JPS63132665A

JPS63132665A - 血液中蛋白質の回収装置

Info

Publication number: JPS63132665A
Application number: JP61281552A
Authority: JP
Inventors: 雄一山本; 正鮫島; 敏宏赤池
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1986-11-26
Filing date: 1986-11-26
Publication date: 1988-06-04
Also published as: JPH0233265B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】工　発明の背景技術分野本発明は、ヒト血液から高力価の血液製剤を簡便に調製
する際に用いられる血液中蛋白質の回収装置に関するも
のである。

先行技術およびその問題点血液製剤には、血液そのものの全血製剤のほか、血液の
各成分を分離した血液成分製剤、血漿蛋白を分ｔａｌｌ
製した血漿分画製剤がある。現在市販されている血漿分
画製剤は、免疫グロブリン製剤、アルブミン製剤、凝固
因子製剤に大きく分類でき、大部分は国産および米国産
である。

免疫グロブリン製剤は、低または無ガンマグロブリン血
症に使われるのみではなく、ウィルス感染、重症感染症
に抗生物質と併用されている。アルブミン製剤には、人
血清アルブミン、加熱人血漿蛋白があり、低蛋白血症、
ショック時、アシド−シス、脱水症等に使われている。

凝固因子製剤には、フィブリノゲン、血液凝固第■因子
、第■因子がある。

血液製剤とくに血漿分画製剤は、プラズマフエレーシス
や肝臓切除などの医療の進歩と共に大量に使われ、輸入
比率の高い我が国においては、不可抗力的なＡＩＤＳ（
後天性免疫不全症候群）感染の恐れも高く、国内増産体
制の確立が必要視されている。

しかしながら、現在、血漿分画製剤は、献血者から得た
血液を遠心分離して新鮮凍結血漿を調製し、これを原料
にして、遠心分離法やイオン交換クロマトグラフィー、
溶解度差を利用する方法など、複雑な手順を経て調製さ
れている。血漿採取段階においては、膜による分離法も
検討されているものの、より一層簡便で収率よく、かつ
高純度に血漿分画製剤を調製することができる血液中蛋
白質の回収装置お開発が望まれていた。

■　発明の目的本発明の目的は、上記先行技術の問題点を解決しようと
するもので、不溶性担体にリガンド（目的物質と親和性
のある物質）として低分子有機化合物を固定した吸着材
により、ヒト血漿から有用血漿成分（血液中蛋白質）を
選択的に吸着採取した後、これを簡便に回収して収率よ
くかつ高純度に血液製剤を調製することができる、安全
で安価な血液中蛋白質の回収装置を提供しようとするこ
とにある。

■　発明の構成本発明者らは、免疫グロブリン除去用吸着材および吸着
装置を開発する過程において、吸着された血漿成分（血
液中蛋白質）が容易に回収できることを見出した。本発
明者らは、この知見に基づいて血液製剤を簡便に収率よ
く、かつ高純度に調製する方法等について研究し、血液
中蛋白質の回収装置を発明するに至った。

すなわち、本発明は、血液中蛋白質を吸着した吸着装置
が具備する溶離液導入口と接続可能な接続部を備え、か
つ該吸着装置内に吸着された血液中蛋白質を溶離させる
作用を有する溶離液を収納した溶離液収納容器と、該吸着装置内を通過した溶離液により溶離された血液中
蛋白質を含む脱離液を排出する為に該吸着装置が備える
脱離液導出口と接続可能な脱離液導入口を一端に備え、
他端に透析された脱離液を排出する為の脱離液排出口を
備え、かつ透析液導入口及び透析液導出口を備え、内部
に透析手段を収納してなる透析装置と、該透析液導入口ならびに透析液導出口と接続され、かつ
透析液を収納してなる透析液収納容器と、該透析装置の脱離液排出口から排出された脱離液を該透
析装置の脱離液導入口へ導き該透析装置内に再循環させ
ることを可能とする流路切換手段を備えた脱離液循環用
手段と、該透析装置の脱離液排出口と接続された血液中蛋白質の
、回収容器とを備えたことを特徴とする血液中蛋白質の
回収装置を提供するものである。

■　発明の具体的構成本発明で対象とする被吸着採取物質は、血漿分画製剤用
の血漿成分であるが、より詳細に説明すると、免疫グロ
ブリン、フィブリノーゲン、アルブミン、凝固系第■（
プロトロンビン）、第■、第■、第■、第Ｘ、第■因子
、第■因子インヒビターパイパッシングアクティビティ
−（Ｆａｃｔｏｒεｉｇｈｔ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｂ
ｙｐａｓｓｉｎｇ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ）　、アンチトロ
ンビン■、フィブロネクチンなどの血液中蛋白質である
。

上記のような血漿成分を吸着採取するため、本発明にお
いては、不溶性担体上にリガンド（目的物質と親和性の
ある物質）として、低分子有機化合物を固定した吸着材
および吸着材を収納した吸着装置を用いる。

吸着材として用いる低分子有機化合物とは、分子量１万
ダルトン以下の物質であるが、とくに複素環式化合物、
脂質あるいはビタミン、ビタミン様作用因子が好ましく
使用される。低分子有機化合物の分子量が１万ダルトン
より大きくなると。

もし脱踵した場合、抗原性などの生物学的活性や副作用
を示す可能性があるため、好ましくない。

複素環式化合物とは、環中に炭素原子とともにペテロ原
子を含む環式化合物であり、三員複素環式化合物ではフ
ランとその誘導体、チオフェンとその誘導体およびジチ
オラン誘導体、ビロールとその誘導体、アゾール類、六
員複素環式化合物では、ピリジンとその誘導体、キノリ
ンおよび関連化合物、アクリジンおよび関連化合物、ピ
リミジンと関連化合物、ピラジンと関連化合物、ピラン
およびピロンと関連化合物、フェノキサジン、フェノチ
アジン、プテリンおよびアロキサジン化合物、プリン塩
基、核酸、ヘミン、クロロフィル、ビタミンＢＩ２およ
びフタロシアニン、あるいはアルカロイド、縮合環系複
素環式化合物を含む。

複素環式化合物の中では、サルファ剤が特に好ましい結
果を与える。

複素環式化合物であってサルファ剤であるものの例とし
ては下記の通りである。

複素環式化合物であってサルファ剤であるもの脂質とは
、脂肪酸のエステルおよびこのようなエステルの構成成
分（脂肪酸、アルコール、ステロイド）なとの天然の化
合物であり、単純脂質（中性脂肪、真性ロウ、コレステ
ロールエステル）、複合脂質（リン脂質、糖脂質、硫脂
質、タンパク脂質）、誘導脂質（脂肪酸、高級アルコー
ル、炭化水素、ビタミンＤ−Ｅ・に）をいう。

脂質の中では、脂肪酸エステルあるいはリン脂質が特に
好ましい結果を与える。

ビタミンあるいはビタミン様作用因子とは、ビタミンＡ
群、ビタミンＢ群、ビタミンＣ群、ビタミンＤ群、ビタ
ミンＥ群、ビタミンに群、カルニチン、フェルラ酸、γ
−オリザノール、α−リポ酸、オロクト酸、ビタミンＰ
群、ビタミンＵをいう。

吸着材として好適に用いられる複素環式化合物のサルフ
ァ剤あるいは脂質の脂肪酸エステルおよびリン脂質ある
いはビタミン、ビタミン様作用因子は、被吸着物質と疎
水性相互作用力を主にして、その他に水素結合、静電結
合、イオン結合、配位結合、ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｗａａｌ
ｓ−Ｌｏｎｄｏｎ力の相互作用力によって引き合うと考
えられる。したがって、被吸着物質の生理活性は低下さ
せないで、これらの相互作用を破壊するか、拮抗する物
質、例えば疎水性相互作用力の場合は、カオトロピック
イオンや界面活性剤、水素結合の場合は水酸基を多く含
む糖類やヒドロキシ誘導体、イオンおよび静電結合の場
合は、電解質やｐＨ調節剤などを、溶離液成分として用
いれば、簡便に被吸着物質を採取し回収することが可能
である。

このような吸着材を固定するための不溶性担体は、親木
性担体、疎水性担体いずれも使用できるが、リガンドの
特性が吸着量に反映され易く、被吸着物質を回収し易い
、親木性担体が好ましい。

不溶性担体の形状は、粒子状、ｍ組状、中空糸状、膜状
等いずれの公知の形状も用いうるが、血液、血漿の通液
性、吸着材調製時の取扱い簡便性などの点から、粒子状
担体が特に好ましく用いられる。

粒子状担体としては、平均粒径０．０５ａ＋＋＊から５
ｎｍの範囲にあることが好ましい、また、粒子形状は、
細胞、に損傷を与えにくいことやタダケ、カケが生じに
くい点か゛ら、球形が好ましい。

使い得る粒子状担体の材質としては、アガロース、キト
サンなどの多糖類、ポリビニルアルコール、メタクリル
酸エステル重合体、スチレン−ジビニルベンゼン共重合
体などの有機ポリマー、多孔質ガラス、アルミナ、セラ
ミックスなどの無機多孔体などであるが、特にアクリル
系重合体、シリカゲルが、機械的強度、操作性などの点
で優れているので、好ましく用いられる。

粒子状担体は、表面にリガンドを多く結合できる多孔体
が好ましく、このような結合力を有するものの平均孔径
は５０人ないし５０００人、より好ましくは１００人な
いし３０００人の範囲にあるものがよい。

リガンドを不溶性担体に固定する方法としては、共有結
合、物理的吸着、イオン結合、生化学的特異結合などの
担体結合法、あるいは架橋法、包括法、複合法が実施さ
れているが、血液あるいは血漿中でのリガンド安定性の
点から、共有結合が好適である。

リガンドを不溶性担体の表面に共有結合する為には、両
者の官能基に応じて、種々の方法が用いられる。例えば
、臭化シアン活性化法、カルボジイミド試薬などを用い
る縮合試薬法、酸アジド誘導体法、ジアゾ法、アルキル
化法、ジアルデヒドやビスエポキシド、ジイソシアネー
トなどを用いる担体架橋法、γ−グリシドキシプロビル
トリメトキシシラン（以下ＧＯＰＴＳと略記する）やβ
−（３，４−エポキシシクロヘキシル）エチルトリメト
キシシランなどを用いるシランカップリング剤活性化法
などが使用される。また、必要に応じて、リガンドと不
溶性担体との間に任意の長さの分子（スペーサー）を導
入して使用することもできる。

不溶性担体とリガンドである低分子有機化合物との間に
介挿するスペーサーとしては、ヘキサメチレンジアミン
などのジアミン類、ヘキサメチレングリコールなどのジ
オール類などが好ましい。

上述した吸着材は、血液あるいは血漿と接触させて血漿
成分をバッチ方式で吸着採取してもよいが、より、好ま
しくは、以下に述べる吸着装置に使用するのがよい。

本発明の回収装置に適用する吸着装置は、血液製剤調製
用吸着材を、血液あるいは血漿の導出入口を備えた容器
内に充填保持させてなるものである。

容器の材質は、ガラス、ステンレス、ポリエチレン、ポ
リプロピレン、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリ
メチルメタクリレート等が使用できるが、オートクレー
ブ滅菌が可能で取り扱い易いポリプロピレンやポリカー
ボネート等が特に好ましい。また、容器本体の吸着材層
と出入口部との間に、血液は通過するが、吸着材は通過
できない網目を持つフィルターを備えているものが好ま
しい。この材質は、生理学的に不活性で強度の高いもの
であれば良いが、特にポリエステル製、ポリアミド製の
ものが好ましく使用される。

以下、図面を用いて、本発明の回収装置に適用する吸着
装置の一構成例についてさらに詳細に説明する。

第２図は、血液製剤調製用血液中蛋白質の吸着装置の１
例についての断面図である。血液あるいは血漿は、血液
導入口４より導入され、容器あるいはカラムに収容され
た血液製剤調製用吸着材２で処理された後、血液導出口
５から導出される。

吸着材は、フィルター３によりカラム内に保持されてい
る。

フィルター３は血液成分は通すが吸着材の構成材を通さ
ないようにしておくのが好ましい。

第３図は、血液製剤調製用血液中蛋白質の吸着装置を利
用した血漿成分の吸着採取方法の１例を示す概略図であ
る。血液は血液導入口６より導入され、ポンプ７、チャ
ンバー８を通って、積層型血漿分離装Ｗ９へ供給され、
血球と血漿に分離される。分離された血漿は、ポンプ７
、チャンバー８を通って血液製剤調製用吸着装置ｌに供
給され、吸着処理された後に、チャンバー８、恒温槽１
０を通って血液導出口１１より導出される。

第４図は、血液製剤調製用血液中蛋白質の吸着装置に血
、液を直接通過させて、血漿成分を吸着採取する方法の
１例゛を示す概略図である。血液は血液導入・導出口１
２より導入され、チャンバー８を経て血液製剤調製用吸
着装置ｌで吸着処理された後に、ポンプ７を通って血液
バッグ１３に貯留される。血液バッグ１３が一杯にな°
つた時点で、ポンプ７を逆回転させ、処理された血液は
右側回路１４、チャンバー８を通って、血液導入・導出
口１２より導出される。

なお、血液製剤調製用血液中蛋白質の吸着装置は、使用
前に蹟製氷、生理食塩水等を充填した後、これを湿熱減
菌処理しておく。

第３図および第４図において、血漿成分を吸着採取した
血液製剤調製用血液中蛋白質の吸着装置は回路より外さ
れ、第１図に示す本発明による血液中蛋白質の回収装置
に装着され、被吸着成分である血液中蛋白質が回収され
、血液製剤が調製される。

吸着装置１の導入口４はチューブ２１を介して溶離液収
納容器２２に接続され、吸着装置１の導出口５はチュー
ブ２３を介して透析装置２４の脱離液導入口２５に接続
される。　溶離液は吸着装置！内に充填された充填材に
吸着された血漿成分（血液中蛋白質）を溶離するだめの
もので、溶離された血漿成分を含む溶離液をここでは脱
離液という。　脱離液は透析装置２４にて脱塩されて脱
離液導出口２６よりチューブ３３を経て排出される。

透析装置２４は脱離液中に蛋白質を変性さ、せる物質が
含まれている場合、脱離液中の塩濃度が高い場合などに
、透析液として生理食塩水や蒸溜水を用いて脱離するた
めのものである。

したがって、透析装置２４の内部に収納されている透析
手段には、透析液を透析液収納容器２７からチューブ２
８を介してポンプ２９により透析液導入口３０より導入
し、透析装置２４内の透析手段を経て透析液導出口３１
より排出し、作用剤の透析液は三方活栓３２の操作によ
り廃棄する。

一般に、脱離液の透析操作は１回では不十分であるので
、チューブ２３および３３上にそれぞれ設けられた三方
活°栓３４および３５間に配置されたポンプ３６を有す
るチューブ３７の循環回路を形成し、脱離液を透析装置
２４に必要回数循環させる。

このようにして脱塩された血漿成分を含む脱離液は三方
活栓３３の操作により透析装置２４の導出口２６からチ
ューブ３３を経て回収容器３８に回収される。

次に本発明の血液中蛋白質の回収装置の操作につき簡単
に説明する。

第２図に例示するような吸着装置を用いて第３図および
第４図に例示するようにして吸着材に血液中の蛋白質（
血漿成分）を吸着させた吸着装置１は第１図に示すよう
に本発明の回収装置に装着される。

第１図に示すように装着後、吸着装置１には溶離液収納
容器２２から後述する溶離液を流して吸着装置１内に充
填されている吸着材に吸着されている血液中蛋白質を溶
離する。

このようにして溶離された血液中蛋白質を含む脱離液は
透析装置２４に通され、透析液収納容器２７からポンプ
２９およびチューブ２８を含む循環回路を経て好ましく
は矢印３９で示すように循環される透析液により、脱離
液中の蛋白質に対して悪影響を及ぼす成分を、ポンプ３
６およびチューブ３７を含む循環回路によって脱離液を
好ましくは矢印４０で示すように循環させつつ、十分に
除去する。

脱塩した成分を含む透析液は三方活栓３２を経て廃棄す
る、透析装置２４により十分に脱塩された脱離液は有効
成分として血液中蛋白質（血漿成分）を含み、これは三
方活栓３５を経て回収容器３８に回収される。

回収された脱離液は必要に応じて濃縮操作、凍結乾燥な
どの処理を施され、血液製剤に調製される。

以上詳述した回収装置において、吸着材に吸着された血
漿成分を十分に吸着材から溶離することが重要である。

　以下にその溶離液について述べる。

溶離液は、吸着材表面と種々の相互作用力で結び付いて
いる血液中蛋白質を回収する為に使用するが、その親離
機構は相互作用力の破壊あるいは他の物質による拮抗作
用である。　したがって、相互作用力の種類によって表
１のように溶離液を使い分ける。

表　１溶離液 ■　実施例以下１．実施例により、本発明をより詳細に説明する。

〔実施例１および比較例１〕Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下ＤＭＦと略記する
）に溶解した１　　ｗ／ｖ％γ−オリザノール１００ｍ
１、クロロホルムとＤＭＦとの混液（１＋４）に溶解し
た１　冑／Ｖ％卵黄レシチン１００ｍ１、クロロホルム
とＤＭＦとエタノールとの混液（１＋３＋０．１）に溶
解した０、１　ｗ／ｖ％ホスファチジルエタノールアミ
ン９０ｍ１、各々に、オキシラン−アクリルビーズ（平
均孔径３５０人、粒子径範囲１００〜２００−１Ｅｕｐ
ｅｒｇｉｔＣＲｏｈｍ　Ｐｈａｒｍａ製、樋口商会飯売
）１５ｇを添加し、アスピレータ−で脱気した。そして
１　　ｖ／ｖ％ピリジンと１　　ｖ／ｖ％トリーｎ−ブ
チルアミンを触媒として添加した後、８０℃水浴中で３
時間加温し、更にブラッドミキサーを使用して室温下で
一晩攪拌し、反応させた。

次に蒸留水、ＤＭＦ　、クロロホルム、エタノールで洗
浄した後、酢酸でｐＨ８に調整した１Ｍモノエタノール
アミン水溶液１００−を加え、ブラッドミキサーを使用
して室温下で一晩攪拌し、未反応のエポキシ基をブロッ
キングした。なお、ブロッキング操作から表面処理を始
めたＥｕｐｅｒｇｉ　ｔＣ：を比較実験に用いた。この
吸着材を、蒸留水０．５　Ｍ塩化ナトリウムを含むｐＨ
４−０，０２Ｍ酢酸バッファー、ｐｌ−１ｆ　Ｏ−０，
２Ｍ炭酸バッファーで繰り返し洗浄した後、最後は蒸留
水で洗い、軽く水を除いたｗｅｔ状態でガラス製試験管
（テルモ製うルボ、１５．５ｍｍφｘ　１００ａ＋ｍ）
に３ｇずつ採取して、吸着実験に供した。

吸着実験は次のように操作した。上記吸着材の入った試
験管に、１３７ｍＭ塩化ナトリウムおよび２゜６１Ｍ塩
化カリウムを含むｐＨ７，２−８ｍＭリン酸バッファー
（ＰＢＳ　）を２ｍｌ添加し、アスピレータ−で脱気し
た後、抗凝固剤として３．８　ｗ／ｖ％クエン酸ナトジ
ナトリウム溶液ｖ／ｖ％含む正常人新鮮血漿３ｄを添加
し、ブラッドミキサーを用いて攪拌しながら、３７℃オ
ーブンで９０分間インキュベートした。そして、容量５
　ｍｌのテルモ製デイスポーザブルシ、リンジを利用し
て作製したミニカラムに、゛この試験管内゛８物を移し
、流出液を集め、流出液中の凝固系第■因子活性を、第
■因子欠乏血漿を用いて八ＰＴＴ　（活性化部分トロン
ボプラスチン時間）を利用する一段凝血法により測定し
た。

結果を表２に示した。表２より、゛卵黄レシチン、ホス
ファチジルエタノールアミン（リン詣質）γ−オリザノ
ール（ビタミ、ン様作用因子、詣肋酸エステル）を結合
させた吸着材が、凝固系第■因子を高率に吸着すること
は明らかである。

次に、吸着材を捕集した上記ミ２二カラムに、第１図に
示す装置を用いて１０％ジオキサン水溶液を流量１ｓｌ
／ｗｉｎで２０１！流した。そして、ダイアライザー用
中空糸を用いて作製した透析器ミニモジュール（膜面Ｈ
４０，Ｉａ＋２）にこの流出液を４℃で循環させ、２１
の生理食塩水を用いて流量５０ｍ１！／ｆｆ１ｉｎで透
析した。

透析後、ミニコン簡易濃縮器（アミコン社）を用いて、
液５１３　ｍｌに濃縮し、第■因子活性を測定したとこ
ろ、オイパーギットＣ−γ・オリザノール、オイパーギ
ットＣ−卵黄レシチン、オイパーギットＣ−ホスファチ
ジルエタノールアミンでは、いずれも吸着前血漿中の２
１％が回収されたのに対して、オイパーギットＣ−エタ
ノールアミンでは回収されなかった。

また、回収液中のジオキサン濃度をガスクロマトグラフ
法により測定したところ、０．０９％に低下していた。

表　　２＝（第■因子活性低下率）〔実施例２〕ＤＭＦとｐＨ１０−０，２Ｍ炭酸バッファーとの混液（
２＋３）に溶解°した０、１　Ｍスルファチアゾール７
００ｇＮに、オキシラン−アクリルビーズｉｏｏｇを添
加し、アスピレータ−で脱気した。そしてＩＶ／Ｖ％ピ
リジンと１　　ｖ／ｖ％トリーｎ−ブチルアミンを触媒
として添加した後、８０℃水浴中で５時間加温し、更に
ブラッドミキサーを使用して室温下で一晩攪拌し、反応
させた。次に蒸留水、ＤＭＦで洗浄した後、酢酸でｐＨ
８に調整した１Ｍモノエタノールアミン水溶液９００−
を加え、ブラッドミキサーを使用して室温下で一晩攪拌
し、未反応のエポキシ基をブロッキングした。

この吸着材を、蒸留水、０．５Ｍ塩化ナトリウムを含む
ｐＨ４−０，０２酢酸バツフアー、ｐＨ１０−０，２Ｍ
炭酸バッファーで繰り返し洗浄した後、ガラス製耐熱ね
じ日照に入れ、蒸留水で９００ｍ１とし、高圧湿熱処理
（１２１℃、２０ｍ１ｎ）して吸着材を充分に洗浄した
。そして、軽く水を除いたｗｅｔ状態で、２０ｇを秤取
し、ｐＨ７，２−ＰＢＳを加えアスピレータ−で脱気し
た後、直径２．５ｃｍのガラス製カラム（Ｂｉｏ−Ｒａ
ｄ製エコツカラム）に吸着材を３０−充填した。

ベリスタルティックポンプを用いて、このカラムにｐＨ
７，２−ＰＢＳ　　（リン酸緩衝化生理食塩水）３００
−を流して洗浄した後、ウシ血漿１００ｒｄを６回循環
させた。次にｐＨ７，２−ＰＢＳ　２０−を流して、流
出液中のアルブミン、総タンパク質量をそれぞれブロム
クレゾールグリーン法、ビウレット法で測定し、ウシ血
漿を６回循環させた時の流出液中濃度と、ざらにＰＢＳ
で洗浄した時の流出液中濃度との差より、吸着採取後Ｐ
ＢＳで回収可能なタンパク質量を算出した。　結果を表
３に示した。

、表３より、スルファチアゾール（サルファ剤）を結合
させた吸着材を用いて、アルブミンを簡便に吸着採取で
きることは明らかである。

次に、実際のアルゴミン回収率を求める為にｐＨ７，２
−ＰＢＳで洗浄した時の流出液を集め、実施例１と同様
のミニモジュールを用いて、２ｊＺの蒸溜水を流量５０
　ｍｌ　／ｌ１ｉｎで流して塩濃度を低下させた。

この液のアルゴミン濃度をブロムクレゾールグリーン法
で測定したところ、吸着餌血漿中の１９％が回収された
。

また、回収液中の塩素イオン濃度をＭｏｈ　ｒ法で測定
したところ、２ＩＩＩＭに低、下していた。

表　　３〔実施例３および比較例２〕キトサンビーズ（未架橋型、架橋型、粒径ｌｌｌ１１、
孔径０．７５二Ｉ１．Ｏｐ、富士紡績製キトパール）を
ｐＨ６，５−５％グルタルアルデヒド・１０ｉＭＣａＣ
Ｒ，２溶液に浸し、ブラッドミキサーを用いて１８ｈｒ
ｓ攪拌した。　この３０ｇ−胃ｅｔに１％葉酸のｐＨ１
０−０，０６Ｍ炭酸バッファー溶液、あるいは１％塩酸
チアミン溶液、あるいは１％卵黄レシチンのクロロホル
ム＋ジメチルホルムアミド溶液（１＋４）を各１００ｍ
１ずつ添加し、脱気した後８０℃水浴で３．５ｈｒｓ加
温（卵黄レシチンはＲｌＴ、）し、ブラッドミキサーを
用いて、ＲｌＴ、、１８ｈｒｓ攪拌した。　次にリガン
ド固定に使用した溶媒で洗浄した後、ｐｕｓ　−Ｉ　Ｍ
モノエタノールアミン水溶液で残存アルデヒド基をブロ
ッキングし、さらに１％水素化ホウ素ナトリウム・１０
ｍＭ　　ＣａＣｆ１ｚ溶液でアゾメチン結合を還元した
。　そして、蒸溜水で充分洗浄して試料（吸着材）とし
た。

別に、シリカゲルビーズ（粒径１００〜２００メツシユ
、平均孔径２３６１人、富士デヴイソン化学製）をｐＨ
８−２，６％グリシドキシプロビルトリメトキシシラン
溶液に浸して脱気した後、ブラッドミキサーを用いて、
Ｒ，Ｔ、、２０ｍ１ｎ混合した。　次に１５０℃オーブ
ンでｌｈｒ加熱し、この１０ｇ−胃ｅｔに上記リガンド
液あるいは１％γ−オリザノールの、ジメチルホルムア
ミド溶液を各々１００−ずつ添加した。　以後上記と同
様に操作して試料を作成した。

吸着実験は次のように操作した。　吸着材２ｇ−ｗｅｔ
（シリカゲル系はＩｇ−ｄｒｙ＋蒸溜水２　ａｌｌ　）
をガラス製試験管（テルモ製うルボ、１５．５ｍｍφｘ
ｌｏＯｍｍ）にとり、正常人血漿（抗凝固剤として３．
８％クエン酸３ナトリウム溶液を１０％添加）３−を加
えた後、３７℃オープン内でブラッドミキサーを用いて
９０ｍ１ｎ回転混合した。　そして内容物をポリエステ
ルメツシュを付けたカラムに移して血漿のみを回収し、
ロケット免疫電気泳動の試料とした。

ロケット免疫電気泳動は、ヘキスト製抗ＡＨＧ（第■囚
子）血清を添加したアガロースゲルを用いて血漿を定電
圧泳動し、ロケット長より第■因子関連抗原（ｆｆＲ：
　ＡＧ）濃度を求めた。

結果を表４−１に示した。　表４−１よりキトサンビー
ズとくに架橋キトサンビーズに塩酸チアミン（ＶｉｔＢ
＋　）を結合させた吸着材が、■：ＡＧを高率に吸着す
ることは明かである。

次に、吸着材を捕集した上記ミニカラムに１０％ジオキ
サン水溶液を流量１−１０＋ｉｎで、２０社流した。そ
して実施−例１と同様なミニモジュールにこの流出液を
４℃で循環させ、２ＪＺの生理食塩水を用いて、流量５
０　ｍｌ　／ｗｉｎで透析した。

透析後、ミニコン簡易濃縮器（アミコン社）を用いて、
液量３＋ｓｌ！に濃縮し、■Ｒ：ＡＧ濃度をロケット免
疫電気泳動法により測定したところ、次表４−２の回収
率が得られた。

また、回収液中のジオキサン濃度をガスクロマトグラフ
法により測定したところ、０．０８％に低下していた。

〔実施例４および比較例３〕実施＠３と同様に操作して、架橋キトサンビーズに塩酸
チアミシを結合させた吸着材を作成した。　これを１ｃ
ｍφエコツカラム（バイオラッド社製）に１０ｍ１充填
し、生理食塩水（生食）で洗浄した後、正常人血漿１５
−を流量ｆｉｌ／ｓｉｎで循環させた。　そして１０回
循環後に生食でリンスして血漿を回収した後、このカラ
ムへ各種溶離液を流して、■Ｒ：ＡＧを脱離させた。　
カラム流出液中のＶＩＲ：ＡＧの濃度をロケット免疫電
気泳動で測定し、■Ｒ：ＡＧの回収率を求めた。

結果を表５に示した。　表５より１．１０％ジオキサン
溶液を用いると、吸着された凝固因子を良好に回収でき
ることは明かである。

なお、上記実施例のカラムからの溶出液を実施例１と同
様なミニモジュールに４℃で循環させ、３１、の生理食
塩水を用いて、流量１００　ｒｉｌ　／ｍｆｎで透析し
た。そして透析後のジオキサン濃度をガスクロマトグラ
フ法により測定したところ、０．１０％に低下していた
。

■　発明の効果本発明、の血液中蛋白質の回収装置は血液中蛋白質（血
漿成分）を゛吸着させた吸着装置をセットして溶離液を
流し、血漿成分が溶離した脱離液を透析装置により十分
に脱塩することにより、簡便に血漿中から血漿製剤用の
有用成分を分層回収することができる。これを用いて高
純度な血液製剤を調整することができる。

【図面の簡単な説明】第１図は本発明の血液中蛋白質の回収装置の略図である
。第２図は発明の血液中蛋白質の回収装置に適用可能な血
液製剤調製用吸着材を収納した吸着装置の線図的断面図
である。第３図および第４図は血液製剤調製用吸着装置を利用し
た血漿成分の吸着採取方法を示す線図である。符号の説明１・・・血液製剤調製用吸着装置、２・・・血液製剤調製用吸着材、３・−フィルター、　４・・・血液溶離液導入口、５・
−血液溶離液導出口、　　６−血液導入口、７・−ポン
プ、　　　　８−・チャンバー、９・−積層型血漿分離
装置、１０−・・恒温槽、１１−・・血液導出口、１２・−血
液導入・導出口、１３・−血液バッグ、１４・−回路２０・・・本発明の血液中蛋白質の回収装置２１．２３
．２８．３３．３７−・チューブ２２・−溶離液収納容
器２４・・・透析装置２５・−脱離液導入口２６・−脱離液導出口２７−・・透析液収納容器２９．３６・−ポンプ３０−・・透析液導入口３１−・・透析液導出口３２．３４．３５−・・三方活栓３８・・・脱離液回収容器３９−透析液循環方向４０−・脱離液循環方向ＦＩＧ、１

Claims

【特許請求の範囲】血液中蛋白質を吸着した吸着装置が具備する溶離液導入
口と接続可能な接続部を備え、かつ該吸着装置内に吸着
された血液中蛋白質を溶離させる作用を有する溶離液を
収納した溶離液収納容器と、該吸着装置内を通過した溶離液により溶離された血液中
蛋白質を含む脱離液を排出する為に該吸着装置が備える
脱離液導出口と接続可能な脱離液導入口を一端に備え、
他端に透析された脱離液を排出する為の脱離液排出口を
備え、かつ透析液導入口及び透析液導出口を備え、内部
に透析手段を収納してなる透析装置と、該透析液導入口ならびに透析液導出口と接続され、かつ
透析液を収納してなる透析液収納容器と、該透析装置の脱離液排出口から排出された脱離液を該透
析装置の脱離液導入口へ導き該透析装置内に再循環させ
ることを可能とする流路切換手段を備えた脱離液循環用
手段と、該透析装置の脱離液排出口と接続された血液中蛋白質の
回収容器とを備えたことを特徴とする血液中蛋白質の回
収装置。