JPH0120384B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵素免疫を自動的に測定する方法に関
するものである。

従来、酵素免疫測定は複雑な測定法であり、用
手法で行われていた。この用手法では多数の反応
容器を用意し、抗原または抗体を固定化した固相
をこれらの反応容器の間で移しながら測定を行つ
ている。特に反応によつて固相に結合した物質
（Bound）と結合してない物質（Free）との分離
（Ｂ―Ｆ分離）を行うために固相を反応容器間で
移す操作が行われている。

このような用手法の工程をそのまま自動化しよ
うとすると、固相を或る反応容器から別の反応容
器に移し替える機構が必要となるが、このような
移送機構は構造が相当複雑となり、高価となる欠
点がある。また、固相を反応容器間で移し替える
には時間がかかり、処理能率が悪くなる。

本発明の目的は、このような固相移送機構を設
ける必要のない酵素免疫自動測定方法を提供しよ
うとするものである。

本発明の酵素免疫自動測定方法は、標識物質と
して酵素を用い、抗原抗体反応によりサンプル中
の特定物質を測定するに当り、サンプル搬送ライ
ン上にあるサンプルカツプをサンプル吸引位置ま
で搬送しサンプル分注器でサンプル吸引位置にあ
るサンプルカツプからサンプルを吸引し反応ライ
ン上のサンプル分注位置にある抗原または抗体を
固定化した固相を収容した反応容器に吐出するサ
ンプル分注工程と、反応容器を撹拌位置まで搬送
し反応容器中の固相とサンプル中の特定物質との
反応を促進する第１の撹拌工程と、反応容器を洗
浄位置まで搬送し反応容器の上部開口より洗浄液
を注入し反応容器内の液体を反応容器外へ吸引排
出して固相を反応容器内に残したままで固相を洗
浄する第１の洗浄工程と、反応容器を酵素標識試
薬分注位置まで搬送し反応容器の上部開口より分
注器で酵素標識試薬を分注する酵素標識試薬分注
工程と、反応容器を第２の撹拌位置まで搬送し反
応容器中の固相と酵素標識試薬との反応を促進す
る第２の撹拌工程と、反応容器を第２の洗浄位置
まで搬送し反応容器の上部開口より洗浄液を注入
し反応容器内の液体を反応容器外へ吸引排出して
固相を反応容器内に残したままで固相を洗浄する
第２の洗浄工程と、反応容器を酵素活性測定用試
薬分注位置まで搬送し反応容器の上部開口より試
薬分注器で酵素活性測定用試薬を分注する酵素活
性測定用試薬分注工程と、反応容器を第３の撹拌
位置まで搬送し反応容器中の固相と酵素活性測定
用試薬との反応を促進する第３の撹拌工程と、反
応容器を測定位置まで搬送し反応容器に収容され
ている反応溶液を測光する測定工程とを具え、抗
原または抗体を固定化した固相を反応容器に入れ
たままで、抗原抗体反応、Ｂ―Ｆ分離および酵素
活性測定のための反応を行うことを特徴とするも
のである。

次に、図面につき本発明を詳細に説明する。

第１図は酵素免疫反応の概略図である。１は、
ポリスチレンボールまたはガラスビーズ等の固相
に抗体（あるいは抗原）２ａを固定した固定化固
相である(A)。この固定化固相１に抗体（あるいは
抗原）２ａに対する抗原（あるいは抗体）２ｂを
含む血清あるいはこれに相応する試料を加えて反
応させる(B)。すると、抗原（あるいは抗体）２ｂ
は固定化固相１上の抗体（あるいは抗原）２ａと
反応し、抗原（抗体）―抗体（抗原）複合物固定
化固相３を生成する(C)。この複合物固定化固相３
に、固定化固相１に固定化した抗体（あるいは抗
原）２ａと同一の抗体（あるいは抗原）に酵素を
標識付けした酵素標識抗体（あるいは抗原）、す
なわち酵素標識試薬４を加えて反応させる(D)。こ
れにより、酵素標識抗体（あるいは抗原）４と複
合物固定化固相３の複合物である酵素標識抗体
（抗原）―抗原（抗体）―抗体（抗原）複合物固
定化固相５を生成する(E)。過剰の酵素標識抗体
（あるいは抗原）４を除去し、前記固定化固相５
上の酵素活性を測定する。これによつて試料中の
抗原（あるいは抗体）の含有量を知ることができ
る。

本発明においては、測定開始時から、上述の抗
原（抗体）―抗体（抗原）複合物固定化固相３の
生成のための抗原抗体反応、その後のＢ―Ｆ分
離、酵素標識抗体（抗原）―抗原（抗体）―抗体
（抗原）複合物固定化固相５の生成のための抗原
抗体反応、その後のＢ―Ｆ分離、酵素活性測定の
ための反応を経る測定終了まで反応管内に固相を
入れたままで処理するものである。

第２図は本発明の酵素免疫自動測定方法を実施
する測定機の一例を示す部分図である。

大口部６ａおよび小口部６ｂを備えたＵ字管６
に、大口部６ａから自由に出し入れでき、小口部
６ｂに入らない固定化固相１を用意する。Ｕ字管
６の大口部６ａより固定化固相１と試薬あるいは
緩衝液を加える(F)。次にサンプル分注器７により
測定対象のサンプルを一定量加え(G)、小口部６ｂ
から空気を吹込み撹拌を行い上述の固定化固相３
を生成させる(H)。この後、大口部６ａに洗浄液供
給装置８、小口部６ｂに洗浄液吸引装置９を適用
させ前記固定化固相３およびＵ字管６の洗浄を行
う(I)。次に上述の酵素標識抗体（あるいは抗原）、
すなわち酵素標識試薬４を分注器１０により、Ｕ
字管６の大口部６ａより加え(J)、小口部６ｂより
空気を吹込み撹拌を行い、上述の固定化固相５を
生成させる(K)。この後、洗浄液供給装置８および
洗浄液吸引装置９によつて、前記固定化固相５お
よびＵ字管６の洗浄を行う(L)。次に固定化固相５
を含むＵ字管６内に、固定化固相５上の酵素活性
を測定するための試薬を、試薬分注器１１によつ
て加える（Ｍ）。この後小口部６ｂより空気を吹
込み撹拌を行い、反応を行つた後（Ｎ）、吸引チ
ユーブ１２によつて反応溶液をフローセル１３内
に移送する（Ｏ）。この反応溶液の吸光度を測定
し、固定化固相５上の酵素活性を求める。これに
より、試料中の抗原（あるいは抗体）２ａの含有
量を知ることができる。また、吸光度測定後、Ｕ
字管６内に残つた固定化固相５は大口部６ａに設
けた固定化固相吸引装置１４によつて除去し、小
口部６ｂに設けた洗浄液供給装置１５により洗浄
液をＵ字管６内に供給し、洗浄後、吸引装置１４
により除去する。

第３図は、第２図をさらに詳細に説明するた
め、本発明による自動測定方法を実施する装置を
示す全体図である。

第３図は、大口部６ａおよび小口部６ｂを備え
た複数のＵ字管を保持する恒温槽を上から見た図
である。恒温槽の上面には反応管を移動させる反
応管ターレツト１６が設けてあり、このターレツ
ト１６は矢印の方向に所定ピツチで回動するリン
グ状円板である。一定量の固相を固定化固相供給
装置１７から大口部６ａに供給する。次に、ター
レツト１６が回動し、サンプル分注器７によりサ
ンプルを一定量加える。このサンプル分注器７
は、矢印の方向に所定ピツチで回動するサンプラ
１８のサンプルカツプ１９からサンプルを、シリ
ンジ２０の上下動およびプローブ２１の回動と上
下動によりＵ字管の大口部６ａに分注する。この
サンプルの分注と同時に又はその前後において適
当な試薬又は緩衝液を分注するように構成するこ
ともできる。２２はＵ字管の小口部６ｂに空気を
送るエアポンプである。小口部６ｂから空気を吹
込み、固定化固相とサンプルを撹拌し完全に反応
させる。次に小口部６ｂから液排出ポンプ２３に
より、未反応の液を排出する。同時に洗浄用ポン
プ２４により大口部６ａから洗浄液を供給し、固
相を残したまま固相とＵ字管の洗浄を行なつてＢ
―Ｆ分離を行う。洗浄液は液排出ポンプ２３によ
り排出する。小口部６ｂの上面には上下動する円
板（図示外）を設け、小口部６ｂを介して空気お
よび液を給排する際にこの円板が下降して給排チ
ユーブが小口部６ｂと連結されるようにし、ター
レツト１６の回動時には上昇するように配置す
る。

次に、酵素標識試薬を分注器１０により、大口
部６ａから分注する。上に述べたと同様にエアポ
ンプ２２から小口部６ｂに空気を吹込み撹拌し、
液排出ポンプ２３により液を排出する。洗浄用ポ
ンプ２４により大口部６ａから洗浄液を供給し、
固相を残したまま固相とＵ字管を洗浄後、洗浄液
を液排出ポンプ２３により排出する。

次に、試薬分注器１１によつて、大口部６ａか
ら酵素活性を測定するための試薬を加え、エアポ
ンプ２２から小口部６ｂに空気を吹込み撹拌す
る。次いで、小口部６ｂから減圧ポンプ２５によ
り反応溶液をフローセル２６に移送する。このフ
ローセル２６で吸光度を測定する。２７は光源、
２８はフイルタ、２９は受光素子である。

測定後、大口部６ａに密閉連結し得る吸引装置
１４によりＵ字管の内容物を排出し、小口部６ｂ
に取付けた洗浄液供給装置１５により洗浄液を供
給しＵ字管を洗浄後、洗浄液を吸引装置１４によ
り除去する。

上記実施例においてＵ字管を使用して酵素免疫
反応を行わせたが、Ｕ字管に限られるものではな
く、固相がＢ―Ｆ分離のための洗浄時の洗浄液の
除去によつて反応容器から吸引排出されないよう
な形状、例えば濾斗状、管内に網状のしきり部を
設けたもの等を使用することができる。

以上述べたように本発明の酵素免疫自動測定方
法によれば、測定開始から測定終了まで固相を反
応容器に入れたままで処理するので、固相を或る
反応容器から別の反応容器に移送するための機構
を設ける必要がなく、それだけ構成が簡単にな
り、安価に実施することができる。また、固相を
反応容器内に残したままであるから処理能力も向
上することなる。さらに、サンプル、酵素標識試
薬、酵素活性測定用試薬の分注後に必ず撹拌を行
うようにしたため反応が促進され、反応時間を短
縮することができ、処理能力を更に向上すること
ができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は酵素免疫反応の概略図、第２図は本発
明による自動測定方法における順次の工程を示す
線図、第３図は第２図に示す自動測定方法を実施
する測定機の構成をさらに詳細に示した図であ
る。 １…固定化固相、２…抗原（抗体）、３…抗原
―抗体複合物固定化固相、４…酵素標識抗体、５
…酵素標識抗体―抗原―抗体複合物固定化固相、
６…Ｕ字管、７…試料分注器、８…洗浄水供給装
置、９…洗浄水吸引装置、１０…分注器、１１…
試薬分注器、１２…吸引チユーブ、１３…フロー
セル、１４…固定化固相吸引装置、１５…小口部
洗浄水供給装置、１６…反応管ターレツト、２２
…エアポンプ、２３…液排出ポンプ、２４…洗浄
用ポンプ。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 標識物質として酵素を用い、抗原抗体反応に
   よりサンプル中の特定物質を測定するに当り、サ
   ンプル搬送ライン上にあるサンプルカツプをサン
   プル吸引位置まで搬送しサンプル分注器でサンプ
   ル吸引位置にあるサンプルカツプからサンプルを
   吸引し反応ライン上のサンプル分注位置にある抗
   原または抗体を固定化した固相を収容した反応容
   器に吐出するサンプル分注工程と、反応容器を撹
   拌位置まで搬送し反応容器中の固相とサンプル中
   の特定物質との反応を促進する第１の撹拌工程
   と、反応容器を洗浄位置まで搬送し反応容器の上
   部開口より洗浄液を注入し反応容器内の液体を反
   応容器外へ吸引排出して固相を反応容器内に残し
   たままで固相を洗浄する第１の洗浄工程と、反応
   容器を酵素標識試薬分注位置まで搬送し反応容器
   の上部開口より分注器で酵素標識試薬を分注する
   酵素標識試薬分注工程と、反応容器を第２の撹拌
   位置まで搬送し反応容器中の固相と酵素標識試薬
   との反応を促進する第２の撹拌工程と、反応容器
   を第２の洗浄位置まで搬送し反応容器の上部開口
   より洗浄液を注入し反応容器内の液体を反応容器
   外へ吸引排出して固相を反応容器内に残したまま
   で固相を洗浄する第２の洗浄工程と、反応容器を
   酵素活性測定用試薬分注位置まで搬送し反応容器
   の上部開口より試薬分注器で酵素活性測定用試薬
   を分注する酵素活性測定用試薬分注工程と、反応
   容器を第３の撹拌位置まで搬送し反応容器中の固
   相と酵素活性測定用試薬との反応を促進する第３
   の撹拌工程と、反応容器を測定位置まで搬送し反
   応容器に収容されている反応溶液を測光する測定
   工程とを具え、抗原または抗体を固定化した固相
   を反応容器に入れたままで、抗原抗体反応、Ｂ―
   Ｆ分離および酵素活性測定のための反応を行うこ
   とを特徴とする酵素免疫自動測定方法。