JPS63107992A

JPS63107992A - 新規抗腫瘍性抗生物質ｓｆ２３６４物質及びその製造法

Info

Publication number: JPS63107992A
Application number: JP61251887A
Authority: JP
Inventors: Jiro Ito; 滋朗伊藤; Hiromi Watabe; 渡部　宏臣; Narutaka Ishii; 石井　成貴; Shuichi Gomi; 修一五味; Mieko Nagasawa; 長沢　美恵子; Takashi Shomura; 庄村　喬; Masaji Sezaki; 瀬崎　正次; Shinichi Kondo; 信一近藤
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1986-10-24
Filing date: 1986-10-24
Publication date: 1988-05-12

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は新規抗腫瘍性抗生物質ＳＦ２３６４物質および
その製造法に関するものである。

さらに詳しくは抗腫瘍作用を有する新規抗生物質Ｓ　Ｆ
２３６４物質およびミクロモノスポラ属に属する微生物
によるその製造法に関するものである。

従来の技術および発明が解決しようとする間３点従来、
数多くの抗腫瘍性抗生物質が報告され。

そのうちのいくつかのちのは制癌剤として実用化されて
いる。しかし癌の化学療法の分野における解決されてい
ない問題はいまだ多く残されている。

本発明者らは、新規かつ有用な抗腫瘍性抗生物質の探索
を目的として多数の微生物を土壌より分熱し、その産生
する物質を探索したところ、ある種の微生物が強い抗腫
瘍作用を示す抗生物質を生産していることを見出し、さ
らに詳細に検討したところ、該抗生物質は新規物質であ
ることを見い出した。またこの物質は実験動物腫瘍に優
れた治療効果を示すことを見い出した。　本発明は上記
の知見に基づいて完成されたものである。

発明の構成本発明にかかる抗生物質Ｓ　Ｆ２３６４物質は塩酸塩と
して純粋に単離され、その理化学的性状は次の通りであ
る。

１、外　　観：無色の無定形粉末２、融　　点：明確な融点を示さず、１７５℃から徐々
に変化し１８５〜１９５℃で褐変分解する。

３、比旋光度：［α］Ｄ２＋３７ド（Ｃ０，２゜ジメチ
ルスル７オキシド［α］！２＋５９°（Ｃｌ，０，Ｈ２Ｃ）４、分子式”
２３Ｈ３１Ｎ３０５・ＨＣｆ５、質量分析スペクトル（
ＦＤ−ＭＳ）：　ｍ／ｚ　４３０（ＭＨ＋）６、紫外部吸収スペクトル：第１図に示す糟！・・（Ｅ
（節２１４（７６０）、　２４０（Ｓ）、　３１４（７８）
ａ　：、ｐＨｌ（Ｊ！ｎ，（　Ｅ　ｉ艶２０６（８１０
）、　３１０（４６）Ａ　ｏ．ＩＮＮａｏｌｌ，ｏ（　ＥＩ，！ｊ．）ｍａ× ２１７（５１６Ｌ　２４０（Ｓ）、　３１４（９３）７
、赤外部吸収スペクトル：第２図に示すＫＢｒ　　−１ νｍａｘＣＩ１１３３８０、　２９６０，　２９２０，　１６２０，　１
６００。

１４９０、　１４５０，　１３９０，　１３２０，　１
２６０。

１２２０、　１１４０，　１１００，　１０３０，　１
０００。

８４０、　７８０８、’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重ジメチルスル７オキシド溶液中で測定したＳ　Ｆ２３６４物質および重水溶液中で測定し
たＳＦ２３６４物質の水和物のスペクトルを第３図およ
び第４図に示す。

９、”Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重ジメチル又ルアオキシド溶液中で測定したＳＦ２３６４物質および重水溶液中で測定した
Ｓ　Ｆ２３６４物質の水和物のスペクトルを第５図およ
び第６図に示す１０、酸性，中性，塩基性の区別：塩基性１１、呈色反
応：陽性　１０％硫酸試薬陰性　塩化第二鉄試薬１２−　溶’ＡＴ　性：水＋　メタノール、エタノール
。

ローブタメールに溶けやすく，酢酸エチル。

クロロホルム、ベンゼンに溶けない１３、　Ｅｊ層クりマトグラフィーニジリカゲル慕層クロマトグラフィー（メルク社製キーゼ
ルゲル６０Ｆ２５４）を使用し。

クロロホルム−メタノール（４：１）で展開したときの
Ｒｆ値は０．２９である上記の理化学的性状を既知抗生物質のそれと比較したと
ころ、紫外部吸収スペクトルからアンスラマイシン（八
ｎＬｈｒａ＋ｎｙｃｉｎ）［８，Ｄ、Ｔｅｎｄｌｅｒら
、Ｎａｔｕｒｅ。

１９９巻、５０１頁、　１９６３年１．シビｔｙフィシ
ン（Ｓｉｂｉｒｏ−ｍｙｃｉｎ）［Ｍ、　Ｇ、　Ｂｒａ
ｚｈｎｉｋｏｖａら、　Ｊ　、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓｗ２５巻、６６８頁、１９７２年］、トーメマイシン
（Ｔｏｍａｙｍｙｃｉｎ）［有馬らｒ　　Ｊ　、　Ａｎ
ｔｉ−ｂｉｏｔｉｃｓ、２５巻、４３７頁、　１９７２
年１゜ネオスラマイシ＞　（ｔｌｅｏｔｈｒａｍｙｃ　
ｉｎ　）［Ｔ、　Ｔａｋｅｕｃｌ＋　ｉら！Ｊ、Ａｎｔ
ｉｂｉｏｔｉｃｓ、２９巻、９３頁、　１９７６年１．
マゼスラマイシン（Ｍａｚｅｔｌ＋ｒａ＋ｎｙｃ、ｉｎ
）［国元ら、Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ。

３３巻、６６５頁、　１９８０年］、プロスラカルシン
（Ｐｒｏ−Ｌｈｒａｃａｒｃｉｎ）［清水婿Ｊ　、Ａｎ
ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、　３５巻１９７２頁、１９８２年
１などのアンスラマイシン系抗生物質と類１以するが、
それらの性状からいずれとも異なり１本物質は新規抗生
物質であることが確認された。

さらに１本物質はそのスペクトル解析および分解実験の
結果１次に示す化学構造式が提出された。

そして１本物質はアンスラマイシン系抗生物質の特徴で
あるアゾメチン構造を持ち、水溶液では容易に水和物を
作り、カルビノールアミンとして存在することが確認さ
れた。

本発明に使用される新抗生物質ＳＦ２３６４の生産菌の
一例としては宮城県仙台市の土壌より新たに分難された
ＳＦ２３６４株がある。

ＳＦ２３６４株の菌学的性状は下記の通りである。

１、形　態基土菌糸は長く伸長９分岐し、その直径は約０゜５μＩ
ｎである。気菌糸は通常放線菌の倍器に用いられる各種
の寒天培地上で形成されない。胞子は基土菌糸に直接ま
たは短い胞子柄を介して阜独着生するが、その形成は非
常に貧弱であり、オーＨ−ル寒天、スターチ寒天等で部
分的に観察される程度である。電子顕微鏡で観察すると
、胞子は球型ないし楕円型で１μ【ｎ前後の大きさを有
し１表面は平滑ないしやや突起を有する。胞子の粘運動
性胞子、菌核なとは観察されない。

■、各種培地上の生訂状態ＳＦ２３６４株の各種培地上の生■状態は次表に示す通
りである。色の記載について［］内に示す標準はフンテ
ィナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎｔ
ａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｒ　Ａｂ＋ｅ
ｒ−ｉｃａ）社製ノ「々ラー・ハーモニイー・マニフル
（Ｃｏｌｏｒ　ＩＩａｒ＋ｎｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）
ｊに記載のものを用いた。観察は２８℃で１４〜２１日
培養後に行なった。

■、生理的性質（１）生育温度範囲：スターチ寒天において２０〜３７℃の温度範囲で生育し
、２６〜３２℃で良好に生＃する。

（２）ゼラチンの液化：　　　陰性（３）スターチの加水分解：　陽性（４）硝酸塩の還元：　　　　陰性（５）脱脂乳のペプトン化：　陽性脱脂乳の凝固：　　　　陽性（６）耐　塩　性：１．５％食塩含有培地では生育する
が、３％以上では生育しない。

（７）　メラニン様色素の生成：陰性 ■、炭素；原の利用法（ＩＳＰＮｏ、９培地使用）（１
）利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−７ラクトース、Ｄ−
キシロース、Ｌ−アラビノース。

Ｄ−マンニトール、Ｌ−ラム／−ス、シュクロース（２）利用しない：ｉ−ミーイノシトーラフィノース ■、細胞壁組成Ｌｅｃｈｅｖａｌ　ｉｅｒら（ＩｎＬ、Ｊ、５ｙｓｔ、
Ｂａｃｔ、　　２０　　：　　４３５　　４４３、１９
７０）の分類によると、ＳＦ２３６４株の細胞壁組成は
■型で糖パターンはＤ型である。

以上より、ＳＦ２３６４株は細胞壁組成が■型、糖パタ
ーンがＤ型の放線菌であり、中温菌で気菌糸を形成せず
、基中菌糸に胞子を１個ずつ形成することから、ミクロ
モノスポラ属に属すると思われる。本発明者らは本面を
ミクロモノスポラ・エスピーＴＳ　Ｆ２３６４（Ｍｉｃ
ｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｓｐ、　Ｓ　Ｆ２３６４）と
称することにした。

本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研苗寄
第８９７９号（ＦＥＲ）Ｐ−８９７９）として受託され
ている。

ＳＦ２３６４株は池の放線菌の場合に見られるように、
その性状が変化しやすい。例えば、ＳＦ２３６４株の、
またはこの株に由来する突然変異株（自然発生または誘
発性）、形質接合体または遺伝子組換え体であっても、
抗生物質ＳＦ２３６４物質を生産養物な含有する培地で
培養する。栄養源としては。

グルコース、水あめ、デキストリン、シュクロース、澱
粉、糖みつ、動・植物油等を使用でトる。

また窒素源として、大豆粉、小麦はい芽、コーンステイ
ープリカー、綿実かす、肉エキス、ペプトン、酵母エキ
ス、硫酸アンモニラｌ、Ｈ硝酸ソーダ。

尿素等を使用できる。その池、必要に応じ、ナトリウム
、カリウム、カルシウム、マグネシウム。

コバルト、塩素、燐酸、硫酸、及びその他のイオンを生
成することができる黒磯塩類を添加することは有効であ
る。また菌の発育を助け、抗生物質ＳＦ２３６４物質の
生産を促進するような有１茂および無は物を適当に添加
することかできる。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が最も適している。培養に適当な温度は、２０〜３７
℃であるが、多くの場合、２６〜３２℃付近で培養する
。抗生物質Ｓ　Ｆ２３６４物質の生産は培地や培養条件
により異なるが、振どう培養、タンク培養とも通常２〜
１０日間でその蓄積が最高に達する。培養物中の抗生物
質ＳＦ２３６４物質の蓄積量が最高になった時に培養を
停止し、培養液から目的物質を単離精製する。

培養物からＳＦ２３６４物質を採取するには１通常発酵
生産物を培養物から分離採取する方法を採用できる。例
えば、濾過、遠心分離、各種有機溶媒による抽出および
各種吸着剤による抽出などを適宜組合せて行なうとよい
。

発明の効果本発明によるＳＦ２３６４物質は弱い抗菌作用を有する
。ＳＦ２３６４物質の塩酸塩の寒天希釈法で測定した各
種微生物に対する最少発育阻止濃度は第１表に示す通り
である。

第１表また本発明によるＳＦ２３６４物質は優れた抗肝癌活性
を有する。ＳＦ２３６４物質の塩酸塩のマウス白血病Ｐ
−３８８に対する抗腫瘍作用を第２表に示す。

試験は腹腔内にＰ−３８８腫瘍細胞を移植したマウスに
ＳＦ２３６４物質の塩酸塩を１日１回腹腔内投与して行
ない、その延命効果を’ｒ／Ｃ（％）で表示した。

本発明によるＳＦ２３６４物質の塩酸塩のマウスに対す
る急性毒性は靜脈内投与でＬＤ５゜１．７〜２．５ｔａ
ｇ／ｋｇ＋腹腔内投与でＬＤ、。１．１〜ｌ、６ｍｇ７
ｋＨであった。

以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例で
あって本発明を限定するものではない。

ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を用
いうろことは勿論のことである。

寒嵐侃種培地として、スターチ２．０％、グルコース１．０％
、小麦胚芽０．６％、ポリペプトン０．５％、酵母エキ
ス０．３％、大豆粉０．２％、炭酸カルシウム０．１％
を含む培地を用いた。

また生産培地として、シュクロース３．０％、綿実粕１
．０％、小麦胚芽１．０％、サングレインＦ２０，６％
、炭酸カルシウム０．１％、硫酸マグネシウム（７水塩
）０．１％、硫酸第一鉄（７水塩）０．０００５％、塩
化コバルト（６水塩）０．０００５％を含む培地を用い
た。

なお、殺菌前ｐＨはすべてｐＨ７，０に調製して使用し
た。

前記種培地２０ｈ＋Ｍ’を分注した１００＋Ｉ＋（！容
三角フラスコを１２０℃で３０分間殺菌し、これに、ミ
クロモノスポラ・エスピー・Ｓ　Ｆ２３６＝ｌ（ＦＥＲ
Ｎ　Ｐ−８９７９）の斜面培養の２〜３白金耳を接種し
、２８℃で４日間振盪培養し、第１種培養とした。つい
で１重培地８０ｍ１を分注した５００ｈ＋Ｎ容三角フラ
スコを１２０℃で３０分間殺菌し、前記第１種培養４ｍ
ρを接種し、　２８’（：’で２日間振盪培養し、これ
を第２種培養とした。さらに種培地ＩＬを分注した５Ｌ
容三角フラスコを１２０℃で３０分間殺菌し、第２種培
養５０ｍＮを接種し、２８℃２日間振盪培養し、これを
第３種培養とした。

予め１２０℃３０分間殺菌した３５Ｌの種培地を含む５
０Ｌ容ジャーファーメンタ−に前記の第２種培養５０を
接種し、２８℃２日間通気（２０Ｌ／分）、攪拌（２５
Ｏｒｐｍ）培養し、これを第４種培養とした。

予め１２０℃３０分間殺菌した２００Ｌの生産培地を含
む３００　Ｌ容タンク、２基に前記の第４種培養を各々
６Ｌずつ接種し、２８℃３Ｂ間通気（１００Ｌ／分）。

攪拌（初期１０１００ｒｐ　４１時間以降１５０ｒｐ＋
ｏ）培養した。

培養終了後濾過助剤として珪藻土を加えて濾過し。

濾液３００Ｌを得た。

これをダイヤイオンＨＰ　−２０（三菱化成社９）１５
Ｌ！を充填したカラムに流し、活性成分を吸着させた。

水洗後、５０％アセトン水溶液で溶離し、活性成分を含
む溶離液４Ｓｅを得た。この溶離液を減圧下で２Ｏｆ！
ｉこ濃縮し９等量のローブタノールで抽出した。

ｎ−ブタ７一ル層を減圧下で濃縮し、クロロホルム−メ
タノール（１０：　１　）で充填したワコーゲルＣ−２
００（和光純、薬社製）５００＋ｎｌ！のカラムの上に
のせ、同溶媒にて１５ｇずつ分画するクロマトグラフィ
ーを行なった。活性成分を含む分画Ｎｏ、　１７０〜４
００を集め。

減圧下で濃縮し、　７．３ｇの粗粉末を得た。これを１
０ｍ１のメタノールに溶解し、クロロホルム−メタノー
ル（１０：　１　）で充填したワコーゲルＣ−２００の
１７０社のカラムにのせ、同様のクロマトグラフィーな
行なった。

活性成分を含む分画Ｎｏ、９０〜２４０を集め、減圧下
で濃縮し、　３．７ｇの粗粉末を得た。これをｐＨ２，
５の塩酸水４ＱＯｍ（に溶かしたのち、ＩＮ苛性ソーダ
溶液でｐＩ（５，０とし、ｃＮｑ−セフ７デツクスＣ−
２５（Ｎａ型）（ファルマシア社製）１５０ｍＮのカラ
ムに流し活性成分を吸着させた。水洗後、０．２Ｍ食塩
水で溶離し、活性成分を含む溶離液４００ｍ１を得た。

この溶離液をダイヤイオンＨＰ−２０，１５０ｍＮを充
填したカラムに流し、活性成分を吸着させたのち水洗し
た。次に５０％アセトン水溶液４５０ｍＮで溶離し、こ
れを減圧下で濃縮したのちセファデックスＬＨ−２０（
ファルマシア社製）９５０ｍｌのカラムにのせ。

メタノールで展開し、　１０ｇずつ分画した。活性成分
を含む分画Ｎｏ、　４５〜５６を集め、減圧下で濃縮し
。

メタノールを除去したのち水に溶解し、これを凍結乾燥
して、純粋な抗生物質ＳＦ２３６４物質の塩酸塩５００
ｎ＋ｙを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は’Ｅ）Ｆ２３６４物質の塩酸塩の紫外部吸収ス
ペクトルを示し、実線（□）は水溶液、破線（−−−−
−−−−・−）は０．ＩＮ塩酸溶液、鎖線（−−−）は
０．ＩＮ苛性ソーダ溶液である。第２図はＳＦ２３６４物質の塩酸塩の臭化カリウム錠で
の赤外部吸収スペクトルを示す。第３図はＳＦ２３６４物質の塩酸塩の重ジメチルスフし
７オキシド中での４００ＭＨｚのＩＨ−ＮＭＲスペクト
ルを示す。第４図はＳＦ２３６４物質の塩酸塩の重水中での４００
ＭＩＩｚの’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。第５図はＳＦ２３６４物質の塩酸塩の重ジメチルスル７
オキシド中での１００ＭＩＩｚの”Ｃ−ＮＭＲスペクト
ルを示す。第６図はＳ　Ｆ２３６４物質の塩酸塩の重水中での１０
０ＭＨｚのＩＩｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）塩酸塩として下記の理化学的性状を示す新規抗腫
瘍性抗生物質ＳＦ２３６４物質およびその塩１、外観：無色の無定形粉末２、融点：明確な融点を示さず、１７５℃から徐々に変
化し１８５〜１９５℃で褐変分解する３、比旋光度：［α］＾２＾２＿Ｄ＋３７１°（ＣＯ．
２、ジメチルスルフォキシド）［α］＾２＾２＿Ｄ＋５９°（Ｃｌ．０、Ｈ＿２Ｏ）４、分子式：Ｃ＿２＿３Ｈ＿３＿１Ｎ＿３Ｏ＿５・ＨＣ
ｌ５、質量分析スペクトル（ＦＤ−ＭＳ）：ｍ／ｚ４３０
（ＭＨ＾＋）６、紫外部吸収スペクトル：第１図に示す λＨ＿２＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＾１＾％＿１＿Ｃ＿ｍ）
２１４（７６０）、２４０（Ｓ）、３１４（７Ｓ） λ＾０＾．＾１＾Ｎ＾Ｈ＾Ｃ＾ｌ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ
＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）２０６（８１０）、３１０（４
６） λ＾０＾．＾１＾Ｎ＾Ｎ＾ａ＾Ｏ＾Ｈ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ
（Ｅ＾１＾％＿１＿ｃ＿ｍ）２１７（５１６）、２４０
（Ｓ）、３１４（９３）７、赤外部吸収スペクトル：第２図に示す ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１３３８０、２９６０、２９２０、１６２０、１６００、
１４９０、１４５０、１３９０、１３２０、１２６０、
１２２０、１１４０、１１００、１０３０、１０００、
８４０、７８０８、＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第３図および第４図に
示す９、＾１＾３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：第５図および第６
図に示す１０、酸性、中性、塩基性の区別：塩基性１１、呈色反応：陽性　１０％硫酸試薬陰性　塩化第二鉄試薬１２、溶解性：水、メタノール、エタノール、ｎ−ブタ
ノールに溶けやすく、酢酸エチル、クロロホルム、ベン
ゼンに溶けない１３、薄層クロマトグラフィー：シリカゲル薄層クロマ
トグラフィー（メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ２５４）
を使用し、クロロホルム・メタノール（４：１）で展開
したときのＲｆ値は０．２９である
（２）ミクロモノスポラ属に属するＳＦ２３６４物質生
産菌を培養し、その培養液からＳＦ２３６４物質を単離
することを特徴とする新規抗腫瘍性抗生物質ＳＦ２３６
４物質の製造法