JP4463515B2

JP4463515B2 - Ｌ−アンセリンの合成法

Info

Publication number: JP4463515B2
Application number: JP2003319506A
Authority: JP
Inventors: 勝行平岡; 浩樹森脇
Original assignee: Hamari Chemicals Ltd
Current assignee: Hamari Chemicals Ltd
Priority date: 2003-09-11
Filing date: 2003-09-11
Publication date: 2010-05-19
Anticipated expiration: 2023-09-11
Also published as: JP2005082571A

Description

本発明は、アンセリンの新規な合成法に関する。

Ｌ−アンセリン、すなわちＮ−β−アラニル−３−メチル−Ｌ−ヒスチジンは動物の筋肉に存在する天然ジペプチドであり、経口摂取された鉄などの微量金属元素の吸収を高めるキャリヤーとして役立つことから造血剤および食品サプリメントとしての利用が検討されている。

これまでアンセリンの化学的合成のためのいくつかの方法が知られている。

１）Ｂｅｈｒｅｎｓｅｔａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１２０，５１７（１９３７）
この文献は、３−メチル−Ｌ−ヒスチジンから出発し、メチルエステル化後、アミノ基がベンジルオキシカルボニル基で保護されたβ−アラニンの酸アジドと反応させてアミノ基が保護されたＮ−β−アラニル−Ｌ−ヒスチジンとし、加水分解によりアミノ基を脱保護してアンセリンを２９％の収率で得たと報告している。

２）Ｒｉｎｄｅｒｋｎｅｃｈｔｅｔａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２９，１９６８（１９６４）
この文献は、３−メチル−Ｌ−ヒスチジンのリチウム塩に、フタリル−β−アラニンとエチルクロロカーボネートとを反応させてフタリル−β−アラニル−３−メチル−Ｌ−ヒスチジンとし、ヒドラジンとの反応によりフタリル基を外し、収率３６％でアンセリンを合成したと報告している。

３）ＷＯ０１／６４６３８
実施例１２および１３がアンセリンの合成法に関する。やはり３−メチル−Ｌ−ヒスチジンから出発し、これにシアン酢酸エチルエステルを反応させてＮ−シアノアセチル−３−メチル−Ｌ−ヒスチジンとし、ロジウムを触媒として接触還元し、粗収率約２９％でアンセリンを合成している。

これら合成法の出発原料である３−メチル−Ｌ−ヒスチジンはＬ−ヒスチジンから出発し、複雑な工程を経て製造しなければならない上、３−メチル−Ｌ−ヒスチジンからの合成工程の総収率も低い。従って市場において入手容易なＬ−ヒスチジンから出発し、高い収率でＬ−アンセリンを合成することができる新合成法の開発が望まれる。

本発明の課題は、商業的にＬ−アンセリンを提供することを可能にする新規な合成法を開発することである。

本発明は、Ｌ−カルノシン、すなわちＮ−β−アラニル−Ｌ−ヒスチジンを合成する際の中間体であるフタリル−Ｌ−カルノシンを利用する。この中間体はＬ−ヒスチジンを塩化チオニルのような脱水試薬の存在下フタリル−β−アラニンと縮合することにより殆んど定量的収率で得られる。この中間体はヒドラジンとの反応によってＬ−カルノシンを与える。

本発明は、この同じ中間体を使ってＬ−アンセリンを合成する。そのため本発明は、
ａ）フタリル−Ｌ−カルノシンのカルボキシル基をアルキルエステル化して保護するステップ、
ｂ）フタリル−Ｌ−カルノシンエステルのイミダゾール環の１位の窒素をアシル化により保護するステップ、
ｃ）アシル化フタリル−Ｌ−カルノシンエステルのイミダゾール環の３位のへメチル基を導入し、同時に脱アシル化するステップ、
ｄ）生成したフタリル−Ｌ−アンセリンアルキルエステルをフタリル−Ｌ−アンセリンへ加水分解するステップ、および
ｅ）生成したフタリル−Ｌ−アンセリンからフタリル保護基を除去し、Ｌ−アンセリンを得るステップを含む。

上のステップａ）の生成物であるフタリル−Ｌ−カルノシンアルキルエステルは、Ｌ−ヒスチジンを最初にエステル化し、次いでフタリル−β−アラニンを反応させて得ることもできる。ただしこの場合は、Ｌ−カルノシンを得るためには脱フタリル化に加え、エステルの加水分解を必要とする。

本発明による利益の一つは、Ｌ−カルノシンの合成のための同じ中間体を使ってＬ−アンセリンを合成することができることである。このためＬ−アンセリンの合成のため３−メチル−Ｌ−ヒスチジンを別途に調達する必要性をなくす。

他の利益は、既知の合成法と比較してより少ない工程数でより高い収率でＬ−アンセリンを合成できることである。収率に関しては、３−メチル−Ｌ−ヒスチジンから出発する既知方法の総収率と比較しても、本発明方法のＬ−ヒスチジンから出発する総収率の方が有意に上廻っている。

ステップａ）：
先に述べたように、フタリル−Ｌ−カルノシンはＬ−カルノシン合成のための中間体として既知物質である。この化合物は通常塩酸塩として得られる。この化合物のカルボキシル基のエステル化は、炭素数６以下の低級アルカノールに懸濁し、酸触媒の存在下還流加熱するエステル化の常法によって行うことができる。エステル化の目的はカルボキシル基の一時的保護であるから、沸点が低く加水分解の容易なメタノールまたはエタノールが好ましい。触媒はｐ−トルエンスルホン酸のような有機スルホン酸が好ましい。

反応終了後反応液を減圧濃縮し、不純物を除去するため酢酸エチルのような水不混和性有機溶媒で抽出し、水層を炭酸水素ナトリウムのような塩基を加え、冷却することにより目的とするフタリル−Ｌ−カルノシンアルキルエステルが結晶として得られる。

変法として、Ｌ−ヒスチジンを最初にエステル化し、次いでＬ−ヒスチジンを出発原料とする場合と同じ条件で、フタリル−β−アラニンと反応させてもよい。この変法はエステルを加水分解する付加工程を必要とするので、Ｌ−カルノシンの同時生産を意図しない場合に採用することができ、３−メチル−Ｌ−ヒスチジンの代りにＬ−ヒスチジンから出発して少ない工程でＬ−アンセリンを高収率で生産できる利益には変わりはない。

ステップｂ）：
ステップｂ）においては、フタリル−Ｌ−カルノシンエステルのイミダゾール環の１位のＮ原子をアシル化し、副反応から保護する。アシル保護基としては、メチル化と同時におこる脱保護の容易さからベンゾイル基が好ましい。ペプチド合成の分野で同じ目的に使用されるｔ−ブトキシカルボニル基や、ベンジルオキシカルボニル基およびエトキシカルボニル基、さらにアセチル基のような他のアシル基で保護することも勿論可能である。

ベンゾイル化は、フタリル−Ｌ−カルノシンエステルをＴＨＦのような不活性有機溶媒に溶解し、トリエチルアミンのような３級アミンの存在下塩化ベンゾイルを滴下し、滴下終了後室温で反応液を数時間攪拌することによって終了する。他のアシル化剤を使用する場合も同様である。

目的生成物は反応液を水で稀釈し、室温で攪拌することにより結晶として析出する。

ステップｃ）：
アシル化したフタリル−Ｌ−カルノシンエステルをＤＭＦのような不活性有機溶媒に溶解し、メチル化試薬を添加し、反応終了まで常温で攪拌する。その後反応混合物を減圧濃縮し、残渣を水に溶解し、不純物を酢酸エチルのような有機溶媒で抽出して除去し、水層に炭酸水素ナトリウムのようなアルカリを添加し、析出する結晶を採取する。メチル化と同時にアシル保護基は脱保護され、得られる結晶はフタリル−Ｌ−アンセリンアルキルエステルである。

ステップｄ）およびｅ）：
これらのステップは同一反応器内で連続して実施するのが有利である。

このためフタリル−Ｌ−アンセリンアルキルエステルは１Ｎ塩酸に溶解し、これにヒドラジンヒドラートを加え、還流下数時間加熱する。この段階でフタリル基の脱保護およびアンセリンエステルのアンセリンへの加水分解が同時に生起する。反応終了後反応液のｐＨを４Ｎ塩酸により下げ、析出する反応副生物（フタル酸）を濾過して除去する。

濾液に含まれるＬ−アンセリンは、例えば以下の操作によって純品として回収することができる。

アニオン交換樹脂を詰めたカラムを用意し、これに上の濾液を通液し、Ｌ−アンセリンを吸着し、カラムを良く洗浄した後希アンモニアを通液して溶出し、目的物の溶出分画を減圧濃縮し、残渣にエタノールを加えて析出する結晶を分離し、エタノールで洗浄した後乾燥する。

以下の実施例および参考例は例示目的のみであって、限定を意図しない。

参考例１

フタリル−Ｌ−カルノシンモノ塩酸塩
攪拌機つきフラスコに水８４ｍｌと、炭酸水素ナトリウム２２．４ｇと、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩モノヒドラート１４．０ｇを加え、均一に溶解する。これへＮ−フタリル−β−アラニルクロライドの理論量を含むトルエン溶液を滴下し、１時間攪拌する。攪拌を停止して静置し、トルエン層を傾しゃして除去し、水層へ６ＮＨＣｌ１２ｍｌとＭＩＢＫ９８ｍｌを加え攪拌する。攪拌を停止して静置し、ＭＩＢＫ層を除去し、残った水層を酸性にし、冷却して結晶を分離する。６０℃で乾燥し、題記化合物２８．３ｇを得た。収率は殆んど１００％であった。

フタリル−Ｌ−カルノシンメチルエステル
還流冷却器と攪拌機を備えたフラスコに、メタノール２８３ｍｌを入れ、参考例１のフタリル−Ｌ−カルノシン結晶２８．３ｇを懸濁する。これへｐ−トルエンスルホン酸一水塩２．５g を添加し、５時間還流する。反応終了後反応液を減圧濃縮し、水１０８ｍｌを加えて残渣を溶解し、水溶液へ酢酸エチル３４ｍｌを加えて攪拌し、静置して分離した有機層を除去し、残った水層へ酢酸エチル１７ｍｌを再び加え、攪拌し、静置して分離した有機層を除去する。残った水層へ炭酸水素ナトリウム１０．１ｇを加えて溶解し、１０〜２０℃で静置して結晶を析出させ、分離して水２８ｍｌで洗浄し、６０℃で乾燥し、題記化合物２０．５ｇを得た。収率は理論の８３．１％であった。

フタリル−Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−カルノシンメチルエステル
上と同様なフラスコにＴＨＦ７８ｍｌを入れ、上で得たフタリル−Ｌ−カルノシンメチルエステル２０．５ｇを溶解し、トリエチルアミン６．７ｇを添加した後、塩化ベンゾイル９．０ｇを滴下する。滴下終了後室温で４時間攪拌し、その後水３５８ｍｌを加え、２０〜２５℃で０．５時間攪拌を続ける。析出した結晶を分離し、水７８ｍｌ、次いでイソプロピルアルコール７８ｍｌの順で結晶を洗い、６０℃で乾燥して題記化合物２５．７ｇを得た。収率は理論の９７．９％であった。

２−（３−フタルイミドプロピオニル）アミノ−３−（１−ベンゾイル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロピオン酸メチルエステル（フタリル−Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−カノルシンメチルエステル）の物性：
Ｃ_２５Ｈ_２２Ｎ_４Ｏ_５ＭＷ：４７４．４７
融点１７６−１７７°
化学純度９９．７％ＨＰＬＣ法
元素分析Ｃａｌｅｄ．Ｃ：６３．２９Ｈ：４．６７Ｎ：１１．８１
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ：６３．０９Ｈ：４．７９Ｎ：１１．４９
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２００ＭＨｚ）：
δ ２．７０（２Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，−ＣＯＣＨ_２）
３．０６（Ｃ：４９．９９Ｈ：６．７１Ｎ：２３．３２
３．１２（１Ｈ，ｄｏｆａｐａｉｒｏｆＡＢＸ，Ｊ_ＡＢ＝１５．ＯＨｚ，Ｊ_ＢＸ＝４．９Ｈｚ，ｏｎｅｏｆＣＨ_２ｎｅｘｔｔｏｔｈｅｉｍｉｄａｚｌｏｅｒｉｎｇ）
４．０２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，ＮＣＨ_２）
４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚａｎｄ４．９Ｈｚ，α−ＨｏｆＨｉｓ）
７．０４（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，５−Ｈｏｆｔｈｅｉｍｉｄａｚｏｌｅｒｉｎｇ）
７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ２Ｈｏｆｔｈｅｉｍｉｄａｚｏｌｅｒｉｎｇ）
７．５６−７．８４（９Ｈ，ｍ）
７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１，Ｎ＝ＣＨ−Ｎ）

フタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステル
上と同様なフラスコにＤＭＦ７７ｍｌを入れ、フタリル−Ｎ−ベンゾイル−Ｌ−カルノシンメチルエステル２５．７ｇを溶解する。この溶液へヨウ化メチル２１．５ｇを滴下し、２０〜３０℃で４時間攪拌する。反応終了後反応液を減圧濃縮し、水１０８ｍｌを加えて残渣を溶解する。不純物を除去するためこの水溶液へ酢酸エチル３３ｍｌを加え、攪拌し、静置して分離した有機層を捨て、水層へ再び酢酸エチル１７ｍｌを加え、攪拌、静置し、分離した有機層を捨て、水層を残す。これへ炭酸水素ナトリウム５．９ｇを溶解し、２０〜３０℃で放置し、析出する結晶を回収し、水２１ｍｌで洗浄し、題記化合物の湿った結晶を得た。これはそのまま次工程で用いる。

以下の実施例４〜７においては、イミダゾール環の１位へベンゾイル基以外のアシル基を導入し、次いでヨウ化メチルを反応させてフタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステルを合成した。

アセチル化次いでメチル化によるフタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステルの合成
還流冷却器と攪拌機を備えたフラスコにＴＨＦ８ｍｌ中１．０ｇのフタリル−Ｌ−カルノシンメチルエステルの溶液を入れ、トリエチルアミン０．３５ｇを添加した後、塩化アセチル０．２９ｇを２０〜５０℃で滴下し、室温で４時間攪拌する。反応週終了後水５０ｍｌと酢酸エチル３０ｍｌを加えて振とうし、有機層を分離し、これを硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた結晶を分離し、風乾してフタリル−Ｎ−アセチルカルノシンメチルエステル０．８５ｇをｍ．ｐ．１７３−１７４℃の結晶として得た。収率は理論の７９．４％。ＮＭＲによって構造を確認した。
次に上で得たフタリル−Ｎ−アセチルカルノシンメチルエステル０．２ｇをＤＭＦ３ｍｌに溶解し、これに沃化メチル０．２ｇを添加し、２０〜３０℃で２日間攪拌する。反応終了後反応液中のフタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステルの生成量をＨＰＬＣで定量したところ、１５５．５ｍｇ（理論の８４．８％）であった。このものは実施例３と同様に処理し、次工程に用いることができる。

エトキシカルボニル化次いでメチル化によるフタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステルの合成
実施例４と同様に、フタリル−Ｌ−カルノシンメチルエステル１．０ｇをＴＨＦ１０ｍｌに溶解し、トリエチルアミン０．３５ｇを添加した後、クロロ炭酸エチル０．４０ｇを２０〜５０℃で滴下し、室温で４時間攪拌する。反応終了後水５０ｍｌを加え、得られた結晶を分離し、酢酸エチル１０ｍｌで洗った後風乾してｍ．ｐ．１８２−１８３℃の結晶としてフタリル−Ｎ−エトキシカルボニルカルノシンメチルエステル０．９２ｇ（理論の７９．３％）を得た。ＮＭＲにより構造を確認した。
次に上で得られたエトキシカルボニル体０．２ｇをＤＭＦ３ｍｌに溶解し、これに沃化メチル０．２ｇを添加し、２０〜３０℃で２日間攪拌する。反応液中のフタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステルの生成量をＨＰＬＣで定量したところ、１０３．７ｍｇ（理論の５９．７％）であった。

実施例４と同様に、フタリル−Ｌ−カルノシンメチルエステル１．０ｇをＴＨＦ１０ｍｌに溶解し、トリエチルアミン０．５ｇを添加した後、クロロ炭酸ベンジル０．８ｇを室温で滴下し、４時間攪拌する。反応終了後水５０ｍｌと酢酸エチル３０ｍｌを加えて振とうし、有機層を分離し、乾燥後減圧濃縮し、得られた結晶を濾取し、イソプロピルエーテル１０ｍｌで洗い、風乾してｍ．ｐ，１４１−１４２℃の結晶としてフタリル−Ｎ−ベンジルオキシカルボニルカルノシンメチルエステル１．０３ｇ（理論の７８．０％）を得た。
次にベンジルオキシカルボニル体０．２ｇをＤＭＦ３ｍｌに溶解し、これに沃化メチル０．２ｇを添加し、２０〜３０℃で２日間攪拌する。反応液中のフタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステルの生成量をＨＰＬＣで定量したところ、６．１ｍｇ（理論の４．０％）であった。

実施例４と同様に、フタリル−Ｌ−カルノシンメチルエステル１．０ｇをＴＨＦ１０ｍｌに溶解し、トリエチルアミン０．３５ｇを添加した後、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート０．７ｇを室温で滴下し、４時間攪拌した。反応終了後水１００ｍｌと酢酸エチル５０ｍｌを加えて振とうし、水層を酢酸エチル３０ｍｌで再抽出して得た有機層を最初に分離した有機層と合併して減圧濃縮し、残渣をシリカゲルカラムに注ぎ、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン１：１で溶出する。溶出液を減圧濃縮して白色固体としてフタリル−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルカルノシンメチルエステル０．６５ｇ（理論の５２．８％）を得た。
次に上のｔ−ＢＯＣ体０．２ｇをＤＭＦ３ｍｌに溶解し、これに沃化メチル０．２ｇを添加し、２０〜３０℃で２日間攪拌する。反応液中のフタリル−Ｌ−アンセリンメチルエステルの生成量をＨＰＬＣで定量したことろ、６４．３ｍｇ（３９．４％）であった。

アンセリン
前と同様なフラスコに１ＮＨＣｌ７０ｍｌを入れ、実施例４で得た湿晶全量（乾燥品２０．８ｇに相当）を溶解し、８０％ヒドラジンヒドラート６ｍｌを加え、約５時間還流する。反応終了後反応混合液に４ＮＨＣｌ１ｍｌを加え、析出物を濾過して除去する。別にアニオン交換樹脂ＳＫ−１Ｂ１００ｍｌを詰めたカラムを用意し、上の濾液を通液する。カラムを水２００ｍｌで２回洗浄し、２．８％アンモニア水２００ｍｌを通液する。目的物の溶出分画（約１００ｍｌ）を集め、減圧濃縮し、残渣にエタノール１００ｍｌを加えて放置し、析出する結晶を分離し、エタノール２５ｍｌで洗い、６０℃で乾燥してＬ−アンセリン９．７ｇを得た。収率は理論の７３．８％であった。

参考例および実施例１〜４および８を通じ、Ｌ−ヒスチジンからのトータル収率は５３％であった。

Ｌ−アンセリンの物性：
融点２３８−２４１°（分解）
ＭｅｒｃｋＩｎｄｅｘ２４０−２４２°（分解）
旋光度〔Ｄ〕^２０ _Ｄ＋１１．２°（Ｃ＝５％，Ｈ２Ｏ）
水分０．４４％
化学純度Ａｎｓｅｒｉｎｅ９９．７％
Ｃａｍｏｓｉｎｅ０．２６％ＨＰＬＣ法
光学純度１００％Ｄ−Ａｎｓｅｒｉｎｅは検出されない。ＨＰＬＣ法
元素分析Ｃａｌｅｄ．Ｃ：４９．９９Ｈ：６．７１Ｎ：２３．３２
Ｆｏｕｎｄ．Ｃ：４９．８６Ｈ：６．８１Ｎ：２３．１１
^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ，２００ＭＨｚ）：
δ ２．６２（^１Ｈ，ｔｏｆａｐａｉｒｏｆＡＢｑ（ＡＢＸ_２ｓｙｓｔｃｍ），Ｊ_ＡＢ＝１６．１Ｈｚ，Ｊ_ＡＸ＝６．７Ｈｚ，ｏｎｅｏｆＣＯＣＨ_２）
２．７０（^１Ｈ，ｔｏｆａｐａｉｒｏｆＡＢｑ（ＡＢＸ_２ｓｙｓｔｃｍ），Ｊ_ＡＢ＝１６．１Ｈｚ，Ｊ_ＡＸ＝６．７Ｈｚ，ｏｎｅｏｆＣＯＣＨ_２）
２．９６（^１Ｈ，ｔｏｆａｐａｉｒｏｆＡＢｑ（ＡＢＸＸ^１ｓｙｓｔｃｍ），Ｊ_ＡＢ＝１５．５Ｈｚ，Ｊ_ＡＸ＝９．３Ｈｚ，Ｊ_ＡＸ＝０，ｏｎｅｏｆＣＨ_２ｎｅｘｔｔｏｔｈｅｉｍｉｄａｚｌｏｅｒｉｎｇ）
３．１３（^１Ｈ，ｔｏｆａｐａｉｒｏｆＡＢｑ（ＡＢＸＸ^１ｓｙｓｔｃｍ），Ｊ_ＡＢ＝１５．５Ｈｚ，Ｊ_ＡＸ＝４．９Ｈｚ，Ｊ_Ｂｘ＝０．７Ｈｚ，ｏｎｅｏｆＣＨ_２ｎｅｘｔｔｏｔｈｅｉｍｉｄａｚｌｏｅｒｉｎｇ）
３．１９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，ＮＣＨ_２）
３．６５（３Ｈ，ｓ，３−Ｍｅｏｆｔｈｅｉｍｉｄａｚｌｏｅｒｉｎｇ）
４．４７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３ａｎｄ４．９Ｈｚ，α−ＨｏｆＨｉｓ）
６．８２（１Ｈ，ｂｒ，５−Ｈｏｆｔｈｅｉｍｉｄａｚｏｌｅｒｉｎｇ）
７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．６ＨＺ，２−Ｈｏｆｔｈｅｉｍｉｄａｚｏｌｅｒｉｎｇ）

有用な生理活性を有する天然型Ｌ−アンセリンを化学的合成法によって商業的規模で製造できる。

Claims

ａ）フタリル−Ｌ−カルノシンのカルボキシル基をアルキルエステル化するステップ、
ｂ）フタリル−Ｌ−カルノシンアルキルエステルのイミダゾール環の１位へアシル基を導入するステップ、
ｃ）アシル化フタリル−Ｌ−カルノシンアルキルエステルをメチル化試薬と反応させ、イミダゾール環３位へメチル基を導入し、同時に脱アシル化するステップ、
ｄ）生成したフタリル−Ｌ−アンセリンアルキルエステルをフタリル−Ｌ−アンセリンへ加水分解するステップ、および
ｅ）フタリル−Ｌ−アンセリンからフタリル保護基を脱保護するステップ、
を含むＬ−アンセリンの合成法。
ステップａ）に代って、Ｌ−ヒスチジンアルキルエステルにフタリル−β−アラニンを反応させることによってフタリル−Ｌ−カルノシンアルキルエステルを合成するステップを含む請求項１の方法。
ステップｂ）において導入されるアシル基は、ベンゾイル、アセチル、エトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、またはｔ−ブトキシカルボニル基である請求項１または２の方法。
ステップｄ）およびｅ）は同じ反応器内で連続して実施される請求項１または３のいずれかの方法。