JPS63100379A - ヒトリンパ腫診断用抗体 - Google Patents
ヒトリンパ腫診断用抗体Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明はヒトリンパ腫診断用抗体に関する。
（従来の技術）
特異的染色体転位、主として転移と逆位は大部分のヒト
造血器官の亜性腫瘍に見られる。ブルキッ） （＋３
ｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫においては、特異的染色体の転
移は、３つのヒト免疫グロブリン道伝千座の１つと艷コ
輩」ｇ＆遺伝子の近位に生じる。散在性のＢ−細胞リン
パ腫、多発性骨ａｐａおよびｔ（１１；１４’）（ｑｌ
３；ｑ３２）染色体転移を有するＢ−細胞タイプの慢
性リンパ球白血病においては、ｂｃｌ−１遺伝子座は染
色体１４上の重鎮遺伝子座に転移する。はとんどのが泡
性リンパ腫、すなわちもっとも普通のヒト造血器官亜性
腫瘍において、（Ｌｌ ４ ：１８）（ｑ３２ ：Ｑ２
１ ）染色体転移が見られた。この転移によりｂｃｌ−
２道伝子は重鎮遺伝子座に隣接した位置に動＜、ｔ（１
４；８）およびｔ（１４；１８）の両方の転移を有する
白血病患者から得られた１つの細胞株において、顕−２
遺伝子からのｍＲＮＡ産生の増強が見られたくツジモト
ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｖｏｌ、 ２２８
、ｐ１４４０−１４４３（１９８５））。判−２３１
！仏子の転写単位は染色体切断点に及び、かくしてオン
コシン蛋白質はＢ−細胞新生物において構造的に変化す
るらしいと結論付けられる。驚くべきことには、転移は
オンコシン蛋白質自体を変化させることはないことがわ
かった。その理由は、転移切断点は実際の蛋白質コード
配列より下流に生じているからである。このように、発
癌は単にｂｃｌ−２遺伝子の正常ヒト遺伝子産生物の過
剰生産に帰因する。
造血器官の亜性腫瘍に見られる。ブルキッ） （＋３
ｕｒｋｉｔｔ）リンパ腫においては、特異的染色体の転
移は、３つのヒト免疫グロブリン道伝千座の１つと艷コ
輩」ｇ＆遺伝子の近位に生じる。散在性のＢ−細胞リン
パ腫、多発性骨ａｐａおよびｔ（１１；１４’）（ｑｌ
３；ｑ３２）染色体転移を有するＢ−細胞タイプの慢
性リンパ球白血病においては、ｂｃｌ−１遺伝子座は染
色体１４上の重鎮遺伝子座に転移する。はとんどのが泡
性リンパ腫、すなわちもっとも普通のヒト造血器官亜性
腫瘍において、（Ｌｌ ４ ：１８）（ｑ３２ ：Ｑ２
１ ）染色体転移が見られた。この転移によりｂｃｌ−
２道伝子は重鎮遺伝子座に隣接した位置に動＜、ｔ（１
４；８）およびｔ（１４；１８）の両方の転移を有する
白血病患者から得られた１つの細胞株において、顕−２
遺伝子からのｍＲＮＡ産生の増強が見られたくツジモト
ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｖｏｌ、 ２２８
、ｐ１４４０−１４４３（１９８５））。判−２３１
！仏子の転写単位は染色体切断点に及び、かくしてオン
コシン蛋白質はＢ−細胞新生物において構造的に変化す
るらしいと結論付けられる。驚くべきことには、転移は
オンコシン蛋白質自体を変化させることはないことがわ
かった。その理由は、転移切断点は実際の蛋白質コード
配列より下流に生じているからである。このように、発
癌は単にｂｃｌ−２遺伝子の正常ヒト遺伝子産生物の過
剰生産に帰因する。
（発明が解決すべき問題点）
癌の有効な治療は、しばしば亜性腫瘍の早期且つ適ＩＥ
な診断にもとづく。このように一般に枦泡性リンパ腫の
ようなヒト亜性腫瘍、特に枦泡性リンパ腫を検出するた
めの簡単！１．つ正確な診断方法が必要とされている。
な診断にもとづく。このように一般に枦泡性リンパ腫の
ようなヒト亜性腫瘍、特に枦泡性リンパ腫を検出するた
めの簡単！１．つ正確な診断方法が必要とされている。
本発明の目的は、ヒトｂｃｌ ２遺伝子の遺伝子産生
物と免疫反応性である抗体： ヒトｌ＋ｃｌ−２遺伝子予宛列相同性を有する少くＡ と６１５ヌクレオチドの長さの配列を含むＤｌ’７”ロ
ーブ； イントロンを実質的に含まないヒト判−２遺伝子：およ
び ヒト唇上−２遺伝子の第１エクソンによってコードされ
ているＮ−末端を有する蛋白質の実質的に純粋な調製物
を提供することである。
物と免疫反応性である抗体： ヒトｌ＋ｃｌ−２遺伝子予宛列相同性を有する少くＡ と６１５ヌクレオチドの長さの配列を含むＤｌ’７”ロ
ーブ； イントロンを実質的に含まないヒト判−２遺伝子：およ
び ヒト唇上−２遺伝子の第１エクソンによってコードされ
ているＮ−末端を有する蛋白質の実質的に純粋な調製物
を提供することである。
すなわち、本発明の目的は６佃胞で発現できるヒ）ｂｃ
ｌ−２遺伝子を提供することである。
ｌ−２遺伝子を提供することである。
さらに、本発明の目的は、ｂｃｌ−２３１！伝子産生物
の実質的に純粋な蛋白質調製物を提供することである。
の実質的に純粋な蛋白質調製物を提供することである。
さらに、ヒト吐土−２１１伝子の形は実質的にイントロ
ンを含まないものが提供される。そのような遺伝子は細
菌で複製され発現されて、ヒトで産生された判−２蛋白
質と同じ一次構造を有する蛋白質を形成できる。
ンを含まないものが提供される。そのような遺伝子は細
菌で複製され発現されて、ヒトで産生された判−２蛋白
質と同じ一次構造を有する蛋白質を形成できる。
本発明は又、ヒト判−２遺伝子の第１エクソンによって
コードされたＮ−末端を有する蛋白質の実質的に純粋な
調製物を提供する。
コードされたＮ−末端を有する蛋白質の実質的に純粋な
調製物を提供する。
本発明の上記抗体、遺伝子および蛋白質調製物を使用す
れば下記の診断方法（Ａ）および（Ｂ）が実（Ａ）
下記段階よりなるヒトのＢ−細〆新生物を検出する診断
法： Ｂ−細胞をヒトから単離し： 蛋白質を該Ｂ−細胞から抽出して試験試料を形成し： 該試験試料を、抗原−抗体複合体が形成され安定である
条件下にｂｃｌ−２遺伝子の遺伝子産生物と免疫反応性
である抗体と接触させ： 上記試験試料について形成した抗原−抗体複合体を定量
し；および 該試験試料について形成した抗原−抗体複合体の旦を対
照試料について形成した蛋白質の量と比較して、試験試
料の複合体対対照試料の複合体の比が約１０より大であ
ればＢ！Ｉ胞新生新生物し、該蛋白質の対照試料は正常
ヒトのＢ細胞、確立された正常Ｂ細胞またはプレーロー
細胞株からの細胞および上記正常ヒトからの非Ｂ細胞か
らなる群から選択された細胞から抽出される。
れば下記の診断方法（Ａ）および（Ｂ）が実（Ａ）
下記段階よりなるヒトのＢ−細〆新生物を検出する診断
法： Ｂ−細胞をヒトから単離し： 蛋白質を該Ｂ−細胞から抽出して試験試料を形成し： 該試験試料を、抗原−抗体複合体が形成され安定である
条件下にｂｃｌ−２遺伝子の遺伝子産生物と免疫反応性
である抗体と接触させ： 上記試験試料について形成した抗原−抗体複合体を定量
し；および 該試験試料について形成した抗原−抗体複合体の旦を対
照試料について形成した蛋白質の量と比較して、試験試
料の複合体対対照試料の複合体の比が約１０より大であ
ればＢ！Ｉ胞新生新生物し、該蛋白質の対照試料は正常
ヒトのＢ細胞、確立された正常Ｂ細胞またはプレーロー
細胞株からの細胞および上記正常ヒトからの非Ｂ細胞か
らなる群から選択された細胞から抽出される。
（Ｂ） 下記段階よりなるヒトのＢ−細胞新生物を検
出する診断法： Ｂ−細胞をヒトから単離し； 蛋白質を該Ｂ−細胞から抽出して試験試料を形成し： 該試験試料を、均一なＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッドが形
成され安定である条件下にヒト吐土−２３１ｆｉ伝子か
らの長さ少くとも１５ヌクレオチドの配列を含むＤＮＡ
プローブと接触させ： 」記試験試料について形成したＲＮＡ−ＤＮＡハイブリ
ッドを定量し：および 該試験試料について形成したＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッ
ドの量を対照試料について形成したＲＮＡの量と比較し
て、試験試料のハイブリッド対対照試料のハイブリッド
の比が約１０より大であれば細胞新生物を示し、ＲＮＡ
の対照試料は正常ヒトのＢｆｉ胞、正常Ｂ細胞またはブ
レーロー細胞株からの細胞および上記正常ヒトからの非
Ｂ細胞からなる群から選択された細胞から抽出される。
出する診断法： Ｂ−細胞をヒトから単離し； 蛋白質を該Ｂ−細胞から抽出して試験試料を形成し： 該試験試料を、均一なＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッドが形
成され安定である条件下にヒト吐土−２３１ｆｉ伝子か
らの長さ少くとも１５ヌクレオチドの配列を含むＤＮＡ
プローブと接触させ： 」記試験試料について形成したＲＮＡ−ＤＮＡハイブリ
ッドを定量し：および 該試験試料について形成したＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッ
ドの量を対照試料について形成したＲＮＡの量と比較し
て、試験試料のハイブリッド対対照試料のハイブリッド
の比が約１０より大であれば細胞新生物を示し、ＲＮＡ
の対照試料は正常ヒトのＢｆｉ胞、正常Ｂ細胞またはブ
レーロー細胞株からの細胞および上記正常ヒトからの非
Ｂ細胞からなる群から選択された細胞から抽出される。
（問題を解決するための手段）
第１図は染色体１８のゲノム制限地図およびｃＤＮＡク
ローンの構造を示す。
ローンの構造を示す。
第２図は５．５ｋｂ転写体（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）に
相当するｂｅｌ−２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す
。オーブン・リーディング・フレームの周囲の配列のみ
が示されている。
相当するｂｅｌ−２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す
。オーブン・リーディング・フレームの周囲の配列のみ
が示されている。
第３図は３．５ｋｂ転写体に相当する回よ一２ｅＤＮＡ
のヌクレオチド配列を示す、オーブン・リーディング・
フレームの周囲の配列のみが示されている。
のヌクレオチド配列を示す、オーブン・リーディング・
フレームの周囲の配列のみが示されている。
第１図中の符号、８はｔ（１４；１８）転移の切断点の
ホットスポット−口は第２エクソン；詔は第１エクソン
；■は第１エクソン；Δは５ｓｔ１．ムはＳｓｔ■１層
はＨｉｎｄｌｌｌ、７！よりａｍＨＩ 、↓はＥＣ０Ｒ
Ｉを各々示す。
ホットスポット−口は第２エクソン；詔は第１エクソン
；■は第１エクソン；Δは５ｓｔ１．ムはＳｓｔ■１層
はＨｉｎｄｌｌｌ、７！よりａｍＨＩ 、↓はＥＣ０Ｒ
Ｉを各々示す。
又、第２図および第３図において、Δは阻−２−アルフ
ァ配列と顕−２−ベータ配列が分岐する１１位を示す。
ァ配列と顕−２−ベータ配列が分岐する１１位を示す。
本発明のＲ様の１つにおいて、ｔ（１４：ｉｓ＞染色体
転移に関連しているＢ−細胞新生物が判−２逍ｆ云子の
ｍＲＮＡと蛋白質産生物の両方の発現を増大せしめるこ
とを見出した。Ｂ−細胞新生物における発現は一最に通
常の細胞によって発現される旺の約１０倍以上である。
転移に関連しているＢ−細胞新生物が判−２逍ｆ云子の
ｍＲＮＡと蛋白質産生物の両方の発現を増大せしめるこ
とを見出した。Ｂ−細胞新生物における発現は一最に通
常の細胞によって発現される旺の約１０倍以上である。
この高度の発現を診断手段として使用してヒトのＢ−細
胞新生物を検定できる。そのような新生物は枦泡性リン
パ腫および他のリンパ腫である。
胞新生物を検定できる。そのような新生物は枦泡性リン
パ腫および他のリンパ腫である。
３種類のｍＲＮＡが判−２遺伝子から転写されることが
わかっている。少くとも２つの異なる蛋白質産生物が確
認された。顕−２−アルファと称される２３９個のアミ
ノ酸蛋白質は５．５ｋｂｍＲＮＡから翻訳される。２０
５個のアミノ酸蛋白質である顕−２−ベータは３．５ｋ
ｂ＋＊ＲＮＡから翻訳される。ｂｃｌ−２−アルファは
８．５ｋｂのｍ ＲＮ Ａからも翻訳される。３つのサ
イズの転写体はすべて第１エクソンまたは５′エクソン
と称される道伝子の５′位に実質的な配列相同性を共有
する。大きな方の２つの転写体は第１エクソンから少く
とも５０ｋｂｉｌｉれている第２エクソンに切継がれる
らしい、切継ぎ部位は蛋白質コード配列の真中にある。
わかっている。少くとも２つの異なる蛋白質産生物が確
認された。顕−２−アルファと称される２３９個のアミ
ノ酸蛋白質は５．５ｋｂｍＲＮＡから翻訳される。２０
５個のアミノ酸蛋白質である顕−２−ベータは３．５ｋ
ｂ＋＊ＲＮＡから翻訳される。ｂｃｌ−２−アルファは
８．５ｋｂのｍ ＲＮ Ａからも翻訳される。３つのサ
イズの転写体はすべて第１エクソンまたは５′エクソン
と称される道伝子の５′位に実質的な配列相同性を共有
する。大きな方の２つの転写体は第１エクソンから少く
とも５０ｋｂｉｌｉれている第２エクソンに切継がれる
らしい、切継ぎ部位は蛋白質コード配列の真中にある。
このように、３゜５ｋｂ転写体は上記の２つの大きな方
の転写体によってコードされる蛋白質とは異なるカルボ
キシル末端を有する蛋白質をコードする。
の転写体によってコードされる蛋白質とは異なるカルボ
キシル末端を有する蛋白質をコードする。
枦泡性リンパ腫のｔ（１４：１８）転移のうち染色体切
断点についてのホットスポットは蛋白質コード頭載に対
して３′の位置にある。したがって、今や、転移があっ
ても蛋白質産生物の１次構造を変化させないことがわか
った。ＡＴＣＣから得られる細菌単離物ＡＴＣＣ６７１
４７および６７１４８を使用して、細菌においてｂｃｌ
−２道伝子産生物アルフアとベータを各々発現させるこ
とができる。
断点についてのホットスポットは蛋白質コード頭載に対
して３′の位置にある。したがって、今や、転移があっ
ても蛋白質産生物の１次構造を変化させないことがわか
った。ＡＴＣＣから得られる細菌単離物ＡＴＣＣ６７１
４７および６７１４８を使用して、細菌においてｂｃｌ
−２道伝子産生物アルフアとベータを各々発現させるこ
とができる。
ｂｃｌ−２遺伝子はｃＤＮＡクローニングにより得られ
、イントロンを含まない、このようにして、これらのク
ローンは細ＩＩ２！中で発現してヒトの体内でつくられ
るのと同じ１次配列を有する産生物をつくることができ
る。当分野で周知である適当な条件十に細胞を生育させ
た後、細胞を回収し破壊して全細胞蛋白質を抽出できる
０次いで蛋白質はたとえばセファロース＜ Ｓ ｅｐｈ
ａｒｏｓｅ） ” またはアガロースビーズのようなサ
イジングカラムに入れて正しい分子量、すなわち約２０
〜３０ｋＤの蛋白質を集めることができる。
、イントロンを含まない、このようにして、これらのク
ローンは細ＩＩ２！中で発現してヒトの体内でつくられ
るのと同じ１次配列を有する産生物をつくることができ
る。当分野で周知である適当な条件十に細胞を生育させ
た後、細胞を回収し破壊して全細胞蛋白質を抽出できる
０次いで蛋白質はたとえばセファロース＜ Ｓ ｅｐｈ
ａｒｏｓｅ） ” またはアガロースビーズのようなサ
イジングカラムに入れて正しい分子量、すなわち約２０
〜３０ｋＤの蛋白質を集めることができる。
さらに、抗−ｂｃｌ−２抗体を使用して精製できる。そ
のような抗体を使用して正しい近似の分子量の細胞蛋白
質の組合せからむ土−２蛋白質を免疫沈殿させることが
できる。たとえば、そのような抗体は第２図および第３
図に示された配列にしたがって合成されたポリペプチド
に対して上昇し得る。他方、該抗体はｂｃｌ ２配列
およびもう１つの蛋白質の該配列を含む融合蛋白質に対
して上昇し得る。融き蛋白質に対して上昇した抗体の例
は下記のとおりである。免疫沈殿後、ｂｃｌ−２蛋白質
は上記抗体から放出されて実質的に純粋すｂｃｌ−２蛋
白質の調製物を提供できる。
のような抗体を使用して正しい近似の分子量の細胞蛋白
質の組合せからむ土−２蛋白質を免疫沈殿させることが
できる。たとえば、そのような抗体は第２図および第３
図に示された配列にしたがって合成されたポリペプチド
に対して上昇し得る。他方、該抗体はｂｃｌ ２配列
およびもう１つの蛋白質の該配列を含む融合蛋白質に対
して上昇し得る。融き蛋白質に対して上昇した抗体の例
は下記のとおりである。免疫沈殿後、ｂｃｌ−２蛋白質
は上記抗体から放出されて実質的に純粋すｂｃｌ−２蛋
白質の調製物を提供できる。
もし１１ニー２−アルファ（約２６ｋＤ）でｂｃｌ−２
−ベータ（約２２ｋＤ）から分離されることが望ましい
なら、この分屋はポリアクリルアミドゲルか、さらにサ
イジングカラムまたはゲル濾過カラムを使用することに
よって達成できる。もちろん、それらのカルボキシル末
端における２つの蛋白質間の本来の相異にもとづいた他
の分慮方法も可能である。ゲル濾過カラムおよび免疫沈
殿および抗体放出についての技術はすべて当分野で周知
である。
−ベータ（約２２ｋＤ）から分離されることが望ましい
なら、この分屋はポリアクリルアミドゲルか、さらにサ
イジングカラムまたはゲル濾過カラムを使用することに
よって達成できる。もちろん、それらのカルボキシル末
端における２つの蛋白質間の本来の相異にもとづいた他
の分慮方法も可能である。ゲル濾過カラムおよび免疫沈
殿および抗体放出についての技術はすべて当分野で周知
である。
Ｂ−細胞の源はいずれもヒトリンパ腫の診断テストに使
用するのに適している。Ｂ−細胞はリンパ節から単離で
きる。別法としては、診断テストには、Ｂ−細胞新生物
の存在についてスクリー二木 ングされている患者から得られた抹梢血の試料を使用し
てもよい、末梢血からＢ−４胞を分離するための手段は
当分野で周知である。たとえば、赤血球及び顆粒球を分
離されるべき細胞群の中間の密度を有する液体中での遠
心分離によりＢ−細胞から分離できる。
用するのに適している。Ｂ−細胞はリンパ節から単離で
きる。別法としては、診断テストには、Ｂ−細胞新生物
の存在についてスクリー二木 ングされている患者から得られた抹梢血の試料を使用し
てもよい、末梢血からＢ−４胞を分離するための手段は
当分野で周知である。たとえば、赤血球及び顆粒球を分
離されるべき細胞群の中間の密度を有する液体中での遠
心分離によりＢ−細胞から分離できる。
Ｂ−細胞からの蛋白質の抽出は当業者に知られている多
くの手段のいずれによっても行なえる。
くの手段のいずれによっても行なえる。
たとえば、細胞は洗浄剤、または機械的手段によって溶
解できる。所望ならば、酵素による分解またはスｌ−レ
ブトマイシンのような薬剤による沈殿によって細胞調製
物から分離できる。もう１度言及すれば、そのような手
段は当分野で周知である。
解できる。所望ならば、酵素による分解またはスｌ−レ
ブトマイシンのような薬剤による沈殿によって細胞調製
物から分離できる。もう１度言及すれば、そのような手
段は当分野で周知である。
動物を大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ）のβ−ガラクトシダー
ゼ蛋白質の部分とヒトｂｃｌ ２蛋白質の部分からな
る融合蛋白質で免疫することによって田夕２蛋白質に対
して免疫反応性である抗体を生成できる。好ましくは、
判−２蛋白質は膣１−２−アルファと−土−２−ベータ
の両方に対して共通である配列を含むであろう、所望な
らば、そのような融合蛋白質をβ−ガラクトシダーゼと
共通する特性を使用して精製できる。ウサギにおけるそ
のような融合蛋白質に対する抗血清はｂｃｌ−２−アル
ファと唇±−２−ベータの双方に対してインビトロで免
疫反応性であることが見出された。さらに、蛍光抗体法
にこの抗血清を使用すれば、固定された細胞におけるい
土−２蛋白質の細胞内の位置を決定できる。
ゼ蛋白質の部分とヒトｂｃｌ ２蛋白質の部分からな
る融合蛋白質で免疫することによって田夕２蛋白質に対
して免疫反応性である抗体を生成できる。好ましくは、
判−２蛋白質は膣１−２−アルファと−土−２−ベータ
の両方に対して共通である配列を含むであろう、所望な
らば、そのような融合蛋白質をβ−ガラクトシダーゼと
共通する特性を使用して精製できる。ウサギにおけるそ
のような融合蛋白質に対する抗血清はｂｃｌ−２−アル
ファと唇±−２−ベータの双方に対してインビトロで免
疫反応性であることが見出された。さらに、蛍光抗体法
にこの抗血清を使用すれば、固定された細胞におけるい
土−２蛋白質の細胞内の位置を決定できる。
マウス、ウサギ、ヒト等の動物を１１よ−２−アルファ
、判−２−ベータ、それらの断片あるいは両方によって
免疫することによっても抗体をつくることができる。別
法として、不滅化細胞株を使用して均−且つ継続的抗体
源を提供することによってモノクローナル抗体をつくる
ことができる。そのような抗体をつくる技術は当分野で
周知である。
、判−２−ベータ、それらの断片あるいは両方によって
免疫することによっても抗体をつくることができる。別
法として、不滅化細胞株を使用して均−且つ継続的抗体
源を提供することによってモノクローナル抗体をつくる
ことができる。そのような抗体をつくる技術は当分野で
周知である。
適当な抗体は判−２の天然遺伝子産物か上述の融合蛋白
質を使用してスクリーニングできる。診断に使用される
抗体はむ土−２−アルファとベータに免疫反応性である
ことが好ましいが、それらの１つと免疫反応する抗体を
使用してもうまくゆく。
質を使用してスクリーニングできる。診断に使用される
抗体はむ土−２−アルファとベータに免疫反応性である
ことが好ましいが、それらの１つと免疫反応する抗体を
使用してもうまくゆく。
Ｂ−細胞から抽出された蛋白質を抗原抗体複合体形成に
適当な条件下に抗体と接触させることができる。一般に
、そのような条件は生理学的条件である。蛋白質抽出物
はそのようなニトロセルロースフィルターまたはミクロ
滴板のような固体支持体に結合できる。
適当な条件下に抗体と接触させることができる。一般に
、そのような条件は生理学的条件である。蛋白質抽出物
はそのようなニトロセルロースフィルターまたはミクロ
滴板のような固体支持体に結合できる。
抗体は一般に適当な条件下に色のある反応生成物を形成
する放射性標識、蛍光標識または酵素結合物のような“
標識”を有している。そのような標識は当分野で周知の
ものばかりである。別法として、抗体が標識されない場
合、第一抗体と反応するもう１つの種の第２抗体によっ
て検出できる。
する放射性標識、蛍光標識または酵素結合物のような“
標識”を有している。そのような標識は当分野で周知の
ものばかりである。別法として、抗体が標識されない場
合、第一抗体と反応するもう１つの種の第２抗体によっ
て検出できる。
もちろん、免疫学的技術はできるだけ定量的に感受性で
あることがこの診断法には好ましい。
あることがこの診断法には好ましい。
抗原−抗体複合体の検出方法は、抗体に使用される標識
方法に依存するであろう、たとえば、放射性標識はオー
トラジオグラフィーまたはシンチレーションカウンター
により検出できるが、酵素結合抗体の生成物は分光光度
計によって検出できる。
方法に依存するであろう、たとえば、放射性標識はオー
トラジオグラフィーまたはシンチレーションカウンター
により検出できるが、酵素結合抗体の生成物は分光光度
計によって検出できる。
試料に対する平行試料を使用して対照とする。
対照試料は好ましくは試験試料と同じ方法で細胞から抽
出された等量の蛋白質からなる。蛋白質の量はローリイ
（Ｌｏｗｒｙ）またはブラッドフォード（Ｂ ｒａｄｆ
ｏｒｄ）の方法のような当分野で周知の方法を使用して
容易に決定できる。対照試料を調製するのに使用される
細胞は正常なヒトからのＢ−細胞、確立された正常なり
一細胞またはプレーロー細胞株および新生物についてス
クリーニングされているヒトからの非Ｂ−細胞からなる
群より選択され得る。
出された等量の蛋白質からなる。蛋白質の量はローリイ
（Ｌｏｗｒｙ）またはブラッドフォード（Ｂ ｒａｄｆ
ｏｒｄ）の方法のような当分野で周知の方法を使用して
容易に決定できる。対照試料を調製するのに使用される
細胞は正常なヒトからのＢ−細胞、確立された正常なり
一細胞またはプレーロー細胞株および新生物についてス
クリーニングされているヒトからの非Ｂ−細胞からなる
群より選択され得る。
転位が染色体１４と１８の間に生じた場合、Ｂ−細胞中
で免疫学的に検出される回↓−２蛋白買のレベルは、正
常なり一細胞、ブレーＢ−細胞または同じヒトからの他
の非−Ｂ−細胞中に見出される判−２蛋白質の量の少く
とも１０倍である。
で免疫学的に検出される回↓−２蛋白買のレベルは、正
常なり一細胞、ブレーＢ−細胞または同じヒトからの他
の非−Ｂ−細胞中に見出される判−２蛋白質の量の少く
とも１０倍である。
回土−２遺伝子から転写された高レベルの鱈Ｎ＾をスク
リーニングするために、スクリーニングされるヒトから
Ｂ−細胞を再び単離しなければならない、当分野で公知
の多くの方法のいずれでも適当である。Ｂ−細胞から抽
出された総ＲＮＡを使用するかｍＲＮＡを全細胞ＲＮＡ
から単雛できる。
リーニングするために、スクリーニングされるヒトから
Ｂ−細胞を再び単離しなければならない、当分野で公知
の多くの方法のいずれでも適当である。Ｂ−細胞から抽
出された総ＲＮＡを使用するかｍＲＮＡを全細胞ＲＮＡ
から単雛できる。
たとえばｌｌＲＮＡはほとんどのｍＲＮＡの３′末端に
あるポリ（Ａ）？−ラクトに結合しているオリゴ（ＪＴ
）セルロース上のアフィニティー・クロマトグラフィー
によって精製できる。当業者に公知の如く、リボヌクレ
アーゼ活性は調製及び検定の間に最小となっていること
が必須である。
あるポリ（Ａ）？−ラクトに結合しているオリゴ（ＪＴ
）セルロース上のアフィニティー・クロマトグラフィー
によって精製できる。当業者に公知の如く、リボヌクレ
アーゼ活性は調製及び検定の間に最小となっていること
が必須である。
ＤＮＡプローブは唇±−２遺伝子の蛋白質コード配列の
いずれからでも選択できる。好ましくは、プローブは該
遺伝子の５′または第１エクソンの配列から選択されて
３種のＲＮ Ａすべてが検出される。別法として、プロ
ーブは、３．５ｋｂ転写体または５．５ｋｂおよび８．
５ｋｂ転写体とのみ独占的にハイブリッドを形成する配
列から選択できる。
いずれからでも選択できる。好ましくは、プローブは該
遺伝子の５′または第１エクソンの配列から選択されて
３種のＲＮ Ａすべてが検出される。別法として、プロ
ーブは、３．５ｋｂ転写体または５．５ｋｂおよび８．
５ｋｂ転写体とのみ独占的にハイブリッドを形成する配
列から選択できる。
好ましくはプローブはｂｃｌ−２配列の少くとも１５ヌ
クレオチドを含む、１０−ブとして使用できる適当なプ
ラスミド分子はＡ Ｔ ＣＣＮ ｏｓ、６７１４７と６
７１４８として寄託しである。もちろん、他の適当な１
０−ブもこれらのあるいは他のｂｃｌ−２配列から合成
あるいは誘導できる。ハイブリダイゼーションを行うた
めに、１０−ブを一重鎖にしておくのがよい。このよう
に、１０−ブが二重鎖なら変性して一重鎖の形にしなけ
ればならない。アルカリまたは熱処理を含む変性の手段
が周知である０次いでプローブを均質なＲＮＡ−ＤＮＡ
ハイブリッドが形成して安定である条件下に、Ｂ−細胞
から得られたＲＮＡと接触させることができる。
クレオチドを含む、１０−ブとして使用できる適当なプ
ラスミド分子はＡ Ｔ ＣＣＮ ｏｓ、６７１４７と６
７１４８として寄託しである。もちろん、他の適当な１
０−ブもこれらのあるいは他のｂｃｌ−２配列から合成
あるいは誘導できる。ハイブリダイゼーションを行うた
めに、１０−ブを一重鎖にしておくのがよい。このよう
に、１０−ブが二重鎖なら変性して一重鎖の形にしなけ
ればならない。アルカリまたは熱処理を含む変性の手段
が周知である０次いでプローブを均質なＲＮＡ−ＤＮＡ
ハイブリッドが形成して安定である条件下に、Ｂ−細胞
から得られたＲＮＡと接触させることができる。
そのような条件は周知である。ハイブリッドを検出する
手段は多く周知であるが、しばしば放射性標識プローブ
及び−重鎖ＤＮＡ′ｔ！、減成するヌクレアーゼの使用
を含む、他の方法も使用できる。
手段は多く周知であるが、しばしば放射性標識プローブ
及び−重鎖ＤＮＡ′ｔ！、減成するヌクレアーゼの使用
を含む、他の方法も使用できる。
抗体診断試験に使用するための上記細胞源のいずれから
も対照試料を得ることができる。同様の条件下に試料と
対照を平行して調製すべきである。
も対照試料を得ることができる。同様の条件下に試料と
対照を平行して調製すべきである。
試験試料と対照試料のハイブリダイゼーションを比較し
てみて試験試料の方が約１０倍を越えて過剰であれば、
Ｂ−細胞新生物であることを示している。
てみて試験試料の方が約１０倍を越えて過剰であれば、
Ｂ−細胞新生物であることを示している。
下記例は本発明の範囲を限定するものではなく、羊に説
明するものである。
明するものである。
火」【倒」二
十
プレーＢ−細胞白血病細胞株３８０のポリＡｍＲＮＡか
らｅＤＮＡライブラリーを造成した。エイアールルシュ
ジ（ａｒ −Ｒｕ５ｈｄｉ）ら、セマティック・セル・
ジェネティックス（Ｓｅｍａｔｉｃ Ｃｅ１ｌＧｅｎｅ
ｔｉｃｓ）、Ｖｏ１８．ｐｌ ５１−１６１（１９８２
）に記載された方法によって細胞質ＲＮＡを抽出した。
らｅＤＮＡライブラリーを造成した。エイアールルシュ
ジ（ａｒ −Ｒｕ５ｈｄｉ）ら、セマティック・セル・
ジェネティックス（Ｓｅｍａｔｉｃ Ｃｅ１ｌＧｅｎｅ
ｔｉｃｓ）、Ｖｏ１８．ｐｌ ５１−１６１（１９８２
）に記載された方法によって細胞質ＲＮＡを抽出した。
ポリＡ ＲＮＡをアビブ（Ａｖｉｖ）およびレーダー
（Ｌｅｄｅｒ）、プロシーディングズ・オブ・ナショナ
ル・アカデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐ ｒｏｃｅ−
ｅｄｉｎｇｓ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｅａｄｅ＋
ａｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＬＩＳＡ、Ｖｏ１６９
．ｐｌ ４０８−１４１２（１９７２）において記載さ
れたようにオリゴ（ｄＴ）カラムクロマトグラフィーに
よって選択された。
（Ｌｅｄｅｒ）、プロシーディングズ・オブ・ナショナ
ル・アカデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐ ｒｏｃｅ−
ｅｄｉｎｇｓ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｅａｄｅ＋
ａｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＬＩＳＡ、Ｖｏ１６９
．ｐｌ ４０８−１４１２（１９７２）において記載さ
れたようにオリゴ（ｄＴ）カラムクロマトグラフィーに
よって選択された。
二重鎖ｃＤＮＡはｍＲＮＡから逆転写酵素（フロツグの
ライフサイエンス社より入手）によってオリゴ（ｄＴ
）をプライマーとしてマニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ
）ら、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｔｏｎｉｎｇ）（１９８２）、コールド・スプリ
ング・ハーバ−・ラボラトリ−、コールド・スプリング
・ハーバ−、ニューヨークに記載の如く使用して合成さ
れた。ＥｅｏＲＩリンカ−結合後、二重鎖ｃＤＮＡをラ
ムダｇｔｌｌファージベクターにクローンした。（ヤン
グ（Ｙ ｏｕｎｇ）およびデービス（Ｄ ａｖｉｓ＞（
１９８３）プロシデイング・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ
ｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａ
ｄｅｍｙｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＵＳＡ、Ｖｏｌ８
０．ｐＨ９４−１１９８）染色体１８の染色体１４への
転移の切断点のホットスポットまで延びる染色体１８の
断片からなるＤＮＡ１０−ブによって約２Ｘ１０’個の
組換えクローンをスクリーニングすることによって、重
なっている３つの独立したｃＤＮＡクローン（Ｂ ３
、Ｂ ４およびＢ１０）が得られた。第１図に示される
ように、クローンＢ３はその末端において１９個のＡ残
基を含み、このクローンはｍＲＮＡの３末端を示す、ｃ
ＤＮＡクローンの制限地図とゲノム配列は、ｃＤＮＡク
ローンＢ３の３′末端からｃＤＮＡ配列のＢａｍＨＩ部
位の直前まで共直線である。ちょうどこの点を越えると
ｃＤＮＡ配列はゲノム配列と分れる。このようにして、
ｃＤＮＡ配列は少くとも２つのゲノム領域からなる。
ライフサイエンス社より入手）によってオリゴ（ｄＴ
）をプライマーとしてマニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ
）ら、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｔｏｎｉｎｇ）（１９８２）、コールド・スプリ
ング・ハーバ−・ラボラトリ−、コールド・スプリング
・ハーバ−、ニューヨークに記載の如く使用して合成さ
れた。ＥｅｏＲＩリンカ−結合後、二重鎖ｃＤＮＡをラ
ムダｇｔｌｌファージベクターにクローンした。（ヤン
グ（Ｙ ｏｕｎｇ）およびデービス（Ｄ ａｖｉｓ＞（
１９８３）プロシデイング・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ
ｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａ
ｄｅｍｙｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＵＳＡ、Ｖｏｌ８
０．ｐＨ９４−１１９８）染色体１８の染色体１４への
転移の切断点のホットスポットまで延びる染色体１８の
断片からなるＤＮＡ１０−ブによって約２Ｘ１０’個の
組換えクローンをスクリーニングすることによって、重
なっている３つの独立したｃＤＮＡクローン（Ｂ ３
、Ｂ ４およびＢ１０）が得られた。第１図に示される
ように、クローンＢ３はその末端において１９個のＡ残
基を含み、このクローンはｍＲＮＡの３末端を示す、ｃ
ＤＮＡクローンの制限地図とゲノム配列は、ｃＤＮＡク
ローンＢ３の３′末端からｃＤＮＡ配列のＢａｍＨＩ部
位の直前まで共直線である。ちょうどこの点を越えると
ｃＤＮＡ配列はゲノム配列と分れる。このようにして、
ｃＤＮＡ配列は少くとも２つのゲノム領域からなる。
ｃＤＮＡクローンＢ４の５′部分（５′末端からＢａｍ
Ｈ１部位まで）を使用してｃＤＮＡバンクをプローブす
ると、もう１組のクローン（クローンＢ１５とクローン
８１６〈第１図９照）を含む）が得られる。これら２つ
のｃＤＮＡクローンは５′領域にクローンＢ４と同じ配
列を有するが、３′領域においてはクローンＢ３．Ｂ４
およびＢＩＯとは全面的に異なる配列を有する。このよ
うに、ｃＤＮＡクローニングにより異なる２組のクロー
ンが得られ、このことは、判−２遺伝子が少くとも２つ
の異なるｍＲＮＡに転写されていることを示す。
Ｈ１部位まで）を使用してｃＤＮＡバンクをプローブす
ると、もう１組のクローン（クローンＢ１５とクローン
８１６〈第１図９照）を含む）が得られる。これら２つ
のｃＤＮＡクローンは５′領域にクローンＢ４と同じ配
列を有するが、３′領域においてはクローンＢ３．Ｂ４
およびＢＩＯとは全面的に異なる配列を有する。このよ
うに、ｃＤＮＡクローニングにより異なる２組のクロー
ンが得られ、このことは、判−２遺伝子が少くとも２つ
の異なるｍＲＮＡに転写されていることを示す。
さらに上流（５′方向で）のｃＤＮＡ配列を得るために
、ｃＤＮＡライブラリーをプライマー・エクステンショ
ン法によって遺戒した。オリゴヌクレオチド（１５−ｍ
ｅｒ）を合成し、マニアティス（ＭａｎｉａＬｉｓ）の
上記文献およびグブラーおよびホフマン（Ｇｕｂｌｅｒ
ａｎｄ Ｈｏｆｆｍａｎ）のＧｅｎｅ、Ｖｏｌ２
５ 、ｐ２６３−２９６におけるようにしてブライマー
として使用した。この方法によりクローンＢ６−３．Ｂ
２２−１およびＢ９の３つのクローンが得られた。
、ｃＤＮＡライブラリーをプライマー・エクステンショ
ン法によって遺戒した。オリゴヌクレオチド（１５−ｍ
ｅｒ）を合成し、マニアティス（ＭａｎｉａＬｉｓ）の
上記文献およびグブラーおよびホフマン（Ｇｕｂｌｅｒ
ａｎｄ Ｈｏｆｆｍａｎ）のＧｅｎｅ、Ｖｏｌ２
５ 、ｐ２６３−２９６におけるようにしてブライマー
として使用した。この方法によりクローンＢ６−３．Ｂ
２２−１およびＢ９の３つのクローンが得られた。
Ｋ１匠Ｌ
２つの異なるプローブを使用して、ノーザーン（Ｎ ｏ
ｒｔｈｅｒｎ）プロット・ハイブリダイゼーション中の
ｂｃｌ ２遺伝子に相当するｍＲＮＡを可視化した。
ｒｔｈｅｒｎ）プロット・ハイブリダイゼーション中の
ｂｃｌ ２遺伝子に相当するｍＲＮＡを可視化した。
第１のプローブ（第１図のプローブＡ）は切断点ホット
スポットに至る３′エクソンに相当する染色体１８のゲ
ノムＤＮＡを含む、使用された他のプローブは５′エク
ソン（第１エクソン）に相当するｃＤＮＡクローンを８
２２−１である。トーマス（Ｔ ｈｏｍａｓ） 、プロ
シーディング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オ
ブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｒ
ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙｏｆ
５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＵＳＡ（１９８０）Ｖｏｌ、７７
゜ｐ５２０１−５２０５のようにしてＲＮＡはグリオキ
サル化され、１％アガロースゲル上で展開され、ニトロ
セルロースフィルターにプロットした。
スポットに至る３′エクソンに相当する染色体１８のゲ
ノムＤＮＡを含む、使用された他のプローブは５′エク
ソン（第１エクソン）に相当するｃＤＮＡクローンを８
２２−１である。トーマス（Ｔ ｈｏｍａｓ） 、プロ
シーディング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オ
ブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｒ
ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙｏｆ
５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＵＳＡ（１９８０）Ｖｏｌ、７７
゜ｐ５２０１−５２０５のようにしてＲＮＡはグリオキ
サル化され、１％アガロースゲル上で展開され、ニトロ
セルロースフィルターにプロットした。
上記ニトロセルロースフィルターを３２ｐ ｆｉｆｉ
プローブと５０％ホルムアミド、４ＸＳＳＣ，０，１％
ＳＤＳ中で３７℃でハイブリッドさせ、最後に２ＸＳＳ
Ｃ（０，３ＭＮａＣ１’、０．０３Ｍクエン酸ナトリウ
ム、ｐＨ７）で６５℃で洗った。
プローブと５０％ホルムアミド、４ＸＳＳＣ，０，１％
ＳＤＳ中で３７℃でハイブリッドさせ、最後に２ＸＳＳ
Ｃ（０，３ＭＮａＣ１’、０．０３Ｍクエン酸ナトリウ
ム、ｐＨ７）で６５℃で洗った。
ゲノムＤＮＡプローブＡは長さ８．５ｋｂと５．５ｋｂ
の２つの転写体を検出した。ｃＤＮＡプローブＢ２２−
１はプローブＡと同じ転写体および３．５ｋｂのもう１
つの転写体を検出した。
の２つの転写体を検出した。ｃＤＮＡプローブＢ２２−
１はプローブＡと同じ転写体および３．５ｋｂのもう１
つの転写体を検出した。
８．５ｋｂの論ＲＮＡが、ゲノム性プローブＡ（および
第１図にプローブＢとして示される）に対して３′であ
る染色体１８からのゲノム性ＤＮＡプローブにハイブリ
ッドすることもわかった。
第１図にプローブＢとして示される）に対して３′であ
る染色体１８からのゲノム性ＤＮＡプローブにハイブリ
ッドすることもわかった。
これらのデータは１土−２遺伝子が異なるサイズの３つ
のｍＲＮＡに転写することを示している。
のｍＲＮＡに転写することを示している。
これらのｍＲＮＡが異なるが関連する遺伝子から得られ
るという可能性は、ノーザーン・プロット・ハイブリダ
イゼーションに使用されたと同じハイブリダイゼーショ
ン条件下にこれらのブローブが１つの細胞性遺伝子のみ
を検出する仁いう事実によって排除される。
るという可能性は、ノーザーン・プロット・ハイブリダ
イゼーションに使用されたと同じハイブリダイゼーショ
ン条件下にこれらのブローブが１つの細胞性遺伝子のみ
を検出する仁いう事実によって排除される。
夫１匠１
重なるｃＤＮＡクローンのヌクレオチド配列は、マキサ
ム（Ｍａｘａｍ）とギルバード（Ｇ １ｌｂｅｒｔ）の
化学的分解方法（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔ
ｈｅ ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ
５ｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ、Ｖｏｌ、７４゜ｐ５６０−
５６４＜１９７７））またはサンガー（Ｓ ａｎｇｅｒ
）の鎖成長停止反応（Ｐ ｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ
ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏ
ｆ ５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＵＳＡ、Ｖｏｌ ７４．ｐ
５４６３ ５４６７（１９７））によって測定され
た。ＤＮＡの両方の鎖の配列を決定した。５．５ｋｂ転
写体から得られたヌクレオチド配列は第２図に示した。
ム（Ｍａｘａｍ）とギルバード（Ｇ １ｌｂｅｒｔ）の
化学的分解方法（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔ
ｈｅ ＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ
５ｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ、Ｖｏｌ、７４゜ｐ５６０−
５６４＜１９７７））またはサンガー（Ｓ ａｎｇｅｒ
）の鎖成長停止反応（Ｐ ｒｏｃｅｅｄｉｎｇ ｏｆ
ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏ
ｆ ５ｃｉｅｎｃｅｓ）ＵＳＡ、Ｖｏｌ ７４．ｐ
５４６３ ５４６７（１９７））によって測定され
た。ＤＮＡの両方の鎖の配列を決定した。５．５ｋｂ転
写体から得られたヌクレオチド配列は第２図に示した。
５１０５塩基対（ｂｐ）のＤＮＡ配列は２３９個のアミ
ノ酸残基（ｂｃｌ ２−アルファ）からなる１つの可
能なオーブン・リーディング・フレームを表わす、３．
５ｋｂ転写体に相当するヌクレオチド配列は第３図に示
されている。
ノ酸残基（ｂｃｌ ２−アルファ）からなる１つの可
能なオーブン・リーディング・フレームを表わす、３．
５ｋｂ転写体に相当するヌクレオチド配列は第３図に示
されている。
この転写体は２０５個のアミノ酸残基（ｂｅｌ−２−ベ
ータ）からなる蛋白質をコードし、この判−２−ベータ
はカルボキシル末端においてｂｃｌ ２−アルファ蛋
白質と異なる。
ータ）からなる蛋白質をコードし、この判−２−ベータ
はカルボキシル末端においてｂｃｌ ２−アルファ蛋
白質と異なる。
第１図は染色体１８のゲノム制限地図およびｃＤＮＡク
ローンの構造を示す。 第２図は５．５ｋｂ転写体に相当する顕−２ｃＤＮＡの
ヌクレオチド配列を示す、オーブン・リーディング・フ
レームの周囲の配列のみが示されている。 第３図は３．５ｋｂ転写体に相当する判−２ｃ Ｄ Ｎ
Ａのヌクレオチド配列を示す、オーブン・リーディン
グ・フレームの周囲の配列のみが示されている。 第１図中の符号、ａはｔ（１４；１８）転移の切断点の
ホットスポット；口は第２エクソン；圀は第１エクソン
；■は第１エクソン；△は５ｓｔｌ、ムはＳｓｔ■、Ｉ
は旧ｎｄｌｌｌ、？はＢａ糟ＨＩ 、↓はＥｃｏＲＩを
各々示す。 又、第２図および第３図において、ムは判−２−アルフ
ァ配列とｂｃｌ−２−ベータ配列が分岐する部位を示す
、。 （外４名）
ローンの構造を示す。 第２図は５．５ｋｂ転写体に相当する顕−２ｃＤＮＡの
ヌクレオチド配列を示す、オーブン・リーディング・フ
レームの周囲の配列のみが示されている。 第３図は３．５ｋｂ転写体に相当する判−２ｃ Ｄ Ｎ
Ａのヌクレオチド配列を示す、オーブン・リーディン
グ・フレームの周囲の配列のみが示されている。 第１図中の符号、ａはｔ（１４；１８）転移の切断点の
ホットスポット；口は第２エクソン；圀は第１エクソン
；■は第１エクソン；△は５ｓｔｌ、ムはＳｓｔ■、Ｉ
は旧ｎｄｌｌｌ、？はＢａ糟ＨＩ 、↓はＥｃｏＲＩを
各々示す。 又、第２図および第３図において、ムは判−２−アルフ
ァ配列とｂｃｌ−２−ベータ配列が分岐する部位を示す
、。 （外４名）
Claims (9)
- （１）ヒト￥ｂｃｌ￥−２遺伝子の遺伝子産生物と免疫
反応性である抗体。 - （２）ヒト￥ｂｃｌ￥−２遺伝子との配列相同性を有す
る少くとも１５ヌクレオチドの長さの配列を含むＤＮＡ
プローブ。 - （３）ＡＴＣＣＮｏ．６７１４７およびＡＴＣＣＮｏ．
６７１４８としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コ
レクションに寄託されたプラスミドからなる群より選択
される特許請求の範囲第２項のプローブ。 - （４）イントロンを実質的に含まないヒト￥ｂｃｌ￥−
２遺伝子。 - （５）細菌において複製される特許請求の範囲第４項の
遺伝子。 - （６）細菌において発現される特許請求の範囲第５項の
遺伝子。 - （７）ヒト￥ｂｃｌ￥−２遺伝子の第１エクソンによっ
てコードされているＮ−末端を有する蛋白質の実質的に
純粋な調製物。 - （８）蛋白質が約２３９個のアミノ酸残基を有する￥ｂ
ｃｌ￥−２−アルファである特許請求の範囲第７項の蛋
白質調製物。 - （９）蛋白質が約２０５個のアミノ酸残基を有する￥ｂ
ｃｌ￥−２−ベータである特許請求の範囲第７項の蛋白
質調製物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US883687 | 1986-07-09 | ||
| US06/883,687 US5015568A (en) | 1986-07-09 | 1986-07-09 | Diagnostic methods for detecting lymphomas in humans |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63100379A true JPS63100379A (ja) | 1988-05-02 |
Family
ID=25383120
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62172023A Pending JPS63100379A (ja) | 1986-07-09 | 1987-07-09 | ヒトリンパ腫診断用抗体 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US5015568A (ja) |
| EP (1) | EP0252685B1 (ja) |
| JP (1) | JPS63100379A (ja) |
| AT (1) | ATE90792T1 (ja) |
| AU (1) | AU602704B2 (ja) |
| CA (1) | CA1340827C (ja) |
| DE (2) | DE3786200T2 (ja) |
| ES (1) | ES2003064T3 (ja) |
| GR (1) | GR880300131T1 (ja) |
Families Citing this family (90)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5015568A (en) * | 1986-07-09 | 1991-05-14 | The Wistar Institute | Diagnostic methods for detecting lymphomas in humans |
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| WO1991009974A1 (en) * | 1989-12-27 | 1991-07-11 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | Diagnostic probe for detecting human stomach cancer |
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| IT1255770B (it) * | 1992-05-22 | 1995-11-15 | Consiglio Nazionale Ricerche | Oligonucleotidi antisenso ad attivita' antitumorale, composizioni farmaceutiche che li comprendono, e loro impieghi |
| WO1993025683A1 (en) * | 1992-06-12 | 1993-12-23 | Massachusetts Institute Of Technology | A gene which prevents programmed cell death |
| US6902732B2 (en) | 1992-06-12 | 2005-06-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Identification and characterization of a gene which protects cells from programmed cell death and uses therefor |
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| US5672686A (en) * | 1994-08-09 | 1997-09-30 | Immunogen, Inc. | Bcl-Y - specific antibodies |
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| US5985598A (en) * | 1994-10-27 | 1999-11-16 | Thomas Jefferson University | TCL-1 gene and protein and related methods and compositions |
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