JPH0245064A - インターロイキン２レセプターの除去装置およびそれを備えた血液体外循環装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はインターロイキン２レセプター（以下ＩＬ−２
Ｒと略す）、あるいはＩＬ−２Ｒ発現細胞を血中より除
去する装置および該除去装置を備えた血液体外循環装置
に関し、特に、成人Ｔ細胞白血病患者の血中からＩＬ−
２Ｒを除去することにより病態の悪化を防ぎ、又は治療
を行なうためのインターロイキン２レセプターの除去装
置とそれを備えた血液体外循環装置に関するものである
。

［従来の技術］ インターロイキン２は、抗原活性化Ｔ細胞によって合成
・分泌されるリンホカインの一種である。ＩＬ−２は、
抗原活性化Ｔ細胞の表面上に存在する特異的な高親和性
レセプターＩＬ−２Ｒとの相互作用によって、活性化Ｔ
細胞の増殖刺激などの生物学的効果を示すと考えられて
いる。

近年、西日本、特に九州地方を中心として高頻度に発生
しているために注目されている成人Ｔ細胞白血病（以下
、ＡＴＬと略す）の発症・進展は白血病細胞の由来が成
熟したヘルパーＴ細胞であり、その表面に多数のＩＬ−
２Ｒが構成的に異常発現していることなどから、ＩＬ−
２システムの関与が示唆されている。そのような説明と
しては、ＡＴＬ発症におけるＩＬ−２システムの２段階
活性化モデルが提唱されており、ＡＴＬ患者、ＨＴＬＶ
−ＩまたはＨＩＶなどのウィルスに感染した者の血中か
らＩＬ−２Ｒを除去できれば患者の治療または感染者の
発症防止か可渣と考えられている（Ｍａｒｕｙａｍａ　
Ｍ、、ｅｔ　ａｌ、Ｃｅ１１４８．：１４３．　（１９
８７））。

従来、血中からＩＬ−２Ｒを除去する方法としては、各
種分離膜を使用する方法、イオン交換樹脂カラムまたは
ゲルを用いたアフィニティーカラムを使用する方法など
がある。

［発明が解決しようとする課題］ しかしながら、従来から行なわれている、各種分ａｍを
使用する方法ではＩＬ−２Ｒを特異的に除去することは
できず、また、イオン交換樹脂カラム、又はセルロース
、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）などのゲルを用
いたアフィニティーカラムを使用する方法ではイオン交
換樹脂やアフィニティーゲル自体が高価であり、かつそ
の性能（試料処理量、試料処理時間、試料処理効率など
）に問題がある。

［課題を解決するための手段］ そこで本発明者らは、前記の問題点を解決し、血中から
ＩＬ−２Ｒを安価に、かつ効果的に除去することができ
る装置を見出すべく鋭意研究を行なった結果、本発明を
完成した。

即ち、本発明は、担体にインターロイキン２レセプター
のモノクロナール抗体を吸着固定させたものを用い、そ
れに血液及び／又は血漿を接触させることを特徴とする
インターロイキン２レセプターの除去装置（第一発明）
、筒状容器の内部に高分子樹脂製中空糸膜を複数本集束
し、該中空糸膜の両端部を開口状態で隔壁に埋込み、該
隔壁により該中空糸膜の両端部を前記筒状容器に流密に
封止してなる装置であって、前記中空糸膜にインターロ
イキン２レセプターのモノクロナール抗体を吸着固定せ
しめるとともに、該中空糸膜に血液及び／又は血漿を接
触させることを特徴とするインターロイキン２レセプタ
ーの除去装置（第二発明）、およびこのインターロイキ
ン２レセプターの除去装置を備えてなる血液体外循環装
置（第三発明）、を提供するものである。

ここで、血液体外循環装置の代表的な例としては、血漿
交換治療装置が挙げられ、その場合、血液処理装置は血
漿分離器を示すものである。

また、本発明に用いる担体としては、特にその種類を限
定するものではなく、例えば、ビーズ状（粒状）、板状
、棒状、管状等の各相体のほか、中空糸膜担体などを用
いることができ、さらにその材質としても、合成高分子
や、ガラス、シリカゲルなどの無機物質、または蛋白質
、多糖等の生物に由来する不溶性の生体高分子物質が使
用てきる。

［実施例］ 以下、本発明を図示の実施例に基づき更に詳細に説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されないことは明ら
かであろう。

第１図は、本発明に係る、血中及び／または血漿からの
Ｉ　Ｌ−２Ｒの除去装置の一例を示したもので、インタ
ーロイキン２レセプターのモノクロナール抗体を吸着固
定させる担体として中空糸膜な用いた例を挙げたもので
ある。

筒状容器ｌの内部にはＩＬ−２Ｒのモノクローナル抗体
を吸着・固定させた複数の高分子樹脂製中空糸膜２が配
設されており、該筒状容器ｌの両端部において、該筒状
容器１と該中空糸膜２の両端部をポリウレタン樹脂等の
ボッティング材からなる隔壁３により流密に支持される
とともに、中空糸ＪＩＩ２の両端部は筒状容器１の両端
に開口している。

以上の構成において、血液及び／または血漿は、筒状容
器ｌの入口４より、ＩＬ−２Ｒのモノクローナル抗体が
吸着固定された中空糸膜２の中空部に入り、このモノク
ローナル抗体と接触して、血液中及び／または血漿中の
ＩＬ−２Ｒが除去され、次いで清浄化された血液及び／
または血漿は出口５を介して筒状容器ｌより流出される
のである。

上記実施例における、ＩＬ−２Ｒに対するモノクローナ
ル抗体を吸着固定させる担体である中空糸膜としては、
各種の高分子重合体よりなるものであればよく、特にそ
の種類は制限されず、例えば、ポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリメチルメタクリレート、ポリビニルアルコ
ール、４−メチルペンテン、ポリカーボネート、ポリフ
ッ化ビニリデン、シリコーンゴム等およびそれらの変性
樹脂などを通常用いることができるが、モノクローナル
抗体との結合方法及び結合力などの観点から考えるとポ
リプロピレン、ポリエチレンなどが好ましい。

中空糸膜のサイズも特に制限されないが、内径１００〜
１１０００ｐ、好ましくは２００〜４００ｇｍ、膜厚１
０〜２００ｇｍ、好ましくは２０〜６０ｕＬｍのものが
望ましい。

また、中空糸膜の膜面積は、一般に０．Ｏ１〜１．０ｍ
”程度のものが好ましい。

中空糸膜へのモノクローナル抗体の吸着・固定方法とし
ては、物理的吸着法、化学的結合方法等の周知の方法が
適用可能であるが、比較的強固に固定でき、かつ抗体の
活性を損なわない方法でなければならない。

本発明において担体に吸着固定されるモノクローナル抗
体としては、Ｉ　Ｌ−２Ｒに対して非常に高い特異的な
反応性を有するモノクローナル抗体であれば、どのよう
なモノクローナル抗体を用いてもよいが、好ましくはモ
ノクローナル抗体Ｈ−４８を用いる。

本発明に使用される筒状容器の材質としては、ポリカー
ボネート、ポリスチレン、ＡＢＳ樹脂、ガラスなどが使
用できる。

本発明の血中及び／または血漿中からのＩＬ−２Ｒの除
去装置は、全血をそのまま流すこともできるが、予め血
漿分離器で分離した血漿だけを流すこともできる。

第２図は、血中のＩＬ−２Ｒを除去する血液体外循環装
置の一例を示したものである。採血部８より血液ポンプ
７によって患者の血液をインターロイキン２レセプター
除去装置６に導き、ＩＬ−２Ｒを取り除いた血液な返血
部９から患者の体内に戻す。

第３図は、血漿中からＩＬ−２Ｒを除去する血液体外循
環装置の一例を示したものである。

ＩＯは採血部であり、血液ポンプ１１によって患者の血
液を体内から血漿分離器１２に導く、血漿分離器１２に
入った血液は、血漿成分が分離され、血漿ポンプ１３で
、インターロイキン２レセプター除去装置１４に導かれ
、ＩＬ−２Ｒを除去した血漿は、Ａ点て血漿分離器１２
から排出される濃縮血液と混合され、返血部１５から患
者の体内に戻す。

（実施例１） インターロイキン２レセプター　　　置の内径３２０１
Ｒｍ、膜厚５５Ｂｍ、長さ２１０ｍ−のポリプロピレン
製中空糸膜な２０００本束ねてポリカーボネート製の筒
状容器に挿入し、ポリウレタン樹脂で筒状容器と中空糸
膜の両端部を固定して膜面積０．３５ｍ”のモジュール
を作成した。

このモジュールにエタノールを５００５Ｍ／ｈｒで３０
分間流して洗浄を行なった後、更に精製水で十分にエタ
ノールを洗浄除去した。

次に、ＩＬ−２Ｒに対して非常に高い特異的な反応性を
有するモノクローナル抗体（Ｈ−４８）を、その濃度が
２００１Ｒｇ／層文となるように、リン酸緩衝食塩水に
溶解し、この溶液４００ｔＪＬを流速的２５ｍＪＬ／ｈ
ｒで前記のエタノール洗浄済モジュールに流すことによ
って、モノクローナル抗体を中空糸の内面に物理的吸着
によって結合した。

次に、このモジュールに１％のヒトγ−グロブリン溶液
を５０１文注入し、室温で３時間静置してモノクローナ
ル抗体で被覆されていない中空糸表面をヒトγ−グロブ
リンで被覆した。これを００１Ｍトリス−塩酸緩衝液（
ｐＨ８，０，０，１５Ｍ塩化ナトリウム）を用いて十分
に洗浄し、血中からＩＬ−２Ｒを除去するために用いる
モジュールとして、使用時まで４℃て保存した。

なお、このようにして作製したモジュールを、通常のア
フィニティークロマトグラフィーに用いても、また、保
存していても、モジュールからの蛋白質の離脱は殆ど認
められなかった。

（実施例２） ヒト正　血　　のＩＬ−２Ｒの除 市販管理ヒト血清であるネスコールＸ（化血研製）の１
Ｏ−ＪＬに、ＩＬ−２Ｒの濃度が約４０ｎｇ／ｒａ！；
ＬとなるようにＩＬ−２Ｒを加えた。

これを、実施例１と同様の方法で作成した膜面積０．０
１■２のモジュール（吸着したモノクローナル抗体量は
約１０ｍｇ）に第２図の装置に示す血液ポンプ（ペリス
タポンプ、井内盛栄堂製）９を用いて流速約２０鳳見／
ｈｒまたは６０１文／ｈｒで流し、モジュールの出口か
ら流出した血清及びモジュールに流す前のＩＬ−２Ｒ濃
度を次に示すサンドイッチ酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ
）で測定した。

その結果を表−１に示す。

表−１ （実施例３） ヒト　血中のＩＬ−２Ｒの ヘパリンを１単位／ａｎとなるように添加した全血１ｓ
ｔｆＬに、Ｉ　Ｌ−２Ｒを約４０　ｎｇｌｍｆＬ　１３
度となるように添加した。これを、実施例１と同様の方
法で作製した膜面８ＩＯ，０１■叩のモジュール（吸着
したモノクローナル抗体量は約１０ｍｇ）にペリスタポ
ンプ（井内盛栄堂製）を用いて流速約２０　　ｍｌ／ｈ
ｒ　、　４０　　ｍｌ／ｈｒまたは８０厘文／ｈｒて流
し、各流速においてモジュールの出口から流出した全血
及びモジュールに流す前の全血を２０００　ｒｐｍ、１
５分間の遠心分離にて血漿を分離し、各血漿中のＩＬ−
２Ｒの濃度を実施例２と同様のＥＬＩＳＡの方法で測定
した。

その結果を表−２に示す。

（実施例４） ＡＴＬ　　　血　　のＩＬ−２Ｒの ＡＴＬ患者の血清１０ｍ見を、実施例１と同様の方法で
作製した膜面積０．０１ｍ”のモジュール（吸着したモ
ノクローナル抗体量は約ＬｏＩＩｇ）にペリスタポンプ
（井内盛栄堂製）を用いて流速約２０ｔｌ／ｈｒまたは
４０　ｍｌ／ｈｒで流し、モジュールの出口から流出し
た血清及びモジュールに流す前の血清中のＩＬ−２Ｒの
濃度をＥＬＩＳＡの方法で測定した。

その結果を表−３に示す。

表−３ ［発明の効果コ 以上説明した通り、本発明のインターロイキン２レセプ
ターの除去装置によれば、モノクローナル抗体を吸着し
た担体を使用し、これに血液及び／又は血漿を接触させ
ているため、血中及び／または血漿中のＩ　Ｌ−２Ｒを
効率的に且つ安価に除去することができる。特に、成人
工細胞患者の血中からＩＬ−２Ｒを除去することによっ
て病態の悪化を防ぎ、または治療を行ない、更に感染者
の発症防止ができる等の優れた効果がある。

また１本発明の血液体外循環装置によれば、血液処理装
置として、モノクローナル抗体を吸着した担体を使用し
たインターロイキン２レセプターの除去装置を用いてい
るので、血中及び／または血漿中のＩＬ−２Ｒを効率的
に除去できるという効果がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係るＩＬ−２Ｒの除去装置の一例を示
す概略図、第２図は血中のＩ　Ｌ−２Ｒを除去する血液
体外循環装置の一例を示す説明図１、第３図は血漿中の
ＩＬ−２Ｒを除去する血液体外循環装置の一例を示す説
明図である。 １・・・筒状容器、２・・・中空糸膜、３・・・支持部
材、４・・・入口、５・・・出口、６・・・インターロ
イキン２レセプター除去装置（モジュール）、７−・・
血液ポンプ、８・・・採血部、９・・・返血部、ｉｏ・
・・採血部、１１−・・血液ポンプ、１２−・・血漿分
離器、１３・・・血漿ポンプ、１４−・・インターロイ
キン２レセプター除去装置（モジュール）、１５・・・
返血部。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）担体にインターロイキン２レセプターのモノクロ
   ナール抗体を吸着固定させたものを用い、それに血液及
   び／又は血漿を接触させることを特徴とするインターロ
   イキン２レセプターの除去装置。
2. （２）筒状容器の内部に高分子樹脂製中空糸膜を複数本
   集束し、該中空糸膜の両端部を開口状態で隔壁に埋込み
   、該隔壁により該中空糸膜の両端部を前記筒状容器に流
   密に封止してなる装置であって、前記中空糸膜にインタ
   ーロイキン２レセプターのモノクロナール抗体を吸着固
   定せしめるとともに、該中空糸膜に血液及び／又は血漿
   を接触させることを特徴とするインターロイキン２レセ
   プターの除去装置。
3. （３）血液ポンプおよび血液処理装置を少なくとも備え
   、血液処理装置への送血と、該血液処理装置からの返血
   とを行なわしめる血液体外循環装置であって、前記血液
   処理装置として請求項１のインターロイキン２レセプタ
   ー除去装置を備えたことを特徴とする血液体外循環装置
   。