DK159320B - 19-epi-dianemycin og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af 19-epi-dianemycin og mikroorganismekultur til anvendelse ved fremgangsmaaden samt farmaceutisk praeparat indeholdende 19-epi-dianemycin - Google Patents
19-epi-dianemycin og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af 19-epi-dianemycin og mikroorganismekultur til anvendelse ved fremgangsmaaden samt farmaceutisk praeparat indeholdende 19-epi-dianemycin Download PDFInfo
- Publication number
- DK159320B DK159320B DK064784A DK64784A DK159320B DK 159320 B DK159320 B DK 159320B DK 064784 A DK064784 A DK 064784A DK 64784 A DK64784 A DK 64784A DK 159320 B DK159320 B DK 159320B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- epi
- dianemycin
- dianemycine
- procedure
- growth
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/195—Antibiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/445—The saccharide radical is condensed with a heterocyclic radical, e.g. everninomycin, papulacandin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/55—Streptomyces hygroscopicus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
Description
i
DK 159320 B
Denne opfindelse angår et hidtil ukendt polyether-an-tibioticum, 19-epi-dianemycin, og farmaceutisk acceptable salte deraf med baser samt en fremgangsmåde til fremstilling af 19-epi-dianemycin og en mikroorganis-5 mekultur til anvendelse ved fremgangsmåden. Opfindelsen angår endvidere farmaceutiske præparater indeholdende 19-epi-dianemycin eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
Coccidiose, som er en almindelig og udbredt infektion 10 hos fjerkræ, forårsages af en eller flere arter af proto- zoiske parasitter af slægten Eimeria. Man kender to typer coccidiose, den coccale og den intestinale. Førstnævnte type forårsages af E. tenella, og den er kendetegnet ved alvorlig blødning. Den anden type forårsages 15 af forskellige arter af Eimeria såsom E. acervulina, E. necatrix, E. maxima, E. hagani, E. mitis, E. prae-cox og E. brunetti. E. adenoides og E. maleagrimitis er den skadevoldende organisme ved coccidiose hos kalkuner .
20 Coccidiosens økonomiske virkninger er langtrækkende, og fjernelsen af og beherskelsen af denne sygdom er derfor af stor betydning for fjerkræindustrien.
Et bredt udvalg af strukturelle typer forbindelser er blevet beskrevet som anticoccidiale midler, herunder 25 polyether-antibiotica, såsom monensin [J. Arner. Chem.
Soc., 8j?, 5737 (1967)]; nigericin [Biochem. Biophys.
Res. Comm., Y3, 29 (1968)]; grisorixin [J. Chem. Soc.
Chem. Commun., 1421 (1970)]; dianemycin [J. Antibiotics 22, 161 (1969);. US patentskrift nr. 3 577 531, 4. maj 30 1971]; salinomycin [J. Antibiotics, 27, 814 (1974)]; X-537A [J. Chem. Soc. Chem. Commun., 967 (1972)]; X-206 [J. Chem. Soc. Chem. Commun., 927 (1971)]; A204A [J. Arner. Chem. Soc., 9J?, 3399 (1973)]; mutalomycin [J. Antibiotics, 30, 903 (1977)]; ionomycin [J. Amer.
2
DK 159320 B
Chem. Soc.,· 101, 3344 (1979)]; K-41B [J. Antibiotics, 32, 169 (1979)]; A-130B og A-130C [J. Antibiotics 33» 94 (1980)]; leuseramycin [J. Antibiotics, 3_3> 137 (1980)]; og A-28695 B [J. Antibiotics, 33_, 252 (1980)]. Emnet 5 er blevet gennemgået af Westley, "Polyether Antibiotics",
Adv. Appl. Microbiol., 22^ 177 (1977), og af Shumard et al., Antimicrobiol. Agents & Chemother. 369-377 (1967).
Svinedysenteri, en af de mest almindelige svinesygdomme, som diagnosticeres i U.S.A., er ligeledes udbredt i 10 mange andre lande, og forårsager hvert år store økonomiske tab. Man har for nylig fundet, at en stor spirochæt,
Treponema hyodysenteriae, er - i det mindste - en primær kilde til denne infektion [Harris, D. L. et al., "Swine Dysentery-1 Inoculation of Pigs with Treponoma hyody-15 senteriae (New Species) and Reproduction of the Disease",
Vet. Med/SAC, 67, 61-64 (1972)].
Forbedret ydelse (forøget væksthastighed og/eller forøget foderudnyttelseseffektivitet) hos drøvtyggere, såsom kvæg, udgør et andet økonomisk ønskværdigt formål for 20 veterinærvidenskaben. Af særlig interesse er vækstfremme, der opnås ved at forøge foderudnyttelsens effektivitet. Mekanismen til udnyttelse af hovednæringsbestanddelen (kulhydraterne) i drøvtyggerfoder er velkendte. Mikroorganismer i dyrenes rumen nedbryder kulhydraterne til 25 monosaccharider, som derpå omdannes til pyruvater. Py-ruvaterne metaboliseres ved mikrobiologiske processer til dannelse af acetater, butyrater eller propionater, hvilke kollektivt betegnes som flygtige fede syrer (VFA).
Med hensyn til en mere detaljeret diskussion henvises 30 til Leng i "Physiology of Digestion and Metabolism in the Ruminant," Phillipson et al., Eds., Oriel Press, Newcastle-upon-Tyne, England, 1970, side 408-410.
3
DK 159320 B
Den relative effektivitet af udnyttelsen af VFA er diskuteret af McCullough i "Feedstuffs," June 19, 1971, side 19; Eskland et al. i J. An. Sci. 3_3> 282 (1971); og Church et al. i "Digestive Physiology and Nutrition 5 of Ruminants," bind 2, 1971, side 622 og 625. Skønt acetaterne og butyraterne udnyttes, udnyttes propionaterne med større effektivitet. Dyrene kan yderligere, når der er for lidt propionat tilgængeligt, udvikle ketose.
En gunstig forbindelse, vil derfor stimulere dyrene 10 til at frembringe en højere andel propionater ud fra kulhydraterne, hvorved man forøger effektiviteten af kulhydratudnyttelsen og ligeledes reducerer forekomsten af ketose.
Man har nu fundet, at en hidtil ukendt stamme af mikro- 15 organismen Streptomyces hygroscopicus, som er isoleret fra en jordprøve opsamlet i Washington, D.C., USA, pro ducerer et hidtil ukendt og værdifuldt antibioticum med anticoccidiale egenskaber. Dette nye produkt blev isoleret og identificeret som 19-epi-dianemycin med 20 formlen r r
JtF JL ·- i JF Xjpx 32λ μ O I Al/ \ i r léll! / Λ M«v I JL X 1» JLe'ft-XC V-M.
Jll0*13 T) \ 1 y\Q 29/ S ! I «Η Me^ ^ jq
COnH Me Me Me 35 0H 'CH 0H
40 38 37 *
Den antibioticum-producerende mikroorganisme ifølge opfindelsen blev isoleret fra en jordprøve opsamlet 4
DK 159320 B
i Washington, D.C., USA. Den blev betegnet som kultur N-483-29. Taxonomiske undersøgelser af denne mikroorganisme blev gennemført af A.H. Huang, som gav den følgende beskrivelse. Baseret på sine undersøgelser kon-5 kluderede han, at det drejer sig om en stamme af
Streptomyces hygroscopicus (Jensen) Waksman og Henrici.
Den nye., kultur har de smalle hyfer, som er knyttet til Actinomycetales, den producerer sporekæder på luftmyceliet og et ikke-fragmenteret substratmycelium. Re-10 sultaterne af analyse på hele celler fastslår yderligere, at den tilhører slægten Streptomyces.
Kulturen N-483-29 udplantes fra en skråkultur i ATCC nr. 172 næringsvæske og dyrkes i 3 dage ved 28 °C på et rysteapparat. Derpå centrifugeres i 20 minutter, 15 vaskes 3 gange med sterilt destilleret vand og udplan tes på substrater, som almindeligvis anvendes til identificering af forskellige medlemmer Actinomycetales.
Kulturen inkuberes ved 28 °C. Resultaterne, som kan aflæses på forskellige tidspunkter, tages normalt efter 20 14 dages forløb. Farverne er beskrevet i den almindelige terminologi, men eksakte farver bestemmes ved sammenligning med farvemærkater fra "Color Harmony Manual", fjerde udgave. Metodernen til aminosyre- og sukkeranalyser på hele celler, er dem der er beskrevet i Becker, 25 B. et al., Appl. Microbiol., 12., 421-423 81964), og i Lechevalier, M.P., J. Lab. Clin. Med., TI, 934-944 (1968).
I det følgende er anført de identifikations-substrater, som blev anvendt til karakterisering af kulturen, samt 30 referencer vedrørende deres sammensætning: 1. Trypton-gærekstrakt-væske - (ISP nr. 1 substrat, 5
DK 159320 B
Dif co).
2. Gærekstrakt-maltekstrakt-agar - (ISP nr. 2 substrat,
Dif co).
3. Havremelsagar - (ISP nr. 3 substrat, Difco).
5 4. Uorganiske salte-stivelses-agar - (ISP nr. 4 substrat,
Difco).
5. Glycerol-asparagin-agar - (ISP nr. 5 substrat, Difco).
6. Pepton-gærekstrakt-jern-agar - (ISP nr. 6 substrat,
Difco).
10 7. Czapek-sucrose-agar - S. A. Waksman, The Actinomycetes, bind 2, substrat nr. 1, side 328, 1961.
8. Glucose-asparagin-agar - samme værk, substrat nr, 2, side 328.
9. Bennett's agar - samme værk, substrat nr. 30, side 15 331.
10. Emerson's agar - samme værk, substrat nr. 28, side 331.
11. Næringsagar - samme værk, substrat nr. 14, side 330.
20 12. Gordon og Smith's tyrosinagar - R. E. Gordon og M.M. Smith, Jr. Bact. 69, 147-150, 1955.
13. Caseinagar - samme værk.
14. Calciummalat-agar - S. A. Waksman, Bact. Rev. 21, 6
DK 159320 B
1 — 19, 1957.
15. Gelatine - R. E. Gordon og 0. M. Mihm, Jr., Bact.
73, 15-27, 1957.
16. Stivelse - samme værk.
5 17. Organisk-nitrat-væske - samme værk.
18. Dextrose-nitrat-væske - S. A. Waksman, The Actinomycetes, bind 2, substrat nr. 1, side 328, 1961, idet der anvendtes 3 g dextrose i stedet for 30 g sucrose, og agar er udeladt.
10 19. Kartoffel-gulerods-agar - Μ. P. Lechevalier, Jr.,
Lab. and Clinical Med. 7_1, 934-944, 1968; idet man dog kun anvender 30 g kartofler, 2,5 g gulerødder og 20 g agar.
20. 2 % ledningsvand-agar.
15 21. Skummetmælk - Difco.
22. Celleluloseudnyttelse - a) H. L. Jensen, Proc. Linn. Soc. N. S. W. 5_5, 231-248, 1930.
b) M. Levine og H. W. Schoenlein, A Compilation of Cul-20 ture Media, substrat nr. 25X1, 1930.
23. Kulhydrater - ISP nr. 9 substrat, Difco.
24. Temperaturområde - ISP nr. 2 substrat plus 50 ml kokosmælk.
Gærekstrakt-maltekstrakt-aqar - væksten god, lysebrun 7
DK 159320 B
(nær 3 ie) med gullige (2ea) kamme eller membraner, moderat forhøjet, rynket til membrandannelse, intet luftmycelium, bagsiden svagt lysegul (2ea) med brune linier (3gc, 3ic); opløseligt pigment brunt (31 c, 3ne).
3 Havreqrynsaqar - væksten moderat, hvid, gullig til grå (1 1/2 ea, 1 l/2ge nær den grå række 3dc, 3fe), tynd til svagt forhøjet, glat, hygroskopisk i visse områder, luftmyceliet det samme som overfladens; bagsiden farveløs, flødefarvet til grå (1 l/2ca, nær den grå række 10 3dc, 3fe); opløseligt pigment svagt lysegult (1 l/2ca).
Uorganiske salte-stivelses-aqar - væksten moderat til god, gullig til grå (lea, 1 1/2 ea, nær grå række 3dc, 3fe, 3ih), tynd til forhøjet, glat men rynket nær kanten, hygroskopisk i visse områder, luftmyceliet det samme 15 som ovenfladen; bagsiden svagt lysegul til grå (2ea, nær de grå serier 3dc, 3fe); opløseligt pigment svagt lysegult (1 1/2 ca).
Glycerol-asparaqin-aqar - væksten ringe til moderat, farveløs til flødefarvet (nær grå række Iba), tynd, 20 glat, intet luftmycelium; bagsiden farveløs; intet oplø seligt pigment.
Glucose-asparaqin-aqar - væksten god, hvid til flødefarvet (2ca), ophøjet, rynket, luftmycelium hvidt; bagsiden svagt lysegul (2ea); opløseligt pigment svagt lysegult 25 (2ca, 2ea).
Czapek-sucrose-aqar - væksten moderat til god, flødefarvet (2ca), tynd, glat, med udspredte kanter, intet luftmycelium; bagsiden farveløs til flødefarvet (2ca); opløseligt pigment flødefarvet (2ca).
30 Emerson's agar - væksten god, lysebrun (3gc), ophøjet, 8
DK 159320 B
glat til let rynket, intet luftmycelium; bagsiden det samme på overfladen; opløseligt pigment brunt (3nc).
Nærinqsaqar - væksten moderat, flødefarvet (1 l/2ca, 2ca), let ophøjet, glat eller forekommende som isolerede 5 kolonier, intet luftmycelium; bagsiden gullig (2ca, 2ea); intet opløseligt pigment.
Bennett's agar -væksten god, flødefarvet (2ca), moderat ophøjet, rynket til furet, luftmycelium intet til ganske lidt, hvidt; bagsiden flødefarvet til lysegrågul (2ca, 10 2gc); opløseligt pigment svagt lysegult (2ea).
Gordon og Smith's tyrosinaqar - væksten ringe til moderat, gulligbrun til mørkebrun (4ec, 4nl, 5nl), tynd til svagt ophøjet, glat, intet luftmycelium; bagsiden brun til mørkebrun (51g, 5ni); opløseligt pigment mørkebrunt 15 til sort (5nl, 5 pn).
Calciummalatagar - væksten moderat, flødefarvet (1 1/2 ca), tynd til let ophøjet, glat, intet luftmycelium; bagsiden det samme som overfladen; intet opløseligt pigment.
20 Caseinaqar - væksten moderat til god, flødefarvet (2ca, 3ca), let ophøjet, glat til let rynket, intet luftmycelium; bagsiden flødefarvet; opløseligt pigment lyserødt brunt (4ia, 4 ga).
Gelatineaqar - væksten god, flødefarvet (2ca), moderat 25 ophøjet, glat men rynket nær kanten, intet luftmycelium; bagsiden det samme som overfladen; opløseligt pigment flødefarvet.
Stivelsesaqar - væksten god, flødefarvet (nær 2ca), moderat ophøjet, rynket, men kan være glat mod kanten, 9
DK 159320 B
intet luftmycelium; bagsiden det samme som overfladen; opløseligt pigment flødefarvet.
Kartoffel-gulerod-aqar - væksten moderat, flødefarvet (1 l/2ca), tynd, glat, luftmycelium sparsomt, hvidt; 5 bagsiden farveløs til flødefarvet; intet opløseligt pigment.
Ledninqsvandaqar - væksten dårlig, farveløs til flødefarvet (nær grå række 2ba), tynd, glat, mest neddykket, luftmycelium sparsomt, hvidt; bagsiden det samme som 10 overfladen; intet opløseligt pigment.
Morfologiske egenskaber; De morfologiske egenskaber blev iagttaget på uorganiske salte-stivelses-agar efter 14 dages inkubering; sporemasse i den grå farverække; sporekæder i sektioner og spiraler, let åben, med lille 15 diameter (6 - 10 yum lang og 3 - 4,5 yum bred), 3 -6 snoninger pr. rulle, 8-10 sporer pr. sporekæde; sporophorerne er monopodisk forgrenede, sommetider verti-cilatisk forgrenede; sporer ovale til elliptiske, undertiden stavformede eller bådformede, 1,2 - 2,0 X 0,9 20 - 1,2 ^um vorteformede, som de ses ved skanderende elek tronmikroskopi.
Biokemiske egenskaber: Melanin dannes ikke; hydrogensulfid dannes; gelatine smeltes; stivelse hydrolyseres; nitrat reduceres til nitrit i begge nitrat-næringsvæsker; 25 dårlig vækst og ingen dekomponering på Jensens cellulose og på Levine og Schoenleins cellulose; klaring men ikke koagulering på mælk; fordøjelse af casein positiv; cal-ciummaleatfordøjelse positiv; tyrosinfordøjelse positiv. Kulhydratudnyttelse: Glucose, arabinose, fructose, inosi-30 tol, mannitol, raffinose, rhamnose, sucrose og xylose udnyttes alle.
DK 159320 B
ία
Temperaturforhold;
21 °C 28 °C 37 °C 43 °C
God til god vækst moderat ingen fremragende vækst vækst vækst
Hel-celle-analyse; Cellevæggene indeholder LL-diamino-pimelinsyre men ingen karakteristiske sukkerarter.
Den mikrobiologiske kultur N-483-29 er kendetegnet ved grå sporer i masse, spiralformede sporekæder, sporer 5 med en vorteagtig overflade og negativ melaninreaktion.
På visse substrater er luftmyceliet hygroskopisk i visse områder. Med undtagelse af den positive udnyttelse af saccharose og raffinose passer isolatet med beskrivelsen af neotype-stammen af S. hygroscopicus, som er offent-10 liggjort i Int. J. Syst. Bact. 22, 265-394, 1972. Udnyttelsen af carbonkilderne adskiller sig blandt de forskellige stammer ifølge H. D. Tresner og E. J. Backus, som har foreslået en udvidet opfattelse af arten, hvilket er offentliggjjort i Applied Microbiology, 4, 243-250 15 1956. Kulturen betragtes således som værende en stamme af Streptomyces hygroscopicus (Jensen) Waksman og Henrici.
Den er blevet deponeret i American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA, som er et anerkendt deponeringssted, hvor man kan være sikret permanent 20 -deponering og let tilgængelighed for offentligheden.
Denne mikroorganisme fik tildelt betegnelsen Streptomyces hygroscopicus ATCC 39205.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav 2's kendetegnende del angivne.
25 Dyrkningen af kulturen S. hygroscopicus ATCC 39205 gen- 11
DK 159320 B
nemføres fortrinsvis under submerse (neddykkede) aerobe betingelser ved 21 - 37 °C under omrøring i et vandigt næringssubstrat. Typiske næringssubstrater, som er anvendelige ved dyrkning, inkluderer en kilde til assi-5 milerbar carbon, såsom sukkerarter, stivelsearter og glycerol; en kilde til organisk nitrogen, såsom casein, enzymatisk fordøjelsesprodukt af casein, casaminosyre, sojaskrå,bomuldsfrøskrå, jordnøddeskrå, hvedegluten, sojamel, gærekstrakt, kødmel og fiskemel; en kilde til 10 vækstforbindelser, såsom biprodukt ved kornforgæring, fiskemel, bomuldsfrømel og gærekstrakt, såvel som uorganiske salte, såsom natriumchlorid og calciumcarbonat og sporelementer, såsom jern, magnesium, zink, cobalt og mangan; endvidere calciumcarbonat og phosphater som 15 buffermidler.
Hvis der opstår for stor skumning under gæringen, sættes i almindelighed anti-skumningsmidler, såsom vegetabilske olier eller siliconer til gæringsmediet. Der opretholdes fortrinsvis beluftning af mediet i tankene 20 til submers vækst med en hastighed på ca. 1/2 til 2 rumfang steril frisk luft pr. rumfang gæringsvæske pr. minut, som tvinges ind i væsken gennem et fordelings-organ. Omrøringen opretholdes ved hjælp af omrørere, således som de er kendte for fagmanden inden for gæ-25 ringsområdet. Omrøringshastigheden afhænger af den an vendte type omrører. En rysteflaske drives sædvanligvis ved 150 - 200 slag pr. minut, medens en fermentor sædvanligvis køres med 300 - 1700 omdrejninger pr. minut.
Man må naturligvis opretholde aseptiske forhold under 30 overførslen af organismen og under hele dens vækst.
Podematerialet kan fremstilles ved at skrabe vegetative celler fra skråkulturer eller Roux-flasker, som er podet med kulturen N-483-29. Et fast substrat, som er egnet til den indledende vækst på skråkulturer og i 12
DK 159320 B
Roux-flasker, er ATCC substrat nr. 172.
ATCC 172 qram/liter
Glucose 10
Opløselig stivelse 20 Gærekstrakt * 5 "NZ Amine A" 5
Calciumcarbonat 1
Destilleret vand op til 1000 ml; pH 7,0 med Κ0Η
Tilsæt agar 20
Vegetative celler fra skråkulturerne anvendes til at pode enten rystekolber eller podningstanek; man kan alternativt pode podningstankene ud fra rystekolberne.
I rystekolber vil væksten sædvanligvis have nået sit 5 maximale på 96 - 120 timer, medens væksten i podnings- tankene sædvanligvis vil være i sin mest favorable periode på fra 72 til 76 timer. Man poder en fermentor med vegetativ næringsvæske fra podningskolberne eller tanken under totalt aseptiske betingelser, og der for-10 gæres i en periode på 96 - 168 timer. Beluftningen opretholdes i rystekoIben ved bevægelse ved hjælp af et rysteapparat eller i tanke ved, at der tvinges steril luft igennem et fordelingsorgan med en hastighed på 1/2 til 2 rumfang luft pr. rumfang væske pr. minut.
15 Hastigheden af bevægelsen (omrøringen) afhænger af den anvendte type bevægelsesapparat, som ovenfor bemærket. Temperaturen indreguleres mellem 24 °C og 36 °C.
Efter gæringens afslutning udvindes antibiocummet ved ekstration af den samlede væskemængde med et med vand 20 ublandbart opløsningsmiddel, såsom n-butanol, methyl- isobutylketon, ethylacetat eller chloroform, ved pH 4,0 - 8,0. Alternativt kan man fraseparere myceliet og ekstrahere med et af de ovenfor nævnte opløsnings- 13
DK 159320 B
midler til isolering af antibioticummet. Ekstrakten koncentreres, koncentratet opløses i heptan og chro-matograferes over silicagel.
Udviklingen i produktionen af antibioticum under gæ-5 ringen, og den biologiske aktivitet af gæringsvæsken, kan overvåges ved biologisk afprøvning af væsken, idet man anvender en følsom stamme af Staphylococcus aureus eller Bacillus subtil'is. S. aureus ATCC 6538 og B. subtilis ATCC 6633 er til dette formål egnede stammer.
10 Man anvender standardplademålings-metoden, hvorved man bruger inhiberingszonen, som omgiver en skive af filtrerpapir, der er mættet med næringsvæsken, som et mål af den antibiotiske styrke. Tyndtlagschromatografi under anvendelse af silicagel er ligeledes et nyttigt instrument 15 til analysering af det antibioticum, som er produceret i fermenteringssubstratet, og sammensætningen af rå og renset materiale, som er ekstraheret fra fermenterings-væskerne. "Analtech" silicagel GF chromatogrammer fremkaldes med ethylacetat/methanol (9:1) eller chlo-20 roform/methanol (9:1). Den antibiotiske forbindelse gøres synlig ved påsprøjtning med vanilin- reagens (3 g vanilin i 75 ml methanol og 25 ml 85?ί phosphorsyre) og opvarmning af TLC-pladen til 80 °C. Antibioticummet viser sig som en purpurfarvet plet. Pladen kan ligeledes 25 blive overlegeret med agar, som er podet med enten S. aureus eller B. subtilis, hvortil man har sat 2,3,4-triphenyl-2H-tetrazoliumchlorid, monohydrat, og inkuberet ved 37 °C i 16 timer for at gøre antibioticummet synligt (hvidt imod en lyserød baggrund).
30 Antibioticummet 19-epi-dianemycin udviser inhiberende virkning overfor en række forskellige Gram-positive mikroorganismer.
14
DK 159320 B
Man poder til denne afprøvning hver organisme i en række reagensglas indeholdende næringssubstrat og varierende koncentrationer af 19-epi-dianemycin til fastlæggelse af den mindst mulige koncentration af antibioticummet 5 udtrykt i ^ug/ml, som inhiberer væksten af organismen over en tidsperiode på 24 timer (MIC).
På grundlag af en sådan afprøvning af 19-epi-dianemycin og litteraturdata vedrørende dianemycins antimikrobielle spektrum kan der opstilles følgende sammenligningsdata:
Prøveorqanisme 19-epi-dianemycin dianemycin
Staphylococcus aureus 3,125 1,56
Lactobacillus casei 0,10 0,78
Bacillus subtilis 1,56 3,12
Escherichia coli 100 100 10 19-epi-dianemycin er således bedre end dianemycin over for to af de fire mikroorganismer. 19-epimeren har samme eller lidt mindre toxicitet end dianemycin, idet litteraturen rapporterer, at LD^g på mus af dianemycin er 40 mg/kg, mens 19-epi-dianemycin har vist en LD^g 15 på mus på 30-70 mg/kg, i begge tilfælde indgivet sub- cutant.
19-epi-dianemycin og dets salte med baser udviser en fremragende aktivitet overfor coccidieinfektioner hos fjerkræ. Disse forbindelser er, når de inkorporeres 20 i kyllingers foder i niveauer på 50 - 200 ppm, effektive til beherskelse af infektioner forårsaget af Eimeria tenella, E. acervulina, E. maxima, E. brunetti og E. necatrix.
Data for effektiviteten af 19-epi-dianemycin og salte 15
DK 159320 B
deraf mod coccidieinfektioner hos kyllinger opnås på følgende måde. Grupper på 3 - 5 ti dage gamle SPF hvide italienske hanekyllinger fodres med et fugtigt foder indeholdende 19-epi-dianemycin eller natrium og/eller 5 kaliumsaltene deraf ensartet dispergeret i foderet.
Efter at have levet på dette foder i 24 timer, inocu-leres hver kylling per os med oocyster af den bestemte art af Eimeria, som er under afprøvning. Andre grupper på 3-5 ti dage gamle kyllinger fodres med et til-10 svarende fugtigt foder, som er frit for 19-epi-diane mycin, og inficeres ikke med coccidier. Disse tjente som normale kontrolgrupper. Resultaterne af behandlingen bedømmes efter 5 dages forløb, når det drejer sig om E. acervulina, og efter 6 dages forløb for alle de andre 15 smittekilder.
De kriterier, som anvendes til at måle anticoccidial aktivitet, består af læsionstal på 0-4 for E. tenella ifølge J. E. Lynch, "A New Method for the Primary Evaluation of Anticoccidial Activity", Am. 3. Met. Res.
20 22^ 324-326 (1961); og på 0 - 3 for de andre arter baseret på en modifikation af det bedømmelsessystem, som er udarbejdet af J. Johnson og W. H. Reid, "Anticoccidial Drugs. Lesion Scoring Techniques in Battery and Floor Pen Experiments in Chicks", Exp. Parasit. 2jJ, 30-36 25 (1970). Et konstant forhold etableres ved at dividere læsionstallet for hver behandlet gruppe med læsionstallet for den inficerede kontrolgruppe.
Man har i almindelighed bestemt værdien af dyrefoder direkte ved fodring af det pågældende dyr. I GB patent-30 skrift nr. 1 197 826 er beskrevet detaljeret en in vitro rumenteknik, hvorved man lettere og med større nøjagtighed kan måle de forandringer, som frembringes i fodermidlerne ved mikroorganismernes indvirkning, til bedømmelse af dyrefoder. Denne teknik involverer anvendelsen af et 16
DK 159320 B
apparat, i hvilket dyrenes fordøjelsesprocesser gennemføres og undersøges in vitro. Fodermidlerne, rumen-indhold og forskellige vækstfremmende midler indføres til og udtages af et laboratorieapparat under nøje kontrol-5 lerede omstændigheder, og de forandringer, der finder sted, undersøges kritisk og fremadskridende under forbruget af foderstofferne ved mikroorganismerne. En forøgelse af propionsyreindholdet i rumen-væsken indikerer, at man har fremkaldt et ønsket respons i den totale 10 drøvtygger-funktion ved hjælp af et vækstfremmende mid del i foderblandingen. Ændringen i propionsyreindholdet udtrykkes som et procentindhold i forhold til det propionsyreindhold, som er fundet i en rumen-væske anvendt som kontrol. Man anvender langtids in vivo fod-.15 ringsundersøgelser for at vise, at der findes en på lidelig korrelation mellem propionsyreforøgelsen i rumen-væsken og forbedret ydeevne for dyret.
Der opsamles rumenvæske fra en fistuleret ko, som bliver fodret med en kommerciel opfedningsblanding plus hø.
20 Rumenvæsken filtreres øjeblikkeligt igennem osteklæde, og der sættes 10 ml til en 50 ml konisk kolbe indeholdende 400 mg af standardsubstratet (68¾ majsstivelse plus 17¾ cellulose plus 15¾ sojaskrå), 10 ml af en pH 6,8 puffer samt de forbindelser, der skal undersøges. Kolben 25 tilledes gas i form af oxygenfrit nitrogen i ca. 2 minutter og inkuberes i en rystetermostat i vand ved 39 °C i ca. 16 timer. Alle afprøvninger udføres som tredobbelte prøver.
Efter denne inkubering blandes 5 ml af prøven med 1 30 ml 25¾ metaphosphorsyre. Efter 10 minutters forløb tilsættes 0,25 ml myresyre, og blandingen centrifugeres ved 1500 omdr./minut i 10 minutter. Prøverne analyseres derpå ved gasfasechromatografi under anvendelse af metoden angivet af D. W. Kellog, J. Dairy Science 52, r' 17
DK 159320 B
1960 (1969). Højden af toppene på eddikesyre, propion-syre og smørsyre fastlægges på prøver fra ubehandlede og fra behandlede inkuberingskolber.
For at forbedre foderudnyttelsen hos drøvtyggere, såsom 5 kvæg og får, og hos monogastriske dyr, såsom svin og kaniner, kan 19-epi-dianemycin inkorporeres i foderblandinger som den frie syre, natriumsaltet, kaliumsaltet eller blandinger deraf. Urensede former af 19-epi-dianemycin eller tørret gæringsvæske indeholdende 10 antibioticummet kan naturligvis inkorporeres i foder blandingerne i koncentrationer med den ønskede styrke.
Opfindelsen belyses nærmere ved de følgende eksempler.
EKSEMPEL 1
Man klargjorde rystekolber under anvendelse af følgende 15 medium: CL13M qram/liter
Cerelose 20,0
Sojamel 10,0 "Distiller Solubles" 5,0
Natriumsulfat 0,5
Cobaltchlorid 0,002
Calciumcarbonat 2 100 ml af substratet blev fordelt i 300 ml rystekolber og steriliseret ved 120 °C og 1 atm i 30 minutter. Substratet blev efter afkøling inoculeret med en suspension af vegetative celler af Streptomyces hygroscopicus ATCC 20 39205, der var blevet dyrket på et ATCC nr. 172 agar- substrat. Kolberne blev rystet ved 28 °C på et roterende rysteapparat med en forskydning på 3,8 - 6,4 cm og 150
DK 159320 B
f 1Θ 200 slag pr. minut i 3-4 dage. En kolbe blev brugt til inoculering af en 5-liters fermentor indeholdende 3 liter af følgende medium: CL13M qram/liter
Cerelose 20,0
Sojamel 10,0 "Distiller Solubles" 3,0
Natriumsulfat 0,5
Calciumcarbonat 2,0
Cobaltchlorid 0,002
Vand op til en liter pH 6,9-7,0.
Der tilsattes 1 ml L61 silicone som antiskumningsmiddel, 5 og derpå blev beholderne forseglet og steriliseret ved 120 °C og 1 atm tryk i 45 minutter. Beholderen blev inoculeret med 1 kolbe (ca. 3% podemateriale), gæret i 96 - 168 timer ved 30 °C, omrørt ved 1700 omdr./min med en lufthastighed på et rumfang luft pr. rumfang 10 væske pr. minut.
Da gæringen var fuldført (baseret på en prøve med en antibiotisk plade overfor B. subtilis ATCC 6633), blev omrøringen og beluftningen stoppet, hvorpå der blev filtreret ved den naturlige pH-værdi under anvendelse 15 af diatoméjord som filterhjælpemiddel. Filterkagen blev opslæmmet i ethanol, filtreret, opløsningsmidlet opkon-centreret under vakuum, fortyndet med 2-3 rumfang vand og derpå ekstraheret 2 gange med 1/3 - 1/2 rumfang af et opløsningsmiddel, såsom methylisobutylketon. Op-20 løsningsmiddellaget blev separeret fra den vandige fase ved afsugning eller centrifugering, rensefiltreret og opkoncentreret under vakuum til en viskøs olie.
19
DK 159320 B
Alternativt blev antibioticummet isoleret ved ekstraktion af hele gæringsvæsken ved den naturlige pH-værdi med methylisobutylketon og opkoncentrering af opløsningsmidlet til en viskøs olie. Olien blev bragt i sus-5 pension i heptan og behandlet i portioner med silicagel 60. Silicagelkagen blev elueret med chloroform, chlo-roform/ethylacetat og ethylacetat. Efter opkoncentrering gav ethylacetatfraktionen et råprodukt, ud fra hvilket 19-epi-dianemycin krystalliserede som det blan-10 dede natrium/kaliumsalt.
Tyndtlagskromatografi af råproduktet i følgende systemer, som hvert adskiller en blanding af dianemycin og 19-epi-dianemycin, førte kun til detektion af 19-epi-diane-mycin.
Rf Rf
System Dianemycin 19-epidianemycin
Ethylacetat 0,30 0,40
Chloroform/acetone (1:1) 0,42 0,49
Ethylacetat/chloroform (2:1) 0,15 0,22
Man opnåede tilsvarende resultater, når man i stedet for substratet i dette eksempel anvendte et af de i det følgende anførte substrater.
Substrat C qram/liter
Cerelose 10,0
Majstivelse 10,0
Sojamel 10,0
Forgærbart tørstof fra majs 5,0
Natriumchlorid 5,0
Calciumcarbonat 1,0
Vand op til en liter pH 6,9 - 7,0.
20
DK 159320 B
Substrat M qram/liter
Cerelose 10,0
Stivelse 20,0 Gærekstrakt 5,0
Coboltchlorid 0,002 •"NZ Amine A" 5,0
Calciumcarbonat 1,0
Vand op til en liter pH 6,9-7,0.
EKSEMPEL 2
En opskalering af den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde til store fermentorer blev gennemført ved, at man tilberedte rystekolber indeholdende 0,7 liter CL13M 5 medium. Indholdet i rystekolben blev fermenteret 3 -5 dage ved 28 °C, hvorpå det blev anvendt til at pode en fermentor på 6435 liter indeholdende 4542 liter CL13M medium. I tanken blev anvendt ca. en liter (0,05¾) podemateriale. Fermentoren blev høstet efter gæring 10 i 4 dage (ca. 4164 liter). Hele gæringsvæsken blev ekstraheret med 1/5 rumfang methylisobutylketon ved det naturlige pH, separeret på en såkaldt "Podbielniack" ekstraktor, og ekstrakten blev koncentreret i vakuum til en olie (30,3 liter).
15 Olien blev yderligere koncentreret på en cycloninddam- per til en sirup. Efter koncentrering blev den bragt i suspension i hexan, omrørt med silicagel ("Merck silica-gel 60"), og derpå filtreret gennem et leje af silicagel og vasket gentagne gange med heptan. Antibioticummet 20 blev elueret trinvis med chloroform, chloroform/ethyl- acetat, ethylacetat og til sidst med 50¾ acetone i ethyl-acetat. Elueringen blev fulgt under anvendelse af tyndt-lagschromatografi og biologisk afprøvning af fraktionerne. De aktive udtagne fraktioner blev kombineret, kon- 21
DK 159320 B
centreret og igen kromatograferet til isolering af an-tibioticummet. Under oparbejdningen var der problemer med de aktive fraktioner fra den chargevise behandling med silicagel. En passage af de aktive eluater igennem 5 granulært Darco kul fjernede de forstyrrende materialer og forbedrede indvindingen. Der blev indvundet ca. 40 g krystallinsk 19-epi-dianemycin.
EKSEMPEL 3
Analogt med eksempel 2 udførtes en gæring på ca. 4164 10 liter af S. hygroscopicus ATCC 39205. Hele gæringsvæsken blev ekstraheret med 1/5 rumfang methy lisobiity lketon, og ekstrakten blev koncentreret i vakuum til dannelse af en brun olie (ca. 3,8 liter). Koncentratet blev hældt i 11,4 liter heptan under omrøring, og den resulteren-15 de opslæmning blev filtreret gennem et leje af diatomé- jord.
Filtratet blev behandlet chargevis med 3 kg silicagel af søjlekvalitet ("Merck silicagel 60", maskevidde 63-212yum). Silicagelen blev vasket med 11,4 liter hver 20 af heptan, chloroform, acetone og methanol. Disse frak tioner blev undersøgt ved tyndtlagschromatografi, og man fandt at 19-epi-dianemycinet fortrinsvis var i acetone- og chloroformfraktionerne.
Acetonefraktionen (180 g) blev chromatograferet på en 25 søjle 8 x 100 cm, som var pakket med silicagel af søj lekvalitet ("Merck silicagel 60", maskevidde 38-63^,um) i ethylacetat. Som eluerings-opløsningsmiddel anvendtes ethylacetat, Strømningshastigheden var 70 ml/minut, og man optog fraktioner på ca. en liter hver. De for-30 skellige fraktioner blev undersøgt ved tyndtlagschro- matografi over "Analtech" GF silicagelplader, som blev fremkaldt i ethylacetat. Pladerne blev synliggjort 22
DK 159320 B
ved sprøjtning med et vanillinreagens (3 g vanillin i 75 ml ethanol og 25 ml 85 % phosphorsyre) og opvarmet til 80 °C. 19-epi-dianemycin forekommer som en purpur-farvet plet under disse betingelser.
5 De fraktioner, som indeholdt 19-epi-dianemycin, blev kombineret og inddampet. Koncentratet blev opløst i en liter chloroform, vasket med en liter surt vand (pH 4), derpå med en liter 5!S dibasisk-natriumphosphatpuf-fer (pH 9), tørret over vandfrit natriumsulfat, fil-10 treret og inddampet. Koncentratet blev optaget i acetone, og der tilsattes en lille mængde (ca. 10?ό) vand, hvorpå 19-epi-dianemycin udkrystalliserede som natriumsaltet. Krystallerne blev opsamlet ved filtrering og tørret i vakuum ved stuetemperatur. Udbyttet var 23 g af na-15 triumsaltet.
Chloroformfraktionen fra silicagel-charge-behandlingen (280 g) blev genopløst i en liter chloroform og sendt igennem en 7 x 120 cm søjle, som var pakket med granuleret aktiveret trækul i chloroform. Der blev elueret med 20 chloroform med hastigheden 20 ml/minut, og der blev opsamlet fraktioner på 300 ml. Fraktionerne indeholdende antibioticum blev kombineret og koncentreret. Koncentratet blev krystalliseret som natriumsaltformen som beskrevet ovenfor for acetonefraktionen. Udbyttet var 14 g. Der 25 blev opnået yderligere 10 g af det urensede materiale i anden omgang.
Natriumsaltet af 19-epi-dianemycin smeltede ved 193-205 °C. Andre egenskaber er: UV I = 232 nm, E = 157 Amax ’ 1 cm 30 Oip = 11,0° (c = 1, methanol) 23
DK 159320 B
Grundstofanalyse Beregnet for C^H^O^Na: £ £ 0 (ved subtraktion) 63,49 8,73 27,78
Fundet: 63,10 8,86 28,04
Den frie syre blev dannet ved vaskning af en chloroform-5 opløsning af natriumsaltet med surt vand (pH 4) og påfølgende afdampning af chloroformen. Forbindelsen kunne ikke bringes til at krystallisere, men blev opnået som et glasagtigt stof.
UVI = 232 nm, e}* = 163
Amax ’ 1 cm 10 (Xp = +15,6° (c = 1, methanol)
Grundstofanalyse Beregnet for C^HygO·^: £ H 0 (ved subtraktion) 63,10 9,06 25,84
Fundet: 64,45 8,94 26,61
Claims (6)
- 40 X 37 OH CH2OH og farmaceutisk acceptable salte deraf med baser.
- 2. Fremgangsmåde til fremstilling af 19-epi-dianemycin, 5 kendetegnet ved, at man dyrker Streptomyces hygroscopicus ATCC 39205 i et vandigt næringssubstrat indeholdende assimilerbare kilder til carbon, nitrogen og uorganiske salte under aerobe betingelser, indtil der er dannet en væsentlig mængde 19-epi-dianemycin.
- 3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at man indvinder 19-epi-dianemycinet.
- 4. Fremgangsmåde ifølge krav 2 eller 3, kendetegnet ved, at der som carbonkilde anvendes glucose.
- 5. Mikroorganismekultur til brug ved fremgangsmåden 15 ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den er en biologisk ren kultur af Streptomyces hygroscopicus ATCC 39205. DK 159320 B
- 6. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det indeholder 19-epi-dianemycin eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ifølge krav 1 sammen med et farmaceutisk acceptabelt bærestof eller fortyndings-5 middel.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US46646883A | 1983-02-15 | 1983-02-15 | |
| US46646883 | 1983-02-15 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK64784D0 DK64784D0 (da) | 1984-02-14 |
| DK64784A DK64784A (da) | 1984-08-16 |
| DK159320B true DK159320B (da) | 1990-10-01 |
| DK159320C DK159320C (da) | 1991-03-04 |
Family
ID=23851872
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK064784A DK159320C (da) | 1983-02-15 | 1984-02-14 | 19-epi-dianemycin og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af 19-epi-dianemycin og mikroorganismekultur til anvendelse ved fremgangsmaaden samt farmaceutisk praeparat indeholdende 19-epi-dianemycin |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0117107B1 (da) |
| JP (2) | JPS59224691A (da) |
| KR (1) | KR870001147B1 (da) |
| AT (1) | ATE36339T1 (da) |
| AU (2) | AU547035B2 (da) |
| CA (1) | CA1214414A (da) |
| CS (1) | CS238399B2 (da) |
| DD (1) | DD220336A5 (da) |
| DE (1) | DE3473277D1 (da) |
| DK (1) | DK159320C (da) |
| EG (1) | EG16996A (da) |
| ES (1) | ES8505381A1 (da) |
| FI (1) | FI77263C (da) |
| GR (1) | GR81785B (da) |
| GT (1) | GT198400008A (da) |
| HU (1) | HU192536B (da) |
| IE (1) | IE56789B1 (da) |
| IL (1) | IL70952A (da) |
| MX (1) | MX167931B (da) |
| NO (1) | NO158223C (da) |
| NZ (1) | NZ207126A (da) |
| PH (2) | PH21705A (da) |
| PL (1) | PL144963B1 (da) |
| PT (1) | PT78078B (da) |
| SU (1) | SU1296010A3 (da) |
| YU (1) | YU43340B (da) |
| ZA (1) | ZA841055B (da) |
| ZW (1) | ZW1984A1 (da) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4510317A (en) * | 1983-07-28 | 1985-04-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibiotic X-14934A |
| JPS6373117U (da) * | 1986-10-30 | 1988-05-16 | ||
| KR20230155763A (ko) | 2022-05-04 | 2023-11-13 | 한국식품연구원 | 파툴린(Patulin), 디아네마이신(Dianemycin) 또는 아르니콜라이드 D(Arnicolide D)를 포함하는 지질 대사 개선용 조성물 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4359583A (en) * | 1980-09-16 | 1982-11-16 | Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. | Antibiotics TM-531 B and TM-531 C |
-
1984
- 1984-01-19 GT GT198400008A patent/GT198400008A/es unknown
- 1984-02-06 JP JP59019820A patent/JPS59224691A/ja active Granted
- 1984-02-09 PT PT78078A patent/PT78078B/pt unknown
- 1984-02-09 GR GR73767A patent/GR81785B/el unknown
- 1984-02-13 CA CA000447252A patent/CA1214414A/en not_active Expired
- 1984-02-13 AT AT84300869T patent/ATE36339T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-02-13 EP EP84300869A patent/EP0117107B1/en not_active Expired
- 1984-02-13 DE DE8484300869T patent/DE3473277D1/de not_active Expired
- 1984-02-13 NZ NZ207126A patent/NZ207126A/en unknown
- 1984-02-14 DK DK064784A patent/DK159320C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-02-14 EG EG108/84A patent/EG16996A/xx active
- 1984-02-14 DD DD84260075A patent/DD220336A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-02-14 SU SU843706216A patent/SU1296010A3/ru active
- 1984-02-14 ZA ZA841055A patent/ZA841055B/xx unknown
- 1984-02-14 IE IE337/84A patent/IE56789B1/en unknown
- 1984-02-14 NO NO840538A patent/NO158223C/no unknown
- 1984-02-14 MX MX026993A patent/MX167931B/es unknown
- 1984-02-14 FI FI840590A patent/FI77263C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-02-14 PL PL1984246205A patent/PL144963B1/pl unknown
- 1984-02-14 IL IL70952A patent/IL70952A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-02-14 HU HU84582A patent/HU192536B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-02-14 AU AU24572/84A patent/AU547035B2/en not_active Ceased
- 1984-02-14 YU YU266/84A patent/YU43340B/xx unknown
- 1984-02-14 ZW ZW19/84A patent/ZW1984A1/xx unknown
- 1984-02-15 KR KR1019840000718A patent/KR870001147B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1984-02-15 ES ES529755A patent/ES8505381A1/es not_active Expired
- 1984-02-15 CS CS841067A patent/CS238399B2/cs unknown
- 1984-02-15 PH PH30244A patent/PH21705A/en unknown
-
1985
- 1985-08-16 AU AU46287/85A patent/AU584629B2/en not_active Ceased
- 1985-08-29 PH PH32719A patent/PH21674A/en unknown
-
1987
- 1987-06-30 JP JP62163886A patent/JPS63152392A/ja active Granted
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4195079A (en) | New polycyclic ether antibiotic | |
| US5100785A (en) | Polycyclic ether antibiotic | |
| US4431801A (en) | Polycyclic ether antibiotic | |
| US4361649A (en) | Polycyclic ether antibiotic | |
| US4543334A (en) | Streptomyces capable of producing neutral macrolide antibacterial agents | |
| DK159320B (da) | 19-epi-dianemycin og salte deraf, fremgangsmaade til fremstilling af 19-epi-dianemycin og mikroorganismekultur til anvendelse ved fremgangsmaaden samt farmaceutisk praeparat indeholdende 19-epi-dianemycin | |
| DK171880B1 (da) | Mikrobiologisk fremgangsmåde til fremstilling af UK-61689 og mikroorganismestammer, der kan anvendes ved fremgangsmåden | |
| US4533553A (en) | Polycyclic ether antibiotic | |
| US4552843A (en) | Process for producing an acidic polycyclic ether antibiotic by cultivation of a novel strain of Streptomyces endus subspecies aureus | |
| US5206263A (en) | Acidic polycyclic ether useful as an anticoccidial agent and as a growth promotant | |
| US4625041A (en) | Acidic polycyclic ether antibiotic | |
| US4547523A (en) | Polyether antibiotic from streptomyces | |
| US4908316A (en) | Streptomyces sp. N664-30 which produces an ionophore antibacterial agent | |
| US4751317A (en) | Inophore antibacterial agent from streptomyces | |
| US4707493A (en) | 19-epi-dianemycin as an anticoccidial and antibacterial agent | |
| KR930007383B1 (ko) | 산성 폴리사이클릭 에테르 항생물질을 생산하는 미생물 및 이를 이용하여 산성 폴리사이클릭 에테르 항생물질을 생산하는 방법 | |
| US4652523A (en) | Method of preparing a new polyether antibiotic from streptomyces | |
| US5478735A (en) | Process for producing acidic polycyclic ether antibiotic having anticoccidial and growth promant activity with Actinomadura |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |