JPS6324161A - 酵素免疫自動測定機における結合物質と非結合物質との分離方法 - Google Patents
酵素免疫自動測定機における結合物質と非結合物質との分離方法Info
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- JPS6324161A JPS6324161A JP6107387A JP6107387A JPS6324161A JP S6324161 A JPS6324161 A JP S6324161A JP 6107387 A JP6107387 A JP 6107387A JP 6107387 A JP6107387 A JP 6107387A JP S6324161 A JPS6324161 A JP S6324161A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は標識物質として酵素を用い、抗原抗体反応によ
りサンプル中の特定物質を測定する酵素免疫自動測定機
に関するものである。
りサンプル中の特定物質を測定する酵素免疫自動測定機
に関するものである。
従来、酵素免疫測定は複雑な測定法であり、自動測定を
行うことはできなかった。この自動化に対する障害とな
る要素の一つに、酵素活性測定がある。すなわち、抗原
抗体反応により酵素を含む複合物固定化固相を生成し、
これに酵素活性を測定する試薬を加えて反応した後、反
応溶液を比色測定すればよいのであるが、この比色測定
の測光路中に面相が侵入すると測定誤差となる欠点があ
る。このため、反応後、先に固相を排出し反応容器に残
った反応溶液を比色測定のためのフローセルに導くこと
が考えられるが、反応容器から固相だけを排出すること
は困難である。このような問題があるため、酵素免疫を
自動的に測定できる装置の開発が阻害されていた。
行うことはできなかった。この自動化に対する障害とな
る要素の一つに、酵素活性測定がある。すなわち、抗原
抗体反応により酵素を含む複合物固定化固相を生成し、
これに酵素活性を測定する試薬を加えて反応した後、反
応溶液を比色測定すればよいのであるが、この比色測定
の測光路中に面相が侵入すると測定誤差となる欠点があ
る。このため、反応後、先に固相を排出し反応容器に残
った反応溶液を比色測定のためのフローセルに導くこと
が考えられるが、反応容器から固相だけを排出すること
は困難である。このような問題があるため、酵素免疫を
自動的に測定できる装置の開発が阻害されていた。
また、酵素免疫測定においては、反応によって結合した
物質（３ｏｕｎｄ ）と結合していない物質（Ｆｒｅｅ
）との分離（Ｂ−Ｆ分離）が必要であるが、これを自動
的に行うことは困難であり、この点でも自動化が阻害さ
れていた。
物質（３ｏｕｎｄ ）と結合していない物質（Ｆｒｅｅ
）との分離（Ｂ−Ｆ分離）が必要であるが、これを自動
的に行うことは困難であり、この点でも自動化が阻害さ
れていた。
本発明の目的は、抗原抗体反応を行い、さらに酵素活性
を測定するだめの反応を行った後の反応溶液の比色測定
を自動的に行うことができる酵素免疫自動測定機を提供
しようとするものである。
を測定するだめの反応を行った後の反応溶液の比色測定
を自動的に行うことができる酵素免疫自動測定機を提供
しようとするものである。
本発明は、標識物質として酵素を用い、抗原抗体反応に
よりサンプル中の特定物質を測定する装置において、反
応容器中において抗原抗体反応および酵素活性測定のた
めの反応を行った後に、固相を含む反応容器より反応溶
液のみを選択的にフローセルに吸引する手段と、フロー
セルに吸引された反応溶液を測光する手段とを具えるこ
とを特徴とする。
よりサンプル中の特定物質を測定する装置において、反
応容器中において抗原抗体反応および酵素活性測定のた
めの反応を行った後に、固相を含む反応容器より反応溶
液のみを選択的にフローセルに吸引する手段と、フロー
セルに吸引された反応溶液を測光する手段とを具えるこ
とを特徴とする。
次に、図面につき本発明の詳細な説明する。
第１図は酵素免疫反応の概略図である。１は、ポリスチ
レンボールまたはガラスピーズ等の固相に抗体（あるい
は抗原）２ａを固定した固定化固相である（Ａ）。この
固定化固相１に抗体（あるいは抗原）２ａに対する抗原
（あるいは抗体）２ｂを含む血清あるいはこれに相応す
る試料を加えて反応させる（Ｂ）。すると、抗原くある
いは抗体）２ｂは固定化固相１上の抗体（あるいは抗原
）２ａと反応し、抗原（抗体）−抗体（抗原）複合物固
定化固相３を生成する（Ｃ）。この複合物固定化固相３
に、固定化面ト目１に固定化した抗体（あるいは抗原）
２ａと同一の抗体（あるいは抗原）に酵素を標識付けし
た酵素標識抗体（あるいは抗原）４を加えて反応させる
（Ｄ）。これにより、酵素標識抗体（あるいは抗原）４
と複合物固定化固相３の複合物である酵素標識抗体（抗
原）−抗原（抗体）−抗体（抗原）複合物固定化固相５
を生成する（Ｅ）。過剰の酵素標識抗体（あるいは抗原
）４を除去し、前記固定化面ト目５上の酵素活性を測定
する。これによって試料中の抗原（あるいは抗体）の含
有量を知ることができる。
レンボールまたはガラスピーズ等の固相に抗体（あるい
は抗原）２ａを固定した固定化固相である（Ａ）。この
固定化固相１に抗体（あるいは抗原）２ａに対する抗原
（あるいは抗体）２ｂを含む血清あるいはこれに相応す
る試料を加えて反応させる（Ｂ）。すると、抗原くある
いは抗体）２ｂは固定化固相１上の抗体（あるいは抗原
）２ａと反応し、抗原（抗体）−抗体（抗原）複合物固
定化固相３を生成する（Ｃ）。この複合物固定化固相３
に、固定化面ト目１に固定化した抗体（あるいは抗原）
２ａと同一の抗体（あるいは抗原）に酵素を標識付けし
た酵素標識抗体（あるいは抗原）４を加えて反応させる
（Ｄ）。これにより、酵素標識抗体（あるいは抗原）４
と複合物固定化固相３の複合物である酵素標識抗体（抗
原）−抗原（抗体）−抗体（抗原）複合物固定化固相５
を生成する（Ｅ）。過剰の酵素標識抗体（あるいは抗原
）４を除去し、前記固定化面ト目５上の酵素活性を測定
する。これによって試料中の抗原（あるいは抗体）の含
有量を知ることができる。
本発明においては、上述の酵素標識抗体（抗原）−抗原
（抗体）−抗体（抗原ン複合物固定化固相５を生成後、
その反応管に酵素活性を測定するための試薬を入れて反
応させ、同相を反応管に残したまま反応溶液のみをフロ
ーセルに導いて比色測定を行うようにする。
（抗体）−抗体（抗原ン複合物固定化固相５を生成後、
その反応管に酵素活性を測定するための試薬を入れて反
応させ、同相を反応管に残したまま反応溶液のみをフロ
ーセルに導いて比色測定を行うようにする。
第２図は本発明の自動測定機の一実施例を示す部分図で
ある。
ある。
大口部６ａおよび小口部６ｂを備えたＵ字管６に、大口
部６ａから自由に出し入れでき、小口部６ｂに入らない
固定化固＋目１を用意する。Ｕ字管６の大口部６ａより
固定化固相１と試薬あるいは緩衝液を加える（Ｆ）。次
にサンプル分注器子により測定対象のサンプルを一定量
加え（Ｇ）、小口部６ｂから空気を吹込み攪拌を行い上
述の固定化固相３を生成させる（Ｈ）。この後、大口部
６ａに洗浄液供給装置８、小口部６ｂに洗浄液吸引装置
９を適用させ前記固定化固相３およびＵ字管６の洗浄を
行う（１）。次に上述の酵素標識抗体（あるいは抗原）
４を分注器１０により、Ｕ字管６の大口部６ａより加え
（Ｊ）、小口部６ｂより空気を吹込み攪拌を行い、上述
の固定化固相５を生成させる（Ｋ）。この後、洗浄液供
給装置８および洗浄液吸引装置９によって、前記固定化
固相５およびＵ字管６の洗浄を行う（Ｌ）。次に固定化
固相５を含むＵ字管６内に、固定化固相５上の酵素活性
を測定するだめの試薬を、試薬分注器１１によって加え
る（ Ｍ ）。この後小口Ｆｆｆｉ６ｂより空気を吹込
み攪拌を行い、反応を行った後（Ｎ＞、吸引チューブ１
２によって反応溶液のみをフローセル１３内に移送する
（○）。この反応溶液の吸光度を測定し、固定化固相５
上の酵素活性を求める。これにより、試料中の抗原（あ
るいは抗体）２ａの含有量を知ることができる。また、
吸光度測定後、Ｕ字管６内に残った固定化面ト目５は大
口部６ａに設けた固定化同相吸引装置１４によって除去
し、小口部６ｂに設けた洗浄液供給装置１５により洗浄
液をＵ字管６内に供給し、洗浄後、吸引装置１４により
除去する。
部６ａから自由に出し入れでき、小口部６ｂに入らない
固定化固＋目１を用意する。Ｕ字管６の大口部６ａより
固定化固相１と試薬あるいは緩衝液を加える（Ｆ）。次
にサンプル分注器子により測定対象のサンプルを一定量
加え（Ｇ）、小口部６ｂから空気を吹込み攪拌を行い上
述の固定化固相３を生成させる（Ｈ）。この後、大口部
６ａに洗浄液供給装置８、小口部６ｂに洗浄液吸引装置
９を適用させ前記固定化固相３およびＵ字管６の洗浄を
行う（１）。次に上述の酵素標識抗体（あるいは抗原）
４を分注器１０により、Ｕ字管６の大口部６ａより加え
（Ｊ）、小口部６ｂより空気を吹込み攪拌を行い、上述
の固定化固相５を生成させる（Ｋ）。この後、洗浄液供
給装置８および洗浄液吸引装置９によって、前記固定化
固相５およびＵ字管６の洗浄を行う（Ｌ）。次に固定化
固相５を含むＵ字管６内に、固定化固相５上の酵素活性
を測定するだめの試薬を、試薬分注器１１によって加え
る（ Ｍ ）。この後小口Ｆｆｆｉ６ｂより空気を吹込
み攪拌を行い、反応を行った後（Ｎ＞、吸引チューブ１
２によって反応溶液のみをフローセル１３内に移送する
（○）。この反応溶液の吸光度を測定し、固定化固相５
上の酵素活性を求める。これにより、試料中の抗原（あ
るいは抗体）２ａの含有量を知ることができる。また、
吸光度測定後、Ｕ字管６内に残った固定化面ト目５は大
口部６ａに設けた固定化同相吸引装置１４によって除去
し、小口部６ｂに設けた洗浄液供給装置１５により洗浄
液をＵ字管６内に供給し、洗浄後、吸引装置１４により
除去する。
第３図は、第２図をさらに詳細に説明するため、本発明
による自動測定機の一実施例を示す全体図である。
による自動測定機の一実施例を示す全体図である。
第３図は、大口部６ａおよび小口部６ｂを備えた複数の
Ｕ字管を保持する恒温譜を上から見た図である。恒温１
ｔｊの上面には反応管を移動させる反応管ターレット１
６が設けてあり、このターレット１６は矢印の方向に所
定ピッチで回動するリング状円彼である。一定量の固相
を固定（ヒ固用供給装置１７から人口部６ａに供給する
。次に、ターレット１６が回動し、サンプル分注器７に
よりサンプルを一定量加える。このサンプル分注器７は
、矢印の方向に所定ピンチで回動するザンブラ１８のサ
ンプルカップ１９からサンプルを、シリンジ２０の上下
動およびプローブ２１の回動と上下動によりＵ字管の大
口部６ａに分注する。このサンプルの分注と同時に又は
その前後において適当な試薬又は緩１封液を分注するよ
うに構成することもできる。２２はＵ字管の小口部６ｂ
に空気を送るエアポンプである。小口部６ｂから空気を
吹込み、固定化固相とサンフルを攪拌し完全に反応させ
る。
Ｕ字管を保持する恒温譜を上から見た図である。恒温１
ｔｊの上面には反応管を移動させる反応管ターレット１
６が設けてあり、このターレット１６は矢印の方向に所
定ピッチで回動するリング状円彼である。一定量の固相
を固定（ヒ固用供給装置１７から人口部６ａに供給する
。次に、ターレット１６が回動し、サンプル分注器７に
よりサンプルを一定量加える。このサンプル分注器７は
、矢印の方向に所定ピンチで回動するザンブラ１８のサ
ンプルカップ１９からサンプルを、シリンジ２０の上下
動およびプローブ２１の回動と上下動によりＵ字管の大
口部６ａに分注する。このサンプルの分注と同時に又は
その前後において適当な試薬又は緩１封液を分注するよ
うに構成することもできる。２２はＵ字管の小口部６ｂ
に空気を送るエアポンプである。小口部６ｂから空気を
吹込み、固定化固相とサンフルを攪拌し完全に反応させ
る。
次に小口部６ｂから液排出ポンプ２３により、未反応の
液を排出する。同時に洗浄用ポンプ２４により大口部６
ａから洗浄液を供給し、面相を残したまま同相とＵ字管
の洗浄を行なってＢ−Ｆ分離を行う。洗浄液は液排出ポ
ンプ２３により排出する。小口部６ｂの上面には上下動
する円板（図示外）を設け、小口部６ｂを介して空気お
よび液を給排する際にこの固成が下降して給排チューブ
が小口部６ｂと連結されるようにし、ターレット１６の
回動時には上昇するように配置する。
液を排出する。同時に洗浄用ポンプ２４により大口部６
ａから洗浄液を供給し、面相を残したまま同相とＵ字管
の洗浄を行なってＢ−Ｆ分離を行う。洗浄液は液排出ポ
ンプ２３により排出する。小口部６ｂの上面には上下動
する円板（図示外）を設け、小口部６ｂを介して空気お
よび液を給排する際にこの固成が下降して給排チューブ
が小口部６ｂと連結されるようにし、ターレット１６の
回動時には上昇するように配置する。
次に、酵素標識試薬を分注器１０により、大口部６ａか
ら分注する。上に述べたと同様にエアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌し、液排出ポンプ２３によ
り液を排出する。洗浄用ポンプ２４により大口部６ａか
ら洗浄液を供給し、固相を残したまま同相とＵ字管を洗
浄後、洗浄液を液排出ポンプ２３により排出する。
ら分注する。上に述べたと同様にエアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌し、液排出ポンプ２３によ
り液を排出する。洗浄用ポンプ２４により大口部６ａか
ら洗浄液を供給し、固相を残したまま同相とＵ字管を洗
浄後、洗浄液を液排出ポンプ２３により排出する。
次に、試薬分注器１１によって、大口部６ａから酵素活
性を測定するだめの試薬を加え、エアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌する。
性を測定するだめの試薬を加え、エアポンプ２２から小
口部６ｂに空気を吹込み攪拌する。
次いで、小口部６ｂから減圧ポンプ２５により反応溶液
をフローセル２６に移送する。このフローセル２６で吸
光度を測定する。２７は光源、２８はフィルタ、２９は
受光素子である。
をフローセル２６に移送する。このフローセル２６で吸
光度を測定する。２７は光源、２８はフィルタ、２９は
受光素子である。
測定後、大口部６ａに密閉連結し得る吸引装置１４によ
りＵ字管の内容物を排出し、小口部６ｂに取付けた洗浄
液供給装置１５により洗浄液を供給しＵ字管を洗浄後、
洗浄液を吸引装置１４により除去する。
りＵ字管の内容物を排出し、小口部６ｂに取付けた洗浄
液供給装置１５により洗浄液を供給しＵ字管を洗浄後、
洗浄液を吸引装置１４により除去する。
上記実施例においてＵ字管を使用して酵素免疫反応を行
わせたが、Ｕ字管に限られるものではなく、反応溶液を
フローセルに導（際に面相が反応溶液と一緒に反応容器
から吸引排出されないような形状、例えば殖斗状、管内
に網状のしきり部を設けたもの等を使用することができ
る。
わせたが、Ｕ字管に限られるものではなく、反応溶液を
フローセルに導（際に面相が反応溶液と一緒に反応容器
から吸引排出されないような形状、例えば殖斗状、管内
に網状のしきり部を設けたもの等を使用することができ
る。
以上述べたように本発明の酵素免疫自動測定機では、反
応後、同相を反応容器内に残したままで反応溶液だけを
フローセルへ導くようにしたため、酵素免疫反応を自動
的に行うことができる。
応後、同相を反応容器内に残したままで反応溶液だけを
フローセルへ導くようにしたため、酵素免疫反応を自動
的に行うことができる。
第１図は酵素免疫反応の概略図、
第２図は本発明による自動測定方法における順次の工程
を示す線図、 第３図は第２図に示す自動測定機の構成をさらに詳細に
示した図である。 １・・・固定北回を目 ２・・・抗原（抗体） ３・・・抗原−抗体腹合物固定化固を目４・・・酵素標
識抗体 ５・・・酵素標識抗体−抗原一抗体複合物固定化固ト目
６・・・Ｕ字管 ７・・・試ｊ科分注器訃・・
洗浄水供給装置 ９・・・洗浄水吸引装置 １０・・・分注器 １１・・・試薬分注器１２・
・・吸引チューブ １３・・・フローセル １４・・・固定化固相吸引装置 １５・・・小口部用洗浄水供給装置 １６・・・反応管ターレット ２２・・・エアポンプ ２３・・・液排出ポンプ２４
・・・洗浄用ポンプ
を示す線図、 第３図は第２図に示す自動測定機の構成をさらに詳細に
示した図である。 １・・・固定北回を目 ２・・・抗原（抗体） ３・・・抗原−抗体腹合物固定化固を目４・・・酵素標
識抗体 ５・・・酵素標識抗体−抗原一抗体複合物固定化固ト目
６・・・Ｕ字管 ７・・・試ｊ科分注器訃・・
洗浄水供給装置 ９・・・洗浄水吸引装置 １０・・・分注器 １１・・・試薬分注器１２・
・・吸引チューブ １３・・・フローセル １４・・・固定化固相吸引装置 １５・・・小口部用洗浄水供給装置 １６・・・反応管ターレット ２２・・・エアポンプ ２３・・・液排出ポンプ２４
・・・洗浄用ポンプ
Claims (1)
- １、標識物質として酵素を用い、抗原抗体反応によりサ
ンプル中の特定物質を測定する装置において、反応容器
中において抗原抗体反応および酵素活性測定のための反
応を行った後に、固相を含む反応容器より反応溶液のみ
を選択的にフローセルに吸引する手段と、フローセルに
吸引された反応溶液を測光する手段とを具えることを特
徴とする酵素免疫自動測定機。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6107387A JPS6324161A (ja) | 1987-03-18 | 1987-03-18 | 酵素免疫自動測定機における結合物質と非結合物質との分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6107387A JPS6324161A (ja) | 1987-03-18 | 1987-03-18 | 酵素免疫自動測定機における結合物質と非結合物質との分離方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4914080A Division JPS56147067A (en) | 1980-04-16 | 1980-04-16 | Automatic measuring instrument for enzyme immunity |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3039046A Division JPH0643163A (ja) | 1991-02-12 | 1991-02-12 | 酵素免疫自動測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6324161A true JPS6324161A (ja) | 1988-02-01 |
| JPH0120383B2 JPH0120383B2 (ja) | 1989-04-17 |
Family
ID=13160594
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6107387A Granted JPS6324161A (ja) | 1987-03-18 | 1987-03-18 | 酵素免疫自動測定機における結合物質と非結合物質との分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6324161A (ja) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS49129588A (ja) * | 1973-04-12 | 1974-12-11 | ||
| JPS5240189A (en) * | 1975-09-26 | 1977-03-28 | Hitachi Ltd | Method and apparatus for chemical analysis |
| JPS5366418A (en) * | 1976-09-18 | 1978-06-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Detecting and mesuring method and apparatus for specific bound protein or bindable substance |
| JPS5472100A (en) * | 1977-11-18 | 1979-06-09 | Kuraray Co | Device for measuring quantity of immunizing substance and analyzing it |
| JPS5523434A (en) * | 1978-08-09 | 1980-02-19 | Toshiba Corp | Automatic analyzer |
-
1987
- 1987-03-18 JP JP6107387A patent/JPS6324161A/ja active Granted
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS49129588A (ja) * | 1973-04-12 | 1974-12-11 | ||
| JPS5240189A (en) * | 1975-09-26 | 1977-03-28 | Hitachi Ltd | Method and apparatus for chemical analysis |
| JPS5366418A (en) * | 1976-09-18 | 1978-06-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Detecting and mesuring method and apparatus for specific bound protein or bindable substance |
| JPS5472100A (en) * | 1977-11-18 | 1979-06-09 | Kuraray Co | Device for measuring quantity of immunizing substance and analyzing it |
| JPS5523434A (en) * | 1978-08-09 | 1980-02-19 | Toshiba Corp | Automatic analyzer |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0120383B2 (ja) | 1989-04-17 |
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