JPS6324160A

JPS6324160A - 酵素免疫自動測定方法

Info

Publication number: JPS6324160A
Application number: JP6107287A
Authority: JP
Inventors: Takashi Yamada; 隆山田
Original assignee: Olympus Optical Co Ltd
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 1987-03-18
Filing date: 1987-03-18
Publication date: 1988-02-01
Also published as: JPH0120382B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は自動的に酵素免疫を測定する測定方法に関する
ものであり、特に、反応によって結合した物質（Ｂｏｕ
ｎｄ　）と結合していない物質（Ｆｒｅｅ　）の分離（
Ｂ−Ｆ分離）が可能な酵素免疫自動測定方法に関するも
のである。

従来、酵素免疫測定は複雑な測定法であり、最終段階の
酵素活性測定は簡単に自動測定を行うことができるにも
かかわらず、１１Ｂ−Ｆ分離を行う操作段階において、
Ｂ−Ｆ分離が容易でない所から全過程を自動化すること
が困難であった。また、生化学自動分析機は通常測定終
了後の洗浄装置を装備しているが、分析途中で洗浄する
ような装置を備えたものは殆どない。従って酵素免疫測
定においても、分析途中の洗浄は用手法で行わなければ
ならなかった。

さらに酵素免疫測定を行うに当たっては、固＋′ｉ］と
サンプルおよび酵素標識試薬との抗原抗体反応時間をサ
ンプル中の測定すべき物質の種類や（吏用する酵素標識
試薬の種類に応じて最適な時間に設定する必要があるが
、１台の測定機によっては１つの項目だけを測定できる
ようにすると測定ｊＱ　、７＞稼動率が悪くなるととも
に複数の測定機を設置し運用するのに多額の経費が嵩む
とともに設置のためのスペースも多く必要となる。

本発明の目的は、分析途中のＢ−Ｆ分離を洗浄により自
動的に行うことができ、しかも抗原抗体反応時間を任意
に設定することができる酵素免疫自動測定方法を提供し
ようとするものである。

本発明の酵素免疫自動測定方法は、標識物質として酵素
を用い、抗原抗体反応によりサンプル中の特定物質を測
定するに当たり、抗原または抗体を固定化した固相を入
れた反応容器を反応ラインに沿って搬送し、反応容器に
サンプルあるいは酵素標識試薬を分注するタイミングか
ら、反応容器に固相を残したままで固相および反応容器
を洗浄することによってＢ−Ｆ分離を行う洗浄タイミン
グまでの間の時間として規定される抗原抗体反応時間を
Ｂ−Ｆ分離のための洗浄タイミングを変更することによ
って設定変更することを特徴とするものである。

次に、図面につき本発明の詳細な説明する。

第１図は酵素免疫反応の概略図である。１は、ポリスチ
レンボールまたはガラスピーズ等の固相に抗体（あるい
は抗原）２ａを固定した固定化固相である（Ａ）。この
固定化固相１に抗体（あるいは抗原）２ａに対する抗原
（あるいは抗体）２ｂを含む血清あるいはこれに相応す
る試料を加えて反応させる（Ｂ）。すると、抗原（ある
いは抗体）２ｂは固定化固相１上の抗体（あるいは抗原
）２ａと反応し、抗原（抗体）−抗体（抗原）複合物固
定化固相３を生成する（Ｃ）。この複合物固定化固相３
に、固定化固相１に固定化した抗体（あるいは抗原）２
ａと同一の抗体（あるいは抗原）に酵素を標識付けした
酵素標識抗体（あるいは抗原）４を加えて反応させる（
Ｄ）。これにより、酵素標識抗体（あるいは抗原）４と
複合物固定化固相３の複合物である酵素標識抗体（抗原
）−抗原（抗体）−抗体（抗原）複合物固定化固相５を
生成する（Ｅ）。過剰の酵素標識抗体（あるいは抗原）
４を除去し、前記固定化固相５上の酵素活性を測定する
。これによって試料中の抗原（あるいは抗体）の含有量
を知ることができる。

本発明においては、上述の抗原（抗体）−抗体（抗原）
複合物固定化固相３および酵素標識抗体（抗原）−抗原
（抗体）−抗体く抗原）複合物固定化固相５を生成後、
固相を反応管に残したままで固相と反応管を洗浄するこ
とによって、Ｂ−Ｆ分離を自動的に行うことができ゛る
ようにする。

また、固相を入れた反応管に試料を分注して抗原抗体反
応を開始させるタイミング（Ｇ）と、洗浄によるＢ−Ｆ
分離を行うタイミング（Ｉ）との間の時間によって規定
される抗原抗体反応時間や、反応管に酵素標識試薬を分
注するタイミング（Ｊ）と洗浄によるＢ−Ｆ分離を行う
タイミング（Ｌ）との間の時間で規定される抗原抗体反
応時間を、測定項目に応じて最適の時間となるようにＢ
−Ｆ分離のための洗浄タイミングを変更できるようにす
る。

第２図は本発明の自動測定方法を実施する測定機の一例
を示す部分図である。

大口部６ａおよび小口部６ｂを備えたＵ字管６に、大口
部６ａから自由に出し入れでき、小口部６ｂに入らない
固定化固相１を用意する。Ｕ字管６の大口部６ａより固
定化固相１と試薬あるいは緩衝液を加える（Ｆ）。次に
サンプル分注器７により測定対象のサンプルを一定量加
え（Ｇ）、小口部６ｂから空気を吹込み攪拌を行い上述
の固定化固相３を生成させる（Ｈ）。この後、大口部６
ａに洗浄液供給装置８、小口部６ｂに洗浄液吸引装置９
を適用させ前記固定化固相３およびＵ字管６の洗浄を行
う（Ｉ）。次に上述の酵素標識抗体（あるいは抗原）、
すなわち酵素標識試薬４を分注器１０により、Ｕ字管６
の大口部６ａより加え（Ｊ）、小口部６ｂより空気を吹
込み攪拌を行い、上述の固定化固相５を生成させる（Ｋ
）。この後、洗浄液供給装置８および洗浄液吸引装置９
によって、前記固定化固相５およびＵ字管６の洗浄を行
う（Ｌ＞。次に固定化固相５を含むＵ字管６内に、固定
化固相５上の酵素活性を測定するための試薬を、試薬分
注器１１によって加える（Ｍ）。

この後小口部６ｂより空気を吹込み攪拌を行い、反応を
行った後（Ｎ）、吸引チューブ１２によって反応溶液を
フローセル１３内に移送する（０）。

この反応溶液の吸光度を測定し、固定化固相５上の酵素
活性を求める。これにより、試料中の抗原（あるいは抗
体）２ａの含有量を知ることができる。また、吸光度測
定後、Ｕ字管６内に残った固定化固相５は大口部６ａに
設けた固定化固相吸引装置１４によって除去し、小口部
６ｂに設けた洗浄液供給装置１５により洗浄液をＵ字管
６内に供給し、洗浄後、吸引装置１４により除去する。

第３図は、第２図をさらに詳細に説明するため、本発明
による自動測定方法を実施する装置を示す全体図である
。

第３図は、大口部６ａおよび小口部６ｂを備えた複数の
Ｕ字管を保持する恒温槽を上から見た図である。恒温槽
の上面には反応管を移動させる反応管ターレット１６が
設けてあり、このターレット１６は矢印の方向に所定ピ
ッチで回動するリング状円板である。一定量の固相を固
定化固相供給装置１７から大口部６ａに供給する。次に
、ターレット１６が回動し、サンプル分注器７によりサ
ンプルを一定量加える。このサンプル分注器７は、矢印
の方向に所定ピッチで回動するサンプラ１８のサンプル
カップ１９からサンプルを、シリンジ２０の上下動およ
びプローブ２１の回動と上下動によりＵ字管の大口部６
ａに分注する。このサンプルの分注と同時に又はその前
後において適当な試薬又は緩衝液を分注するように構成
することもできる。２２はＵ字管の小口部６ｂに空気を
送るエアポンプである。小口部６ｂから空気を吹込み、
固定化面相とサンフルを攪拌し完全に反応させる。

次に小口部６ｂから液排出ポンプ２３により、未反応の
液を排出する。同時に洗浄用ポンプ２４により大口部６
ａから洗浄液を供給し、面相を残したまま固相とＵ字管
の洗浄を行なってＢ−Ｆ分離を行う。洗浄液は液排出ポ
ンプ２３により排出する。小口部６ｂの上面には上下動
する円板（図示外）を設け、小口部６ｂを介して空気お
よび液を給排する際にこの円板が下降して給排チューブ
が小口部６ｂと連結されるようにし、ターレット１６の
回動時には上昇するように配置する。したがって、この
上下動する円板に対する給排チャーブの取付は位置を変
えることによりＢ−Ｆ分離のための洗浄位置、すなわち
Ｂ−Ｆ分離のタイミングを変更することができる。

次に、酵素標識抗体を分注器１０により、大口部６ａか
ら分注する。上に述べたと同様にエアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌し、液排出ポンプ２３によ
り液を排出する。洗浄用ポンプ２４により大口部６ａか
ら洗浄液を供給し、固相を残したまま固相とＵ字管を洗
浄後、洗浄液を液排出ポンプ２３により排出する。

次に、試薬分注器１１によって、大口部６ａから酵素活
性を測定するだめの試薬を加え、エアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌する。

次いで、小口１６ｂから減圧ポンプ２５により反応溶液
をフローセル２６に移送する。このフローセル２６で吸
光度を測定する。２７は光源、２８はフィルタ、２９は
受光素子である。

測定後、大口部６ａに密閉連結し得る吸引装置１４によ
りＵ字管の内容物を排出し、小口部６ｂに取付けた洗浄
液供給装置１５により洗浄液を供給しＵ字管を洗浄後、
洗浄液を吸引装置１４により除去する。

上記実施例においてＵ字管を使用して酵素免疫反応を行
わせたが、Ｕ字管に限られるものではなく、固相がＢ−
Ｆ分離のための洗浄時の洗浄液の除去によって反応容器
から吸引排出されないような形状、例えば濾斗状、管内
に網状のしきり部を設けたもの等を使用することができ
る。

以上述べたように本発明の酵素免疫自動測定方法では、
分析途中で、固相を反応容器内に残したままで洗浄を行
ってＢ−Ｆ分離を自動的に行うことができる洗浄装置を
設けたので、容易に反応物と未反応物の分離を行うこと
ができ、全過程を自動的に操作することができる。また
、この洗浄装置は、簡単な構造なので、サンプル分注か
ら最終的な比色定量その他の光学的測定まての反応段階
において、任意の位置に選択的に設置することができ、
且つ脱着可能である。すなわち、洗浄によるＢ−Ｆ分離
を行うタイミングを変更することによって測定項目に応
じた最適の抗原抗体反応時間を設定することができ、−
台の測定機を能率良く使用することができるとともに経
済的にも有利となる。

【図面の簡単な説明】

第１図は酵素免疫反応の概略図、第２図は本発明による自動測定方法における順次の工程
を示す線図、第３図は第２図に示す自動測定方法を実施する測定機の
構成をさらに詳細に示した図である。１・・・固定化固相２・・・抗原（抗体）３・・・抗原−抗体複合物固定化固を目４・・・酵素標
識抗体５・・・酵素標識抗体−抗原一抗鉢複合物固定化固ト目
６・・・Ｕ字管　　　　　７・・・試料分注器８・・・
洗浄水供給装置９・・・洗浄水吸引装置１０・・・分注器　　　　１１・・・試薬分注器１２・
・・吸引チューブ１３・・・フローセル１４・・・固定化固相吸引装置１５・・・小口部用洗浄水供給装置１６・・・反応管ターレット２２・・・エアポンプ　　２３・・・液排出ポンプ２４
・・・洗浄用ポンプ

Claims

【特許請求の範囲】１、標識物質として酵素を用い、抗原抗体反応によりサ
ンプル中の特定物質を測定するに当たり、抗原または抗体を固定化した固相を入れた反応容器を反応ラインに沿って搬送し、反応容器にサン
プルあるいは酵素標識試薬を分注するタイミングから、
反応容器に固相を残したままで固相および反応容器を洗
浄することによってＢ−Ｆ分離を行う洗浄タイミングま
での間の時間として規定される抗原抗体反応時間をＢ−
Ｆ分離のための洗浄タイミングを変更することによって
設定変更することを特徴とする酵素免疫自動測定方法。