JPS63104927A - アルド−スリダクタ−ゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はアルドースリダクターゼ阻害作用を有し、白内
障、網膜症、神経障害、腎障等の糖尿病における各種合
併症の治療に有用なアルドースリダクターゼ阻害剤に関
するものである。

［従来の技術および問題点コ 近年、白内障、網膜症、腎症等の糖尿病における各種合
併症の成因として、グルコースの代謝経路であるポリオ
ール経路を介した細胞内ソルビトールの蓄積が注目され
ている。ポリオール経路は、グルコース、ガラクトース
等のアルドースがソルビトール、ガラクチトール等のポ
リオールを介してフルクトース等のケトースに変換され
る代謝経路であり、免疫組織化学的手法により全身請臓
器に広く存在することが明らかになってきた。

この経路の第１段階であるアルドース−ポリオール間の
変換を触媒する酵素をアルドースリダクターゼといい、
この酵素がポリオール経路の律速酵素と考えられている
。このアルドースリダクターゼを阻害し、ソルビトール
の産生や蓄積を低下させることが、糖尿病患者におけろ
合併症の治療に有効であるという報告がなされている。

そこで、アルドースリダクターゼ阻害作用を有する薬剤
の開発が望まれていた。

［問題点を解決するための手段］ 本発明音等は、種々の生薬についてアルドースリダクタ
ーゼ阻害作用に関する研究を行った結果、勺薬（Ｐａｅ
ｏｎｉａ　Ｉａｃｔｉｆｌｏｒａ　ＰＡＬＬ、またはそ
の他の近縁植物の根）に強いアルドースリダクターゼ阻
害作用があること見い出し、次いで、荀薬の活性成分に
ついて研究を進めた結果、一般式で表される化合物が極
めて強いアルドースリダクターゼ阻害作用を有すること
を見い出し本発明を完成させた。すなわち本発明は、一
般式 ［式中Ｇはガロイル基を示し、Ｒは水素原子またはガロ
イル基を示す。コ で表される化合物（以下、一般式の化合物と称する。）
を有効成分とするアルドースリダクターゼ阻害剤である
。

一般式の化合物には、以下に示す化合物がある。

これらの化合物を得るには、例えば、次のような方法が
ある。

荀薬を、水、アルコール類または水とアルコール類、水
とアセトンの混合溶媒で抽出し、該抽出液から溶媒を除
去し残渣を、そのまま、あるいは水に溶解した後、酢酸
エチルで抽出し、抽出液から酢酸エチルを留去した残渣
を、水、水とアルコール類の混合溶媒、アルコール類、
水とアセトンの混合溶媒から選ばれる少なくとも一つを
溶出溶媒として、セファデックスＬＨ−２０等のセファ
デックス、ダイヤイオンＨＰ−２０等のポーラスポリマ
ー等を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに付し、
高速液体クロマトグラフィー（以下、［（ＰＬＣ）で目
的成分を確認しながら分画することにより得る・ことが
できる。場合により水、アルコール類の適当な溶媒を用
いて再結晶することにより精製してもよい。

一般式の化合物の製造の具体例を示すと次の如くである
。

具体例１ 勺薬１　ｋｇを水−アセトン（１：４）ｌ！で抽出し、
抽出液よりアセトンを減圧下留、去して、水溶液とし、
酢酸エチル５００ｄで３回抽出した。酢酸エチル層を合
併し、減圧上溶媒を留去して、酢酸エチルエキス２０ｇ
を得た。この壬キスをセファデックスＬＨ−２０（ファ
ルマンア製）のカラムクロマトグラフィーに付し、水−
エタノール混合溶媒系で濃度勾配をかけて溶出し、フラ
クション■およびフラクション■を得た。フラクション
■を熱水から再結晶して、保持時間１６．９分［ＨＰ　
Ｌ　Ｃ条件。

カラム：ＴＳＫ　ｇｅｔ−Ｌ　Ｓ　−４１０Ｋ（４＋ｎ
ｍ　ｉ、ｄ、ｘ　３００＠１）、溶媒：１４％ＣＨｓＣ
Ｎ　−５０ｍＭＮ　ａ　Ｈｘ　Ｐ　Ｏ４から始めて２０
分で３０％ＣＨ，ＣＮ−５０ｍＭ　Ｎ　ａ　ＨｔＰ　Ｏ
４に濃度勾配をかける。流速：　０　、７　ｄ　／ｍｉ
ｎ、検出波長：２８Ｏｒ＋＋＋＋。

装置：島津ＬＣ−６八ｌを示す、無色粒状結晶の１．２
．３．６−チトラーＯ−ガロイルーβ−Ｄ−グルコース
を得た。

具体例２ 具体例１で得たフラクション■を、さらに上記と同じ展
開溶媒を用いてセファデックスＬｌ＋−２０のカラムク
ロマトグラフィーで精製し、凍結乾燥して、保持時間１
９．６分［ＨＰＬＣ条件は具体例１と同じ］を示す、白
色粉末の１．２．３．４．６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−
β＝Ｄ−グルコースを得た。

具体例Ｉおよび２で得た化合物の理化学的性質は、文献
［Ｍ、ＮｉＮ１５ｈｉｚａ、Ｔ、Ｙａｍａｇｉｓｈｉ　
、Ｇ、Ｎｏｎａｋａ。

１、Ｎ１５ｈｉｏｋａ、Ｊ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｐｅｒ
ｋｉｎ　Ｔｒａｎｓ、ｌ、２９６３（１９８２）　：　
ｉｄｅｍ、　、　１ｂｉｄ、　、　９６１（１９８３）
コ記載の１．２．３　。

６−テトラ−０−ガロイルーβ−Ｄ−グルコースおよび
１．２．３．４．６−ペンタ−Ｏ−ガロイル−β−Ｄ−
グルコースの性質とそれぞれ一致した。

次に一般式の化合物がアルドースリダクターゼ阻害作用
を有することを実験例を挙げて説明する。

実験例１ くアルドースリダクターゼ活性の測定〉−２０℃にて保
存した。

水晶体は０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフロリド
を含む１３５ｍＭナトリウム−カリウム−リン酸緩衝液
（ｐＨ７，０）にてホモジナイズして、３０．００Ｏｒ
ｐｍで３０分間遠心した。その上清をアルドースリダク
ターゼ活性測定の検体とした。

また、以上の操作はすべて４℃で行い、検体は０℃で保
存した。

アルドースリダクターゼ活性の測定はデュフラン（Ｄｕ
ｆｒａｎｅ）らの方法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ。

３２．９９−１０５（１９８４）参照コにより行った。

すなわち、１００＋ｎＭ硫酸リチウム、０．０３ｍＭＮ
ＡＤＰＨ（還元型ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ　ａｄｅｎ
ｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ
）、および基質とじて０、ＩｍＭＤＬ−グリセルアルデ
ヒドまたは２０ｍＭグルコースを含むように調製した１
３５ｍＭナトリウム−カリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ７
，０）８００成に、上記の検体１００ｄおよび上記具体
例１および２で得た化合物をそれぞれエタノールにｌｘ
　１０−３ｍｙ／ｄの終濃度となるように溶解させた薬
物溶解液１００ｄをそれぞれ加え、３０℃にて３０分間
反応させた。次に、０．５Ｎ塩酸０．３−を加えて反応
を停止させ、１０ｍＭイミダゾールを含む６Ｎ水酸化ナ
トリウム１１１１を添加することにより、前記の反応に
よって生じたＮＡＤＰ（酸化型ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄ
ｅ　ａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏ
ｓｐｈａｔｅ）を蛍光物質に変換して、６０分後にその
蛍光強度を測定した。蛍光強度は、室温で分光光度計Ｒ
Ｆ−５１０（株式会社島津製作所製）を用いて励起波長
３６０　ｎｏ＋、蛍光波長４（ｉｏｎｓの条件で測定し
た。また、薬物溶解液を加えるかわりにエタノールを加
える以外は上記と同様にして反応させて測定した蛍光強
度をコントロール値とした。

アルドースリダクターゼはＮＡＤＰ）ｌを補酵素として
、ＤＬ−グリセルアルデヒドあるいはグルコースをポリ
オールに変換する酵素であり、この反応に伴ってＮＡＤ
ＰＨはＮＡＤＰに変化する。従ってＮＡＤＰが少なけれ
ば、アルドースリダクターゼが阻害されていることにな
る。

その結果を、阻害度（％）および５０％阻害濃度（ＩＣ
ｓａ）として第１表に示す。

第　　　　１　　　　表 ラットレンズのアルドースリダクターゼ以上の結果から
、一般式の化合物はアルドースリダクターゼの活性を著
しく阻害することが認められ、糖尿病の合併症の予防ま
たは治療に有効であることが期待される。

次に一般式の化合物の経口投与での急性毒性試験をｄｄ
Ｙ系マウスおよびウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）系ラット
を用いて行ったところ、いずれの化合物も１９７ｋｇの
経口投与で死亡例はなかった。

このように、一般式の化合物は極めて毒性が低く、安全
性の高いものである。

本発明における実験データおよび急性毒性試験の結果か
ら考えて、一般式の化合物の有効投与量は患者の年令、
体重、疾患の程度によっても異なるが、通常成人で一般
式の化合物重量として１日量１２０〜６００１１９を症
状に合わせて１日３回程度に分けての服用が適当と認め
られる。

次に用例を示して具体的に説明するが、本発明はこれに
より何ら制限されるものではない。

用例Ｉ 具体例！で得た化合物１００ｇを無水ケイ酸２０ｇと混
合し、これにトウモロコシデンプン７５ｇを加え、さら
に混合した。この混合物に１０％ハイドロキシプロピル
セルロース・エタノール溶液を１００７加え、常法通り
ねつ和し、押し出し、乾燥し、篩別することにより２０
〜５０メツシユの粒子の顆粒剤を得た。

この顆粒剤は、症状に合わせて！同量８０〜４００　ｘ
９（具体例１で得た化合物の重量として４０〜２００１
１９に相当）として１日３回服用する。

用例２ 具体例２で得た化合物４０ｇを無水ケイ酸２０ｇと混合
し、これに微結晶セルロースＩＯｇ、ステアリン酸マグ
ネシウム、乳糖５０ｇを加え混合し、この混合物を単発
式打錠機にて打錠して径７１１重ｆｉ　１２０１９の錠
剤を製造した。

本錠剤１錠は、具体例２で得た化合物４０１９を含有す
る。本錠剤は、１回１〜５錠、１日３回服用する。

用例３ 具体例１で得た化合物４０■を乳糖１００　ｔｐ、ｑと
混合し、Ｎｏ、０のゼラチンカプセルに充填してカプセ
ル剤を得た。

本カプセル剤は、症状にあわせて１回１〜５カプセルを
１日３回服用する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中Ｇはガロイル基を示し、Ｒは水素原子またはガロ
   イル基を示す。］ で表される化合物を有効成分とするアルドースリダクタ
   ーゼ阻害剤。