JPS6277329A - アルド−スリダクタ−ゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、桂皮、芍薬、大川、生姜、甘草、蒼！、附子
から選ばれる一種または二種以上の水または水性有機溶
剤抽出物を有効成分とするアルドースリダクターゼ阻害
剤に関するものである。

近年、白内障、網膜症、神経障害、腎症等の糖尿病にお
ける各種合併症の成因として、グルコースの代謝経路で
あるポリオール経路を介した細胞内ソルビトールの蓄積
が注目されている。ポリオール経路は、グルコース、ガ
ラクトース等のアルドースがソルビトール、ガラクヂＩ
・−ル等のポリオールを介してフルクトース等のケトー
スに変換される代謝経路であり、免疫組織化学的手法に
より全身請臓器に広く存在することか明らかになってき
た。

この経路の第１段階であるアルドース−ポリオール間の
変換を触媒する酵素をアルドースリダクターゼといい、
この酵素がポリオール経路の律速酵素と考えられている
。このアルドースリダクターゼを阻害し、ソルビトール
の産生や蓄積を低下させることが、糖尿病患者における
合併症の治療に有効であるという報告がなされている。

そこで本発明者等は、種々の漢方処方とその構成生薬に
ついてアルドースリダクターゼ阻害作用に関する研究を
行った結果、桂皮、芍薬、大川、生姜、甘草、蒼Ａｊ、
附子から選ばれる一種または二種以上の水または水性有
機溶剤抽出物が、アルドースリダクターゼ阻害作用を有
することを見出した。本発明は、この知見に基づくもの
で、糖尿病患者の合０［症の治療に有効な、桂皮、勺薬
、大炎、生姜、け草、蒼ｔ、附子から選ばれる一種また
は二種以−にの水または水性ａ機溶剤抽出物からなるア
ルドースリダクターゼ阻害剤を提供づ゛るものである。

本発明におＩＪる生薬の水または水性有機溶剤抽出物と
は、桂皮、勺薬、大川、生姜、甘草、蒼！、附子から選
ばれる一種または二種以上の生薬を水または水性有機溶
剤（例えばエタノール等の水性アルコール）で抽出して
得られた抽出液、または得られた抽出液をシ濾過後、ス
プレードライ、フリーズドライもしくは、濃縮乾固など
の通常の方法により乾燥して得られた乾燥エキスを意味
する。

目的抽出物を得るには、上記の生薬の中の一種または二
種以上を混合して抽出するか、もしくは、それぞれの生
薬を抽出後それぞれの抽出物を混合してもよい。抽出条
件は、室温あるいは加熱（約８０〜１００℃に加熱）し
て行うことができるが、加熱して行うことが好ましい。

本抽出物は、そのままでも使用することが出来るが、通
常の製剤に用いられる賦形剤、補助剤などを加えて製剤
製造の常法に従って、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤
なとの製剤にして用いることも出来る。所望により、こ
の抽出物をさらに透析、各種クロマトグラフィーなどの
常法により精製して用いてもよい。

このうち、柱台３〜４重量部、勺薬３〜４重量部、人世
３〜４重量部、生姜３〜４重量部、甘草２重量部、蒼！
３〜４重量部、附子０．５〜１重Ｍ部の分量から成る漢
方処方は、一般に桂枝加混附湯と称せられ、漢方の成書
（診療成典）にその薬効が記載されており、神経痛、リ
ウマチ、冷え症の腹痛、半身不随、小児麻痺等の諸疾患
に使用されている。しかし、アルドースリダクターゼ阻
害作用のあることは従来全く知られていなかったことで
ある。

上記生薬抽出物の製造の具体例を示すと次のごとくであ
る。

具体例１ 桂皮４ｇ、芍薬４ｇ、大炎４ｇ、生姜４ｇ、甘草２ｇ、
蒼ｔ４ｇ、附子１ｇの混合生薬に１０倍量、すなわち２
３０　ｄの水を加えて約１００℃で１時間加熱抽出し、
得られた抽出液をシ濾過後、スプレートライして４．５
ｇの乾燥エキス粉末を得た。

具体例２ 桂皮１５ｇに１０倍Ｍ１すなわち１５０蔵の水を加えて
約１００℃で１時間加熱抽出し、得られた抽出液をｔ過
後、濃縮乾固して１．４ｇの乾燥エキスを得た。

具体例３ 蒼！１５ｇ！、＝１０倍ｍ、すなわち１５０ｄの水を加
えて約１００℃で１時間加熱抽出し、得られた抽出液を
シ濾過後、濃縮乾固して１．８ｇの乾燥エキスを得た。

具体例４ 勺薬１５８に１０倍ｍ、すなわち＋　５０　ｍＱの水を
加えて約１００℃で１時間加熱抽出し、得られた抽出液
を７過後、濃縮乾固して１．７ｇの乾燥エキスを得た。

具体例５ 甘草１５ｇ１．＝１０倍量、すなわち１５０−の水を加
えて約１００℃で１時間加熱抽出し、得られた抽出液を
シ濾過後、濃縮乾固して１．６ｇの乾燥エキスを得た。

次に本発明のアルドースリダクターゼ阻害剤がアルドー
スリダクターゼ阻害作用を有することを実験例を挙げて
説明する。

実験例１ くアルドースリダクターゼ活性の測定〉６週齢のウィス
ター（Ｗｉｓｔａｒ）系雄性ラットをエーテル麻酔下に
犠殺し、直ちに水晶体を摘出し、−２０℃にて保存した
。

水晶体は０．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフロリｌ
、を含む１３５ｎ＋Ｍナトリウムーカリウム−リン酸緩
衝液（ｐｔ１７．０）にてホモジナイズして、３０、Ｏ
ＯＯｒｐｍで３０分間遠心した。その」−清をアルドー
スリダクターゼ活性測定の検体とした。

また、以上の操作はすべて４℃で行い、検体は０℃で保
存した。

アルドースリダクターゼ活性の測定はデュフラン（Ｄｕ
ｆｒａｎｅ）らの方法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｍｅ
ｄｉｃｉｎｅ。

３２．９９−１０５（＋９８４）参照］により行った。

すなわち、１００ｍＭ硫酸リチウム、０．０３ｍＭＮＡ
ＤＰＩ＋（還元型ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ　ａｄｅｎ
ｉｎｅｄｉｎａｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ
）、および基質として０、ＩｍＭＤＬ−グリセルアルデ
ヒドまたは２０ｍＭグルコースを含むように調製した１
３５ｍＭすトリウム−カリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ７
，０）８００成に、上記の検体＋００Ｊおよび上記具体
例１〜５で得た薬剤をそれぞれ蒸留水にＩ　ｍｇ／Δと
なるように溶解させた薬剤溶解液１００　ｕａをそれぞ
れ加え、３０℃にて３０分間反応させた。次に、０．５
Ｎ塩酸０．３−を加えて反応を停止させ、１０ｍＭイミ
グゾールを含む６Ｎ水酸化ナトリウム１ｒｆＬＱを添加
することにより、前記の反応によって生したＮＡＤＰ（
酸化型　ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ　ａｄｅｎｉｎｅｄ
ｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を蛍光
物質に変換して、６０分後にその蛍光強度を測定した。

蛍光強度は、室温で分光光度計ＲＦ−５１０（株式会社
島津製作所製）を用いて励起波長３６０　ｎｍ、蛍光波
長４６０ｎｍの条件で測定した。また、薬剤溶解液を加
えるかわりに蒸留水を加える以外は上記と同様にして反
応させて測定した蛍光強度をコントロール値とした。

アルドースリダクターゼはＮ　Ａ　Ｄ　Ｐ　Ｉ＋を補酵
素として、Ｄｌ、−グリセルアルデヒドあるいはクルコ
ースをポリオールに変換Ａる酵素であり、この反応に伴
ってＮＡＤＰＩＩはＮＡＤＰに変化する。従ってＮＡＤ
Ｐか少なければ、アルドースリダクターゼが阻害されて
いることになる。

その結果を第１表に示す。

（以下余白） 第　　　　１　　　　表 ラットレンズのアルドースリダクターゼに対する阻害作
用 実験例２ 〈赤血球中ソルビトールの定量〉 健常人前腕部静脈から採取し、ヘパリン処理した血液よ
り得た赤血球を冷生理食塩水で３回洗浄し、更にヘマト
クリット値が３０％前後となるように浮遊した。２８ｍ
Ｍグルコースと上記具体例１１４および５で得た薬剤を
それぞれ ２　、５　ｍｇ／蔵の濃度になるように蒸留水を用いて
溶解し、更に酸素９５％、二酸化炭素５％で平衡化した
クレブス−リンガ−重炭酸イオン緩衝液（ｂｉｃａｒ’
ｂｏｎａｔｅ　ｂｕｒｒｅｒ）４　ｍ、Ｑに、上記赤血
球浮遊液１ｍｌを加えて、３７℃でインキュベートした
。６０分後に６％冷通過塩素酸加えて反応を止め、４℃
で３．０００　ｒｐｍｌ　０分間遠心して除蛋白した。

その上清に２．５Ｍ炭酸ツＪリウムを加えて中和した後
、これを検体としてＭａｌｏｎｅらの方法によりソルビ
ト−ル濃度を測定した。

すなわち、１，０ｍΩ中に５０ｍＭのグリシン緩衝液（
ｐｌ＋９．４）および０．２ｍＭのＮＡＤ（酸化型ｎｉ
ｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ　ａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕｃｌ
ｅｏｔｉｄｅ）と０．６４ユニットのソルビトールデヒ
ドロゲナーゼを含むように調製した反応混合液に、前記
のようにして除蛋白した検体０　、５　ｍ、Ｑを加えて
反応させた。この反応によって生したＮＡＤｌｌ（還元
型ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕ
ｃｌｅｏｔｉｄｅ）を蛍光物質とし、その蛍光強度を測
定し、ソルヒトール量の指標とした。

この反応は細胞内のソルビトールとＮＡＤをソルビ）−
−ルデヒドロゲナーゼによって、Ｄ−フルクトースとＮ
ＡＤＩＩに変換する反応であるから、反応後のＮＡ＋月
１か多ければ、ソルビトールの含有量が多いということ
になる。

なお、具体例１．４および５で得た薬剤を反応時に添加
Ｕ゛ず、反応終了後に添加する以外は、上記と同様にし
て反応させて測定した蛍光強度をコントロール値とした
。

その結果を、コントロールのソルビトール含有量を１０
０％として第２表に示す。

第２表 赤血球中のソルヒトール量に対する作用以上の結果から
、本発明のアルドースリダクターゼ阻害剤はアルドース
リダクターゼの活性を阻害し、赤血球中のソルビトール
の蓄積を減少させることが認められ、糖尿病の合併症の
予防または治療に有効であることが期待される。

次に具体例１〜５で得た薬剤の経口投与での急性毒性試
験をｄｄＹ系マウスおよびウィスター（ｌｆｉｓｔａｒ
）系ラットを用いて行ったところ、具体例１〜５で得た
薬剤は１５ｇ／ｋｇ（投与限界）の経口投与でも死亡例
はなかった。

このように、本発明の薬剤は極めて毒性が低く、安全性
の高いものである。

本発明における実験データおよび急性毒性試験の結果か
ら考えて、本発明の薬剤の有効投与量は患者の年令、体
重、疾患の程度によってもことなるが、通常成人で乾燥
エキス粉末量として１日量１〜ＩＯｇを症状に合わせて
１日３回程度に分けての服用が適当と認められる。

次に用例を示して具体的に説明するが、本発明はこれに
より制限されるものではない。

用例１ 上記の具体例１により製造した薬剤２００ｇを乳糖９５
ｇおよびステアリン酸マグネシウム５ｇと混合し、この
混合物を圧縮成型した後、粉砕し、整粒し、篩別して２
０〜５０メツシユの粒子の良好な顆粒剤を得た。

この顆粒剤は、症状に合わＵ゛て１日量１．５〜１５ｇ
（本発明のアルドースリダクターゼ阻害剤の乾燥エキス
粉末重量としてｌ−１０ｇに相当）を３回に分けて服用
する。

用例２ 上記の具体例５により製造した薬剤２００ｇを乳糖９５
ｇおよびステアリン酸マグネシウム５ｇと混合し、この
混合物を圧縮成型した後、粉砕し、整粒し、篩別して２
０〜５０メツシユの粒子の良好な顆粒剤を得た。

この顆粒剤は、症状に合わせて１日量１．５〜１５ｇ（
本発明のアルドースリダクターゼ阻害剤の乾燥エキス粉
末重量として１〜ＩＯｇに相当）を３回に分けて服用す
る。

用例３ 上記の具体例３により製造した薬剤２００ｇを乳糖９５
ｇおよびステアリン酸マグネシウム５ｇと混合し、この
混合物を圧縮成型した後、粉砕し、整粒し、篩別して２
０〜５０メツシユの粒子の良好な顆粒剤を得た。

この顆粒剤は、症状に合イつせて１日量１．５〜１５ｇ
（本発明のアルドースリダクターゼ阻害剤の乾燥エキス
粉末重信としてＩ−！Ｏｇに相当）を３回に分けて服用
する。

用例４ 上記の具体例２により製造した薬剤２００ｇを微結晶セ
ルロース４５ｇおよびステアリン酸マグネンウム５ｇと
混合し、この混合物を単発式打鍵機にて打錠して、直径
９ｍｍ、重ｆｆｊ２５Ｄｍｇの錠剤を製造した。本錠剤
１錠中には本発明の薬剤２００ｍｇを含有する。

本錠剤は、症状に合わせて１日量５〜５０錠を３回〜６
回に分けて服用する。

用例５ 上記の具体例４により製造した薬剤２００ｇを微結晶セ
ルロース４５ｇおよびステアリン酸マグネノウム５ｇと
混合し、この混合物を単発式打鍵機にて打錠して、直径
９ｍｍ、重量２５０ｍｇの錠剤を製造した。本錠剤１錠
中には本発明の薬剤２００ｍｇを含有する。

本錠剤は、症状に合わせて１日量５〜５０錠を３回〜６
回に分けて服用する。

用例６ 上記の具体例５により製造した薬剤２００ｇを微結晶セ
ルロース４５ｇおよびステアリン酸マグネ／ウム５ｇと
混合し、この混合物を単発式打鍵機にて打錠して、直径
９ｍｍ、重ｆｎ２５０ｍｇの錠剤を製造した。本錠剤１
錠中には本発明の薬剤２００ｍｇを含有する。

本錠剤は、症状に合わせて１日ｍ５〜５０錠を３回〜６
回に分けて服用する。

用例７ 上記の具体例１により製造した薬剤２５０ｇを硬カプセ
ルに充填した。本カプセル剤は、症状に合わせて１日４
〜４０カプセルを１日３回〜６回に分けて服用する。

用例８ 上記の具体例３により製造した薬剤２５０ｇを硬カプセ
ルに充填した。本カプセル剤は、症状に合わせて１日４
〜４０カプセルを１日３回〜６回に分けて服用する。

用例９ 上記の具体例４により製造した薬剤２５０ｇを硼カプセ
ルに充填した。本カプセル剤は、症状に合わせて１日４
〜４０カプセルを１日３回〜６回に分けて服用する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 桂皮（Ｃｉｎｎａｍｏｍｉ　ｃｏｒｔｅｘ）、芍薬（Ｐ
   ａｅｏｎｉａｅＲａｄｉｘ）、大棗（Ｚｉｚｙｐｈｉ　
   Ｆｒｕｃｔｕｓ）、生姜（Ｚｉｎｇｉｂｅｒｉｓ　Ｒｈ
   ｉｚｏｍａ）、甘草（ＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅＲａｄ
   ｉｘ）、蒼朮（Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ　Ｌａｎｃｅ
   ａｅ　Ｒｈｉｚｏｍａ）、附子（Ａｃｏｎｉｔｉ　Ｔｕ
   ｂｅｒ）より選ばれる一種または二種以上の生薬の水ま
   たは水性有機溶剤抽出物を有効成分とするアルドースリ
   ダクターゼ阻害剤。