JPS63225388A

JPS63225388A - リゾレシチンの製造方法

Info

Publication number: JPS63225388A
Application number: JP62056479A
Authority: JP
Inventors: Nobuo Fukuda; 信雄福田; Hidehiko Hibino; 日比野　英彦; Osamu Nakachi; 仲地　理
Original assignee: Nippon Oil and Fats Co Ltd
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 1987-03-13
Filing date: 1987-03-13
Publication date: 1988-09-20

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はグリセロホスホリルコリン（以下、ＧＰＣと記
す）から直接リゾレシチン（以下、ＬＰＧと記す）を製
造する方法に関するものである。

〔従来の技術〕

ＬＰＧはホスファチジルコリン（以下、ＰＣと記す）の
アシル基が１個脱離したもので、制癌剤や細胞膜修飾作
用、脳のコリン供給源などとして生理効果を有する化合
物である。

ＬＰＧは自然界、特に動物細胞に広く分布し。

膜系において脂質の数％を占めるといわれている。

ＬＰＧを得る方法としては次の方法が知られている。

■　天然レシチン（卵黄、大豆等）中に含有されるＬＰ
Ｇを溶媒分画、カラム分画等により分取する。

■　天然または合成のＰＣを酵素分解（ホスホリパーゼ
Ａ２処理）して得られるＰＣ，ＬＰＧ、　ＧＰＣの混合
物からカラム分離による精製を行ってＬＰＧを得る。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかるに上記従来のＬＰＧの製造方法のうち、■の方法
は大量の溶媒を使用する必要があること、分取に長時間
を要すること、分取したＬＰＧの脂肪酸が単一脂肪酸で
はないことなどの問題点がある。

また■の方法は酵素が高価であること、酵素が失活しや
すく使いにくいこと、酵素はタンパク質が含まれている
ため緩衝液の調整や活性を抑えるための処理が必要であ
ること、また合成ＰＣを得るには大量の溶媒が必要であ
ること、ＧＰＣ−塩化カドミウム複合体を使用するとカ
ドミウムの除去や副生成物の除去等の精製工程を必要と
じ、長時問責すことなどの問題点がある。

本発明は上記問題点を解決するためのもので、多量の溶
媒やカドミウム塩を使用することなく、ＬＰＧ特に単一
脂肪酸組成を有するＬＰＧを大量に効率よく製造できる
ＬＰＧの製造方法を提案することを目的としている。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、グリセロホスホリルコリン１モルに対して、
脂肪酸の無水物またはハロゲン化物０．７〜３．５モル
未満を、ピリジン誘導体または第三アミンから選ばれる
エステル化触媒の存在下に、非プロトン性高極性溶媒中
で反応させることを特徴とするリゾレシチンの製造方法
である。

本発明においてＬＰＧの原料として用いられるＧＰＣは
脱アシルリン脂質体で、ＬＰＧの骨格となるものであり
、主に大豆、卵黄等の天然リン脂質からＰＣを分離し、
脱アシルして得られる。ＰＣの分離はシリカゲルまたは
活性アルミナを用い、クロロホルム／メタノール等の混
合溶媒で溶出させて行われる。脱アシルはテトラブチル
アンモニウムヒドロキシド等の４級アルキルアンモニウ
ム水酸化物を使用してアルコーリシスして行われるが、
低濃度の水酸化ナトリウム等のアルカリで穏やかに加水
分解してもよい、　ＧＰＣは非常に強い吸湿性を示すの
で、調製後凍結乾燥して空気遮断下、五酸化リンと水酸
化カリウム等で除湿を行っているデシケータ−中に保存
される。

本発明のＬＰＧの原料として用いられる脂肪酸無水物ま
たはハロゲン化物の脂肪酸は直鎖型１分鎖型または飽和
型、不飽和型のいずれでも良く、鎖長は特に限定されな
いが、炭素数１〜３０、好ましくは１２〜２２のものが
適当である。このような脂肪酸としては目的とするＬＰ
Ｇの構造に応じて任意のものを選ぶ。例えば重合性基を
持つ脂肪酸を原料とすると重合性のＬＰＧが得られ、高
度不飽和脂肪酸を原料とすると生理活性を有するＬＰＧ
が得られる。このような脂肪酸としては１例えばラウリ
ン酸、トリデカン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、
パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、オレイン
酸、リノール酸、リルン酸、アラキシン酸、アラキドン
酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサヘキサエ
ン酸等が挙げられる。これらの脂肪酸の形態は無水物ま
たはクロライド、ブロマイド、アイオダイド等のハロゲ
ン化物として反応に用いる。

本発明の反応に用いられるエステル化触媒は。

ピリジン誘導体または第三アミンから選ばれるもので、
ジメチルアミノピリジン、ジメチルアミノメチルピリジ
ン、ジブチルアミノエチルピリジン、４−ピロリジノピ
リジン、ピロリジノイソプロピルピリジン、ピロリジノ
ブチルピリジン、トリエチルアミン、トリブチルアミン
、ジイソプロピルエチルアミン、トリオクチルアミン、
トリプロピルアミン、トリイソプロピルアミンなどが例
示でき。

これらの１種以上のものが使用できるが、そのうち特に
ジメチルアミノピリジンおよびトリエチルアミンが好ま
しい。

本発明の反応に用いる溶媒は非プロトン性高極性のもの
であり、解離して水素イオンを放出しない高極性の溶媒
である。このような溶媒としてはジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ヘキサ
メトキシホスホロアミド、エチレングリコールオリゴエ
ーテル、ピリジン、アセトアニリドなどが例示でき、こ
れらの１種以上のものが使用できる。これらは脱水した
ものを使用する。

ＬＰＧの製造は、ＧＰＣＩモルに対して、脂肪酸の無水
物またはハロゲン化物０．７〜３．５モル未満、好まし
くは１〜１．５モルを、前記触媒の存在下に前記非プロ
トン性高極性溶媒中で反応させる。触媒の使用量はＧＰ
Ｃ１モルに対して０．０１〜１０モル、好ましくは２〜
５モル程度、非プロトン性高極性溶媒の使用量はＧＰＣ
１モルに対して１０−１２０モル、好ましくは３０〜１
１０程度である１反応温度は７０〜１２０℃、好ましく
は８０〜１００℃、反応時間は１〜３時間未満、好まし
くは１〜２時間が適当である。

上記の反応では、ＧＰＣに少量の脂肪酸無水物またはハ
ロゲン化物を非プロトン性高極性溶媒中で反応させるこ
とにより、ＬＰＧを高収率で製造することができる。こ
の場合比較的高温で比較的短時間反応を行うことにより
、ＬＰＧの収率は高くなる。

反応終了後は溶媒抽出、再結晶、各種クロマトグラフィ
ーなどの分離精製手段により容易に目的物を単離できる
が１本発明においては冷アセトン処理による再結晶が収
率および工程の簡便さから特に好ましい。

以下、ＧＰＣと長鎖長脂肪酸無水物とを使用する場合の
ＬＰＧの製造方法について説明する。反応溶媒である充
分に脱水した非プロトン性高極性溶媒にＧＰＣと酸無水
物を添加した後、反応触媒として例えばＮ、Ｎ−ジメチ
ル−４−アミノピリジンを加えて７０〜１２０℃で１〜
３時間未満攪拌すると、粗反応物が得られる。このとき
の反応収率は６０〜８０％である。均−状の粗反応物の
精製には、充分に脱水したアセトンを添加して冷蔵庫に
放置する。放置後、遠心分離器で遠心分離して溶媒を除
去する。

析出した触媒および触媒と酸無水物との複合体を脱水ア
セトンを添加して遠心分離する。この工程を繰り返すこ
とにより反応生成物は完全に除去できる。目的物を多量
に分取するには、中圧カラムにシリカゲルを充填し、通
常のＰＣ分離展開溶媒を通液すると、目的物を得ること
ができる。中圧カラムによる収率は９０〜９５％程度で
ある。単離物は薄層クロマトグラフィーおよび液体クロ
マトグラフィーで単一であり、ファースト◆アトム・ボ
ンバード・イオン化マスクロマトグラフィー（ＦＡＢ−
ＭＳ）で目的物の分子イオンと確認できる。

こうして得られるＬＰＧは制癌効果、膜修飾作用、脳の
コリン供給源および免疫分野における生理効果を有し、
重金属を含まないので、これらの用途に広く利用するこ
とができる。この場合、脂肪酸の種類を選ぶことにより
、ＬＰＧの用途を広げることができ、特に単一脂肪酸の
ＬＰＧとした場合。

個々のアルキル鎖の効果や役割を明確化できる。

〔発明の効果〕

本発明によれば、ＧＰＣを脂肪酸の無水物またはハロゲ
ン化物と非プロトン性高極性溶媒中で反応させるように
したので、ＰＣを合成することなく、また多量の溶媒や
重金属塩、酵素などを使用することなく、任意の脂肪酸
を有するＬＰＧを効率よく多量に製造することができる
。

〔実施例〕

以下、実施例によって本発明を詳述する。実施例中１％
は重量％を示す。

参考例　ＧＰＣの製造市販卵黄レシチン３０ｇを５００ｍＱの無水エチルエー
テルに溶解させ、攪拌しつつテトラブチルアンモニウム
ヒドロキシド１０％メタノール溶液８０ｒ＠Ωを加えて
１０分間室温で反応させた。室温にて２時間放置後上澄
液をデカンテーションして回収し、さらに底に沈澱した
ＧＰＣは無水エチルエーテル１００＋＋＋Ｒで洗った後
、エタノール１２５ｍＱを加えて沸騰させた。

これにＨｙｆｌｏ−Ｓｕｐｅｒ　Ｃｅ１（和光純薬工業
■製、商標）１ｇを加えて熱いうちに濾過した。濾液を
冷却後、無水エチルエーテル２５０■Ｑを加えると沈澱
が生じた。上澄液をデカンテーションによって除き、沈
澱を凍結乾燥してＧＰＣを得た。このときの収量は６．
１ｇであった。このものの分析値は次の通りである。

ＮＭＲ（ＣＤ、　０Ｏ−ｄ４”）δ：　３．２　（ｓ、
　Ｎ”（Ｃ）！３）３）、　３．２０〜４．３０　（脂
、グリセリン−Ｈおよびコリン−Ｈ〕。窒素量（理論値
１２．３％）実測値１１．９％（Ｍｏｌｙｂｄｏｖａｎ
ａｄ。

ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　５ｐａｃｔｒｏｐｈ
ｏｔｏ＋＊ｅｔｒｙ）。

実施例１パルミチン酸６．０ｇ（２３，６ｍＭ）を無水トリフル
オロ酢酸９．８ｇ（４６，７ｍＭ）を添加し、３８℃で
１時間攪拌した。窒素ガス気流下、攪拌しながら徐々に
加熱し、温度が８５℃に達してから５〜５０ｍｍＨｇで
無水トリフルオロ酢酸を除去した。得られた無水パルミ
チン酸全量にジメチルスルホキシド２０ｍＱ、参考例で
得たＧＰＣ２，Ｏｇ　（７，８ａ＋Ｍ）およびＮ、Ｎ−
ジメチル−４−アミノピリジン１．６ｇ（１３，２ｍＭ
）を加え、８０℃で２時間激しく攪拌した。室温放置後
、脱水アセトン２００ｍＭを添加して攪拌すると白色沈
殿が生じた。これを−２０℃の冷凍庫に１時間放置後１
回転数３００ＯＲＰＭで１０分間遠心分離した０回収し
た沈澱物に脱水アセトン１００社を添加し、遠心分離を
２回行った。さらに脱水アセトンで沈澱物を繰返し洗滌
して減圧下で脱溶媒した。上澄液も上記と同様に操作し
た。

得られた白色沈殿物２．７ｇはクロロホルム／メタノー
ル（１／１．　Ｖ／Ｖ）に溶解した。溶解液は分取りロ
マトグラフィー用シリカゲル（水戸化学■製、ＣＧ３．
３００メツシユ）を充填した中圧カラム（２，２ｃｍφ
Ｘ３０ａｍ）に付した。溶離液はクロロホルム／メタノ
ール／水（６５／２５／４、ｖ　／　ｖ　）で、２Ｒを
５ｍＱ／ｍｉｎの割合で流した。ＬＰＧ流出区分を分画
し、この分画区分は減圧下でクロロホルムとメタノール
を留去し、ベンゼンを添加して水を共沸留去した。得ら
れたＬＰＧは２．５　ｇ　（収率６５％）であった。

得られたＬＰＧは薄層クロマトグラフィーでは、展開溶
媒〔クロロホルム／メタノール／水（６５／２５／４、
Ｖ／Ｖ））においてＩｌｆ値０．１２に単一スポットが
認められ、プツトマー試薬により青色を発色した（リン
酸塩の検出）。さらにファースト・アトム・ボンバード
・イオン化マスクロマトグラフィー（ＦＡＢ−ＭＳ）の
直接導入法で分析した結果、ＬＰＧの分子イオン（（Ｍ
÷）Ｉ）”４９６）が明瞭に認められた。

実施例２ドコサヘキサエン酸１０　ｇ　（３０，５ｍＭ）にジメ
チルホルムアミド１．１　ｇ　（１５，３ｍＭ）とオキ
シ塩化リン３．３ｇ（２１、３ａ＋Ｍ）の混液を３８℃
に保持しながら１時間かけて滴下した。窒素気流下で３
０分間反応させた６窒素気流下、８０〜１００℃で減圧
蒸留してドコサヘキサエン酸クロライド８ｇを得た。ド
コサヘキサエン酸クロライド５．５　ｇ　（１５，６鳳
Ｍ）にジメチルホルムアミドびトリエチルアミン０．９　ｇ　（８．９１Ｍ）を加え
て１００”Ｃで１．５時間激しく攪拌した．室温に放冷
後説水アセトン５０ｍｊｌを添加して攪拌すると白色沈
殿を生じた．これを−２０℃の冷凍庫に１時間放置後、
３０００ＲＰＭで１０分間遠心分離した．回収した沈殿
物に脱水アセトン１００ｍＭを添加して攪拌し遠心分離
する操作を２回行った．さらに沈殿物を脱水アセトンで
洗滌して、減圧下で脱溶媒した．得られた白色沈殿物３
．１．はクロロホルムｌメタノール（１／１。

ｖ／ｖ）に溶解した．溶解液は分取りロマトグラフィー
用シリカゲル（水戸化学（株）製、ＣＧ３．　３００メ
ツシユ）を充填した中圧カラム（２．２ｃｍφｘ　３０
ｃｍ）に付した．溶離液はクロロホルム／メタノール／
水（６５／２５／４，　Ｖ／Ｖ）で、３円を１０ｍｌ／
ｗｉｎの割合で流した。

ＬＰＧの流出区分を分画し、この分画区分を減圧下でク
ロロホルムとメタノールを留去し、ベンゼンを添加して
水を共沸留去した．得られたＬＰＧは２、９ｇ（収率６
６％）であった。

得られたＬＰＧは薄層クロマトグラフィーでは、展開溶
媒〔クロロホルム／メタノール／水（６５／２５／４、
ｖ／ｖ）　）においてＲｆ　Ｏ．１５に単一スポットが
認められ、プツトマー試薬により青色を発色した。さら
にＦＡＢ−ＭＳの直接導入法で分析した結果．　ＬＰＧ
の分子イオン（（Ｍ＋Ｈ）”５６５）が明瞭に認められ
た。

実施例３実施例２と同様にして、リノール酸５ｇ（１７．９ｄ）
および無水トリフルオロ酢酸７．４ｇ（３５．４ｍＭ）
から得たリノール酸クロライド４．０４（（７．８＋ｓ
Ｍ）とＧＰＣ２ｇ（７．８ｉｔＭ）とを、Ｎ，Ｎ−ジメ
チル−４−アミノピリジン１、６ｇ（１３．２ｍＭ）の
存在下に、ジメチルスルホキシド２０ｍｊ１中，１００
℃テ１．５時間反応さｆ，ＬＰＧ２．９ｇ（収率７５％
）を得た．得られたＬＰＧは薄層クロマトグラフィーで
は，展開溶媒〔クロロホルム／メタノール／水（６５／
２５／４．　Ｖ／Ｖ）］においてＲｆ　Ｏ．１５に単一
スポットが認めらた．またＦＡＢ−ＭＳで分析した結果
、ＬＰＧの分子イオン（　（Ｍ＋Ｈ）”５１７）が明瞭
に認められた。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）グリセロホスホリルコリン１モルに対して、脂肪
酸の無水物またはハロゲン化物０．７〜３．５モル未満
を、ピリジン誘導体または第三アミンから選ばれるエス
テル化触媒の存在下に、非プロトン性高極性溶媒中で反
応させることを特徴とするリゾレシチンの製造方法。
（２）エステル化触媒がジメチルアミノピリジン、ジメ
チルアミノメチルピリジン、ジブチルアミノエチルピリ
ジン、４−ピロリジノピリジン、ピロリジノイソプロピ
ルピリジン、ピロリジノブチルピリジン、トリエチルア
ミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン
、トリオクチルアミン、トリプロピルアミンおよびトリ
イソプロピルアミンから選ばれる１種以上のものである
特許請求の範囲第１項記載の製造方法。
（３）非プロトン性高極性溶媒がジメチルスルホキシド
、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ヘキサ
メトキシホスホロアミド、エチレングリコールオリゴエ
ーテル、ピリジンおよびアセトアニリドから選ばれる１
種以上のものである特許請求の範囲第１項または第２項
記載の製造方法。