JPS63104912A - アルド−スリダクタ−ゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はアルドースリダクターゼ阻害作用を有し、白内
障、網膜症、神経障害、腎障等の糖尿病における各種合
併症の治療に有用なアルドースリダクターゼ阻害剤に関
するものである。

［従来の技術および問題点コ 近年、白内障、網膜症、腎症等の糖尿病における各種合
併症の成因として、グルコースの代謝経路であるポリオ
ール経路を介した細胞内ソルビトールの蓄積が注目され
ている。ポリオール経路は、グルコース、ガラクトース
等のアルドースがソルビトール、ガラクチトール等のポ
リオールを介してフルクトース等のケトースに変換され
る代謝経路であり、免疫組織化学的手法により全身請臓
器に広く存在することが明らかになってきた。

この経路の第１段階であるアルドース−ポリオール間の
変換を触媒する酵素をアルドースリダクターゼといい、
この酵素がポリオール経路の律速酵素と考えられている
。このアルドースリダクターゼを阻害し、ソルビトール
の産生や蓄積を低下させることが、糖尿病患者における
合併症の治療に有効であるという報告がなされている。

そこで、アルドースリダクターゼ阻害作用を有する薬剤
の開発が望まれていた。

［問題点を解決するための手段］ 本発明者等は、種々の生薬についてアルドースリダクタ
ーゼ阻害作用に関する研究を行った結果、甘草（Ｇｌｙ
ｃｙｒｒｈｉｚａ　ｕｒａｌｅｎｓｉｓ　Ｆ［５ＨＥＲ
。

Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｇｌａｂｒａ　ＬＩＮＮＥ　
ｖａｒ、　ｇｌａｎｄｕｌｉｆｅｒａＲＥＧＥＬ　ｅｔ
　ＨＥＲＤＥＲまたはその他同属植物の根およびストロ
ン）に強いアルドースリダクターゼ阻害作用があること
見い出し、次いで、甘草の活性成分について研究を進め
た結果、一般式で表される化合物が極めて強いアルドー
スリダクターゼ阻害作用を有することを見い出し本発明
を完成させた。

すなわち本発明は、一般式 ［式中Ｒは、水素原子、グルコースまたはアピオグルコ
ース基を示す。］ で表される化合物（以下、一般式の化合物と称する。）
を有効成分とするアルドースリダクターゼ阻害剤である
。

一般式の化合物には、以下に示す化合物がある。

これらの化合物を得るためには、例えば、次のような方
法がある。

甘草を、水、アルコール類または、水とアルコール類の
混合溶媒で抽出し、抽出液から除去した残渣を、順次、
水、水−メタノール（１：ｌ）、メタノールを溶出溶媒
として、セファデックスＬｌ（−２０等のセファデック
ス、ダイヤイオンＨＰ−２０等のポーラスポリマー等を
担体に用いたカラムクロマトグラフィーに付し、それぞ
れの画分を得る。次いで、水−メタノール（１：１）溶
出部、メタノール溶出部をそれぞれ水、メタノール、エ
タノール、エーテル、アセトン、クロロホルム、ベンゼ
ン、水−酢酸−メタノール混合液から選ばれる少なくと
もひとつを溶出溶媒として、セファデックスＬＨ−２０
等のセファデックス、ＭＣＩゲルＣＨＰ２０Ｐ等のポー
ラスポリマー、セルロース、シリカゲルまたは逆相系シ
リカゲル等を担体に用いたカラムクロマトグラフィーに
数回付し、薄層クロマトグラフィーで目的成分を確認し
ながら分画することにより得ることができる。場合によ
り、メタノール、エタノール、水等の適当な溶媒を用い
て再結晶することにより精製してもよい。

イソリクイリチゲニンは、レスアセトフェノンとｐ−ヒ
ドロキシベンズアルデヒドとを縮合させて得ることもで
き、また、相当する配糖体を硫酸などの酸で加水分解す
ることによっても得ろことができる。

一般式の化合物の製造の具体例を示すと次の如くである
。

具体例！ 甘草１．４に９をｌＯＱの水で抽出し、抽出液より水を
除去して、水工キス４００ｇを得た。この水工キスを再
び、水ＩＱに溶解した後、セファデックスＬＨ−２０（
ファルマシア製）のカラムクロマトグラフィーに付し、
順次、水、水−メタノール（１：’１）、メタノールで
溶出した。このメタノール溶出部を再度セファデックス
Ｌｌ！−２０のカラムクロマトグラフィーに付し、水−
メタノール混合溶媒系で濃度勾配をかけて溶出し、フラ
クション５［水−メタノール（４：６）溶出部］及びフ
ラクション６［水−メタノール（３ニア）溶出部・］を
得た。このフラクション５をＭＣＩゲルＣＨＰ２０Ｐ（
三菱化成製）のカラムクロマトグラフィーに付し、水−
メタノール混合溶媒で溶出し、６０％メタノールで溶出
する両分を減圧下で濃縮し、水−メタノールから結晶化
して、Ｒｆ値０．５０［１層プレート：キーゼルゲル６
０　Ｆ　、、、、展開溶媒：クロロホルムーメタノール
（’３：ｌ）、発色試薬：１０％硫酸（橙色）］の黄黄
色針状晶を得た。この化合物の理化学的性質は文献［Ｒ
，Ｐｕｒｉ、Ｒ，５ｅｓｈａｄｒｉ、Ｊ、Ｓｉｃ、Ｉｎ
ｄ、Ｒｅｓ、、１３，４７５（１９５４）］記載のイソ
リクイリチンの性質と一致した。

具体例２ 具体例１で得たフラクション６を具体例１と同様にＭＣ
ＩゲルＣＩＩＰ２０Ｐカラムクロマトグラフィーに付し
、水−メタノール（４：６）溶出部を得た。これを更に
、セルロース（アビセル、脂化成製）カラムクロマトグ
ラフィーに付し、２％酢酸−メタノール（９５：５）で
溶出し、最初の２ｇで溶出する画分を減圧下で濃縮し、
水−メタノールから再結晶することにより、Ｒｒ値０．
２５［薄層プレート：キーゼルゲル６０Ｆ□４、展開溶
媒：クロロホルム−メタノール（３：ｌ）、発色試薬：
１０％硫酸（橙色）］の黄黄色針状晶を得た。この化合
物の理化学的性質は文献［Ｖ、　１．Ｌｉｔｖｉｎｅｎ
ｋｏ、Ｆａｒｍａｔｓｅｖｔ、Ｚｈ、（Ｋｉｅｖ）。

１８．２０（１９６３）］記載のりクラシトの性質と一
致した。

具体例３ レスアセトフェノン１．５ｇ及びｐ−ヒドロキシベンズ
アルデヒド（１，２ｇ）をエタノール４−に溶解し、こ
れに５０％（ｗ／ｖ）水酸化カリウム溶液３０−を加え
、水浴上で２時間加熱した。反応液を氷水中に注ぎ、濃
塩酸でｐｕｔ〜２とし、生じた黄色結晶を濾取し、水洗
後乾燥した。これを水−エタノールから再結晶して融点
１９２〜３℃、Ｒｆ値０．２６［薄層プレート：キーゼ
ルゲル６０Ｆ、５い展開溶媒：ｎ−ヘキサン−酢酸エチ
ル（３：２）、発色試薬：１０％硫酸（橙色）］の黄黄
色針状晶を得た。

この化合物の理化学的性質は文献［Ｒ，Ｐｕｒｉ。

Ｒ，５ｅｓｈａｄｒｉ、Ｊ、Ｓｉｃ、　Ｉｎｄ、Ｒｅｓ
、、　１３．４７５（１９５４）コ記載のイソリクイリ
チゲニンの性質と一致した。

次に、一般式の化合物がアルドースリダクターゼ阻害作
用を有することを実験例を挙げて説明する。

実験例１ くアルドースリダクターゼ活性の測定〉６週齢のウィス
ター（Ｗｉｓｔａｒ）系雄性ラットをニー２０℃にて保
存した。

水晶体は０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフロリド
を含む１３５ｍＭナトリウム−カリウム−リン酸緩衝液
（ｐＨ７，０）にてホモジナイズして、３０、ＯＯＯｒ
ｐｍで３０分間遠心した。その上清をアルドースリダク
ターゼ活性測定の検体とした。

また、以上の操作はすべて４°Ｃで行い、検体は０℃で
保存した。

アルドースリダクターゼ活性の測定はデュフラン（Ｄｕ
ｆｒａｎｅ）らの方法［Ｂｉｏｃｈｅａ＋１ｃａｔ　Ｍ
ｅｄｉｃｉｎｅ。

１１．９９−１０５（１９８４）参照］により行った。

すなわち、ｌ００ｍＭ硫酸リチウム、０．０３ｍＭＮ　
Ａ　Ｄ　Ｐ　Ｉ＋　（還元型ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ
　ａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｈｏｓ
ｐｈａｔｅ）、および基質として０、ＩｍＭＤＬ−グリ
セルアルデヒドまたは２０ｍＭグルコースを含むように
調製した１３５１Ｍナトリウム−カリウム−リン酸緩衝
液（ｐｌ（７，０）８００成に、上記の検体１００ｄお
よび上記具体例１〜３で得た化合物をそれぞれエタノー
ルにｌ×１Ｏ−３１Ｎ９／ｙｄの終濃度となるように溶
解させた薬物溶解液１ｏａｄをそれぞれ加え、３０℃に
て３０分間反応させた。次に、０．５Ｎ塩酸０．３−を
加えて反応を停止させ、１０ｍＭイミダゾールを含む６
Ｎ水酸化ナトリウム１−を添加することにより、前記の
反応によって生じたＮＡＤＰ（酸化型ｎｉｃｏｔｉｎａ
ｍｉｄｅ　ａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を蛍光物質に変換して、６０分
後にその蛍光強度を測定した。蛍光強度は、室温で分光
光度計ＲＦ−５１０（株式会社島津製作所製）を用いて
励起波長３６０■、蛍光波長４６０ｎｍの条件で測定し
た。また、具体例１〜３で得た化合物の溶解液を加える
かわりにエタノールを加える以外は上記と同様にして反
応させて測定した蛍光強度をコントロール値とした。

アルドースリダクターゼはＮＡＤＰＨを補酵素として、
ＤＬ−グリセルアルデヒドあるいはグルコースをポリオ
ールに変換する酵素であり、この反応に伴ってＮＡＤＰ
ＨはＮＡＤＰに変化する。従ってＮＡＤＰが少なければ
、アルドースリダクターゼが阻害されていることになる
。

その結果を、障害度（％）および５０％阻害濃度（ＩＣ
５ｏ）として、第１表に示す。

第　　　　１　　　　表 ラットレンズのアルドースリダクターゼ実験例２ く赤血球中ソルビトールの定量〉 健常人前腕部静脈から採取し、ヘパリン処理した血液よ
り得た赤血球を冷生理食塩水で３回洗浄し、更にヘマト
クリット値が３０％前後となるように浮遊した。２８ｍ
Ｍグルコースと上記具体例１で得た化合物をそれぞれ０
．０５．０．０２５．０．０　＋、０．００５および０
．００１ｍ９／ｄの終濃度になるようにエタノールある
いはＤＭＳＯ（ジメチルスルフオキシド）を用いて溶解
し、更に酸素９５％、二酸化炭素５％で平衡化したクレ
ブス−リンガ−重炭酸イオン緩衝液（ｂｉｃａｒｂｏｎ
ａｔｅｂｕｆｆｅｒ）４７に、上記赤血球浮遊液１−を
加えて、３７°Ｃでインキュベートした。６０分後に６
％冷通過塩素酸加えて反応を止め、４°Ｃで３，０００
ｒｐｍｌＯ分間遠心して除蛋白した。その上清に２．５
Ｍ炭酸カリウムを加えて中和した後、これを検体として
Ｍａｌｏｎｅらの方法によりソルビトール濃度を測定し
た。

すなわち、１．０ＩＩｔ！Ｑ中に５０ｍＭのグリシン緩
衝液（ｐＨ９，４）および０．２ｍＭのＮＡＤ（酸化型
ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ　ａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅ）と０．６４ユニツトのソルビトール
デヒドロゲナーゼを含むように調製した反応混合液に、
前記のようにして除蛋白した検体０．５−を加えて反応
させた。この反応によって生じたＮＡＤＨ（還元型ｎｉ
ｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕｃｌｅ
ｏｔｉｄｅ）を蛍光物質とし、その蛍光強度を測定し、
ソルビトール量の指標とした。

この反応は細胞内のソルビトールとＮＡＤをソルビトー
ルデヒドロゲナーゼによって、Ｄ−フルクトースとＮＡ
ＤＨに変換する反応であるから、反応後のＮＡＤＩ（が
多ければ、ソルビトールの含有量が多いということにな
る。

なお、具体例１で得た化合物を反応時に添加せず、反応
終了後に添加する以外は、上記と同様にして反応させて
測定した蛍光強度をコントロール値として、ＩＣ６゜値
（Ｍ）を求めた。

その結果、ＩＣ５゜は２．９Ｘ１（Ｉ’Ｍであった。

以上の結果から、本発明のアルドースリダクターゼ阻害
剤はアルドースリダクターゼの活性を阻害し、赤血球中
のソルビトールの蓄積を減少させることが認められ、糖
尿病の合併症の予防または治療に有効であることが期待
される。

次に、具体例１〜３で得た化合物の経口投与での急性毒
性試験をｄｄＹ系マウスおよびウィスター（ｆｉｓｔａ
ｒ）系ラットを用いて行ったところ、具体例１〜３で得
た化合物は１ｇ／に９の経口投与で死亡例はなかった。

このように、一般式の化合物は極めて毒性が低く、安全
性の高いものである。

本発明における実験データおよび急性毒性試験の結果か
ら考えて、本発明の薬剤の有効投与量は患者の年令、体
重、疾患の程度によっても異なるが、通常成人で一般式
の化合物重量として１日量１２０〜６００■を症状に合
わせて１日３回程度に分けての服用が適当と認められる
。

次に用例を示して具体的に説明するが、本発明はこれに
より制限されるものではない。

用例１ 上記の具体例１で得た化合物１００ｇを無水ケイ酸２０
ｇと混合し、これにトウモロコシデンプン７５ｇを加え
、さらに混合した。この混合物に１０％ハイドロキシプ
ロピルセルロース・エタノール溶液を１００−加え、常
法通りねっ和し、押し出し、乾燥し、篩別することによ
り２０〜５゜メツシュの粒子の顆粒剤を得た。

この顆粒剤は、症状に合わせて１同量８０〜４００２ｇ
（具体例１で得た化合物の重量として４０〜２０　Ｏｆ
ｆ９に相当）として１日３回服用する。

用例２ 具体例２で得た化合物４０ｇを無水ケイ酸２０ｇと混合
し、これに微結晶セルロース１０ｇ、ステアリン酸マグ
ネシウム、乳糖５０ｇを加え混合し、この混合物を単発
式打鍵機にて打錠して径７ｍｍ、重量１２０７１９の錠
剤を製造した。

本錠剤１錠は、具体例２で得た化合物４０肩９を含有す
る。本錠剤は、１回１〜５錠、１日３回服用する。

用例３ 具体例３で得た化合物４０句を乳糖１０（ｌｙと混合し
、Ｎｏ、Ｏのゼラヂンカプセルに充填してカプセル剤を
得た。

本カプセル剤は、症状に合わせて１回ｌ〜５カプセルを
１日３回服用する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中Ｒは、水素原子、グルコースまたはアピオグルコ
   ース基を示す。］ で表される化合物を有効成分とするアルドースリダクタ
   ーゼ阻害剤。