JP2002136298A

JP2002136298A - Ｄｈａを高濃度に含有するアシルグリセリドの製造方法

Info

Publication number: JP2002136298A
Application number: JP2000334624A
Authority: JP
Inventors: Tetsuo Nara; 哲生奈良; Masao Nakatate; 雅生中楯; Hitoshi Urano; 仁浦野
Original assignee: Tama Biochemical Co Ltd
Current assignee: Tama Biochemical Co Ltd
Priority date: 2000-11-01
Filing date: 2000-11-01
Publication date: 2002-05-14

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明はアシルグリセリドの製造方法におい
て、ＤＨＡを高濃度に含有する手法の開発を課題とす
る。【解決手段】０．１〜１．５Ｍ／Ｌの濃度を有する緩
衝液を用いることにより、解決できることを見出した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】ＤＨＡを高濃度に含有するア
シルグリセリドの製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＤＨＡは、ドコサヘキサエン酸、すなわ
ち、１分子当たり２２個の炭素原子を有し、６個の２重
結合を有するｎ−３系高度不飽和脂肪酸に分類される直
鎖脂肪酸である。近年、その生理活性に学習機能向上、
視力の向上、血圧低下、抗動脈硬化症、抗腫瘍、抗アレ
ルギー症、精神の安定化等の効果があることが知られて
きており、栄養補助食品としても有用なものと認められ
ている。

【０００３】このＤＨＡは主に海洋産物より得られる油
脂に含まれており、特にマグロ、カツオ、イワシ等から
得られる魚油にトリアシルグリセリドとして存在し、そ
の含有量は多いもので総脂肪酸組成に対し２０％〜３０
％であり、ＤＨＡ以外の脂肪酸が大量に存在している。
このため、ＤＨＡを有効量摂取する場合に脂質摂取過
多、他の脂肪酸によるＤＨＡの有用性の低下という問題
がある。

【０００４】このために、ＤＨＡをさらに効率よく摂取
する方法として高濃度化が望まれ、ウィンタリング法、
水の存在下による微生物由来のリパーゼを用いた加水分
解法(特開平４−１６５１９号公報)が行われている。ま
た、同公報にはｐＨ保持の目的で必要に応じ少量(０．
００１〜０．０５Ｍ／Ｌ)の緩衝液を使用することも示
されてはいる。しかしながら、これらの方法を用いて
も、ＤＨＡの含有量は総脂肪酸組成に対して４５％〜５
５％が限度であった。

【０００５】一方、油脂と水との混合物にリパーゼを作
用させる反応において、反応系に水溶性高分子を添加す
ることにより、ＤＨＡ含有量を６０％以上に濃縮する方
法も知られている(特開平８−６０１８１号公報)。しか
し、この方法では反応終了後有機物を多く含む水が残
り、その処理にコストがかかる問題がある。従って、安
定的に且つ効率よく、高濃度のＤＨＡを含有するアシル
グリセリドを製造する方法が求められている状況であ
る。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】アシルグリセリドの製
造方法において、ＤＨＡを高濃度に含有する手法の開発
を課題とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記課題
を解決すべく鋭意努力した結果、０．１〜１．５Ｍ／Ｌ
の濃度を有する緩衝液を用いることにより、解決できる
ことを見出した。すなわち、本発明は(１)ＤＨＡを含む
アシルグリセリドをリパーゼを用いて加水分解を行う方
法において、０．１〜１．５Ｍ／Ｌの濃度を有する緩衝
液を用いることを特徴とするＤＨＡを含有するアシルグ
リセリドの製造方法、(２)緩衝液の濃度が０．５〜１．
２Ｍ／Ｌであることを特徴とする(１)記載のアシルグリ
セリドの製造方法、(３)緩衝液がリン酸、リン酸塩又は
その誘導体のいずれかを含むことを特徴とする(１)又は
(２)記載のアシルグリセリドの製造方法、(４)ＤＨＡの
濃度が６０％以上であることを特徴とする(１)、(２)又
は(３)記載のアシルグリセリドの製造方法に関する。

【０００８】本発明は、ＤＨＡを含有する魚油等を高塩
濃度緩衝液の存在下、リパーゼを用いて脂肪酸を選択的
に加水分解し、その後、遊離脂肪酸を除去することによ
り高濃度のＤＨＡを含むアシルグリセリド型油脂を効率
的に得ることを意図したものである。本発明において、
アシルグリセリドとは各種脂肪酸がグリセリンにエステ
ル結合した状態を示す。

【０００９】すなわち、本発明はリパーゼを用いた加水
分解反応系にリン酸等の緩衝液を０．１〜１．５Ｍ／Ｌ
存在せしめることにより、リパーゼの脂肪酸選択性が向
上し、且つ、加水分解された遊離脂肪酸が緩衝液中の陽
イオンと結合し、リパーゼの認識対象外になることによ
り、加水分解反応進行率を高め、ＤＨＡを効率よく濃縮
することができることを見出したものである。

【００１０】本発明において、原料となる魚油はＤＨＡ
を多く含むもの(例えば、１０％〜３０％)が好ましく、
マグロ、カツオ、イワシ、アジ等由来の魚油が利用でき
る。また、ＤＨＡを多く含有するものであれば、鯨油、
イカ油、微生物由来油等も使用することができるが、そ
の起源については特に限定されるものではない。

【００１１】次に、上記原料に高塩濃度緩衝液及びリパ
ーゼを添加して処理する。本発明において使用する緩衝
液は、リパーゼの反応阻害を示さないｐＨ４．０〜９．
０の範囲で強い緩衝能を示すものが良い。好ましくは、
リパーゼの加水分解反応における最適ｐＨとする。

【００１２】高塩濃度緩衝液の量としては、原料に対し
１０％〜２０００％であり、好ましくは１００％〜１０
００％である。高塩濃度緩衝液としてはリン酸を含有し
ていることが好ましい。すなわち、リン酸の存在により
リパーゼによる加水分解反応において、ＤＨＡはリパー
ゼの加水分解反応を受けずらくなり、アシルグリセリド
として高濃度に濃縮されていく。緩衝液のリン酸源とし
ては、リン酸、リン酸塩、リン酸誘導体が挙げられる。

【００１３】高塩濃度緩衝液の濃度としては、リン酸と
して０．１〜１．５Ｍ／Ｌの範囲でよく、好ましくは
０．５〜１．２Ｍ／Ｌが良い。リン酸濃度が高くなるに
したがって、反応により得られる油脂のＤＨＡ含有量が
高くなっていく。緩衝液は無塩のものも使用できるが、
塩を用いたものが好ましい。使用する塩としては、ナト
リウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム
塩、マンガン塩等が挙げられる。

【００１４】本発明において使用するリパーゼとして
は、微生物、動物又は植物由来を問わないが、好ましく
はＤＨＡに対して基質特異性を有するものが良い。微生
物由来のリパーゼとしては、キャンディダ属、リゾプス
属、シュードモナス属、ムコール属、アスペルギルス
属、ペニシリウム属又はアルカリゲネス属等由来のもの
が挙げられるが、本発明では特にキャンディダ属に属す
る微生物由来のリパーゼが効率よく使用できる点で好ま
しく、市販のもの(例えば、商品名リパーゼ−ＯＦ；名
糖産業社製)を用いることができる。

【００１５】加水分解反応を進行させるためのリパーゼ
の添加量は、油脂加水分解活性を表すユニット(Ｕ)で示
した場合、原料油脂１ｇに対して１Ｕ〜１００，０００
Ｕで良く、好ましくは１００〜１０、０００Ｕである。
この加水分解反応を行うには、反応器にて高塩濃度緩衝
液を調製し、原料油脂を入れ、十分な攪拌混合を行いな
がら、混合物の温度を２５〜７０℃、好ましくは３５〜
４５℃に保温する。これにリパーゼを加え加水分解反応
を行う。反応は静置でも進行するが、窒素などの不活性
ガスによる攪拌、さらには機械的攪拌の導入により、よ
り効率的に加水分解反応を進行させることができる。

【００１６】この加水分解反応は、リパーゼをイオン交
換樹脂、活性炭、多孔性樹脂、ハイドロキシアパタイト
に吸着させ、これを充填したカラムを用いて連続的に行
うこともできる。そして、回分式で加水分解反応を行っ
た場合の反応時間は３〜２０時間である。反応液は、非
極性溶媒、例えばヘキサン等の炭化水素系溶媒を用いて
油脂を抽出し、これより水酸化ナトリウム、水酸化カリ
ウム等を含むアルカリ水溶液を用いて遊離脂肪酸を除去
することにより、ＤＨＡを６０％以上含有するアシルグ
リセリドを製造することができる。以下、実施例により
本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに
限定されるものではない。

【００１７】

【発明の実施の形態】(実施例１)１．０Ｍ／Ｌリン酸
水素２ナトリウム−クエン酸緩衝液(ｐＨ７．０)４００
ｍｌとマグロ頭部より抽出された油脂２００ｇを攪拌混
合し、４０℃に保温後、油脂１ｇに対して１０００Ｕの
キャンディダ・シリンドラシエ由来のリパーゼ(リパー
ゼ−ＯＦ；名糖産業社製)を加え、１５時間加水分解反
応を行った。得られた混合物よりヘキサン４００ｍｌに
て油脂を抽出し、このヘキサン層を水洗後、加水分解さ
れた遊離脂肪酸の１．２倍等量の水酸化ナトリウムを用
いて遊離脂肪酸を除去した。減圧下、ヘキサンを留去し
ＤＨＡが濃縮されたアシルグリセリド３９．３ｇを得
た。ＧＣ分析による総脂肪酸組成に対するＤＨＡ含有量
は、原料が２６．９％に対し得られた油脂は、７１．４
％であった。

【００１８】(実施例２)０．１Ｍ／Ｌリン酸水素２ナ
トリウム−クエン酸緩衝液(ｐＨ７．０)８００ｍｌとマ
グロ頭部より抽出された油脂１００ｇを攪拌混合し、４
０℃に保温後、油脂１ｇに対して８０００Ｕのキャンデ
ィダ・シリンドラシエ由来のリパーゼ(リパーゼ−Ｏ
Ｆ；名糖産業社製)を加え、１５時間加水分解反応を行
った。反応液を実施例１と同様に処理しアシルグリセリ
ド１８．９ｇを得た。ＧＣ分析による総脂肪酸組成に対
するＤＨＡ含有量は、原料が２６．９％に対し得られた
油脂は、６２．４％であった。

【００１９】(実施例３)０．５Ｍ／Ｌリン酸水素２ナ
トリウム−クエン酸緩衝液(ｐＨ７．０)８００ｍｌとマ
グロ頭部より抽出された油脂２００ｇを攪拌混合し、４
０℃に保温後、油脂１ｇに対して１０００Ｕのキャンデ
ィダ・シリンドラシエ由来のリパーゼ(リパーゼ−Ｏ
Ｆ；名糖産業社製)を加え、１５時間加水分解反応を行
った。反応液を実施例１と同様に処理しアシルグリセリ
ド４２．５ｇを得た。ＧＣ分析による総脂肪酸組成に対
するＤＨＡ含有量は、原料が２６．９％に対し得られた
油脂は、６４．６％であった。

【００２０】(実施例４)１．２Ｍ／Ｌリン酸水素２ナ
トリウム−クエン酸緩衝液(ｐＨ７．０)８００ｍｌとマ
グロ頭部より抽出された油脂４００ｇを攪拌混合し、４
０℃に保温後、油脂１ｇに対して１０００Ｕのキャンデ
ィダ・シリンドラシエ由来のリパーゼ(リパーゼ−Ｏ
Ｆ；名糖産業社製)を加え、１５時間加水分解反応を行
った。反応液を実施例１と同様に処理しアシルグリセリ
ド４５．７ｇを得た。ＧＣ分析による総脂肪酸組成に対
するＤＨＡ含有量は、原料が２６．９％に対し得られた
油脂は、７３．４％であった。

【００２１】(実施例５)１．０Ｍ／Ｌトリス−リン酸
緩衝液(ｐＨ７．０)５００ｍｌに塩化カルシウム２ｇを
入れ、マグロ頭部より抽出された油脂１００ｇを攪拌混
合し、４０℃に保温後、油脂１ｇに対して８０００Ｕの
キャンディダ・シリンドラシエ由来のリパーゼ(リパー
ゼ−ＯＦ；名糖産業社製)を加え、１５時間加水分解反
応を行った。反応液を実施例１と同様に処理しアシルグ
リセリド１１．２ｇを得た。ＧＣ分析による総脂肪酸組
成に対するＤＨＡ含有量は、原料が２６．９％に対し得
られた油脂は、７４．６％であった。

【００２２】(比較例１)脱イオン水６００ｍｌとマグロ
頭部より抽出された油脂３００ｇを攪拌混合し、４０℃
に保温後、油脂１ｇに対して８０００Ｕのキャンディダ
・シリンドラシエ由来のリパーゼ(リパーゼ−ＯＦ；名
糖産業社製)を加え、１５時間加水分解反応を行った。
反応液を実施例１と同様に処理しアシルグリセリド６
３．３ｇを得た。ＧＣ分析による総脂肪酸組成に対する
ＤＨＡ含有量は、原料が２６．９％に対し得られた油脂
は、４７．５％であった。

【００２３】(比較例２)比較例１で得られた油脂を比較
例１と同様な条件で処理した。ＧＣ分析による総脂肪酸
組成に対するＤＨＡ含有量は、原料が４７．５％に対し
得られた油脂は、５４．５％であった。

【００２４】(比較例３)１．０Ｍ／Ｌトリス−塩酸緩
衝液(ｐＨ７．０)５００ｍｌに塩化カルシウム２ｇを入
れ、マグロ頭部より抽出された油脂１００ｇを攪拌混合
し、４０℃に保温後、油脂１ｇに対して８０００Ｕのキ
ャンディダ・シリンドラシエ由来のリパーゼ(リパーゼ
−ＯＦ；名糖産業社製)を加え、１５時間加水分解反応
を行った。反応液を実施例１と同様に処理しアシルグリ
セリド３０．１ｇを得た。ＧＣ分析による総脂肪酸組成
に対するＤＨＡ含有量は、原料が２６．９％に対し得ら
れた油脂は、５５．３％であった。

【００２５】(実施例６)実施例１と同様の手法でＤＨＡ
含有量７０．０％のアシルグリセリドを得た。これをシ
リカゲル(ＢＷ−８０富士シリシア社製)に吸着し、溶
媒を用いて分画を行った。薄層クロマトグラフィーによ
りトリアシルグリセリド画分とジアシルグリセリド画分
を確認したが、モノアシルグリセリドは極微量であっ
た。これらの重量はトリアシルグリセリドが５２．９
％、ジアシルグリセリドが４６．３％であった。それぞ
れのＧＣ分析による総脂肪酸組成に対するＤＨＡ含有量
は、トリアシルグリセリドが５９．７％、ジアシルグリ
セリドが８３．０％であった。

【００２６】

【発明の効果】本発明により、ＤＨＡを６０％以上含有
するアシルグリセリドを効率的且つ選択的に製造するこ
とができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続きＦターム(参考） 4B064 AD85 AD88 CA21 CB03 CD01 CD07 CD25 DA10 4H059 AA10 BA33 BB05 BB07 BC06 BC48 CA38 CA74 EA21

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ＤＨＡを含むアシルグリセリドをリパー
ゼを用いて加水分解を行う方法において、０．１〜１．
５Ｍ／Ｌの濃度を有する緩衝液を用いることを特徴とす
るＤＨＡを含有するアシルグリセリドの製造方法。
【請求項２】緩衝液の濃度が０．５〜１．２Ｍ／Ｌで
あることを特徴とする請求項１記載のアシルグリセリド
の製造方法。
【請求項３】緩衝液がリン酸、リン酸塩又はその誘導
体のいずれかを含むことを特徴とする請求項１又は２記
載のアシルグリセリドの製造方法。
【請求項４】ＤＨＡの濃度が６０％以上であることを
特徴とする請求項１、２又は３記載のアシルグリセリド
の製造方法。