JPS63152392A - １９−エピ−ダイアネマイシン産生培養物 - Google Patents

１９−エピ−ダイアネマイシン産生培養物

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JPS63152392A
JPS63152392A JP62163886A JP16388687A JPS63152392A JP S63152392 A JPS63152392 A JP S63152392A JP 62163886 A JP62163886 A JP 62163886A JP 16388687 A JP16388687 A JP 16388687A JP S63152392 A JPS63152392 A JP S63152392A
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ウォルター・パトリック・カレン
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は新規なポリエーテル抗生物質を産生′ｆる微
生物の培養物に関する。より詳細には、本発明は１９−
エピーダイアネマイシンを産生ｆる新菌株、ストレグト
マイセス・ハイクロスコピカス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｍｙｃ
ｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｊｃｕｓ）ノ培養物に関する
。
コクシジウム症、すなわち家禽類に共通で広く蔓延する
感染症はエイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）属の原虫である
数種の寄生虫のうちの１つあるいはそれ以上によって引
き起される。２つのタイプのコクシジウム症、すなわち
冒腸性のものと腸性のものが知られている。第一のタイ
プはエイメリア・テネラ（Ｅ　、ｔｅｎｅｌｌａ　）に
よって引き起され、重篤な出血を特徴とする。第二のタ
イプはエイメリア・アセルブＩＪ　ｆ　（Ｅ　、　ａｃ
ｅｒｖｕｌ　ｉ　ｎａ　）、エイメリア・ネカトリック
ス（Ｅ、ｎｅｃａｔｒｉｘ）　、エイメリア・マクシマ
（Ｅ、ｍａｘｉｍａ）　、エイメリア龜ハガニ（Ｅ、ｈ
ａｇａｎｉ　）　、エイｌ　ＩＪ　７　・ミテ４ス（Ｅ
。
ｍ１ｔｉｓ）、エイメリア・プラエコックス（Ｅ。
ｐｒａｅｃｏｘ）およびエイメリア・プルネッティ（Ｅ
。
ｂｒｕｎｅｔｔｉ　）のようなエイメリア属の種々の種
によって引き起される。七面鳥ではエイメリア・アテノ
イデス（Ｅ　、　ａ（１６ｎｏ　１ｄｅｓ　）およびエ
イメリアーマレアグリミティｘ　（Ｅ　、　ｍａｌｅａ
ｇｒｉｍｉｔｉｓ　）がコクシジウム症の病原微生物で
ある。
胞子虫症の経済的影響は非常に大きく、胞子虫症の撲滅
と抑止は家禽業界にとって非常に重大である。
非常に広範囲の構造の化合物（＃？リエーテル抗生物質
等）が抗コクシジウム剤として開示されている。たとえ
ば次のような抗生物質である：モネンシ：／　［Ｊ、Ａ
ｍ８ｒ、　Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　、、　８９　。
５７３７（１９６７））；＝ゲＩＪ　シン［Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ　。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｇｏｍｍ、　、　３３　、２
９　（１９６８）　〕；グＩＪ　７リキシ７　［Ｊ、Ｃ
ｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｇｈｅｍ　、Ｃｏｍｍｕｎ、　。
１４２１（１９７０）］　　；ダイアネマイシン［Ｊ。
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　２２．１６１　（１９６９）
　；　Ｕ、Ｓ。
Ｐａｔｅｎｔ　３．５７７、５３１　ｏｆ　Ｍａｙ４．
１９７１　］　；Ｓｏｃ、　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｍｕｎ
、、　９２７　（１９７１）］　；　Ａ２０４Ａ［Ｊ、
Ａｍｅｒ、　Ｇｈｅｍ、　Ｓｏｃ、＋　９５．３３９９
　（１９７３））；ミュータＯ’？イシ７［Ｊ、Ａｎｔ
ｉｂｉｏｔｉｃｓ、　３０゜９０３（１９７７））；イ
オノ−ｒ　イシｙ　［Ｊ　、　Ａｍｅｒ。
Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、　１０１　、３３４４　（］　９
７９）］　：Ｋ　　４１　Ｂ　ＣＪ　−Ａｎ　ｔｉｂ　
ｉ”　ｔｉｅｓ　、３２　、］　６９　（１，９７９）
〕；（１９８０）］。この問題はウェスレイ（Ｗｅｓｔ
ｌｅｙ。
＠Ｐｏ１ｙｅｔｈｅｒ　Ａｎｔｌｂｉｏｔｉｃｓ”、　
Ａｄｖ、　Ａｐｐｌ。
Ｍｉｃｉｏｂｉｏｌ、、　２２．１７７　（１９７７）
）およびシュマート９ら（Ｓｈｕｍａｒｃｌ　ｅｔ、　
ａｌ、、　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ　。
Ａｇｅｎｔｓ　’＆　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ。３６９−３
７７　（１９６７））によって検討された。豚赤痢、す
なわちアメリカ合衆国で診断される最も普通の豚の疾病
のｊつは他の多くの国でも流行しており、年間の経済的
損失は非常に太きい。最近、大きなスピロヘータである
トレボネマ拳ヒオデ゛イセンテリアエ（Ｔｒｅｐｏｎｅ
ｍａ　ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉ？Ｌｅ　）　　が感染
症の第１ｉ源でトることがわかった［　Ｈａｒｒｉｓ、
　Ｄ、Ｌ。
ｅｔ　ａｌ、　”　５ｗ１ｎｅ　Ｄｙ５ｅｎｔｅｒｙ−
ＪＩｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｏｆ　Ｐｉｇｓ　ｗｉｔｈ　
Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｈｙｏｃｌｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ
（Ｎｅｗ　５ｐｅｃｉｅｓ　）　ａｎｄ　Ｒｅｐｒｏａ
ｕｃｔ；ｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ］］５ｅａｓｅ、’Ｖｅｔ
、Ｍｅｄ／ＳＡＣ，６７，６１−６４（１，９７２）　
：］。
牛力ような反すう動物の体位向上（生長速度の増加およ
び／または飼料利用効率の増加）は獣医科学のもう１つ
の経済的に望ましい課題である。
特に重要なのは飼料利用効率を増加することによって達
成される生長促進である。反すう動物用飼料の主栄養部
分（炭水化物）の利用のメカニズムは周知である。反す
う動物の反すう胃中の微生物は炭水化物を単糖類に分解
し、これは次いでピルベートに転化される。ピルベート
は微生物学的方法で代謝されてアセテート、ブチレート
またはプロピオナート（まとめて揮発性脂肪酸（ＶＦＡ
）とし１知られる）を形成する。より詳しく検討するた
めには、Ｌｅｎｇ、　”　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ
　Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄ　Ｍｅｔａｂｏｌｌｓｍ　
ｉｎ　ｔｈｅ　Ｒｕｍ１ｎａｎｔ、　＠Ｐ　ｈ　１−１
１ｉｐｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、　、　Ｅｄｓ、　、　０ｒ
ｉｅｌ　Ｐｒｅｓｓ。
Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ−ｕｐｏｎ−Ｔｙｎｅ、　Ｅｎｇｌ
ａｎｄ、　１９７０　。
ｐｐ、　４０８−４１０　　を参照されたい。
ＶＦＡ　利用の相対的効率については下記文献で論じら
れてイル：　ＭｃＣ；ｕｌｌｏｕｇｈ、　”Ｆｅｅｄｓ
ｔｕｆｆｓ、”Ｊｕｎｅ　］　９　、１９７１　、およ
びｐｌ　９　；　Ｅｓｋｅｌａｎｄ　ｅｔａｌ、Ｊ、Ａ
ｎ、Ｓｃｉ、３３．２８２（１９７１）　；およびＣｈ
ｕｒｃｈ　ｅｔ　ａｌ、”　Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　Ｐｈ
ｙｓｉｏｌｏｇｙ？Ｌｎｄ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　ｏｆ
　Ｒｕｍ１ｎａｎｔｓ、”　Ｖｏｌ、２　。
］　９７］、　、　ｐｐ、　６２２および６２５゜アセ
テートおよびブチレートも利用されるが、プロピオネー
トを利用するとより大きな効率が得られる。さらに、あ
まりにプロピオネートが少ないと動物がケトン症になる
可能性がある。したがって有利な化合物は動物が炭水化
物から高い割合のプロピオネートを産生するのを促進し
炭水化物の利用効率を増大せしめ、ケトン症の発痘率を
低減させるものである。
ワシントン市で集めた土壌試料から単離された新菌株の
スプレブトマイセス・バイグロスコピカス（ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐ；ｃｕｓ　）が抗
コクシジウム特性を有する新規で価値ある抗生物質を産
生ずることがわかった。この新規な生成物を単離シ、１
９−エピーダイアネマイシンと同定した。
本発明の抗生物質産生微生物はアメリカ合衆国ワシント
ン市で集めた土壌試料から単離された。
これは培養物Ｎ−４８３−２９と称した。この微生物の
分類学的研究はり、Ｈ，ハン（Ｈｕａｎｇ　）　　によ
ってなされ、下記の特性が示された。彼の研究にもとづ
いてこの菌株はストレプトマイセス・バイグロスコピカ
ス（ジエンセン）ワクスマン・エン）”　−ヘア　１Ｊ
　シ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐ
ｉｃｕｓ（Ｊｅｎｓｅｎ）　Ｗａｋｓｍａｎ　ａｎｄ　
Ｈｅｎｒｉｃｉ）　であることが結論された。
この新しい培養物は放線菌目の細い菌糸を有し、気菌糸
上に胞子鎖をつくり、断裂していない基質菌糸を形成す
る。全細胞分析の結果によりさらにストレプ）　−７イ
セス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）属に属することが
わかった。
培養物Ｎ−４８３−２９を斜面培養試験官からＡＴＣＣ
＃１７２ブロスｆ移植し３日間２８℃で振とう器上で生
育させた。次いでこれを２０分間遠心分離し、３回滅菌
蒸留水で洗い、通常放線菌目（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔ
ａｌｅｓ　）の菌ノ同定に使用さｆ１７−＋培地に移植
した。
こノ培養物を２８℃でインキュベートし、結果を経時的
に測定しながら１４日間観察するのがもつともふつうで
ある。色は共通の用語で記述され、正確な色はザ・カラ
ーｅノ１−モニーｅマニュアル（Ｔｈｅ　Ｃｏ１ｏｒ　
Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）　、第四版の色性と
比較することによって測定される。全細胞アミノ酸およ
び糖分析の方法はＢｅｃｋｅｒ、Ｂ、　ｅｔ　ａｌ、。
ａｎｄ　ｉｎ　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、　Ｍ、Ｐ、、
　Ｊ、　Ｌａｂ、　０ＩＩｎ。
Ｍｅｄ、、７１．９３４−９４４（１，９６８）に記載
されている。
この培養物の特性を決定するのに使用した同定用培地及
びその組成は下記のとおりである：１　トリプトン−酵
母エキスブロス−（ＩＳＰ＃１培地、ディフコ（Ｄｉｒ
ｃｏ）　） ２、酵母エキス−麦芽エキス寒天−（工５Ｓｄ２培地、
ディフコ） ３　オートミール寒天−（工ＳＰ＃３培地、ディフコ） ４　無機塩−でんぷん寒天−（ＩＳＰ＃４培地、ディフ
コ） ５、グリセリン−アスパラギン寒天−（ＩＳＰ、＃５培
地、ディフコ） ６、ペプトン−酵母エキス鉄寒天−（ＩＳＰ＃６培地、
ディフコ） ７、ツアヘクー蔗糖寒天−８，Ｗ、Ｗａｋｓｍａｎ、　
ＴｈｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、　Ｖｏｌ、　２　
、培地ＡＩ　、　ｐ３２８　。
８、　グルコース−アスパラギン寒天−Ｓ、Ｗ。
Ｗａｋｓｍａｎ、　Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ
ｓ、　Ｖｏｌ、２．培地Ａ２　、ｐ３２８．１９６］ ９、ベネットの寒天−同上培地４３０．ｐ３３１１０、
エマーノンの寒天−同上培地Ａ２８　、　ｐ３３１１１
、栄養寒天−同上培地Ａ　］、　４　、　ｐ　３３０】
２、ボート９ンおよびスミスのチロシン寒天−Ｒ，Ｅ、
Ｇｏｒｄｏｎ　ａｎｄ　Ｍ、Ｍ、Ｓｍ　ｉ　ｊｈ、　Ｊ
ｒ、　、　Ｂａａ　ｔ、６９　。
１４７−１５０．１９５５゜ １３、カゼイン寒天−同上 ３４、−ｒ　レイン酸カルシウム寒天−３，Ａ、Ｗａｋ
ｓｍａｎ。
Ｂａｃｔ、Ｒｅｖ、２１．１−２９．１９５７１５、ゼ
ラｆ　ン−Ｒ，Ｅ、Ｃｏｒｄｏｎ　ａｎｄ　Ｊ、Ｍ、Ｍ
ｉｈｍ、　Ｊｒ、。
Ｂａｃｔ、７３．１５−２７．１９５７１６、でんぷん
−同上 １７、有機硝酸塩ブロス−同上 １８、ゲキストリン硝酸塩ブロス−３０１の蔗糖の代す
に３ｇ−のテキストリンを使用して寒天を除いた以外は
Ｓ、Ａ、Ｗａｋｓｍａｎ、　Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｅｔｅｓ。
Ｖｏｌ、　２　、培地Ａｌ　、　ｐ３２８　、１９６１
１９、ばレイしょにんじん寒天−Ｍ、Ｐ、Ｌｅｃｈｖａ
ｌｉｅｒ。
Ｊｒ、、　Ｉａｂ、　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｅ
ｄ、　７１　、９３４−９４４　。
１．９６８　　ＬかＬ３０７のばしｌ、’Ｌヨ、２．５
５１４）［んじんおよび２０Ｆの寒天のみを使用する。
２０．２％水道水寒天 ２１、スキムミルク−ディフコ ２２、セルロース利用 ａ）　　Ｈ，Ｌ、Ｊｅｎｓｅｎ、Ｐｒｏｃ＋Ｌｉｎｎ、
Ｓｏｃ、Ｎ、Ｓ、Ｗ。
５５．２３１−２４８．１９３０ ｂ）　　Ｍ、Ｌｅ＋Ｖｉｎ８　ａｎｄ　Ｈ，Ｗ、５ｃｈ
ｏｅｎｌｅｉｎ、　ＡＣｏｍｐｉｌａｔＩｏｎ　ｏｆ　
Ｃｕ１ｔｕｒｅ　ＭｅｄＩａ、　ｍｅｄｉｕｍ　Ｎｏ。
２５］　　１　　、］　　９３０ ２３、炭水化物−ＩＳＰ＃９培地、ディフコ２４　温度
範囲−工ＳＰ＃２培地＋５０ｍ１のココやし黄色がかっ
た（２　ｅａ　）隆起または膜が有り、黄褐色（３ｉｅ
！近く）中位に盛り上がった、しわがよりているか膜状
、気菌糸なし；裏面淡黄色がかつて（２ｅａ）、茶色の
線（３ｇＣ、３ｉｃ）があり；可溶性色素茶色（３１ｃ
、　３ｎｅ）。
生育中位、白色、黄色がかった色ないし灰色（］　−ｅ
ａ、　１−ｇａ、　　灰色に近い一連の色３ｄｃ。
３ｆｅ）、薄いないしわずかに盛り上がり、なめらか、
いくつかの部分で疎水性、表面と同じ気菌糸；裏面無色
、クリーム色ないし灰色（１−ｃａ、灰色に近い一連の
色３ｄＣ１３ｆｅ）；　　可溶性色素淡黄色（１−ｃａ
）。
生育中位ないし良好、黄色がかった色ないし灰色（］、
　ｅａ、　１−ｅａ、灰色に近い一連の色３ｄｃ、　３
ｆｃ１３ｉｈ）、薄いないし盛り上がり、なめらかだが
縁に近いところはしわがより、いくつかの部分では疎水
性、表面と同じ気菌糸；裏面淡黄色ないし灰色（２ｅａ
、灰色に近い一連の色３　ｄｃ、　３　ｆｅ　）　；可
溶性色素淡黄色（１−ｃａ）。
生育乏しいないし中位、無色ないしクリーム色（灰色に
近い一連の色］−ｂａ　）、薄い、なめらか、気菌糸な
し；裏面無色、可溶性色素なし。
生育良好、白色ないしクリーム色（２ｃａ）、盛り上が
り、しわがより、縁が広がっており、気菌糸なし；裏面
無色；可溶性色素淡黄色（２０ａ、２ｅａ）。
生育中位ないし良好、クリーム色（２ｃａ）、薄い、な
めらか、縁が広がり、気菌糸なし；裏面無色ないしクリ
ーム色（２Ｃａ）；　　可溶Ｆｉ色素クリーム色（２ｃ
ａ）。
生育良好、黄褐色（３ｇＣ近く）、盛り上がり、（１２
〕 なめらかないしわずかにしわがより、気菌糸なし；裏面
表面と同じ；可溶性色素茶色（３１Ｃ）。
栄養寒天 生育中位、クリーム色（１−ｃａ、　２　ｃａ）、わず
かに盛り上がり、なめらかあるいは離れたコロニーとな
り、気菌糸なし；裏面淡黄色（２ｃａ、２ｅ！ａ）；可
溶性色素。
ベネットの寒天 生育良好、クリーム（２ｃａ）、中位盛り上がっでおり
、しわが寄るが隆起しており、気菌糸ないか非常にわず
か、白色；裏面クリーム色ないし淡黄色（２ｅａ）。
生育乏しいか中位、黄色がかった茶色ないし暗茶色（４
ｅｃ、４ｎｌ、５ｎ１）、薄いないしわずかに盛り上が
り、なめらか、気菌糸なし；裏面茶色ないし暗茶色（５
１ｇ、５ｎｉ）；可溶性色素淡黄色ないし黒色（５ｎｉ
、５ｐｎ）。
マレイン酸カルシウム寒天 生育中位、クリーム色（］−Ｃａ）、薄いないしわずか
に盛り上がり、なめらか、気菌糸なし；裏挙表面と同じ
；可溶性色素なし。
カゼイン寒天 生育中位、クリーム色（２ｃａ近く）、中位盛す上がり
、なめらかであるが縁近くにしわあり、気菌糸なし；裏
面は表面と同じ；可溶性色素クリーム色。
でんぷん寒天 生育良好、クリーム色（２Ｃａ近く〕、中位盛り上がり
、しわがあるが縁に近づくにつれなめらが、気菌糸なし
；裏面は表面と同じ；可溶性色素クリーム色。
生育中位、クリーム色（１−ｃａ）、薄く、なめらか、
気菌糸まばら、白色；裏面無色ないしクリーム色；可溶
性色素なし。
水道水寒天 生育乏しく、無色ないしクリーム色（灰色に近い一連の
色２ｂａ）、薄く、なめらか、はとんど深部、気菌糸ま
ばら、白色；裏面表面と同じ；可溶性色素なＬｏ 形態学的特性： 形態学的特性は１４日間インキュベーション後無機塩−
でんぷん寒天上で観察された。ダレイカラージリーズの
胞子塊；うす巻き部分の胞子鎖はわずかに開き、その直
径は小さく（長さ６−１０μｍ、巾３−４．５μｍ）、
３〜６巻／巻回コイルり、８〜３０胞子／胞子鎖；胞子
体は単軸的に分枝し、時々渦巻き状に分枝し；胞子は卵
形ないし楕円形時として棒状あるいは舟状で１．２〜２
．ＯＸｏ、９〜１．２μｍ、走査電子顕微鏡によれば圧
伏を呈する。
生化学的特性： メラニン生成せず；硫化水素生成；ゼラチン液化；でん
ぷん加水分解；両方の硝酸塩ブロスにおいて硝酸塩を亜
硫酸塩に還元し；ジエンセンのセルロースおよびレビン
およびヨーエンラインのセルロース上で生育乏しく分解
せず；牛乳を透明化するが凝固せず；カゼモ消化化田）
；マレイン酸カルシウム消化ｆ−１−１；チロシン消化
（−＋−）。炭水化物利用ニゲルコース、アラビノース
、フラクトース、イノシトール、マンニトール、ラフィ
ノース、ラムノース、蔗糖およびキシロースはすべて利
用される。
温度関係： 良好ないし　　良好な生育　中位の生育　生育なしすぐ
れた生育 全組側分析： 細胞壁はＬＬ−ジアミノピメリン酸を含有しているが特
徴的な糖賑は含まない。
培養物Ｎ−４８３−２９は灰色の胞子塊、らせん状の胞
子鎖、圧伏の表面を有する胞子およびメラニン反応が陰
性であることを特徴とする。蔗糖とラフィノースの利用
が陽性である以外はこの単離物は工ｎｔ、　Ｊ、　５ｙ
ｓｔ、　Ｂａｃｔ、、２２．２６５−３’９４　。
１９７２に記載されているストレプトマイセス・バイグ
ロスコピカス（Ｓ、　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　）
の新基準菌株についての記載と一致する。炭素源の利用
はＨｏＤ、ＴｒｅｓｎｅｒおよびＥ、Ｊ、Ｂａｃｋｕｓ
　ｖｃよろと菌株により異なり、彼等はＡｐｐｌｉｅｄ
　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ。
４．２４３−２５０．１９５６に記載された種について
広い概念を提案した。このようにこの培養物はストレプ
トマイセス・バイグロスコピカス（ジエンセン）ワクス
マン・エンド−ヘンリチ（ｓｔｒｅｐｔｏ−ｍｙｃｅｓ
　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　（Ｊｅｎｓｅｎ）　Ｗ
ａｋｓｍａｎａｎｄ　Ｈｅｎｒｉｃｉ　）　　と考えら
れる。これはメリーランド州のロックビルにあるアメリ
カン−タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されて
おりこの公認の寄託機関は寄託物を永続的に保存し、出
願に特許が付与された場合公衆に分譲する。この微生物
はストレプトマイセス−バイグロスコピカス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　）　
ＡＴＣＣ３９２０５と称される。この微生物は３７ＣＦ
Ｒ１，１１４および３５ＵＳＣＪ２２Ｖｃもとづイ”’
（７７メＩＪ力合衆国特許商標庁の長官によって決定さ
れた人に分譲される。寄託された微生物の公衆への分譲
についてのすべての制限は特許付与と同時に完全に取り
除かれる。この微生物の寄託は１９８６年１２月ＪＯ日
にＡＴＣＣにおいてブタベスト条約下での寄託に変更さ
れた。
本発明の上記説明と完全に一致する上記微生物の使用の
みに限定されず、上記目的を達成する微生物の使用を包
含する。天然のあるいはＸ線照射、紫外線照射、ナイト
ロジエンマスタードによる処理等の種々の方法で人工的
に誘導した変異種および／または変種；たとえば上記微
生物から得られるものを使用するのが特に望ましい。
発明者等はここに記載した種からの核酸またはその均等
物を使用して形質転換、人工的抗原変換、遺伝子組換え
または他の遺伝子の処理により形成されてここに記載し
た目的生成物を生成し上述の如き生化学的変化を生ぜし
める能力を取得した微生物であればその外見または生理
学的挙動にかかわらず使用することを希望する。
培養物ストレプトマイセス・ハイグロスコぎカス（Ｓ、
ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　）　ＡＴＣＣ３９２０５
の培養は深部好気条件下に２１°〜３７℃で水性栄養培
地中で攪拌しながら行なわれる。培養に有用な典型的な
栄養培地は同化し得る炭素源、たとえば糖、でんぷんお
よびグリセリン、有機窒素源、たとえばカゼイン、カゼ
インの酵素分解物、カザミノ酸、大豆ひきわり紛、綿実
粉、落花生粉、小麦グルテン、大豆粉、酵母エキス、肉
粉および魚粉；生長　。
物質源、たとえば穀物可溶物、魚粉、綿実粉および酵母
エキス；塩化ナトリウムおよび炭酸カルシウムのような
鉱物塩；および鉄、マグネシウム、亜鉛、コバルトおよ
びマンガンのような微量元素；および緩衝剤としての炭
酸カルシウムおよびリン酸カルシウムを含む。
もし過剰の泡が発酵中に生じたら、一般的に植物注油ま
たはシリコンのような消泡剤を発酵培地に加える。深部
生育のためのタンク中の培地の通気に好ましくは約−〜
２容量の滅菌した空気７発酸ブロスの容量７分の割合で
スパージャ−を通してプロスの中に空気を強制的に通気
することによって維持される。攪拌は一般的に発酵技術
の当業者に周知の攪拌手段によって維持される。攪拌の
速度は使用した攪拌装量のタイプに依る。振とうフラス
コな通常１５０〜２００サイクル／分で運転され、発酵
装置は通常３００〜１７００回転／分で運転される。も
ちろん無菌的条件は微生物の移植およびその生育を通し
て維持されなげればならない。
接種物はＮ−４８３−２９培養物を接種された斜面また
はルー（Ｒｏｕｘ　）びんから栄養細胞をかき取ること
によって調製する。斜面またはルーびん上で最初に生育
させるのに適した固体培地はＡＴＣＣ培地＃］７２であ
る。
グルコース　　　　　　　　　　】０ 可溶性でんぷん　　　　　　　　２０ 酵母エキス　　　　　　　　　　　５ ＮＺアミンＡ５ 炭酸カルシウム　　　　　　　　　１ 寒天添加　　　　　　　　　　　２０ 斜面からの栄養細胞を使用して振どうフラスコあるいは
接種タンクを接種した。あるいは、別法として、接種タ
ンクは振とうフラスコから接種する。振とうフラスコ中
での生育は一般に９６〜１２０時間で最庫に達するので
接種タンク中での生育期間は通常７２〜９６時間がもつ
とも好ましい。発酵装置を完全に無菌条件下に接種フラ
スコまたはタンクからの栄養細胞ブロスで接種し、９６
〜１６８時間発酵させる。通気は振とうフラスコノ場合
は揺動により、タンクの場合はスパージャ−を通して滅
菌した空気を一〜２答量／ブロスの容量７分の速度で通
気することによって維持する。揺動（攪拌）の速能は上
述の如く使用されたタイプの攪拌器に依る。温度は２４
℃〜３６°ＣＫ調節する。
発酵完了時に抗生物質は全ソロスをｎ−メタノール、メ
チルインブチルケトン、酢酸エチルまたはクロロホルム
のような水非混和性溶媒によってｐＨ４，０〜８．０で
抽出することによって回収される。別法として、菌糸を
分離し上記溶媒の１つで抽出して抗生物質を単離する。
この抽出物を濃縮し、濃縮物をヘプタンにとり、シリカ
ゲル上でクロマトグラフィーにかげる。
発酵の間の抗生物質産生の進行状況および発酵プロスの
生物活性は黄色ブドウ球菌（５ｔａｐｈｙ−１ｏｃｏｃ
ｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　）または枯草菌（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ　）の感受性菌株を使用して上記
ブロスの生物検定によって監視できる。黄色ブトつ球菌
（Ｓ、　ａｎｒｅｎｓ　）　ＡＴＣＣ；　６５３８　　
および枯草菌（Ｂ、　５ｕｂｔｉｌｉＳ　）　ＡＴＣＣ
６６３３はこの目的に適した菌株である。標準的プレー
ト検定技術によれば該ブロスで飽和したＦ紙円板の周囲
の阻止帯を抗生物質の効力の目安とする。シリカゲルを
使用する薄層クロマトグラフィーは発酵培地中で産生さ
れる抗生物質を分析する有用な手段であり、粗製のおよ
び精製された物質の組成物が発酵ブロスから抽出する。
アナルテク（Ａｎａｌｔｅｃｈ　）シリカゲルＣＦクロ
マトダラムを酢酸エチル：メタ／　−ル（９：］）の混
合物あるいはクロロホルム：メタノール９：〕の混合物
で展開する。この抗生物質ナバニリン試薬（７５ｍＡ’
のエタノール中３Ｊのバニリンおよび２５ｍ１の８５％
リン酸）で噴霧しＴＬＣプレートを８０℃で加熱するこ
とによって目に見えるようにする。この抗生物質は紫色
のスポットとして見える。プレートは黄色ブドウ球菌（
Ｓ、ａｎｒｅｎｓ　）または枯草菌（Ｂ、５ｕｂｔｉｌ
ｉｓ　）のイスれかを接種し、２，３．４−）リフエー
ル−２Ｈ−テトラゾリウムクロリド−水和物を添加して
おいた寒天を積層し３７°Ｃで１６時間インキュベート
して該抗生物質を可視化した（ピンク色の背景に対して
白色）。
抗生物質１９−エビ０−ダイアネマイシンは種々のグラ
ム陽性微生物に対して生育閉止作用を示す。
この試験のために各微生物を栄養培地および種々の濃度
の］９−エピ−ダイナマイシンを含有する一連の試験管
に接種し微生物の生育を２４時間以上にわたって閉止す
る抗生物質の最小一度（ＭＩＣ）？測定する。
】９−エピーダイアネマイシンおよびそのカチオン塩は
家禽のコクシジウム感染症に対するすぐれた活性を示す
。にわとりの餌に５０〜２００　ｐｐｍで混入すると、
これらの化合物はエイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ
　ｔｅｎｅｌｌａ　）、エイメリアーアセルブリナ（Ｅ
、　ａｃｅｒｖｕｌｌｎａ　）　、：Ｘ−イｙ’す７−
　？　キシマ（Ｅ、ｍａｘｉｍａ　）　、エイメリア・
ブルネツチ（Ｅ、ｂｒｕｎｅｔｔｉ　）およびエイメリ
ア・ネカトリツクス（Ｅ、ｎｅｃａｔｒｉｘ　）によっ
てひき起される感染症を抑制するのに有効である。
にわとりのコクシジウム感染症に対する１９−エピ−ダ
イナマイシンおよびその塩の有効性のデータは下記のよ
うに得られた。３〜５日令のＳＰＥ白色レグホンの雄と
り群に１９−エピーダイアネマイシンまたはそのナトリ
ウムおよび／またはカリウム塩を均一に分散させたすり
餌を与えた。この餌を２４時間摂取させた後、各にわと
りに経口でエイメリア属の特定種の接合子爵を接種した
。
他の群の３〜５日令のにわとりに１９−二ピーダイアネ
マイシンを含まない同様のすり餌を与え、コクシジウム
を感染させなかった。これらシま正常の対照として使用
した。処理の結果はエイメリア−アセにブリナ（Ｅ、ａ
ＣｅｒＶｕｌｉｎａ　）の場合５日後に評価し他の種に
ついてはすべて６日後に評価した。
抗コクシジウム活性を測定するのに使用した基準はエイ
メリア・テネラ（Ｅ、ｔｅｎｅｌｌａ　）についてはＪ
、Ｆ、、　Ｌｙｎｃｈ、　”　Ａ　Ｎｅｗ　Ｍｅｔｈｏ
ｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅＰｒｉｍａｒｙ　Ｅｖａｌｕａｔｉ
ｏｎ　ｏｆ　ＡｎｔｌｃｏｃｃｉｄｉａｌＡｃｔｉｖｉ
ｔｙ”、　Ａｍ、　Ｊ、　Ｙｅｔ、　Ｒｅｓ、　２２　
、３２４〜３２６（１９６）　）に従って障害点数０〜
４とし；他（１’）ｔｌｌ）ｆｌｃツイテハＪ、　Ｊｏ
ｈｎｓｏｎ　ａｎｄ　Ｗ、Ｈ，Ｒｅ１ｄ。
Ａｎｔｌｃｏｃｃｉｄｉａｌ　Ｄｒｕｇｓ　Ｌｅｓｉｏ
ｎ　ＳｃｏｒｉｎｇＴｅｃｈｎｉｑｅｓ　ｉｎ　Ｂａｔ
ｔｅｒｙ　ａｎｄ　Ｆｌｏｏｒ　ＰｅｎＥｘｐｅｒｉｍ
ｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｃｌｃｓ”、　Ｅｘｐ、　Ｐａ
ｒａＳｉ　ｔ。
２８．３０−３６　（１，９７０）によって考案された
点数方式の変形にもとづいてＯ〜３とした。一定の比が
各処理群の障害点数を感染対照の障害点数で割ることに
よって達成される。
１９−エピーダイアネマイシンのコクシジウム感染抑制
剤としての活性を下記のような実験により測定した：各
群５羽の生後９日のバレット・ロックｅりｏ　ｙ、　（
Ｂａｒｒｅｄ　Ｒｏｃｋ　Ｃｒｏｓｓ　）系ヒヨコに、
１９−エピーダイアネマイシンを２５〜】５０ｐｐｍ　
　の種々の濃度で含有する基本飼料を与えた。
下記組成を有する市販のにわとり用スターター（ピュＩ
Ｊ　ｆ・コマーシャル・チック・スターター；ミズーリ
州、セントルイスのザ・ラルストン　ピュリナ社（Ｔｈ
ｅ　Ｒａ１ｓｔｏｎ　Ｐｕｒｉｎａ　Ｃｏ、）を基本飼
料として使用し、感染の２４時間前およびその後試験期
間を通して連続的に適宜にわとりに与えた。
粗蛋白　　　　　　　】８，０％以上 粗脂肪　　　　　　　　３．０％以上 粗繊維　　　　　　　　６．０％以下 ミネラル添加　　　　　３．５％以下 原料：肉および骨粉、魚粉、大豆粉、大豆ひきわり粉、
からす麦ひきわり粉、黄色とうもろこし粉、脱水アルフ
ァルファ粉、小麦中級品、ビタミンＢ１゜添加物、エト
キシキン（防腐剤）、動物性脂肪（ブチル化ヒドロキシ
アニソールで防腐したもの）、塩化コリン、ナイアシン
、ビタミンＡ添加物、リボフラビン添加物、パントテン
酸カルシウム、Ｄ活性化動物ステロール、ビタミンＥ添
加物、メナジオン重亜硫酸ナトリウム（２−メチル−１
，４−ナツタキモン重亜硫酸ナトリウム）（ビタミンに
活性源）、炭酸カルシウム、低弗素リン鉱石、ヨウ化塩
、硫酸マンガン、酸化第一マンガン、硫酸銅、酸化亜鉛
。
投薬後２４時間して、これらのにわとりにエイメリア・
テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ　）の２００
，０００個の芽胞を有する接合子嚢（５ｐｏｒｕｌａｔ
ｅｄ　ｃｏｃｙｓｔｓ）を経口で接種した。そし℃、各
群の各にわとりの平均体重を測定した。さらに、１０羽
の群にもつと多量の試験化合物を含む基本飼料を与えた
。
（未感染、未処理対照群） さらにもう１つの１０羽からなる群を未感染、未処理対
照群として使用した。これらのにわとりを感染後５日目
及び６日目に出血の徴候の有無について検査した。感染
後８日目に、各群各にわとりの平均体重を測定し、にわ
とりの死体を解剖し、盲端（ｃｅｃｕｍ　）を肉眼でし
らべた。そして病理インデックス（平均感染重症度）を
測定した。感染後５日前に死亡したにわとりを毒死と見
なした。
感染後５日以降に死亡したにわとりを感染病による死亡
と見なした。試験化合物の効果は、致死率の低下および
病理インデックスを未投薬の感染対照の病理インデック
スと比較することによって測定した。死体解剖に際して
、病理インデックスは対照に対する障害％、すなわち、
試験されたにわとりに対照のにわとりとの障害の数の差
動対照のにわとりの障害の数の百分率の比として表わし
た。
１９−エピーダイアネマイシンの抗コクシジウム活性は
下記のとおりである： 投与量　障害％　平均感染 エイメリア・テネラ （Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ）　　　　１５０　
　７６　０．７０１２５　１００　０．００ １００　　　９０　０．３０ ５０　　　６７　１．０ ２５３３２．０ エイメリア・アセルブリナ （Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）　　１００
　　　８０　０．４７５　　　９０　０．２ ５０９００．２ ２５　　　９０　０．４ （＊上記実験においては毒性による死亡はなかった。） 動物飼料についてのデータは一般的に動物に飼料を直接
与えることによって測定された。英国特許明細書簡１，
１９７，８２６号はインビ）Ｏでの反すう胃技術を詳し
く説明しており、これによれば、微生物によってもたら
される飼料中の変化がより容易に測定され、動物飼料の
評価が非常に正確である。
この技術は動物の消化過程をインビトロで行い研究でき
る装置を使用することからなる。動物飼料、反すう胃液
種物、および種々の生育促進剤を注意深く制御された条
件下に実験室ユニツ）Ｋ導入し、それから取り出し、生
じた変化を微生物によって飼料が消化を受けている間臨
界的且つ段階的に研究する。反すう胃液体中のプロピオ
ン酸含量の増加は全般的な反すう動物の生育が飼料組成
物中の生長促進剤によって望ましく促進さねたことを示
している。プロピオン酸含量の変化は対照反すう胃液に
含まれるプロピオン酸の％として表わされる。長期間に
わたってインビボで飼料を与えて研究した結果、反すう
胃液中のプロピオン酸の増加と改善された動物の生長と
の間に信頼し得る相関関係が示される。
市販の肥満させるための飼料に千草を加えて与えておい
た牛に穿孔して反すう胃液を集めた。反すう胃液はただ
ちにチーズクロスを通して瀝過し、１０ｍ、ｌを４００
ｍｇの標準物質（とうもろこしでんぷん６８％＋セルロ
ース１７％十大豆かす粉１５％）を含有する５０ｍ１の
コニカルフラスコに入れ、１０ｍ１のｐＨ６，８緩衝液
および試験化合物を加えた。フラスコに酸素を含まない
窒素を約２分間通気し、３７℃の振と５水浴中で約１６
時間インキュベートした。すべての試験は三重に行った
。
インキュベート後、５ｄの試料を１ｍｌの２５％メタリ
ン酸と混合した。１０分後、０．２５ｍ１の蟻酸を加え
、混合物を１５０　Ｏｒｐｍで１０分間遠心分離シタ。
次いでＥ料をり、Ｗ、Ｋｅｌｌｏｇ、　Ｊ、Ｄａｉｒｙ
ｓｃ；ｅｎｃｅ５２，１６９０（］９６９）の方法によ
り気液クロマトグラフィーによって分析した。酢酸、プ
ロピオン酸、および酪酸のピークの高さを未処ｆおよび
処理インキュベーションフラスコカラの試料について測
定した。
牛や羊のような反すう動物および豚やウサギのような単
胃動物による飼料効率を改善するために、１９−エピ０
−ダイアネマイシンは飼料組成物に遊離酸、ナトリウム
塩、カリウム塩またはそれらの混合物として混入する。
】９−エビーダイアネマイシン粗生成物またはこの抗生
物質を含有する乾燥発酵ブロスを望ましい効力を示ｆ濃
度で飼料組成物に混入する。
下記例は本発明をさらに充分説明するものであって、決
して本発明の範囲を限定するものではな（ゝ０ 例］ 振とうフラスコに下記組成の培地を調製した：ＯＬ１３
Ｍ　　　　　　　　　　　％／ｌセレロース　　　　　
　２０．０ 大豆粉　　　　　　　　１００ 蒸留可溶物　　　　　　　５．０ 硫酸ナトリウム　　　　　０．５ 塩化コバルト　　　　　　０．００２ 炭酸カルシウム　　　　　２ １００ｍ１の培地を３００ｒｎｌの振とうフラスコに入
れ１２０°Ｃで１５ｐＳｉで３０分間滅菌した。冷却後
、培地にＡＴＣＣ１，７２寒天培地で生育したストレフ
トマイセス・バイグロスコピカス（Ｓｔｒｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　）ＡＴＣＣ３９２
０５の栄養細胞懸濁液を接種した。これらのフラスコを
２８℃で３．８１〜６．３５ｃｒｎ（１−〜２−インチ
）の変位を有するロータリーシェーカーで１５０〜２０
０サイクル／分（ＣＰＭ）で３〜４日間振とうした。１
つのフラスコを使用して３ｔの下記培地を含む５を発酵
容器を接種した： （３リ セレロース　　　　　　　　２０．０ 大豆粉末　　　　　　　　１０．０ 蒸留可溶物　　　　　　　　５．０ 硫酸ナトリウム　　　　　　０．５ 炭酸カルシウム　　　　　　２．０ 塩化コバルト　　　　　　　　０．００２水で１　ｔＫ
する。
ｐＨ６，ｇ　−７，０ ］、　ｍ１ｌＯ”）　Ｌ　］　６シリコンを消泡剤とし
て加え、容器を密封し、１２０℃、１５ｐＳｉで４５分
間滅菌シタ。これラノ容器（ポット）に１つのフラスコ
分の培養物（約３％接種物）で接種し、９６〜１６８時
間３０℃で１７００回転／分（ＲＰＭ）で】容量の空気
／液体の容量７分の通気速度で攪拌しながら発酵させた
。
発酵が完了したとき（枯草菌（Ｂ、５ｕｂｔｉｌｉｓｓ
）ＡＴＣＣ６６３３に対する抗生物質ディスク検定にも
とづいて）、発酵装置の運転を止めｐＨを調製すること
なく珪藻土によって濾過した。フィルタ一ケーキをメタ
ノール中でスラリー化し、濾過し、溶媒を真空下に濃縮
し、２〜３容量の水で希釈し、次いでメチルイソブチル
ケトンのような溶媒−一・ヲ容量で２回抽出した。溶媒
層を水性相から吸引又は遠心分離で分離し、加熱し真空
下に濃縮して粘稠性の油状物とした。
別法として、この抗生物質は全ブロスをそのままのｐＨ
でメチルイソブチルケトンで抽出し、この溶媒を濃縮し
て粘稠性の油状物とすることによって単離された。この
油状物をヘプタンに懸濁し、バッチをシリカゲル６０で
処理した。シリカゲルケーキをクロロホルム；クロロホ
ルムと酢酸エチルおよび酢酸エチルで溶出した。濃縮後
、酢酸エチルフラクションから粗生成物を得、これから
１９−二ピーダイアネマイシンがナトリウムとカリウム
の混成塩として結晶した。
この粗生成物を下記系を使用して薄層クロマトグラフィ
ーにかけてダイアネマイシンと１９−二ピーダイアネマ
イシンの混合物を分離し、】９−エビ−ダイ了ネマイシ
ンのみ検出した。
系　　　　　　　　　　　　　　　　Ｒｆ】９−エピー
ダ 酢酸エチル　　　　　　　　０．３０　　　０．４０こ
の例の培地の代りに下記培地の１つを使用した場合も同
様の結果が得られた。
セレロース　　　　　　　　　　　１０．０とうもろこ
しでんぷん　　　　　１０．０大豆粉　　　　　　　　
　　　　１０．０とうもろこし発酵性固体　　　　　５
．０塩化ナトリウム　　　　　　　　　５．０炭酸カル
シウム　　　　　　　　　　１．０水でＩＡＫする。ｐ
Ｈ６，９−７，０ 培地Ｍ　　　　　　　　　　　　ｆ／−／ｌｌセロース
　　　　　　　　　　　１０，０でんぷん　　　　　　
　　　　　２０．０酵母エキス　　　　　　　　　　　
５０塩化コバルト　　　　　　　　　　０．００２ＮＺ
アミンＡ５・０ 炭酸カルシウム　　　　　　　　　１．０水で】Ｌにす
る。ｐＩ（６，９−７，０例２ 例１の方法を大きな発酵装置で規模を拡大して行うため
に０．７ＵツトルのＣＬ１３培地を含有する振とうフラ
スコをつくった。この振とうフラスコ内の接種物を３〜
５日間２８℃で発酵しＯＬｌ　３Ｍ培地４５４２リツト
ル（１２００ガロン）を含有する６４３４．５リツトル
（１７００ガロン）の発酵装置に接種した。約１　ＩＪ
ットル（０，０５％）の接種物をタンクの中で使用した
。この発酵装置を４日間発酵させた後回収した（約４１
６４リツトル（１１００ガロン））。全ブロスを一容量
のメチルイソブチルケトンでそのままのｐＨで抽出し、
ｙｔ”　トヒ−，ｚ＋ｚ＝”）ツク（ＰＯｄｂｉｅｌｎ
ｉａＣｋ　）抽出器で分離し、溶媒を真空濃縮して油状
物とした（３０．３リツトル（８ガロン））。
この油状物をさらにサイクロン蒸発器でシロップ状に濃
縮した。濃縮後この油状物をヘプタンに懸濁してシリカ
ゲル（メルクシ□リカゲル６０）で攪拌し、シリカゲル
床に通して沖過し、ヘプタンで繰返し洗った。この抗生
物質を１１ニクロロホルム、クロロホルム／酢酸エチル
、酢酸エチルで溶出シ、最後に酢酸エチル中５０％のア
セトンで溶出シタ。この溶出物を薄層クロマトグラフィ
ーにかけてフラクションを生成検定した。活性なフラク
ションを集め、濃縮し、再びクロマトグラフィーにかけ
て抗生物質を単離した。この処理の間にシリカゲルバッ
チ処理から得られた活性なフラクションについていくつ
かの問題が生じた。活性なフラクションを顆粒状ダルコ
（ＤａｒＣ○）カーボンに通すと不純物が除かれ回収率
が改善された。約４０ｙ−の結晶】９−エヒータイ了ネ
マイシンが回収された。
例３ 例２の方法によってストレプトマイセス・／・イグロス
コピ力ｙ、　（Ｓ、ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　）　
Ａ　Ｔ　ＣＧ３９２０５の約４１６４リツトル（１１０
０ガロン）発酵物をつくった。全プロスを一容量のメチ
ルイソブチルケトンで抽出し、抽出物を真空下に茶色の
油状物（約３．７９リツトル（１ガロン））とした。こ
の濃縮物を１１．４リツトル（３ガロン）の攪拌されて
いるヘプタンに江別し、得られたスラリーを珪藻土床を
通して涙過した。
このν液を３　Ｋ９のメルクカラム級シリカゲル６０（
７０〜２３０メツシユ）でバッチ処理した。
これらのフラクションを薄層クロマトグラフィーで検査
し、１９−エピーダイアネマイシンが主としてアセトン
とクロロホルムのフラクションにあることがわかった。
アセトンフラクション（１８０１を酢酸エチル中メルク
カラム級−７ＩＪカゲル６０　（２３０〜４００メツシ
ユ）を充填した８×１００ｃｒｎカラムでクロマトグラ
フィーにかげた。酢酸エチルを溶出溶媒として使用した
。流速は７０ｍ１１分で各々】ｔのフラクションを採取
した。各フラクションをアナルテク（Ａｎａｌｔｅｃｈ
　）　ＣＦシリカゲルプレートで酢酸エチルを展開溶媒
として薄層クロマトグラフィーにかけた。これらのプレ
ートをバニリン試薬（７５ｍｌのエタノールと２５ｍ１
の８５％リン酸中３ｚのバニリン）で噴霧し８０℃に加
熱することにより可視化した。１９−エピーダイアネマ
イシンはこれらの条件下に紫色のスポットとなった。
】９−エピーダイアネマイシンを含有するフラクション
をいっしょにして蒸発させた。濃縮物を１ｔのクロロホ
ルムに溶解させ、ＬＡの酸水溶液（ｐＨ４）で洗い、次
いで】ｔの５％二二塩性性リン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ
９）で洗い、無水の硫酸ナトリウム塩ム燥し、沖過し、
蒸発させた。この濃縮物をアセトンにとり、少量の（約
１０％）の水を加えると１９−エピーダイアネマイシン
がナトリウム塩として結晶した。結晶を炉取し室温で真
空下に乾燥した。収量は２３ｇ−（す）　ＩＪウム塩）
。
シリカゲルバッチ処理からのクロロホルムフラクション
をＩｔのクロロホルムに再び溶解し、クロロホルム中顆
粒状活性炭を充填した７Ｘ］　２０ｍカラムに通した。
カラムをクロロホルムで２０ｍ１／分で溶出し、３００
ｍ１のフラクションを集めた。抗生物質を含有するフラ
クションを集め濃縮し、た。−融物を上記の如くアセト
ンフラクションについてはナトリウム塩として結晶化し
た。収量は１４５’であった。さらＫ　１．０９−の粗
生成物を第二の収量として得た。
１９−エピーダイアネマイシンのナトリウム塩の融点は
１９３−２０５°Ｃであった。他の特性は次のとおりで
あった： αｐ　＝　＋１１．０°（Ｃ−１、メタノール）元素分
析値： Ｃ４゜Ｈ７□ｏ１４Ｎａとして 計算値：Ｇ、６３．４９　　Ｈ，８，７３０，２７，７
８実測値：Ｃ，６３，１０Ｈ，８，８６０，２８，０４
ナトリウム塩のクロロホルム溶液を酸水溶液（１）Ｈ４
）で洗い次いでクロロホルムを蒸発ｊることによって遊
離酸を形成した。この化合物を結晶化に導くことは出来
なかったが、ガラス状物としαＤ　＝　＋１５．６°（
Ｃ−１、メタノール）Ｃ４□Ｈ７８０１４として 計算値：Ｃ，６５，１０Ｈ，９，０６０，２５，８４実
測値：Ｃ，６４，４５Ｈ，８，９４０，２６，６１２９
３］、、２８７４．２７８７．２７３１．２７０１　。
２６５１．２５１５　、］　７１６．１６６７．１５６
６゜１４６２．１４０６，１３７３．１３３３，１３２
６゜１２９３．１．２７］　、１２３７．１１９１．１
１６４゜１１１？、１０９８．］０６５．１００３．９
８４゜９４６．９１２，８９７，８６８，８４３，７８
６゜（４１〕 ７７５．７３２．６６４．５９０ｃｆｎ″″１呈色反応 明細書２３頁１２行ないし１６行目にあるとおり、】９
−エピーダイアネマイシンにバニリン試薬（７５ｍｌの
エタノール中３１のバニリンおよび２５ｍ１の８５％リ
ン酸）を噴霧したＴＬＣプレートを８０℃に熱すると紫
色のスポットとして見える。
溶剤に対する溶解性 ｎ−ブタノール、メチルイソブチルケトン、酢酸エチル
、クロロホルム、ヘプタンおよびメタノールに可溶性

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Ｓｔ
    ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）
    ＡＴＣＣ３９２０５を含有する培養物であつて、炭素、
    窒素及び無機物質の同化し得る源を含有する水性栄養培
    地中で発酵せしめると抗生物質１９−エピ−ダイアネマ
    イシンを回収し得る量で産生し得る培養物。
  2. （２）凍結乾燥された形の特許請求の範囲第１項の培養
    物。
JP62163886A 1983-02-15 1987-06-30 １９−エピ−ダイアネマイシン産生培養物 Granted JPS63152392A (ja)

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