JPS6324162A - 酵素免疫自動測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵素免疫を自動的に測定する方法に関するもの
である。

従来、酵素免疫測定は複雑な測定法であり、用手法で行
われていた。この用手法では多数の反応容器を用意し、
抗原または抗体を固定化した固相をこれらの反応容器の
間で移しながら測定を行っている。特に反応によって固
相に結合した物質（Ｂｏｕｎｄ　）と結合してない物質
（Ｆｒｅｅ　）との分離（Ｂ−Ｆ分離）を行うために固
相を反応容器間で移す操作が行われている。

このような用手法の工程をそのまま自動化しようとする
と、面相を成る反応容器から別の反応容器に移し替える
機構が必要となるが、このような移送機構は構造が相当
複雑となり、高価となる欠点がある。また、固相を反応
容器間で移し替えるには時間がかかり、処理能率が悪く
なる。

本発明の目的は、このような固相移送機構を設ける必要
のない酵素免疫自動測定方法を提供しようとするもので
ある。

本発明の酵素免疫自動測定方法は、標識物質として酵素
を用い、抗原抗体反応によりサンプル中の特定物質を測
定するに当たり、抗原または抗体を固定化した固相を反
応容器に入れたままで、抗原抗体反応、Ｂ−Ｆ分離およ
び酵素活性測定のための反応を行うことを特徴とするも
のである。

次に、図面につき本発明の詳細な説明する。

第１図は酵素免疫反応の概略図である。１は、ポリスチ
レンボールまたはガラスピーズ等の固を目に抗体（ある
いは抗原）２ａを固定した固定化固相である（Ａ）。こ
の固定化固相１に抗体（あるいは抗原）２ａに対する抗
原（あるいは抗体）２ｂを含む血清あるいはこれに相応
する試料を加えて反応させる（Ｂ）。すると、抗原（あ
るいは抗体）２ｂは固定化固相１上の抗体（あるいは抗
原）２ａと反応し、抗原（抗体）−抗体（抗原）複合物
固定化固相３を生成する（Ｃ）。この複合物固定化固相
３に、固定化固相１に固定化した抗体くあるいは抗原）
２ａと同一の抗体（あるいは抗原）に酵素を標識付けし
た酵素標識抗体（あるいは抗原）、すなわち酵素標識試
薬４を加えて反応させる（Ｄ＞。これにより、酵素標識
抗体（あるいは抗原）４と複合物固定化固相３の複合物
である酵素標識抗体（抗原）−抗原（抗体）−抗体（抗
原）複合物固定化固相５を生成する（Ｅ）。

過剰の酵素標識抗体（あるいは抗原）４を除去し、前記
固定化固相５上の酵素活性を測定する。これによって試
料中の抗原（あるいは抗体）の含有量を知ることができ
る。

本発明においては、測定開始時から、上述の抗原（抗体
）−抗体く抗原）複合物固定化固相３の生成のだめの抗
原抗体反応、その後のＢ−Ｆ分離、酵素標識抗体（抗原
）−抗原（抗体）−抗体く抗原）複合物固定化固相５の
生成のための抗原抗体反応、その後のＢ−Ｆ分離、酵素
活性測定のための反応を経る測定終了まで反応管内に同
相を入れたままで処理するものである。

第２図は本発明の酵素免疫自動測定方法を実施する測定
機の一例を示す部分図である。

大口Ｎ６ａおよび小口部６ｂを備えたＵ字管６に、大口
部６ａから自由に出し入れでき、小口部６ｂに入らない
固定化固相１を用意する。Ｕ字管６０大ロ部６ａより固
定化面を目１と試薬あるいは緩衝液を加える（Ｆ）。次
にサンプル分注器７により測定対象のサンプルを一定量
加え（Ｇ）、小口部６ｂから空気を吹込み攪拌を行い上
述の固定化固相３を生成させる（Ｈ）。この後、大口部
６ａに洗浄液供給装置８、小口部６ｂに洗浄液吸引装置
９を適用させ前記固定化固相３およびＵ字管６の洗浄を
行う（１）。次に上述の酵素・標識抗体（あるいは抗原
）、すなわち酵素標識試薬４を分注器１０により、Ｕ字
管６の大口部６ａより加え（Ｊ）、小口部６ｂより空気
を吹込み攪拌を行い、上述の固定化固相５を生成させる
（Ｋ）。この後、洗浄液供給装置８および洗浄液吸引装
置９によって、前記固定化固相５およびＵ字管６の洗浄
を行う（Ｌ）。次に固定化固相５を含むＵ字管６内に、
固定化固相５上の酵素活性を測定するだめの試薬を、試
薬分注器１１によって加える（Ｍ）。

この後小口部６ｂより空気を吹込み攪拌を行い、反応を
行った後（Ｎ）、吸引チューブ１２によって反応溶液を
フローセル１３内に移送する（○）。

この反応溶液の吸光度を測定し、固定化固相５上の酵素
活性を求める。これにより、試料中の抗原（あるいは抗
体）２ａの含有量を知ることができる。また、吸光度測
定後、Ｕ字管６内に残った固定化固相５は大口部６ａに
設けた固定化固相吸引装置１４によって除去し、小口部
６ｂに設けた洗浄液供給装置１５により洗浄液をＵ字管
６内に供給し、洗浄後、吸引装置１４により除去する。

第３図は、第２図をさらに詳細に説明するため、本発明
による自動測定方法を実施する装置を示す全体図である
。

第３図は、大口部６ａおよび小口部６ｂを備えた複数の
Ｕ字管を保持する恒温槽を上から見た図である。恒温槽
の上面には反応管を移動させる反応管ターレット１６が
設けてあり、このターレット１６は矢印の方向に所定ピ
ッチで回動するリング状円板である。一定量の固相を固
定化同相供給装置１７から大口部６ａに供給する。次に
、ターレット１６が回動し、サンプル分注器７によりサ
ンプルを一定量加える。このサンプル分注器７は、矢印
の方向に所定ピッチで回動するサンプラ１８のサンプル
カップ１９からサンプルを、シリンジ２０の上下動およ
びプローブ２１の回動と上下動によりＵ字管の大口部６
ａに分注する。このサンプルの分注と同時に又はその前
後において適当な試薬又は緩衝液を分注するように構成
することもできる。２２はＵ字管の小口部６ｂに空気を
送るエアポンプである。小口部６ｂから空気を吹込み、
固定化固相とサンプルを攪拌し完全に反応させる。

次に小口部６ｂから液排出ポンプ２３により、未反応の
液を排出する。同時に洗浄用ポンプ２４により大口部６
ａから洗浄液を供給し、固ト目を残したまま固相とＵ字
管の洗浄を行なってＢ−Ｆ分離を行う。洗浄液は液排出
ポンプ２３により排出する。小口１１６ｂの上面には上
下動する円板（図示外）を設け、小口部６ｂを介して空
気および液を給排する際にこの円板が下降して給排チュ
ーブが小口部６ｂと連結されるようにし、ターレット１
６の回動時には上昇するように配置する。

次に、酵素標識試薬を分注器１０により、大口部６ａか
ら分注する。上に述べたと同様にエアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌し、液排出ポンプ２３によ
り液を排出する。洗浄用ポンプ２４により大口部６ａか
ら洗浄液を供給し、固相を残したまま同相とＵ字管を洗
浄後、洗浄液を液排出ポンプ２３により排出する。

次に、試薬分注器１１によって、大口部６ａから酵素活
性を測定するための試薬を加え、エアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌する。

次いで、小口１１６ｂから減圧ポンプ２５により反応溶
液をフローセル２６に移送する。このフロー。

セル２６で吸光度を測定する。２７は光源、２８はフィ
ルタ、２９は受光素子である。

測定後、大口部６ａに密閉連結し得る吸引装置１４によ
りＵ字管の内容物を排出し、小口部６ｂに取付けた洗浄
液供給装置１５により洗浄液を供給しＵ字管を洗浄後、
洗浄液を吸引装置１４により除去する。

上記実施例においてＵ字管を使用して酵素免疫反応を行
わせたが、Ｕ字管に限られるものではなく、固相がＢ−
Ｆ分離のための洗浄時の洗Φ液の除去によって反応容器
から吸引排出されないような形状、例えば濾斗状、管内
に網状のしきり部を設けたもの等を使用することができ
る。

以上述べたように本発明の酵素免疫自動測定方法によれ
ば、測定開始から測定終了まで固相を反応容器に入れた
ままで処理するので、固相を成る反応容器から別の反応
容器に移送するための機構を設ける必要がなく、それだ
け構成が簡単になり、安価に実施することができる。ま
た、同相を反応容器内に残したままであるから処理能力
も向上することなる。

【図面の簡単な説明】

第１図は酵素免疫反応の概略図、 第２図は本発明による自動測定方法における順次の工程
を示す線図、 第３図は第２図に示す自動測定方法を実施する測定機の
構成をさらに詳細に示した図である。 １・・・固定化固相 ２・・・抗原（抗体） ３・・・抗原−抗体複合物固定化固相 ４・・・酵素標識抗体 ５・・・酵素標識抗体−抗原一抗体複合物固定北回ト目
６・・・Ｕ字管　　　　　７・・・試材分注器訃・・洗
浄水供給装置 ９・・・洗浄水吸引装置 ＩＯ・・・分注器１１・・・試薬分注器１２・・・吸引
チューブ １３・・・フローセル １４・・・固定化固相吸引装置 １５・・・小口部用洗浄水供給装置 １６・・・反応管ターレット ２２・・・エアポンプ　　２３・・・液排出ポンプ２４
・・・洗浄用ポンプ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、標識物質として酵素を用い、抗原抗体反応によりサ
   ンプル中の特定物質を測定するに当たり、 抗原または抗体を固定化した固相を反応容 器に入れたままで、抗原抗体反応、Ｂ−Ｆ分離および酵
   素活性測定のための反応を行うことを特徴とする酵素免
   疫自動測定方法。