JPS6319520B2

JPS6319520B2 -

Info

Publication number: JPS6319520B2
Application number: JP58243675A
Authority: JP
Inventors: Toshuki Matsuo; Kenji Sagawa
Original assignee: SANTORII KK
Current assignee: SANTORII KK
Priority date: 1983-12-26
Filing date: 1983-12-26
Publication date: 1988-04-22
Also published as: US4748232A; AU578057B2; NZ210750A; DE3484391D1; EP0147193A2; AU3713384A; EP0147193B1; ATE62252T1; EP0147193A3; ZA8410044B; DK170618B1; EP0398451A1; US5354900A; DK624884A; DK624884D0; CA1245635A; JPS60136596A

Description

【発明の詳細な説明】

（発明の分野）この発明は、利尿作用、ナトリウム利尿作用及
び血圧降下作用を有するペプチド並びにその酸付
加塩、並びにこれらを含んで成る利尿剤に関す
る。（発明の背景）種々の体液性因子、すなわち生理活性物質が、
物理的因子、例えば心拍出量、血管壁の弾性等と
共に血圧を規定する重要な因子であることはよく
知られている。この体液性因子が関与する系とし
て、レニン−アンジオテンシン−アルドステロン
系、カテコラミン系、プロスタグランジン系、カ
リクレイン−キニン系と共にナトリウム利尿ホル
モン系が存在し、ウアベイン様物質といわれるナ
トリウム利尿ホルモンが血圧の上昇に関与するこ
ともすでに周知である。なお、この明細書において「ナトリウム利尿」
とはカリウムイオンに対してナトリウムイオンを
選択的に排泄する利尿を言う。（従来技術）従来から、本態性高血圧の治療にナトリウムイ
オンの排泄を目的として、利尿剤、例えばフロセ
マイドが用いられている。しかしながら、この物
質とこの発明の物質とは構造が全く異る。一方、ヒトの心房中には、ペプチドホルモン産
生細胞中に見られる顆粒と形態的に類似する顆粒
が存在することが知られている〔J.D.Jamieson
及びG.E.palade，J.Cell Biol.，23，151（1964）〕。
また、ラツトの心房のホモジネート物及びその顆
粒が、ラツトに対してナトリウム利尿を起すこと
も知られている〔A.J.DeBold等、Life Sci.，28，
89（1981）；R.Keeller，Can.J.Physiol.
Pharmacol.，60，1078（1982）等〕。さらに、最
近において、Mark G.Currie S.等はヒト、ウサ
ギ、ブタ及びラツトの心房中にナトリウム利尿作
用を有する分子量２万〜３万のペプチド様物質及
び分子量１万以下のペプチド様物質が存在するこ
とを示唆した〔Science，221，71〜73（1983）〕。本発明者等は、ナトリウム選択性が高く効果的
な利尿作用を有する物質を見出すべく鋭意研究を
行つた結果、ヒトの心房から、28個のアミノ酸で
構成され約3100の分子量を有する全く新しいペプ
チドを単離することに成功し、このペプチドの構
造を決定すると共に、このペプチドが顕著な利尿
作用、ナトリウム利尿作用及び血圧降下作用を有
することを見出し、この発明を完成した。すなわち、この発明は、顕著な利尿作用、特に
ナトリウム利尿作用を有する新規なペプチド、及
び該ペプチドを含んで成る利尿剤を提供すること
を目的とする。なお、この明細書において、この新規ペプチド
をα−hANP（α−human atrial natriuretic
polypeptide）と称する。（発明の構成） (A) α−hANPの構造及び物理化学的性質この発明のペプチドα−hANPは次の構造式
（）で表わされる。上記の構造式（）において、とは直接
に結合しており、又このアミノ酸鎖は左側にア
ミノ末端を有し右側にカルボキシ末端を有す
る。式中、Aspはアスパラギン酸、Asnはアス
パラギン、Alaはアラニン、Argはアルギニ
ン、Ileはイソロイシン、Glyはグリシン、Glu
はグルタミン酸、Glnはグルタミン、Cysは1/2
シスチン、Serはセリン、Tyrはチロシン、
Pheはフエニルアラニン、Metはメチオニン、
Leuはロイシンをそれぞれ表わし、いずれもＬ
−アミノ酸である。分子量：約3100（ゲル過法による。）旋光度：〔α〕²⁵ _D＝−80.0℃（ｃ＝0.16，0.1N
酢酸）。紫外線吸収スペクトル：Max＝275nm。呈色反応：エールリツヒ反応陰性、坂口反
応、及びパウリ反応いずれも陽性。酸性・中性・塩基性の別：塩基性溶剤に対する溶解性：水、メタノール及び酢
酸に溶解し、酢酸エチル、酢酸ブチル、エチル
エーテル、ヘキサン、石油エーテル、ベンゼン
及びクロロホルムに難溶である。薄層クロマトグラフイー：Rf値 0.41（ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝
４：１：１：２） 0.34（ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝
30：６：20：24） 0.08（ｎ−ブタノール：酢酸：酢酸エチル：水
＝１：１：１：１）。アミノ酸組成（アミノ酸分析による）

【表】

【表】なお、この化合物は前記のごとく塩基性であ
り、無機酸、例えば塩酸、硫酸、燐酸等、又は有
機酸、例えば蟻酸、酢酸、プロピオン酸、コハク
酸、クエン酸等と共に常法に従つて酸付加塩に転
換することができる。 (B) α−hANPの生物学的性質この発明のペプチドα−hANPは顕著な利尿作
用、ナトリウム利尿作用及び血圧降下作用を有す
る。試験方法雄性SD系ラツト（体重300〜400ｇ）にペント
バルビタール60mg／Kgを腹腔内投与することによ
つて麻酔し、以下Life Sciences，Vol.28，pp89
〜94に記載されている方法に準じて行つた。気道確保のため、気管カニユーレ（PE−240
Clay−Adams）を施し、股動脈に血圧測定用の
動脈カニユーレ（PE−10にPE−50を接続）を挿
入し、股静脈にリンゲル液投与用の静脈カニユー
レを挿入した。この静脈カニユーレを通して1.2
mlのリンゲル液を10分間にわたつて注入した後
1.2ml／時の速度で定常注入（constant infusion）
を行つた。シラステイツク・チユーブ（内径0.02インチ、
外径0.037インチ、ダウコーニング社製）の膀胱
カニユーレから試験管内に採尿した。この採尿は
被験物質を投与する前30分間と投与後５分間又は
その後経時的に行い、この尿試料の分析値を比較
することにより被験物質の作用を測定した。被験物質α−hANPは、その所定量を5μｇのバ
シトラシン（抗菌剤）と共に50μの滅菌生理食
塩水に溶解し、頚静脈から投与した。 α−hANPの投与量は0.1nモル（群）、0.2n
モル（群）及び0.4nモル（群）の３段階と
し、対照としてα−hANPを投与せずバシトラシ
ンのみを投与する群（群）、及び比較のためα
−hANPの代りに公知のナトリウム利尿剤である
フロセマイド（Furosemide）を1.21μモル投与す
る群（群）を設けた。結果この試験において次表に示す結果が得られた。

【表】

【表】この表から明らかなごとく、この発明のペプチ
ドα−hANPは顕著な利尿作用及びナトリウム利
尿作用を有する。すなわち、この発明のα−
hANPを0.4nモル投与した場合、その利尿作用及
びナトリウム利尿作用は公知の利尿剤であるフロ
セマイドを1.21μモル投与した場合のそれにほぼ
匹敵する。この投与量（0.4nモル）において、こ
の発明のα−hANPは尿排泄量を約20倍に増加せ
しめ、ナトリウムの排泄量を約27倍に増加せしめ
た。又、被験化合物を投与しない場合の尿中の
Na／Ｋ比がおよそ0.3であるのに対し、α−
hANPを0.4nモル投与した場合この比は約2.0に
上昇し、この発明のα−hANPがNaを選択的に
排泄するナトリウム利尿剤として有用であること
が示唆された。さらに、被験物質を投与した後経時的に採尿し
て経過を観察した場合の結果は第１図のようであ
つた。この図から明らかなごとく、この発明のα
−hANPの利尿作用及びナトリウム利尿作用は公
知の利尿剤であるフロセミドのそれよりも急速に
生じた。また、第２図に示す如く、この発明のα−
hANPを1.2μｇ（0.4nモル）投与した後、血圧は
緩かに15〜20mmHg降下し、約45分間持続した。
この結果によりα−hANPが血圧降下作用を有す
ることも明らかとなつた。 α−hANPの利尿剤としての適性前記のごとくこの発明のペプチドα−hANPは
顕著な利尿作用及びナトリウム利尿作用を有す
る。このペプチドは繰返し投与しても抗体産生を惹
起せず、アナフイラキシーシヨツクを起こさな
い。また、この発明のペプチドはＬ−アミノ酸の
みからなり、投与後、生体内の各種プロテアーゼ
により徐々に分解されるため毒作用をほとんど有
しない。前記のごとく、α−hANPはｎｇ／Kgのオーダ
ーで効果を発揮し、毒性が非常に低いから、1n
ｇ／Kg〜10mg／Kgの範囲で投与することができ、
10nｇ／Kg〜１mg／Kgの範囲で投与するのが好ま
しい。この発明のα−hANPは、ペプチド系医薬の投
与に一般に使用されている投与方法、すなわち非
経口的投与方法、例えば静脈内投与、筋肉内投
与、皮下投与等によつて投与するのが好ましい。
経口投与した場合、α−hANPは消化管内で分解
を受けるためこの投与方法は一般的には効果的で
ないが、消化管内で分解を受けにくい製剤、例え
ば活性成分であるα−hANPをリポゾーム中に抱
容したマイクロカプセル剤として経口投与するこ
とも可能である。又、直腸、舌下、鼻内など消化
管以外の粘膜から吸収せしめる投与方法を採用す
ることも可能であり、この場合、例えば坐剤、舌
下錠、点鼻スプレー剤等の形で投与することがで
きる。 (C) α−hANPの製造方法この発明のペプチドα−hANPは、ヒトの心房
組織を適当な酸性溶媒、例えば燐酸緩衝液、塩酸
含有酢酸等の中でホモジネートし、雛直腸標本弛
緩活性を指標として、遠心分離、等電沈澱、溶媒
抽出、限外過、ゲル過、吸着クロマトグラフ
イー等、ペプチドの精製に常用される各種処理を
適宜組合わせて分子量約3100のペプチドを分離す
ることにより得られる。しかしながら、α−hANPを工業的規模で得る
には合成法を用いるのがより有利であることは言
うまでもない。この発明のペプチドα−hANP
は、ペプチドの合成に常用される固相法、又は液
相法によつて製造することができる。この合成
は、例えば、矢島治明、榊原俊平著、日本生化学
会編、生化学実験講座（）；蛋白質の化学、４
巻、208〜495頁、(株)東京化学同人発行（1977）；
及び泉屋信夫ほか著、ペプチド合成、丸善(株)発行
（1975）に記載されているメリフイールド
（Merrifield）等の方法に準じて行うことができ
る。例えば、メリフイールド等の固相合成法によつ
てα−hANPを合成することができる。この方法
を本発明に適用する場合、α−アミノ基はいずれ
のアミノ酸についてもtert−ブチルオキシカルボ
ニル基（Boc基）で保護し、チロシンの水酸基は
２，６−ジクロロベンジル基（Cl₂−Bzl基）で、
アルギニンのグアニジノ基はトシル基（Tos基）
で、セリンの水酸基はベンジル基（Bzl基）で、
アスパラギン酸β−カルボン酸基はＯ−ベンジル
基（Ｏ−Bzl基）でそれぞれ保護するのが好適で
ある。まず、Ｃ末端アミノ酸であるチロシンの保
護誘導体Boc−Tyr（Cl₂−Bzl）をクロロメチル
樹脂に導入し、以後順次アミノ酸鎖を延長し、保
護α−hANP−樹脂を合成し、これをフツ化水素
で処理することにより保護α−hANPを樹脂から
切断し、同時に脱保護し、そしてこれを還元する
ことによりCys^7,23（Acm）−α−hANP（Acmはシ
ステインのチオール基を保護するアセトアミドメ
チル基である）を得る。次に、これをヨウ素で酸
化することによりチオール基を保護基Acmを脱
離せしめると同時に７位と23位のシステインのチ
オール基によるジスルフイド結合を形成せしめる
ことにより粗合成α−hANPを得る。得られた粗
合成α−hANPはゲル過、逆相HPLC等ペプチ
ドの精製に常用される手段により精製し高純度の
この発明のペプチドα−hANPを得る。次に実施例により、この発明をさらに具体的に
説明する。実施例１ヒトの心房からのα−hANPの分離死後10時間後にヒトの心房40ｇを摘出し、７倍
量の、20mM塩酸を含有する1M酢酸中で５分間
煮沸することにより内在するプロテアーゼを失活
せしめた。これを冷却した後、４℃においてポリ
トロンミキサーでホモジナイズすることにより抽
出を行つた。得られた抽出液を12000×Ｇで30分
間遠心分離を行い、上清200mlを得た。この上清
に12mlの氷酢酸を加えてその濃度を１規定濃度
（Ｎ）に調整した。この調整液に、アセトンを滴
加してその最終濃度を66％にすることによりアセ
トン沈澱を行い、次にこれを遠心分離することに
より424mlの上清を得た。得られた上清を減圧下
で濃縮乾固し、得られた残渣を100mlに1N酢酸溶
液に溶解し、そして50mlずつのエーテルで２回抽
出することにより脱脂した。得られた水層を凍結
乾燥し、凍結乾燥物を再度100mlの1N酢酸溶液に
溶解し、そしてこれを限外過（アミコン社製
UM−２を使用）することにより脱塩して50mlの
濃縮液を得た。この濃縮液を1N酢酸溶液で平衡
化したSP−Sephadex Ｃ−25（フアルマシア製，
8.0×22cm）でゲル過した。溶離液として1N酢
酸溶液、2Nピリジン溶液、及び2Nピリジン−
1N酢酸溶液（PH5.0）を用い、この順序で溶出を
行い、それぞれフラクシヨンSP−、SP−、
及びSP−を得た。このフラクシヨンSP−を
凍結乾燥することにより凍結乾燥物26.6mgを得、
これを1N酢酸溶液に溶解し、セフアデツクスＧ
−50によりゲル過（カラムサイズ1.2×103cm；
流速5.4ml／時間；フラクシヨンサイズ２ml）し
た。これにより、雛直腸標本弛緩活性を有するβ
画分（フラクシヨンNo.42〜45）及びα画分（フラ
クシヨンNo.46〜51）を得た。この溶出パターンを
第３図に示す。次に、このα画分を一緒にし陽イ
オン交換高速液体クロマトグラフイー（HPLC）
に付した。このクロマトグラフイーにおいては、
TSK−CM25W〔東洋曹達(株)製〕カラムを用い、
溶出溶媒として(A)10mM蟻酸アンモニウム（PH
6.6）：アセトニトリル（90：10）、及び(B)1.0M蟻
酸アンモニウム（PH6.6）：アセトニトリル（90：
10）を用い、直線グラジエント法により酢酸濃度
を10mMから0.5Mまで変化させて80分間溶出し、
唯一の雛直腸筋標本弛緩活性画分（フラクシヨン
No.57〜59を得た。次に、これを逆相HPLCに付し
た。このクロマトグラフイーにおいては、カラム
Chemcosorb 5ODSH（サイズ4.6×250mm）を使用
し、流速1.0ml／分、圧力110〜130Kg／cm²とし、
溶出溶媒として(A)水：アセトニトリル：10％トリ
フルオロ酢酸（90：10：１）、及び(B)水：アセト
ニトリル：10％トリフルオロ酢酸（40：60：１）
を使用した。(A)を８分間流した後、(A)から(B)への
直線グラジエント法で80分間溶出した。主要ピー
クを分取し、実質的に純粋なα−hANPを30μｇ
得た。実施例２ α−hANPの合成アミノアシル樹脂の合成 0.92ミリモル／ｇ樹脂のクロル基を導入したク
ロロメチル樹脂３ｇを15mlのジメチルホルムアミ
ド中で撹拌し、これに1.22ｇ（2.76ミリモル）の
Boc−Tyr（Cl₂−Bzl）−OHと0.90ｇ（2.76ミリモ
ル）の炭酸セシウムから調製した。 Boc−Tyr（Cl₂−Bzl）−OHセシウム塩のジメ
チルホルムアミド溶液10mlを加え、ゆるやかに12
時間撹拌した。次に樹脂を取し、ジメチルホル
ムアミド、エタノール、水、エタノール及び塩化
メチレンにより記載の順序で洗浄し、そして乾燥
した。次に過剰の酢酸セシウムと共に、ジメチル
ホルムアミド中50℃にて24時間撹拌し、未反応の
残存クロル基をアセチル化し、そして前記のよう
に洗浄した。こうして樹脂１ｇ当り0.7ミリモル
のBoc−Tyr（Cl₂−Bzl）−OHが導入された。樹脂３ｇを得た。なお、導入率はHF法、及び
HCl−プロピオン酸加水分解法により求めた。保護α−hANP−樹脂の合成各構成アミノ酸のα−アミノ基はすべてBoc基
で保護し、チロシンの水酸基はCl₂−Bzl基で保護
し、アルギニンのグアニジノ基はTos基で保護
し、セリンの水酸基はBzl基で保護し、アスパラ
ギン酸のβ−カルボン酸基はＯ−Bzl基で保護し
た。また、システインのチオール基はAcm基で
保護した。これらの保護基の内、Boc基は50％ト
リフルオロ酢酸により容易に除去される。他の保
護基は50％トリフルオロ酢酸に対しては安定であ
るがAcm基を除き弗化水素により除去される。
システインのチオール保護基Acm基は50％トリ
フルオロ酢酸及び弗化水素に対して安定であり、
ヨウ素による酸化により除去され同時にスルフイ
ド結合が形成される。保護アミノ酸の縮合に当つては、樹脂に結合し
ている保護ペプチドの末端アミノ基のアミノ保護
基、すなわちBoc基をまず除去して末端アミノ基
を遊離せしめた。この脱Boc基反応は、塩化メチ
レン中50％トリフルオロ酢酸により保護ペプチド
−樹脂を30分間処理することにより完全に進行し
た。この脱Boc基反応の進行、完結はカイザ−試
薬（ニンヒドリン試薬）により確認した。このようにして保護ペプチド−樹脂の末端アミ
ノ酸のアミノ基を遊離せしめた後、この遊離アミ
ノ基を、α−hANPのアミノ酸配列における次に
位置するアミノ酸のBoc保護誘導体の遊離カルボ
キシル基と縮合せしめた。この保護アミノ酸の縮合においては、Boc−
Asn−OHの縮合は、これを10当量用い24時間反
応せしめることによりｐ−ニトロフエノールエス
テル法に従つて行つた。そのほかのすべてのBoc
−アミノ酸は、その６当量を６当量のジシクロヘ
キシルカルボジイミド縮合剤と共に用いて縮合せ
しめた。この操作によつて反応が完了しない場合
は同じ操作を反復した。同じ操作を３回反復して
も反応が完結しない場合には、塩化メチレン中10
％無水酢酸−ピリジン（９：１）により10分間処
理して未反応のアミノ基をアセチル化し次のBoc
−アミノ酸の縮合操作に進んだ。なお上記の縮合
の進行及び完結も、脱Boc基反応の確認と同様に
カイザー試薬（ニンヒドリン試薬）により行つ
た。このようにして、樹脂（0.70ミリモル／ｇ樹脂）３ｇから出発し
て、樹脂6.6ｇを得た。樹脂の切離し、脱保護、ペプチドの精製、及
びＳ−Ｓ結合の形成前記のようにして得られた保護ペプチド−樹脂
３ｇを５mlのアニソールにより湿潤せしめ、そし
て０℃にて60分間弗化水素酸により処理し、次に
過剰の弗化水素酸を留去した。この処理により保
護ペプチドが樹脂から切断されると共に、チオー
ル保護基Acm以外の保護基が除去された。次に
200mlの1N酢酸を加えて30分間撹拌した後過す
ることにより樹脂を除去した。次に液をエーテルで洗浄し、５％水酸化アン
モニウム溶液でPH8.0に調整し、そして2.3ｇのジ
チオスレイトールを加え40℃にて24時間インキユ
ベートすることにより還元を行つた。この還元操
作によりMet（Ｏ）体がほとんど還元されたこと
が逆相HPLCにより確認された。又、Ser又は
Thrを含むペプチドを弗化水素酸により処理した
ときに生じる可能性があるＯ−ペプチド結合も上
記の還元操作で正常なペプチド結合にもどる。上記の反応液（約300ml）をオクターデカ−シ
リカ（ODS）を充填したカラム（φ4cm×５cm）
に吸着させ、水で洗浄し、次に60％アセトニトリ
ル水溶液でペプチドを溶出し、無機塩を含まない
ペプチド850mgを得た。次にこのペプチド650mgを
CM−セフアロースを用いるイオン交換クロマト
グラフイーにより精製した。すなわち、50mM酢
酸アンモニウム緩衝液（PH4.0）で平衡化たCM−
セフアロースカラム（φ1.5cm×75cm）に前記ペプ
チド試料を適用し、50mM酢酸アンモニウム（PH
4.0）500mlから0.5M酢酸アンモニウム（PH7.0）
500mlへの直線グラジエント法により溶出し、主
ピークを採取した。これをODSカラム（φ4cm×
５cm）を通して脱塩し、そして凍結乾燥すること
により逆相HPLCにおいてほぼ単一のペプチド
７，23Cys（Acm）−α−hANPを127mg（乾燥重
量）得た。次に、６mlの酢酸及び1.6mlの水中50mg（乾燥
重量）の７，23Cys（Acm）−α−hANPの溶液
と、40mlの酢酸、18mlの水及び80μの1N塩酸中
170mgのヨウ素の溶液中に、一挙に加え、そして
激しく撹拌した。10分後、反応液が透明になるま
でＬ−アスコルビン酸緩衝液を加え、この反応液
を水で10倍に稀釈し、ODSカラム（φ4cm×５cm）
を通して脱塩し、そして凍結乾燥した。こうして
α−hANP、７，23Cys（Acm）−α−hANP、及
びMet（Ｏ）−７，23Cys（Acm）−α−hANPが約
３：１：１の比率で混在している粗凍結乾燥物
30.2mg（乾燥重量）を得た。この粗凍結乾燥物17.2mgをTSK−CM ２ SW
〔東洋曹達(株)製〕を用いた陽イオン交換HPLCに
より前記の３成分に分離し（第４図）、α−
hANP画分を採取することにより約95％純度のα
−hANPを4.5mg得た。得られたα−hANPをダウエツクス（酢酸
型）処理し、酢酸塩としたときの元素分析値を示
す。（C₁₂₇H₂₀₃N₄₅O₃₉S₃・5CH₃COOH・8H₂O）ＣＨＮ計算値 46.67 6.83 17.88 測定値 46.74 6.41 17.75 (D) 利尿剤の製造前述のように、本発明のα−hANPは、他のペ
プチド系医薬と同様に、経口投与した場合消化管
内で分解されるので、注射薬として、静脈内、筋
肉内、皮下等に非経口的に投与することが好まし
い。しかし、リポゾーム中に抱容したマイクロカ
プセル剤にすれば、経口投与剤とすることも可能
であり、坐剤、舌下錠、点鼻スプレー剤等の形に
すれば、消化管以外の粘膜から吸収させることも
可能である。次に、注射薬としての実施例を示す。なお、注
射薬として薬効が充分に維持されることを、ラツ
トを用いて確認した。実施例 α−hANPの製剤化パシトラシン含有生理食塩液製剤 α−hANP9.36nmoleを、パシトラシン５％
（ｗ／ｖ）を含む生理食塩液936μ1にて溶解し、
α−hANP濃度が10nmole／ml（30.92μｇ／ml）
の溶液を注射用製剤とした。上記の製剤の10，20，40および100μ1を、８〜
10週令のラツトに頚静脈より注射筒を用いて急速
注入した。（Ｎ＝７／群）その結果、尿量は10μ1群で222±44％に、20μ1
群で281±41％に、40μ1群で507±58％に、100μ1
群で433±34％増加し、利尿作用が証明された。生理食塩液製剤 α−hANPを生理食塩液936μ1にて溶解し、α
−hANP濃度が1.5μｇ／mlの溶液を注射用製剤と
した。上記の製剤を20μ1／minの速度で８週令のラツ
トに大腿静脈より１時間45分持続注入した（Ｎ＝
１）結果、尿量が増加し、利尿作用が証明され
た。凍結乾燥製剤 α−hANP1.0mgを0.1N酢酸水溶液にて溶解し、
この50μ1をポリスチレン試験管にとり凍結乾燥
した。上記の凍結乾燥製剤（50μ1／tube）に0.5mlの
生理食塩液を加えて溶解し、この35μ1を生理食
塩液50μ1とともに10週令の（体重350ｇ）のラツ
トに大腿静脈より注射筒を用いて急速注入した
（Ｎ＝５）結果、尿量は1178％に増加し、利尿作
用が認められた。

【図面の簡単な説明】

第１図は利尿作用及びナトリウム利尿作用の経
時変化を示し、第２図はこの発明のα−hANPの
血圧降下作用を示すチヤート図であり、第３図は
心房からα−hANPを分離する場合のα成分とβ
成分の分離を示すクロマトグラムであり、そして
第４図はα−hANPの化学合成の最後段階におけ
るＳ−Ｓ体（α−hANP）の分離を示すクロマト
グラムである。

Claims

【特許請求の範囲】１次の構造式（）（式中とは直接に結合している）で表わされるペプチド、及びその酸付加塩。２次の構造式（）、（式中とは直接に結合している）で表わされるペプチド又はその酸付加塩を含んで
成る利尿剤。