圧下除去して白色泡状固体２．５
１．９　（９７％）を得た。ＩＨＮＭＲ（δ。

ＣＤＣｌ３　）　　７．４０−６．８３＋（ｍ−１３Ｈ
）、５．１３（ｓ　、　２　Ｈ）　ｅ　５．０８　（ｂ
ｒ　ｓ　、　Ｉ　Ｈ）、　４．６３−４．４４　（ｂｒ
　ｍ　、　Ｉ　Ｈ）　＋　４．０４　（ｂｒ　ｓ　ａ　
２Ｈ）。

３．５９（ｓ、２Ｈ）、３．００（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ。

２Ｈ）及び１−４３　（ｓ　ｊ９　Ｈ）　ｐ　ＦＡＢ　
マ／（スペクトル（ｍ／ｅ　）５５８（Ｍ＋Ｌｊ、）、
５５２　（Ｍ十Ｈ）、５５１　（Ｍ＋’ｌ　、４９６，
４５２．３０３゜２８７及び１４９によＶ）Ｎ−ｔ−ブ
チルオキ７カルボニルーＬ−フェニルアラニンの〔ハラ
−（ス／ｌ／　７　イ＝　／Ｌ／　−４−ヒドロキシメ
チルフェニルコメチルフェニル酢酸〕エステルと同定さ
れた。

５、樹脂へのＮ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ　−
７ｘ　＝　ルア　ラーンの〔ハラ−（スルフィニルー４
−ヒドロキシメチルフェニル）メチルフェニル酢酸〕エ
ステルの結合。

アミノメチル化ポリスチレン／１％ジビニルベンゼンの
試料０．５０．９　＜、　０．３１　ｒｎ−１ニル）（
ペプチドインターナショナル、０．６２ｒＩＬ当量／９
）を塩化メチレン５成に懸濁させ、次に１０係ジインノ
ロビルエチルアミン／塩化メチレン（ｖ：ｖ）５ｍｔで
２回そして塩化メチレン５　ｍｌで６回洗浄した。

次にこの樹脂に連続して５０：５０（ｖ：ｖ）塩化メチ
レン／Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド５　ｍｌ。

１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１５１■（０，９８
ｒＩＬモル）、Ｂｏｃ　−Ｌ　−Ｐｈｅスルホキシドハ
ンドル２４９〜（０，４５ｍモル）そして次に１．６−
ジインブロピルカルボジイミド０．２０＝（１６（１＋
７．１．２７ｍモル）ヲ加えた。２．５時間振ジまぜの
後に、溶媒を除去しそしてこの樹脂を塩化メチレン５成
で６回そしてメタノール５　ｍｌで３回洗浄した。１５
時間真空下乾燥の後に、樹脂は６６０〜の重さがちりそ
してアミノ酸分析を行なった時に０．４５９　ｍ当量７
ｇのフェニルアラニン負荷を示した。この樹脂の赤外線
分析はスルホキシド基金示す１０３０ｃｍ−１での中強
度帯域と樹脂へのアミド結合金示す１６７０ｃＩｒＬ−
１での張帯域を示した。他の張帯域は１７４０．１７２
０゜１５２０及び１１７０　ｃｍ−１で見られ、これは
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン基に帰属された。

例　　２ 樹脂合成■ 下記の例はスルホキシド化合物の調製及びアミノ置換支
持体（不例においては、アミノメチル化ポリスチレン／
１％ジビニルベンゼン）への結合を例示する。これは固
相ペグテド合成のために適した支持体？供し、これはパ
ラ−スルフィニル−ベンジルアルコール基金含有し、こ
れに所望のペプチドのＣ−末端アミノ酸が結合できる。

工程１及び２は前記の例１に記載したものと同一である
。

６、　　β−（トリメチル−シリル）−エテルーパ？−
（スルフィニル−４−アセトキシメチルフェニル）−メ
チルフェニルアセテートの調製。

塩化メチレン２５成中の例１の工程２からのアルコ−＃
３．００　、ｊｉｔ　（７，４１ａｓ−＋＝ｙ　）及び
Ｎ、Ｎ−ジメチル−４−アミンぎリジン０．０９　、！
ｉ’　ＣＯ，７４ｍモル）に室温でかつ窒素雰囲気下無
水酢酸０．７５＋１０．８４．！ｉ’、８．２２ｍモル
）を加えた。１時間かきまぜの後に、この塩化メチレン
溶液を連続的に０．２Ｎ塩酸及び飽和重炭酸ナトリウム
水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過しそ
して減圧下溶媒を除去して白色固体、融点１３６−１３
７°Ｃ，３，２１！９（９７％）を得た。”ＨＮｌａ（
δ、　ＣＤＣ４３）７．４１　（ｓ　ｔ　４　Ｈ）　−
７−２２−６，９６（Ａ　Ｂクアルテット、　４　Ｈ）
、　５．１４　（ｓ。

２　Ｈ）、　４．２３−４．１５　（ｍ　、　２　Ｈ）
　、　４．０９−３．９６　（Ａ　Ｂクアルテット−２
Ｈ’）　、３．５８　（ｓ。

２Ｈ）、２．１３（ｓ、３Ｈ）、１．０２−０．９４（
ｍｓ２！（）、及び０．０５　（ｓ　、　９　Ｈ”）　
；　ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｅ）４６９（Ｍ＋Ｎａ
）。

４４７（Ｍ＋Ｈ）及び４１９は所望の化合物を示す。

４、パラ−（スルフィニル−４′−アセトキシメチルフ
ェニル）メチルフェニル酢酸の調製。

工程３の生成物２．５４　ｇに４５　％　トＩＪフルオ
ロ酢酸１５％アニソール１５０係塩化メチレン（Ｖ：ｖ
：ｖ）５０１１！Ｊを加えた。室温で４５分後に、揮発
物を減圧下除去して白色固体、融点１６５−１６６°Ｃ
，１，９８，１生じ；　ｌＨＮＭＲ（Ｊ　、　Ｃ［ｔ３
及びｄ６−ＤＭＳＯ）７．５５　（ｓ　ｓ　４　Ｈ）　
−７，５１（ｄ−Ｊ−７，３Ｈｚ　、　２Ｈ）、　７．
１１　（ｄ、　Ｊ−７，３Ｈｚ。

２　Ｈ）　、　５．２５　（ｓ　、　２　Ｈ”）　、　
４．０３　（ｓ　、　２Ｈ）。

３．５７　＜、　ｓ　、　２　Ｈ）及び２．１４（ｓ、
３Ｈ）；？ススペクト／’（ｍ／ｅ　）３４７（Ｍ＋１
　”）　、　３０３及び１４９は所望の化合物を示す。

５、　アミノメチル化ポリスチレン樹脂にパラ−（スル
フィニル−４′−アセトキシメチルフェニル）メチルフ
ェニル酢酸の結合。

アミノメチル化ポリスチレン／１％ジビニルベンゼンの
試料２．００　ｇ（１，１８ｍモル）　（ペプチドイン
ターナショナル、０．５９ｍ当量／ｇ’）を撮りまぜ容
器に入れ、１０％（ｖ：ｖ）ジイソゾロピルエテルアミ
ン／塩化メチレン２０Ｍで２回、塩化メチレン２０αで
６回そして次に５０％Ｎ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド１５０％塩化メチレン（ｖ：
ｖ）で２回洗浄した。得られた湿樹脂に５０％Ｎ、Ｎ−
ジメチルホルムアミド１５０％塩化メチレン（ｖ：ｖ）
２０ｍ、工程４から得られた酸０．６６ｇ（１，，９０
ｍモル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール０．５８
　ｇ（３，７８ｍモル）１．３−ジイングロビルカルボ
ゾイミド２．０ｒｎｌ（１，６ｇ、１２．７７７１モル
）を引続きに加えた。

２４時間ふりまぜの後に、この溶液を排出しそしてこの
樹脂を塩化メチレン２５成で６回洗浄した。

樹脂の試料を取出しそして真空下乾燥した。この試料の
赤外線分析は１７４０α−１（エステルカルボニル）、
１６７５ｃｍ−１（アミドカルボニル）及び１０３０函
−１（スルホキシド）の強い帯域を示し、所望の化合物
を示す。

６、　アセテート基の除去。

工程５から得られた樹脂金Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド２５成で６回洗浄しそして次にＮ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド２５Ｉｄ中の無水ヒドラジン６Ｉｎｌ（３，０
ｇ、９５７７Ｌモル）の浴液を加え九。

４８時間振り、まぜの後に、浴液全排出しそしてこの樹
脂金Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、塩化メチレン及び
インプロパツールの２５ｔｎｌで各々連続的に３回洗浄
した。真空下乾燥後に、試料は赤外線スペクトルで特性
をしらべ、そして１６６０ｃｍ−’（アミドカルボニル
）及び１０３０ｃｍ−１（スルホキ７ド）で強い帯域金
示した。工程５からの樹脂の赤外線スペクトルに見られ
た１７４０ｃｒＩＬ−１でのエステル帯域はもはや存在
しなかった。

例　　６ 本例は例２のスルホキシド・・ンドル置換樹脂にＮ−保
護アミノ酸（本例ではＢｏｃ　”　Ｌ　−フェニルアラ
ニン）の付着を例示する。

例２の工程６からの樹脂（約１．１８ｍモｆｉｖ’）を
塩化メチレン２０Ｉ！Ｌｌで３回洗浄しそして次に塩化
メチレフ２０虹、Ｈ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フ
ェニルアラニン０．７８　ｇ（、２，９４ｍモル）、Ｎ
、Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン０．０２１１Ｃ０
，１６７Ｘモル）及び１，３−ジイングロビルカルボジ
イミド１．［］ｍ　（０，８０１、６，３５ｍモル　）
を続いて加えた。２４時間の振りまぜの後に、この溶液
全排出しそして塩化メチレン２ＯＮで３回洗浄した。塩
化メチレン２ＯＮに懸濁後に、ジイソプロピルエテルア
ミン１．６　ａＪ　（１，２ｇ、９．２７７Ｌモル）及
び無水酢酸１．０〜（１，１ｇ、１１ｍモル）全加えた
。２時間振りまぜの後に、溶液を排出し、この樹脂全塩
化メチレンで３回、メタノールで６回洗浄しそして真空
下乾燥した。この樹脂のアミノ酸分析はスルホキシド基
金示す１０３０ｃ１ｎ−１での中強度帯域、樹脂へのア
ミド結合金示す１６７０ｃＭ−１での強い帯域金示した
。他の強い帯域は１７４０．１７２０，１５２０及び１
１７０σ−１で見られ、これはＮ　−Ｂｏｃ　−Ｌ−フ
ェニルアラニン基に帰属された。この樹脂の赤外線スペ
クトルは例１の工程５からの樹脂のものと同一であった
。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿１は１から２０の炭素原子を有するアルキ
   ルであり、Ｒ＿２は水素、アシル又はカルボキシル末端
   Ｎ−ブロックドアミノ酸であり、ｎは０から２０であり
   そしてＰは重合体支持体である）を含む固相ペプチド合
   成のための樹脂。
2. （２）Ｐが官能化架橋ポリスチレンである、特許請求の
   範囲第１項の樹脂。
3. （３）Ｒ＿１がメチレンであり、Ｒ＿２がカルボキシル
   末端Ｎ−ブロックドアミノ酸でありそしてｎが１である
   、特許請求の範囲第２項の樹脂。
4. （４）構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｐは架橋ポリスチレンでありそしてＲは水素、
   カルボキシル末端Ｎ−ブロックドアミノ酸又はアシル基
   である）を含む固相ペプチド合成のための樹脂。
5. （５）１）構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘはハロゲンであり、ｎは０から２０であり、
   Ｒ＿１は１から２０の炭素を有するアルキルでありそし
   てＲは酸保護基である）のエステルをメルカプトベンジ
   ルアルコールと反応させて構造▲数式、化学式、表等が
   あります▼ のスルフィドを形成すること、 ２）このスルフィドを酸化して構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ のスルホキシドを形成すること、 ３）このスルホキシドをカルボキシル末端Ｎ−ブロック
   ドアミノ酸Ｒ＿２でエステル化して構造▲数式、化学式
   、表等があります▼ のエステルを形成すること、 ４）このエステルから酸保護基Ｒを除去して構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ の酸を形成すること、そして ５）このスルホキシドを官能化重合体Ｐにアンカーして
   構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ の樹脂を形成すること、 を含む固相ペプチド合成のための樹脂を合成する方法。
6. （６）酸保護基が２−トリメチルシリルエチル、９−フ
   ルオレネメタノール、トリメチルシリル又はｔ−ブチル
   ジメチルシリルでありそしてメルカプトベンジルアルコ
   ールがｐ−メルカプトベンジルアルコールである、特許
   請求の範囲第５項の方法。
7. （７）スルフィドが０から２５℃で塩化メチレン中のｍ
   −クロロ過安息香酸で酸化される、特許請求の範囲第６
   項の方法。
8. （８）カルボキシル末端Ｎ−ブロックドアミノ酸がＮ−
   ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニンである
   、特許請求の範囲第７項の方法。
9. （９）官能化重合体がアミノメチルポリスチレンである
   、特許請求の範囲第８項の方法。
10. （１０）１）構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘはハロゲンであり、ｎは０から２０であり、
    Ｒ＿１は１から２０の炭素を有するアルキルでありそし
    てＲは酸保護基である）のエステルをメルカプトベンジ
    ルアルコールと反応させて構造▲数式、化学式、表等が
    あります▼ のスルフィドを形成すること、 ２）このスルフィドを酸化して構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ のスルホキシドを形成すること、 ３）このスルホキシドを酸、エステル又は無水物でアシ
    ル化して構造 ▲数式、化学式、表等があります▼ の、Ｒ＿３がアシル基である、エステルを形成すること
    、 ４）このエステルから保護基Ｒを除去して式▲数式、化
    学式、表等があります▼ の酸を形成すること、 ５）このスルホキシドを官能化重合体Ｐにアンカーして
    式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の樹脂を形成すること、 ６）アシル基Ｒ＿３を除去して式 ▲数式、化学式、表等があります▼ のアルコールを形成すること、そして ７）このスルホキシドのアルコールをカルボキシル末端
    Ｎ−ブロックドアミノ酸Ｒ＿２でエステル化して式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の固相ペプチド合成のための樹脂を形成すること、を含
    む固相ペプチド合成のための樹脂を合成する方法。
11. （１１）酸保護基が２−トリメチルシリルエチル、第三
    ブチル、ｐ−メトキシベンジル又は９−フルオレネメタ
    ノールでありそしてメルカプトベンジルアルコールがｐ
    −メルカプトベンジルアルコールである、特許請求の範
    囲第１０項の方法。
12. （１２）スルフィドが０から２５℃で塩化メチレン中の
    ｍ−クロロ過安息香酸で酸化される、特許請求の範囲第
    １１項の方法。
13. （１３）官能化重合体がアミノエテルポリスチレンであ
    る、特許請求の範囲第１２項の方法。
14. （１４）ｎが１に等しくそしてＰが官能化架橋ポリスチ
    レンである、特許請求の範囲第１０項の方法。