JPH01141598A - 高度不飽和脂肪酸含有モノグリセリドの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は高度不飽和脂肪酸をＳｎ−１位に有する高度不
飽和脂肪酸含有モノグリセリドの製造法に関するもので
ある。

（従来の技術） 天然モノグリセリドは脂質の代謝過程で生成され、生体
脂質から必ず発見される６ｔ＆ＦＡ成分である。

モノグリセリドは立体特異性からＳｎ−１型、Ｓｎ−２
型、Ｓｎ−３型が存在することが知られており、Ｓｎ−
１型とＳｎ〜２型は分離できるが、Ｓｎ−２型とＳｎ−
３型は分離するのは困難とされている。これらの個々の
立体特異的異性体の合成や分離が従来から検討されてき
た。

一般にＳｎ−１位モノグリセリドは、α−モノグリセリ
ド、ｌ−モノグリセリドまたは１−アシルグリセロール
と呼ばれ、Ｓｎ−２位モノグリセリドはβ−モノグリセ
リド、２−モノグリセリドまたは２−アシルグリセロー
ルと呼ばれている。

天然に存在するモノグリセリドはＳｎ−１型とＳｎ−２
型の混在であり、構成する脂肪酸は多成分であるため、
モノグリセリドの分子種は複雑であり、特定の分子種の
みを単離することは難しい。

このモノグリセリドは総脂質中で、［リアシルグリセロ
ール、ジアシルグリセロール、コレステロールエステル
および遊離コステロール等とともに工１１純脂質中に見
出される。

特に最近の住化学の進歩により、これらの単純脂質もリ
ン脂質や糖脂質等の極性脂質と共に細胞膜を形成してい
ることが知られている。最近、モノオレインによる消化
吸収促進作用（円（ＡＲＭ　ＴＨＣＩＩ−ＩＡＰＡＮ第
１巻、第８号、７〜１３頁（１９８５））があることが
明らかになっている。

そのため、高度不飽和脂肪酸含有モノグリセリドの生理
活性が期待されている。生理活性が期待されるモノグリ
セリドの脂肪酸は、オレイン酸、リノール酸、リルン酸
、γ−リルン酸、ジホモＴ−リルン酸、アラキドン酸、
エイコサベンクエン酸、ドコサヘキサエン酸のような高
度不飽和脂肪酸が主体となる分子種である。高度不飽和
脂肪酸は、水産動物の脂肪組織、哺乳動物の臓器等に見
出されるが、主にトリアジルグリセロールやリン脂質と
して存在し、モノグリセリドとしての存在量は非常に少
ないので、高度不飽和脂肪酸を含有するモノグリセリド
を分画する原料には不適当である。

一方、Ｓｎ−１位あるいはＳｎ−２位に脂肪酸が組み込
まれたＳｎ−１位モノグリセリドまたはＳｎ−２位モノ
グリセリドを合成する方法がすでに知られている（桑田
勉、改稿油脂化学、前渡文庫、１１２〜１１５頁、１９
６３、合波書店）。この方法により、グリセロールのＳ
ｎ−１位に高度不飽和脂肪酸を結合したＳ　ｎ−１位モ
ノグリセリドの合成を行うとすれば、次のような方法が
ある。まず、α−モノクロルヒドリンと脂肪酸ナトリウ
ム塩、または銀塩と共に熱する方法が知られている。ま
たは、グリセロールがアセトンと縮合してアセトングリ
セロールを生じ、酸クロライド、希酸による反応を経由
して目的物を合成する方法も知られている。

（発明が解決しようとする問題点） しかし、このような従来法では、次の問題点がある。

■　脱クロライドで生成する水酸基がＳｎ−２位に転移
し、Ｓｎ−２位モノグリセリドを生成する。

■　目的物中にＳｎ−１位モノグリセリドとＳｎ−２位
モノグリセリドが混在する。

■　脂肪酸のクロライド化に際し、化学変化に弱い高度
不飽和脂肪酸のクロライド化に対する配慮がなされてい
ないので、目的物中の高度不飽和脂肪酸の二重結合に異
性化が生じやすい。そのため得られるモノグリセリドは
、細胞レベルの実験で厳しい立体構造の識別を行う酵素
やレセプターに対して正確に認識されない。

現在、天然の脂質中にはＳｎ−１位に高度不飽和脂肪酸
を含有するモノグリセリドが存在していることが知られ
ているが、それは非常に微量であり、この立体特異性を
保持して生理作用を発揮できるモノグリセリドの効率良
い合成法や単離法は見当たらない。

従って本発明の目的は、高収率で、出来るだけ簡単な工
程により高度不飽和脂肪酸をＳｎ−１位に含むモノグリ
セリドを製造する方法を提供することにある。

（問題点を解決するための手段） 本発明は、（Ａ）グリセロホスホコリンと高度不飽和脂
肪酸を反応させて１，２−ジアシル−３ｎ−３−グリセ
ロホスホコリンを得る工程、（Ｂ）１．２−ジアシル−
３ｎ−３−グリセロホスホコリンをホスホリパーゼＡ２
により処理して１−アシル−３ｎ−３−グリセロホスホ
コリンを得る工程、（Ｃ）　　１−アシル−３ｎ−３−
グリセロホスホコリンをホスホリパーゼＣにより処理し
て１−モノアシルグリセロールを得る工程、 を含む高度不飽和脂肪酸含有モノグリセリドの製造法で
ある。

本発明で用いるグリセロホスホコリンは、一般にＬ−α
−グリセロホスホコリンと呼ばれるもので、系統名は、
Ｓｎ−１グリセロール−３−ホスホリルコリンであり、
立体特異的にグリセロールの３位がホスホリル：２リン
によって覆われており、１位、２位は遊離水酸基となっ
ている。このようなグリセロホスホコリンは、天然ホス
ファチジルコリンをテトラブチルアンモニウムヒドロキ
シドで脱アシル化し、遊離状態ではメタノール溶液とし
て、また結晶状態では塩化カドミウム複合体として回収
することができる。このグリセロホスホコリンは遊離状
態でも結晶状態でもアシル化反応が進行するので、化学
構造や原料としての入手からも好ましい原料である。

また、高度不飽和脂肪酸は生理活性の点から、炭素数１
８以上、不飽和結合が３個以」二のものが好ましく、例
えばオレイン酸、リノール酸、リルン酸、γ〜リルン酸
、特に好ましくは炭素数２０以上の生体組織中に見出さ
れるジホモＴ〜リルン酸、アラキドン酸、エイコサベン
クエン酸、ドコサヘキサエン酸が適している。

本発明で使用する高度不飽和脂肪酸は高純度品が市販さ
れ、また脳、肝臓等にも存在し、大量には魚油、卯黄リ
ン脂質等に存在し、加水分解、尿素付加、分子蒸留、カ
ラムクロマトグラフィー等を組合せることにより高純度
品が単離できる。

」二重の各脂肪酸は、酸無水物、酸塩化物、酸イミダゾ
ール塩等に変換して用いられる。また、上記の各脂肪酸
を用いて、後述の製造工程を経ても、不飽和脂肪酸は二
重結合の位置異性化や幾何異性化を生ぜずＳｎ−１位モ
ノグリセリドが得られる。

特に高度不飽和脂肪酸は誘導化に際して、二重結合のマ
イグレーションが生じやすいため、反応生成物のチエツ
クを行ったところ、マイグレーションは認められなかっ
た。出発原料から目的物までの二重結合のマイグレーシ
ョンのチエツクはＩＲ（赤外スペクトル）（１０５６〜
９４０　ｃｍ−’　：孤立トランス異性体量）、ＩＪＶ
（紫外スペクトル）　（２３３ｍμ：共役ジエン共役ト
エン酸ｍ／ｊ　：共役トリエン酸）で行い、目的物は、
ＦＡＢ−ＭＳ　（質里スペクトル）（Ｍ＋Ｈ）”で分子
量を確認後、加水分解して得た高度不飽和脂肪酸は、ジ
アゾメタンでエステル化し、キャピラリーカラムガスク
ロマトグラフィーで二重結合のマイグレーションに起因
するアーティファクト（人工的生成物）のないことを確
認した。

高度不飽和脂肪酸含有モノグリセリドは、次の工程で製
造される。まず（Ａ）工程においてグリセロホスホコリ
ンとＳｎ−１位、Ｓｎ−２位に組み込んだ高度不飽和脂
肪酸の酸無水物、酸塩化物、酸イミダゾール塩等とを、
例えばジメチルアミノピリジン等の塩基性アミン触媒下
で反応させ、精製して、１．２−ジアシル−Ｓｎ−３−
グリセロホスホコリンを得る。次に（Ｂ）工程において
上記の１．２−ジアシル−３ｎ−３−グリセロホスホコ
リンをホスホリパーゼＡ２により処理して、Ｓｎ−２位
を特異的に加水分解し、精製後、１−アシル−３ｎ−３
−グリセロホスホコリンを得る。次に（Ｃ）工程におい
て上記ｌ−アシル−３ｎ−３−グリセロホスホコリンを
ホスファチジルコリン分解型ホスホリパーゼＣにより処
理してＳｎ−３位のグリセロールの水酸基とホスホコリ
ン基を結ぶリン酸ジエステル結合を加水分解し、これを
精製してＳｎ−１位モノグリセリドを得る。本発明にお
いて用いるホスホリパーゼＣは一種のホスホジェステラ
ーゼで、グリセロリン脂質やスフィンゴミエリンのリン
酸ジ゛エステル結合を加水分解し、ジアシルグリセロー
ルやセラミドとリン酸モノエステルを生成する一群の酵
素の総称である。この酵素は基質特異性からホスファチ
ジルコリン分解型、スフィンゴミエリン分解型およびホ
スファデジルイノシトール分解型の３種が存在するが、
細菌が菌体外酵素として分泌するホスファチジルコリン
分解型を使用するのが好ましい。ホスファチジルコリン
分解型のホスホリパーゼＣの起源としては、クロストリ
デイウム・バーフリンジエンズ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）やバチルス・セレウス（
Ｂａｃｉｌｉｕｓ　ｅｅｒｅｕｓ）等が知られており、
市販品もある。

本発明において製造することができるＳｎ−１位モノグ
リセリドは、種々の化合物があり、代表的な化合物とし
てモノオレイン酸グリセリド、モノオレイン酸グリセリ
ド、モノγ−リルン酸グリセツト、モノジポモＴ−リル
イン酸グリセリド、モノアラキドン酸グリセリド、モノ
エイコサペンタエン酸グリセリド、モノドコサヘキサエ
ン酸グリセリドなどが挙げられる。

本発明によって製造されるＳｎ−１位モノグリセリドは
、未分化細胞（例えば癌細胞等）の正常細胞への分化誘
導効果および細胞賦活剤として期待されており、いずれ
も細胞膜流動性を変化させる架剤として利用できる。

（発明の効果） 本発明の方法によれば、グリセロホスホコリンに高度不
飽和脂肪酸を組み込んだ１．２−ジアシル＝Ｓｎ−３−
グリセロホスホコリンから１−アシル−３ｎ−３−グリ
セロホスホコリンを経て、Ｓｎ−１位モノグリセリドを
得る工程により、高度不飽和脂肪酸の二重結合に起因す
るアーティファクｌもなく、Ｓｎ−１位モノグリセリド
を、天然の立体特異性を維持したまま筒車な工程で、か
つ高収率で製造することができる。

（実施例） 以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明す
る。

実施例１ ドコサヘキサエン酸８．０ｇ　（２４ｍＭ）を無水四塩
化炭素３０ｍ１！に溶解後、ジシクロカルボジイミド２
．７ｇ（１３ｍＭ）を添加し、３７℃で５時間攪拌した
。析出したジシクロへキシルウレアを濾別して除き、脱
溶媒後、ドコサヘキサエン酸無水物５．３ｇを得た。得
られたドコサヘキサエン酸無水物全量にジメチルスルホ
キシド５０ｍ１を添加した液に、グリセロホスホコリン
１　、４ｇ　（５ｍＭ）及びジメチルアミノピリジン１
．３５ｇ（１１ｍＭ）を加え、５０℃で６時間激しく攪
拌した。

反応後、沈澱物を濾別し、冷アセトンで洗浄し、遠心分
離によって沈澱物を回収した。この操作を３回繰り返し
、脱溶媒後、粗ホスファチジルコリンが得られた。得ら
れた粗ホスファチジルコリンをクロロホルム／メタノー
ル混液に溶解し、イオン交換樹脂アンバーラード２００
Ｃ（ローム・アンド・ハース社製）を５ｇ加えて触媒を
除去した。この粗ホスファチジルコリンをシリカゲルカ
ラムに付しクロロホルム／メタノール／水（６５／２５
／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）混液にて溶出し、１．２−ドコサヘ
キサエニルホスファチジルコリン４．３ｇを得た。この
ものの分析値は次の通りである。

ＦＡＢ−ＭＳ：　　（Ｍ＋Ｈ）”　　８７７得られた１
、２−ドコサヘキサエニルホスファチジルコリン４．３
ｇの一部２．０ｇを、脱水エチルエーテル１１−と脱水
メタノール３−に溶解し、この溶液にハブ毒ホスホリパ
ーゼＡ２（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｆ　１ａｖｏｖｉ
ｒｉｄｉｓ、、和光純薬工業■製）　１２ｍｇ、　０．
１Ｍ塩化カルシウム溶液３．２ｄ、０．２Ｍ　ｌ−リス
−塩酸緩衝液３　、５　ｍｌを添加して３７℃で攪拌し
ながら一晩反応させた。エタノールで反応を止め、ブラ
イ・ダイア−法により抽出した。抽出液を脱溶媒後、冷
アセトンで洗浄し、遊離脂肪酸を除き、粗１−アシルー
３ｎ−３−グリセロホスホコリン３．５ｇを得た。

これをシリカゲルカラムに付し、クロロホルム／メタノ
ール／水（６５／２５／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）混液にて溶出
し、Ｓｎ−１ドコサヘキサエニルーＳｎ−グリセロ−３
−ホスホリルコリン２．９ｇを得た。このものの分析値
は次の通りである。

ＦＡＢ−ＭＳ：　　（Ｍ＋Ｈ）’　　５６６上記Ｓｎ−
１ドコサヘキサエニル−３ｎ−グリセロ−３−ホスホリ
ルコリンの一部１．０ｇを８００μ！の脱水メタノール
に溶解し、この溶液に細菌ホスホリパーゼＣ（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ起源、シグマ社製）を２０ｍｇ
、０．２Ｍ　ｌ−リス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝　７゜４）
を６−１Ｏ，１Ｍ塩化カルシウム３　、５　ｍｌ、脱水
エチルエーテル４−を加えた。反応混合物をスクリュー
キャップ付２０−の試験管中にテフロンスターラー・バ
ーと共に加えて、３７℃で１時間激しく撹拌しながらイ
ンキュベートした。

反応後、混合物にヘキサン１２−を加えてから分液ロー
トに移し抽出後、窒素雰囲気下で濃縮した。

濃縮物にクロロホルムｌ　ｍｌを加えて沈澱させて除去
した。このものをクロロホルム／メタノール／水（６５
／２５／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）の展開溶媒で薄層クロマトグ
ラフ４−　（ＴＬＣ）分析した結果、Ｒｆ　＝０．１３
に少量の１−アシル−３ｎ−３−グリセロホスホコリン
と、Ｒｆ　＝０．８にＳｎ　　１位モノグリセリドが確
認された。上記の沈澱物をシリカゲルカラムに付し、ク
ロロホルム／メタノール／水（６５／２５／４　Ｖ／Ｖ
／Ｖ）混液に溶出Ｌ７．６５０ｍｇのモノドコサヘキサ
エン酸グリセリドを得た。このものの分析イ直は次の通
りである。

り（観：黄色透明の油状液体 溶解状態：メタノールに可溶 ＴＬＣ： ■　ヘキサン／エチルエーテル／酢酸 （５０１５０／Ｉ　Ｖ／Ｖ／Ｖ）　　　Ｒｆ　＝０．０
８■クロロホルム／アセトン／メタノール（９０／９／
Ｉ　Ｖ／Ｖ／Ｖ）　　　　Ｒｆ　＝０．０５■り００ホ
ルム／メタノール／水 （６５／２５／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）　　　Ｒｆ　＝０．８
（Ｒｆ値０．０８及び０．８は標準体のモノドコサへキ
サエン酸グリセリドの位置に相当した。）ＦＡＢ−ＭＳ
　：　　（Ｍ＋Ｎａ）”　　４２５分子量４０２ ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィー）：ＯＤＳ　
（オクタデシルシラン）カラムメタノール１ｍ１／ｍｉ
ｎ　　単一ピークキャビラリ−ガスクロマトグラフィー
：カーボワックス２０Ｍ液相、５０ｍ、　２００℃加水
分解して得た脂肪酸をジアゾメタンでメチル化して測定
した。ドコサヘキサエン酸が主成分であり、二重結合の
マイグＩノージョンに起因するアーティファクトは認め
られなかった。

過酸化物量：電位差滴定法　２５．０ｍｅｑ、／ｋｇ実
施例２ ドコサヘキサエン酸２５　ｇ　（７６ｍＭ）にジメチル
ホルムアミド２．７ｇ　（３８ｍＭ）とオキシ塩化リン
８　、３ｇ　（５３ｍＭ）の混液を６０〜６５℃に保ら
、４０分かりて撹拌しながら滴下し、その後３０分間反
応を継続した。反応物を８０〜１００℃に加熱しながら
減圧１留し、残渣としてドコサヘキサエン酸クロライド
２４．８ｇを得た。

ドコサヘキサエン酸クロライド６．３ｇ（１８ｍＭ）に
ジメチルホルムアミド３９ｍ１を添加した液に、グリセ
ロホスホコリン１．１ｇ（４ｍＭ）及び１−リエタノー
ルアミン０　、８９ｇ　（９ｍＭ）を加え、６０℃で７
時間激しく攪拌した。

室温放冷後、冷アセトン４０ＩＩ１１を添加して振り混
ぜ、遠心分離により沈澱物を回収し、この操作を３回繰
り返した。脱溶媒後、沈澱物３．０ｇをシリカゲル（富
士ゲルｃ句製、ＣＧ３）の中圧ガラスカラム（２，２ｃ
ｍ　Ｘ４５ｃ、ｍ）に付した。このカラムをクロロホル
ム約１．２１にて未反応物を除去し、クロロホルム／メ
タノール／水（６５／２５／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）混液にて
溶出した。溶出液３．０　／を減圧下で脱溶媒し、■、
２−ジドコサヘキサエニルホスファチジルコリン１．９
ｇを得た。このものの分析値は次の通りである。

ＦＡＢ−ＭＳ：　　（Ｍ＋ｔｌ）”　　８７７ＴＬＣ：
クロロホルム／メタノール／水（６５／２５／４　Ｖ／
Ｖ／Ｖ）　　　Ｒｆ　＝０．３９得られた１、２−ジド
コサヘキサエニルホスファチジルコリン１．９ｇを脱水
エチルエーテル１０−と脱水メタノール２ｍｌに溶解し
、この溶液にハブ毒ホスホリパーゼＡ２　（Ｔｒｉｍｅ
ｒｅｓｕｒｕｓ　ｆｌａｖｏｖｉｒｉｄｔｓ和光純薬工
業側製）　１０ｍｇ、０．１Ｍ塩化カルシウム溶液３　
ｍｌ、０．２Ｍ　トリス−塩酸緩衝液３．５ｍｌを添加
して３７℃で攪拌しながら一晩反応させた。エタノール
で反応を止め、ブライ・ダイア−法により抽出した。抽
出液を脱溶媒後、冷アセトンで洗浄し、遊離脂肪酸を除
き、粗１−アシルー３ｎ−３−グリセロホスホリルコリ
ン１．６ｇを得た。これをシリカゲルカラムに付し、ク
ロロホルム／メタノール／水（６５／２５／４　Ｖ／Ｖ
／Ｖ）混液ニテ）容出し、Ｓｎ−１−ドコサヘキサエニ
ルー３ｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン１．３ｇを
得た。このものの分析値は次の通りである。

ＦＡＢ−ＭＳ：　　　（Ｍ＋Ｈ）”　　　５６６得られ
たＳｎ−１ドコサヘキサエニルーＳｎ−グリセロ−３−
ホスホリルコリン１．３ｇを８００μ！の脱水メタノー
ルに溶解し、この溶液に細菌ホスホリパーゼＣ（Ｂａｃ
ｊｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕ’ｓ起源λシグマ社製）　２０
ｍｇ、０．２Ｍ　トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，４）　
６　ｄ、０、１？？塩化カルシウム溶液３．５ｍｌ、エ
チルエーテル４　ｍｌを加えた。反応混合物を、スクリ
ューキャップ付２０ｍ１の試験管中にテフロンスターラ
ーハーを加えて、３７℃で１時間激しく攪拌しながらイ
ンキュベートした。

反応混合物にヘキサノ１５−を加えてから分液ロー１・
に移し抽出した。抽出後、窒素雰囲気下で濃縮した。濃
縮物にクロロホルムｌ　ｍｌを加えて沈澱させて除去し
た。このものをクロロホルム／メタノール／水（６５／
２５／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）の展開溶媒で薄層クロマトグラ
フィー分析した結果、Ｒｆ　＝０．１３に少縫のＳ　ｎ
−Ｉ　Ｆコザヘキサエニル−Ｓｎ−グリセ１コー３−ホ
スホコリンとＲｒ　＝０．８にＳｎ−１位モノグリセリ
ドが確認された。上記の沈澱物をシリカゲルカラムに付
し、クロロホルム／メタノール／水（６５／２５／４　
Ｖ／Ｖ／Ｖ）混液にて溶出し、７２０Ｂのモノドコザヘ
キザエン酸グリセリドを得た。このものの分析値は次の
通りである。

外観：黄色透明の油状液体 溶解状態：メタノール、−・キサンに可溶ＴＬＣ：■ヘ
キサン／エチルエーテル／酢酸（５０１５０／ｌ　Ｖ／
Ｖ／Ｖ）　　　Ｒｆ　＝０．０８■クロロホルム／アセ
トン／メタノール（９０／９／Ｉ　　Ｖ／Ｖ／Ｖ）　　
　　　Ｒｆ　＝０．０５■クロロホルム／メタノール／
水 （６５／２５／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）　　　Ｒｆ　＝０．８
（Ｒｆ値０．０８及び０．８は標準体のモノドコザへキ
サエン酸グリセリドの位置に相当した。）ＦＡＢ−ＭＳ
　：　　（Ｍ＋Ｎａ）”　　４２５分子量４０２ ＨＰ　Ｉ、　Ｃ：　ＯＤ　Ｓカラム メタノールｌｙＪ／ｍｉｒ＋　　単一ピークキャビラリ
ーガスクロマトグラフィー二カーボワックス２０門液相
、５０ｍ、２００℃加水分解して得た脂肪酸をジアゾメ
タンでメチル化して測定した。ドコサヘキサエン酸が主
成分であり、二重結合のマイグレーションに起因するア
ーティファクトは認められなかった。

過酸化物量：電位差滴定法　２３．Ｏｍｅｑ、／ｋｇ実
施例３ アラキドン酸４．０ｇ（１２，４ｍＭ）を無水門塩化炭
素２０ｍ１に２容解後、ジシクロカルボジイミド１　、
４ｇ　（６、７ｍＭ）を添加し、３７℃で６時間撹拌し
た。析出したジシクロウレアを濾別して除き、脱溶媒後
、アラキドン酸無水物２．４ｇを得た。得られたアラキ
ドン酸無水物全量にジメチルスルホキシド４０耐を添加
した液に、グリセロホスホコリン０．７ｇ（２，７ｍＭ
）及びジメチルアミノピリジン０．７ｇ　（２、７ｍＭ
）を加え、５０℃で６時間激しく攪拌した。

反応後、沈澱物を濾別し、冷アセトンで洗浄し、遠心分
離によって沈澱物を回収した。この操作を３回繰り返し
、脱溶媒後、粗ホスファチジルコリンが得られた。得ら
れた粗ホスファチジルコリンをクロロボルム／メタノー
ル混液に溶解し、実施例１と同様のイオン交換樹脂を用
いて触媒を除去した。この粗ホスファチジルコリンを実
施例１と同様にカラムに付して？容出した１、２−ジア
ラキドニルホスファチジルコリン１．６ｇを得た。この
ものの分析値は次の通りである。

ＦＡＢ−ＭＳ：　　（Ｍ＋Ｈ）”　　７９７得られた１
、２−ジアラキドニルホスファチジルコリン１．６ｇを
脱水エチルエーテル１０　ｍｌと脱水メタノール２　ｍ
ｌに溶解し、この溶液にハブ毒ホスホリパーゼＡ２（Ｔ
ｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓ　ｆｌａｖｏｖｉｒｉｄｉｓ）
　１０ｍｇ。

０．１Ｍ塩化カルシウム溶液３　ｍｌ、０．２Ｍ　ｌ−
リス−塩酸緩衝液３　、５　ｍｌを添加して３７℃で撹
拌しながら一晩反応させた。エタノールで反応を止め、
ブライ・ダイア−法により抽出した。抽出液を脱溶媒後
、冷アセトンで洗浄し、遊離脂肪酸を除き、′Ｍｉ１−
アシルーＳｎ−３−グリセロホスホコリン１．２ｇを得
た。これをシリカゲルカラムに付し、クロロホルム／メ
タノール／水（６５／２５／４　Ｖ／Ｖ／Ｖ）混液にて
）容出し、Ｓｎ−１アラキトノイル−３ｎ−グリセロ−
３−ホスホリルコリンｏ、ｓｇを得た。このものの分析
値は次の通りである。

ＦＡＢ−ＭＳ；　　（Ｍ＋Ｈ）”　　５２７上記Ｓｎ−
１アラキトノイル−３ｎ−グリセロ−３−ホスホリルコ
リン０．８ｇを８００μｌの脱水メタノールに溶解し、
この溶液を実施例１と同様の条件でインキュベートした
。

反応混合物を抽出後、薄層クロマトグラフィー分析した
結果、Ｒｆ　＝０．１３に微量の１−アシル−Ｓｎ−３
−グリセロホスホコリンと、Ｒｆ　＝０．７５乙、ごＳ
Ｌ′！−１位モノグリセリドが確認された。相りｎ−１
位モノグリセリドをシリカゲルカラムに（□＝Ｊし、５
０９ｍｇのモノアラキドン酸グリセリドを得た。

このものの分析値は次の通りである。

外観：黄色透明の油状液体 溶解状Ｂ：メタノールに可溶 ＴＬＣ： ■ヘキサン／エチルエーテル／酢酸 （５０１５０／Ｉ　Ｖ／Ｖ／Ｖ）　　　Ｒｆ　＝０．０
７■クロロホルム／アセトン／メタノール（９０／９／
Ｉ　Ｖ／Ｖ／Ｖ）　　　　Ｒｆ　＝０．０５ＦＡＢ−Ｍ
Ｓ　：　　ＣＭ＋Ｎａ）”　　３８５分子量３６２ キャピラリーガスクロ°７トグラフイー二カーボワソク
ス２０Ｍ液相、５０ｍ、　２００℃実施例１と同様にア
ーティファクトは認められなかった。

過酸化物量：電位差滴定法　１Ｂ、４ｍｅｑ／ｋｇ実施
例４ エイコサペンタエン酸１４．９　ｇ　（４９，３ｍＭ）
にジメチルホルムアミド１　、８ｇ　（２４、７ｍＭ）
とオキシ塩化リン５、４ｇ　（３４、５ｍＭ）の混液を
６０〜６５℃に保ち、３５分間かけて撹拌しながら滴下
し、その後、反応物を８０〜１００℃に加熱しながら減
圧蒸留し、残渣としてエイコサペンタエン酸り１コライ
ド１４．８ｇを得た。エイコサペンタエン酸クロライド
６．０ｇ　（１８，７ｍＭ）　にジメチルホルムアミド
３０ｍ１を添加した液に、グリセロホスホコリン１゜Ｉ
ｇ　（４ｍＭ）及びトリエタノールアミン０．９ｇ（９
ｍＭ）を加え、６０℃で７時間激しく攪拌した。

以下、実施例２と同様に行い３．］、ｇの粗ホスファチ
ジルコリンをシリカゲルカラム処理して、１．２−ジエ
イコサペンタエニルホスフアチジルコリン１．８ｇを得
た。このものの分析値は次の通りである。

ＦＡＢ−ＭＳ：　　（Ｍ＋Ｈ）“　８２５ＴＬＣ：クロ
ロホルム／メタノール／水（６５／２５／４　Ｖ／Ｖ／
Ｖ）　　　Ｒｆ　＝０．３９得られた１、２−ジエイコ
サベンタエニルホスファチジルコリン１．８ｇを実施例
２と同様にホスホリパーゼＡ２処理後、精製してＳｎ−
１エイコサペンタエノイル＝Ｓｎ−グリセロ−３−ホス
ホコリン１．２ｇを得た。このものの分析値は次の通り
である。

ＦＡＢ−ＭＳ：　　（Ｍ十Ｈ）”　　５３９得られたＳ
ｎ−１エイコサペンタエノイル−８ｎ−グリセロ−３−
ホスホリルコリン１．２ｇを実施例２と同様にホスホリ
パーゼＣ処理後、精製して７００ｍｇのモノエイコサベ
ンクエン酸グリセリドを得た。このものの分析値は次の
通りである。

外観、溶解状態、ＴＬＣ，ＨＰＬＣおよびキャピラリー
ガスクロマトグラフィーは、実施例２と同様の結果であ
る。

ＦＡＢ−ＭＳ　：　　（Ｍ＋Ｎａ）”　　３９７分子量
３７４ 過酸化物量：電位差滴定法　２４．１ｍｅｑ、／ｋｇ

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１において得られるモノドコサへキサ
エン酸グリセリドをファースト・アトム・ボンバードイ
オン化マスクロマトを直接導入法で分析した結果を示す
図である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）（Ａ）グリセロホスホコリンと高度不飽和脂肪酸
   を反応させて１，２−ジアシル−Ｓｎ−３−グリセロホ
   スホコリンを得る工程、 （Ｂ）１，２−ジアシル−Ｓｎ−３−グリセロホスホコ
   リンをホスホリパーゼＡ＿２により処理して１−アシル
   −Ｓｎ−３−グリセロホスホコリンを得る工程、 （Ｃ）１−アシル−Ｓｎ−３−グリセロホスホコリンを
   ホスホリパーゼＣにより処理して１−モノアシルグリセ
   ロールを得る工程、 を含む高度不飽和脂肪酸含有モノグリセリドの製造法。
2. （２）高度不飽和脂肪酸は炭素数１８以上、不飽和結合
   が３個以上のものである特許請求の範囲第１項記載の製
   造法。