CN104873932A - 一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物及其制备方法。本发明根据中医药理论为指导,制备出四逆汤组方中的附子、干姜、甘草各个有效组分的制备方法及配伍组合比例。本发明的中药提取物组合物经药效试验表明四逆汤各味药材提取物的组合物能提高心肌梗死导致的心力衰竭大鼠射血分数和缩短分数,明显改善心肌细胞形态,减轻心脏胶原纤维化程度,降低血清中醛固酮和心房利钠肽的含量,具有治疗心血管疾病的作用。本发明药效作用明确,质量控制严谨、服用剂量小、服用方便。
Description
技术领域:
本发明涉及一种中药复方的提取物,具体涉及一种具有治疗心血管疾病作用的四逆汤有效组分组合物的制备工艺及有效组分配比,属于医药制药领域。
背景技术:
四逆汤是《伤寒论》中的经典名方,具有回阳救逆之功效,临床常用于治疗心肌梗死和心力衰竭。四逆汤由附子、干姜、甘草组成,其中附子大辛大热,具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功效,为君药,其主要成分为乌头类生物碱;干姜作为臣药,性味辛热,具有温中散寒、回阳通脉的功效,可助附子回阳,其主要成分为总挥发油和姜辣素类化合物;甘草主要成分为黄酮和皂苷类化合物,其作为佐使药,具有和中益气之效,既能缓解附子、干姜的暴烈之性,又能调和二者的药性,为回阳救逆最佳配伍。
传统四逆汤汤剂一副药由炙甘草6g,生附子10g,干姜6g组成,用量大,携带不方便。其中乌头类生物碱具有心脏毒性,并且能强烈兴奋中枢神经,直接作用于心肌,先兴奋,后抑制,用量过大可导致心肌麻痹而死亡。因此传统四逆汤汤剂其质量难以控制,而且毒副作用较大,服用不方便,不能长期保存,不适合大型工业生产。
目前尚无文献报道有关四逆汤有效组分组合物及其制备方法的。
发明内容:
本发明的目的在于提供一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物;本发明的另一目的在于提供上述的中药提取物组合物的制备方法及其应用。
本发明的主要技术方案是,通过对经典方剂四逆汤有效组分进行提取,提供一种药效高、质量可控、服用剂量少、毒副作用小的中药提取物组合物。
本发明提供了一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物,所述的中药提取物组合物是由以下三味药材的提取物组合而成:
(A)附子提取物
取附子炮制品,粉碎后用50-95%乙醇于80-100℃下热提两次,每次提取4-6小时,合并提取液浓缩得流浸膏,加1-10倍水混匀后,1-3倍氯仿萃取1-3次,合并萃取液浓缩至干,真空干燥得附子提取物;
本发明的附子提取物较优的,其中双酯型生物碱的含量为0.1%~3.8%(重量百分比,以下同)。
(B)干姜提取物
取干姜炮制品,于烘箱(较优为鼓风烘箱)中30-50℃下干燥1-2小时后,粉碎;用3-5倍体积50-80%乙醇于30-60℃下浸提1-3次,每次1-2小时,合并提取液,浓缩至无醇得流浸膏,加1-2倍体积水混匀,以1-3倍体积乙酸乙酯萃取1-3次,合并萃取液浓缩至干得干姜提取物;
本发明的干姜提取物较优的,其中6-姜酚的含量为1%~24%。
(C1)甘草总黄酮提取物
取甘草粉末,于30-90℃下30-90%乙醇热提1-2小时,倾出提取液,药渣再提取1-2小时;合并浓缩提取液至无醇,得到甘草提取物;甘草提取物加适量水,树脂吸附后用5-20倍体积纯水洗脱,再用5-10倍体积45-80%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩至干得甘草总黄酮提取物;
本发明的甘草总黄酮提取物较优的,其中甘草苷的含量为1%~17%。
所述的树脂吸附较优的,是上AB-8树脂柱做动态吸附,流速尽量放慢,流下来的溶液依旧加到柱上进行吸附,进行1-4个小时。
(C2)甘草总皂苷提取物
取甘草粉末,于30-90℃下30-90%乙醇热提1-2小时,倾出提取液,药渣再提取1-2小时;合并浓缩提取液至无醇,得到甘草提取物;加1-3倍体积0.1-1.0%的氨水,充分混匀;静置后抽滤;滤液用稀盐酸调pH到2-3,静置等沉淀大量析出;滤出沉淀,沉淀加30-70%乙醇溶解后上树脂吸附(较优为上D101大孔吸附树脂柱),先以蒸馏水洗脱至洗脱液加5倍量95%乙醇不产生浑浊,再以30-80%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至干得甘草总皂苷提取物;
本发明的甘草总皂苷提取物较优的,其中甘草酸含量为1%~27%。
本发明进一步,将以上制备所得到的附子提取物、干姜提取物、甘草总黄酮和甘草总皂苷提取物进行配比,使其中双酯型生物碱、6-姜酚、甘草苷、甘草酸的含量比例控制在1:(5-10):(100-150):(500-800),得到四逆汤有效组分组合物。
较优的,双酯型生物碱、6-姜酚、甘草苷、甘草酸的含量比例控制1:7:140:700、1:10:150:800。
本发明中的附子炮制品,可市售,如淡附片、白附片。
本发明中的干姜炮制品,可市售。
本发明中的甘草,可市售,甘草粉末能过60目筛网。
本发明提供的中药提取物组合物,可以单独作为药物使用,也可以作为原料制成片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂等剂型使用,制成各种剂型时,按制药现有技术加入各种辅料。
本发明还提供了上述用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物在制备治疗心血管疾病药物中的应用。
本发明所述的心血管疾病是指心力衰竭、心肌梗死、心绞痛等。
在四逆汤中的附子、干姜、甘草含有的化学成分复杂,包括如多糖类、挥发油、萜类、皂苷类、黄酮类、生物碱类等多种成分,提取难度很大。本发明通过现代分离制备技术提取出单味药材的有效化学成分,并且结合药理实验,制备得到了一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物。
本发明通过药理实验证明,本发明制备的四逆汤有效组分组合物具有很好的强心作用,可用于治疗心力衰竭等疾病。而四逆汤有效组分组合物药效不仅优于传统汤剂,且服用方便,质量稳定可控,可长期保存,并且本发明涉及到的四逆汤有效组分组合物及其制备方法未见文献报道。
附图说明
图1为各组大鼠心肌细胞HE染色(×400);
图2各组大鼠心肌细胞MASSON染色(×400)。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1:制备附子、干姜、甘草提取物组合物1:
(1)取淡附片,粉碎后用85%乙醇于85℃下热提两次,每次提取6小时,合并提取液浓缩至流浸膏,加10倍体积水混匀后,1倍体积氯仿萃取2次,合并萃取液,浓缩至干,真空干燥得附子提取物。其中双酯型生物碱的含量为3.5%。
(2)取干姜切片,于鼓风烘箱中50℃下干燥2小时后,粉碎。用5倍体积80%乙醇于50℃下浸提两次,每次2小时,合并提取液,浓缩至无醇流浸膏。取流浸膏中加2倍体积水混匀,以3倍体积乙酸乙酯萃取,合并萃取液浓缩至干,得干姜提取物。其中6-姜酚的含量为20.0%。
(3)取甘草粉末于75℃下70%乙醇热提2小时,倾出提取液,药渣再提取1.5小时。合并浓缩提取液至无醇,得到甘草提取物。取甘草提取物加适量水,上AB-8树脂柱做动态吸附,流速尽量放慢,流下来的溶液依旧加到柱上进行吸附,进行4个小时之后。用10倍体积纯水洗脱,之后用10倍体积的70%乙醇洗脱,收集70%乙醇洗脱液,浓缩至干得甘草总黄酮提取物。其中甘草苷的含量为15.4%。
(4)按步骤(3)的方法,制备得到甘草提取物,加1倍体积0.5%的氨水,充分混匀。静置后,抽滤。滤液用稀盐酸调PH到2,静置等沉淀大量析出。滤出沉淀,沉淀加50%乙醇溶解后上D101大孔吸附树脂柱,先以蒸馏水洗脱至洗脱液加5倍量95%乙醇不产生浑浊,再以50%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至干得甘草总皂苷提取物。其中甘草酸含量为22.7%。
(5)将步骤(1)步骤(2)步骤(3)步骤(4)所得到的附子提取物、干姜提取物、甘草总黄酮和甘草总皂苷提取物进行配比,使其中双酯型生物碱、6-姜酚、甘草苷、甘草酸的含量比例控制在1:7:140:700,得到四逆汤有效组分组合物。
实施例2:制备附子、干姜、甘草提取物组合物2:
(1)取白附片,粉碎后用95%乙醇于90℃下热提两次,每次提取6小时,合并提取液浓缩至流浸膏,加8倍体积水混匀后,2倍体积氯仿萃取3次,合并萃取液,浓缩至干,真空干燥得附子提取物。其中双酯型生物碱的含量为3.1%。
(2)取干姜切片,于鼓风烘箱中40℃下干燥1小时后,粉碎。用4倍体积60%乙醇于60℃下浸提3次,每次1小时,合并提取液,浓缩至无醇流浸膏。取流浸膏中加2倍体积水混匀,以2倍体积乙酸乙酯萃取,合并萃取液浓缩至干,得干姜提取物。其中6-姜酚的含量为22.1%。
(3)取甘草粉末于85℃下80%乙醇热提1小时,倾出提取液,药渣再提取1小时。合并浓缩提取液至无醇,得到甘草提取物。取甘草提取物加适量水,上AB-8树脂柱做动态吸附,流速尽量放慢,流下来的溶液依旧加到柱上进行吸附,进行3个小时之后。用15倍体积纯水洗脱,之后用8倍体积的70%乙醇洗脱,收集80%乙醇洗脱液,浓缩至干得甘草总黄酮提取物。其中甘草苷的含量为14.8%。
(4)按步骤(3)的方法,制备得到甘草提取物,加2倍体积1%的氨水,充分混匀。静置后,抽滤。滤液用稀盐酸调PH到3,静置等沉淀大量析出。滤出沉淀,沉淀加70%乙醇溶解后上D101大孔吸附树脂柱,先以蒸馏水洗脱至洗脱液加5倍量95%乙醇不产生浑浊,再以70%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至干得甘草总皂苷提取物。其中甘草酸含量为25.1%。
(5)将步骤(1)步骤(2)步骤(3)步骤(4)所得到的附子提取物、干姜提取物、甘草总黄酮和甘草总皂苷提取物进行配比,使其中双酯型生物碱、6-姜酚、甘草苷、甘草酸的含量比例控制在1:10:150:800,得到四逆汤有效组分组合物。
实施例3:四逆汤有效组分组合物对心力衰竭模型大鼠的影响试验
1.实验方法
1.1动物
SD大鼠50只(中国人民解放军第二军医大学动物中心),雄性,体重180-200g。
1.2动物造模
称量大鼠体重,乙醚麻醉,备皮后手术区碘酒消毒,铺巾。沿第3、4肋间依次切开皮肤、胸大肌,暴露肋骨。打开胸膜,暴露心脏,于左心耳边缘与肺动脉圆锥之间下1mm结扎左冠状动脉前降支(LAD)。依次缝合第3、4肋问,肌层和皮肤。假手术组穿线不结扎。术后腹腔注射青霉素800万u,用3d,防止感染。
术后第7天,大鼠1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉,背位固定,进行心电图检测,观察Q波发生情况,以标准12导联中出现6-8个导联Q波为操作成功。
1.3给药分组
手术5周后,将心力衰竭大鼠随机分成5组,每组10只,即:
心力衰竭模型组、
传统四逆汤水煎液组(剂量5g/kg)、
实施例1四逆汤有效组分组(剂量60mg/kg)、
实施例2四逆汤有效组分组(剂量60mg/kg)。
另外设置假手术组。
连续4周灌服给药,假手术组及心脏衰竭模型组灌服等量蒸馏水。
1.4观测指标
1.4.1超声心动图检测评价
在胸骨旁用二维超声测量或计算如下指标:左室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(FS)。所有参数均在3个连续心动周期中测量并取均值。结果见表1。
表1各组大鼠超声心动检测结果
注:与假手术组比较*p<0.05,与心力衰竭模型组比较▲p<0.05
如表1所示,造模4周后,与假手术比较,心力衰竭模型组大鼠的EF、FS值显著降低,LVEDV、LVESV值显著升高(p<0.05)。四逆汤水煎液组、实施例1和实施例2四逆汤有效组分组的LVEF、FS数值较心力衰竭组有显著差异(p<0.05),表明四逆汤水煎液、四逆汤有效组分具有改善心力衰竭模型大鼠心功能的作用。
1.4.2 HE染色与MASSON染色病理形态学评价
完成超声心动图检测后,将大鼠开胸留取心脏标本,分离左心室,于4℃的4%多聚甲醛中固定。24h后取心肌标本,常规取材、脱水、石蜡包埋,沿左室长轴线每隔1mm横断面切取数张5μm厚的组织切片,常规HE和Masson染色。400倍光镜下观察组织形态学及胶原纤维沉积情况。结果见图1、图2。
如图1所示,假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,胞质染色均一,无坏死灶,与假手术组相比,心力衰竭模型组大鼠心肌细胞紊乱,可见坏死灶,与心力衰竭模型组大鼠相比,四逆汤水煎液组、实施例1和实施例2四逆汤有效组分组的大鼠心肌细胞情况明显改善。
如图2所示,假手术组大鼠心肌细胞间质胶原纤维增生不明显。与假手术组相比,心力衰竭模型组大鼠的心肌细胞间质胶原纤维大量沉积。与心力衰竭模型组相比,四逆汤水煎液组、实施例1和实施例2四逆汤有效组分组间质纤维化程度显著减轻,间质少量胶原纤维沉积。表明四逆汤水煎液、四逆汤有效组分组合物可以改善心力衰竭大鼠的心肌细胞形态,抑制胶原蛋白沉积,减轻纤维化程度。
1.4.3血清中醛固酮及心房利钠肽的含量测定
采集实各组大鼠的血样,置于干燥试管内,经高速离心分离血清,-20℃冰箱保存。用放射免疫法测定醛固酮(ALD)与心房利钠肽(ANP)浓度。结果见表2。
表2各组大鼠ALD和ANP含量的比较
注:与假手术组比较**p<0.01,与心力衰竭模型组比较▲p<0.05,▲▲p<0.05
如表2所示,与假手术组相比,心力衰竭模型组的ALD和ANP值显著升高(P<0.01),提示心力衰竭大鼠存在神经内分泌过度激活。四逆汤水煎液、实施例1和实施例2四逆汤有效组分可显著降低心力衰竭大鼠血清中ALD和ANP(P<0.05或P<0.01),表明四逆汤水煎液和四逆汤有效组分可以通过降低ALD和ANP,部分抑制心力衰竭大鼠神经内分泌的过度激活。
2结论
本发明制备的四逆汤有效组分能提高心肌梗死导致的心力衰竭大鼠射血分数和缩短分数,明显改善心肌细胞形态,减轻心脏胶原纤维化程度,降低血清中醛固酮和心房利钠肽的含量,并且治疗效果比传统水煎液更为显著,具有治疗心血管疾病的作用,且与传统四逆汤水煎液相比,本发明的四逆汤有效组分用药剂量低,服用方便,质量可控。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
Claims (9)
1.一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物,所述的中药提取物组合物是由以下三味药材的提取物组合而成:
(A)附子提取物
取附子炮制品,粉碎后用50-95%乙醇于80-100℃下热提两次,每次提取4-6小时,合并提取液浓缩得流浸膏,加1-10倍水混匀后,1-3倍氯仿萃取1-3次,合并萃取液浓缩至干,真空干燥得附子提取物;
(B)干姜提取物
取干姜炮制品,于烘箱中30-50℃下干燥1-2小时后,粉碎;用3-5倍体积50-80%乙醇于30-60℃下浸提1-3次,每次1-2小时,合并提取液,浓缩至无醇得流浸膏,加1-2倍体积水混匀,以1-3倍体积乙酸乙酯萃取1-3次,合并萃取液浓缩至干得干姜提取物;
(C1)甘草总黄酮提取物
取甘草粉末,于30-90℃下30-90%乙醇热提1-2小时,倾出提取液,药渣再提取1-2小时;合并浓缩提取液至无醇,得到甘草提取物;甘草提取物加适量水,树脂吸附后用5-20倍体积纯水洗脱,再用5-10倍体积45-80%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩至干得甘草总黄酮提取物;
(C2)甘草总皂苷提取物
取甘草粉末,于30-90℃下30-90%乙醇热提1-2小时,倾出提取液,药渣再提取1-2小时;合并浓缩提取液至无醇,得到甘草提取物;加1-3倍体积0.1-1.0%的氨水,充分混匀;静置后抽滤;滤液用稀盐酸调pH到2-3,静置等沉淀大量析出;滤出沉淀,沉淀加30-70%乙醇溶解后上树脂吸附,先以蒸馏水洗脱至洗脱液加5倍量95%乙醇不产生浑浊,再以30-80%乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至干得甘草总皂苷提取物。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物,其特征在于,其中步骤(A)附子提取物中双酯型生物碱的含量为0.1%~3.8%;其中步骤(B)干姜提取物中6-姜酚的含量为1%~24%;
其中步骤(C1)甘草总黄酮提取物中甘草苷的含量为1%~17%;
其中步骤(C2)甘草总皂苷提取物中甘草酸含量为1%~27%。
3.根据权利要求1所述的一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物,其特征在于,其中步骤(C1)中的树脂吸附,是上AB-8树脂柱做动态吸附,流速尽量放慢,流下来的溶液依旧加到柱上进行吸附,进行1-4个小时。
4.根据权利要求1所述的一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物,其特征在于,其中步骤(C2)中的树脂吸附,是上D101大孔吸附树脂柱。
5.根据权利要求1所述的一种用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物,其特征在于,所述的附子提取物、干姜提取物、甘草总黄酮和甘草总皂苷提取物进行配比,使其中双酯型生物碱、6-姜酚、甘草苷、甘草酸的含量比例为1:(5-10):(100-150):(500-800)。
6.一种用于治疗心血管疾病的药物制剂,是由如权利要求1至5任一所述的中药提取物组合物和药用辅料制得的。
7.根据权利要求6所述的一种用于治疗心血管疾病的药物制剂,其特征在于,所述的药物制剂为片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂。
8.一种如权利要求1至6任一所述的用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物在制备治疗心血管疾病药物中的应用。
9.根据权利要求1所述的用于治疗心血管疾病的中药提取物组合物在制备治疗心血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的心血管疾病是指心力衰竭、心肌梗死。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150902 |
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |