JPS6272627A - 単純ヘルペスウイルス感染症の予防又は治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 本発明は、単純ヘルペスウィルス＜　ｆ−１ｅｒｐｅｓ
ｓｉｍｐｌｅｘ　ｖｉｒｕｓ　、　ｌ−Ｉ　Ｓ　Ｖ　）
に対するヒトモノクローナル抗体を有効成分とする、Ｈ
Ｓ　Ｖ感染症の予防又は治療剤に関する。

（○）従来技術 細胞融合の技術を用いて、特異的な抗体を産生ずるがや
がては死滅する運命にあるリンパ球又はＢ細胞〈抗体産
生細胞）と、培養器の中で永久に増殖しつづけるミエロ
ーマ細胞（骨髄腫細胞）を融合させることにより、特異
抗体を永続的に産生分泌するハイブリドーマ（融合細胞
）株を樹立させる方法は公知である。

かかる方法によって作成されたハイブリドーマが産生ず
るモノクローナル抗体は、高い精麿と信頼度をもつ純粋
な化学試薬として、検査試薬や標識試薬、アフィニティ
ークロマトグラフィーなどに応用ができる他、各種疾患
の治療薬。

予防薬としての応用も期待できるものである。

ところで、モノクローナルなウィルス抗体を得ようとす
る場合には、ウィルス抗体産生細胞とミエローマ細胞と
を融合させ、クローニングによってウィルス抗体産生性
のハイブリドーマを得ればよいことは一般論としては知
られている。そして、具体的には、例えば、特公昭５９
−２２７６号公報には、インフルエンＩＪ’ウィルス又
は狂犬病ウィルスで免疫されたＢＡＬＢ／Ｃマウスの肺
臓細胞（抗体産生細胞）と、同種のマウスのミエローマ
細胞とを融合させハイブリドーマを得、これをクローニ
ングすることによって、モノクローナルな抗ウィルス・
マウス抗体を産生ずるハイブリドーマを１０たことが開
示されている。また、特開昭５８−１７５４８９＠公報
には、単純ヘルペスウィルスで免疫したマウスの肺臓細
胞とマ・クスのミエローマ細胞とを融合さＩ、抗単純ヘ
ルペスウィルス・マウス抗体を産生ずるハイブリドーマ
を得たことを開示されている。

（ハ）発明が解決しようとする問題点 以上のごとく、抗ウイルス抗体を産生ずるハイブリドー
マに関しては、具体的な成功例は抗ウィルス・マウス抗
体を産生ずるマウス−マウスハイブリドーマだけである
。しかし、ヒトの病気の予防や治療等のためには、同種
タンパクである抗ウィルス・ヒト抗体の方が有用でかつ
安全であり、そのためには、ヒトの抗体産生細胞を用い
てマウス−ヒトハイブリドーマやヒト−ヒトハイブリド
ーマを樹立する必要がある。

しかしながら、動物の場合と異なり、ヒトの場合には、
ヒトをあらかじめ多回のウィルスで免疫し有効に刺激さ
れた抗体産生細胞を採取して細胞融合に用いるといった
方法をとるね（プにはいかないので、適切な抗体産生細
胞の採取、調製が困難であるといった問題等があり、未
だ明確な成功例の報告がない。

に）問題点を解決するための手段 本発明者らは、抗Ｈ８Ｖ・ヒトモノクローナル抗体を得
、これをＨ８Ｖ感染症の予防や治療に用いることを目的
として鋭意研究を行なった結果、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでマ
イト−ジエンの存在下にＨ８■又はＨ８Ｖ由来の蛋白若
しくは糖蛋白で感作したヒトの抗体産生細胞と、マウス
のミエローマ細胞とを融合させるという方法によって、
抗Ｈ３Ｖヒトモノクローナル抗体を産生ずるマウス−ヒ
トハイブリドーマを得ることができた。

そして、このハイブリドーマ及び／又はそれに由来する
細胞株を培養し、培養物からＨ３Ｖに対するヒトモノク
ローナル抗体を採取し、これがＨ３Ｖに対する中和活性
と感染抑制能を有することを確認して、本発明を完成し
た。

即ち、本発明は、単純ヘルペスウィルス１型又は２型感
染細胞の細胞膜及び細胞質と反応し、非感染細胞とはほ
とんど反応しないという性質を有する、分子洛が約１６
万でＩ（ＩＧ型の、単純ヘルペスウィルスに対するヒト
モノクローナル抗体を有効成分とする、単純ヘルペスウ
ィルス感染症の予防又は治療剤である。

ヒトの抗体産生細胞とは、ヒトのリンパ球（又はＢ細胞
）であって、抗体を分泌している又は分泌する能力を持
った細胞をいう。これは肺臓、リンパ節、末梢血、骨髄
、扁桃、アデノイド等の細胞の中に含まれている。本発
明の目的のためには、いかなるソースのリンパ球でも用
いることができるが、好ましいのは肺臓又は扁桃又はア
デノイドから採取されたものである。

マウスのミエローマ細胞としては、８−アザグアニン耐
性株を用いるのが有利であり、公知のものとしては、Ｂ
ＡＬＢ／ＣマウスのＰ３Ｘ６３Ａａ８株、Ｐ３−ＮＳ１
／１−Ａｏ　４−１株。

Ｐ３Ｘ６３Ａ（１８Ｌ１１株、５Ｐ２１０Ａｑ１４株。

Ｐ３Ｘ６３Ａ（１８，６，５，３株、　ＭＰＣｌｌ−、
−４５゜６、７Ｇ　１．７株、５ｐ−ｉ株等がある。

ヒトの抗体産生細胞とマウスのミエローマ細胞とを融合
させるに先立って、ヒトの抗体産生細胞をｉｎ　Ｖｉｔ
ｒｏでマイト−ジエンの存在下に感作するのが好ましい
。

ヒトの場合、正常人でもｌ−１８Ｖに対する抗体を産生
じ得る能力のあるリンパ球を有している場合が多いが、
その数が少ないためにそのままでは目的とするハイブリ
ドーマを得るために利用することができない。これに対
し、ｉｎ　ＶｉｔｒＯでヒ１−の抗体産生細胞を感作す
る方法によれば、感作により細胞の分化及び増殖を促進
し、目的とする抗体産生細胞の数を任意に増大させるこ
とができる。かくしてＨ８Ｖで感作された抗体産生細胞
を用いて細胞融合を行なうことによって、効率良く抗Ｈ
３Ｖモノクロナール抗体を産生ずるハイブリドーマを得
ることができる。

ト１ｓＶとしては１型（例えば、Ｋ２Ｓ株、ＨＢｙａｓ
ｈｉｄａ株）と２型（例えば、ＹＳ−４株）が知られて
いる。感作のためには、これらのウィルスだけでなく、
かかるウィルス由来の蛋白若しくは糖蛋白を用いてもよ
い。

マイト−ジエンは、リンパ球の分化及び増殖を促進さＵ
るものなら何でもよいが、例えば、ボークウィドマイト
−ジエン（ＰＷＭ）、プロティンＡ、フイトヘムアグル
チニン（ＰＨＡ）コンカナバリンＡがある。好ましいの
はＰＷＭであり、通常２〜２００μｇ／ｒｄ、好ましく
は２０〜１１００ｔ１／ｍｌｌの母で用いられる。

感作の方法条件は特に限定されるものではないが、抗原
（１−（ＳＶ、又はｌ−１ｓＶ由来の蛋白若しくは糖蛋
白）の濃度は１Ｒｇ／ｍ１〜１μび／戒。

リンパ球（抗体産生細胞）の濃度は１×１０５〜１×１
０７個／ｄが適当であり、培養温度は３５〜４０℃で培
養時間は４〜１０日、好ましくは６〜８日である。培養
液は人、牛、馬等の血清を含むものなら何でも良いが、
特に胎児牛血清（Ｆｅ２）を含む培養液（例えばＲＰ　
Ｍ　［１６４０）が好ましい。

かくして得られたウィルスで感作したヒトの抗体産生細
胞とマウスのミエローマ細胞とは、次いで公知の方法に
従って細胞融合せしめられる。

例えば、抗体産生細胞とミエローマ細胞を１０：１〜１
：１０゜好ましくは１：１〜１：３の比率で混合し、適
当な細胞融合用溶液、例えば約３５％ポリエチレングリ
コール（分子ｆｉ　１，０００〜６．０００程度）およ
び約７．５％ジメチルスルホキシドを含むＲＰＭ　Ｉ　
１６４０を加えて、空温〜３７℃で１〜数分間撹拌し、
その後１０％Ｆ　ＣＳ　７ＪＯＲＰＭ　１１６４０で徐
々に希釈し、洗浄の後トＩＡＴ（ヒボキサンチン−アミ
ノプテリン−チミジン）選択培養液にて細胞濃度が１〜
５　ｘ　１０５個／Ｉｄとなるように調整する。これを
０．２ｄずつ、例えば９６穴プレートに分注し、５％Ｃ
Ｏ２を含む空気中で３５〜３８℃で２〜３週間培養する
。ＨＡ　Ｔ培養液なかではハイブリトーマのみが生存し
、８−アザグアニン耐性のミエローマ細胞及びミエロー
マ同士の融合細胞は生存し１ｑない（未融合の抗体産生
細胞は数日で死滅する）。

培養後、培養液中の抗体価をチェックし、目的とする抗
体を産生じているハイブリドーマのみを選択し単離する
（クローニング）。培養液中の抗体価のチェックは、ラ
ジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ）、酵素抗体法（ＥＬ　
［ＳＡ）。

螢光抗体法などの、抗原への抗体の結合そのものを検出
する方法と、ウィルスの生物活性を阻害する抗体の活性
をみる方法等で行なうことができる。クローニングによ
って選択された、本発明の抗ウィルス・ヒト抗体を産生
ずるマウス−ヒトハイブリドーマは、凍結して保存する
ことができる。かかるハイブリドーマのセルライン（細
胞株）及び／又はそれに由来する細胞株を適当な方法で
大量に培養すると、培養上清から本発明の目的とするヒ
トモノクローナル抗体を得ることができる。また、この
ハイブリドーマを動物に移植して腫瘍化し、その腹水や
血清からモノクローナル抗体を得ることもできる。

本発明は、かくして得られたモノクローナル抗体を有効
成分とする、ＨＳ　Ｖ感染症の予防又は治療剤である。

予防あるいは治療剤の形態は、水溶液あるいはそれを凍
結乾燥した粉体である。

この薬剤は０．１ｑ／ＩＲＩ！ないし５０ｒＩｆｊ／ｄ
、望ましくは１〜１０Ｒｇ／−のモノクローナル抗体を
含む。

塩類としては、０．５〜１．５％（Ｗ／Ｖ　）の塩化ナ
トリウム、望ましくは０．９％（Ｗ／Ｖ）である。さら
に０．００１〜０．ＩＭ、望ましくは０．０２Ｍのリン
酸ナトリウム（ｐＨ７，、Ｏ〜ｐｌ−１７，８）を加え
る。タンパク安定剤としては、０，１ｒｎｇ／＃ｌｉ！
〜１０１１１９　／　ｄのヒト血清アルブミンおよび／
または０．１％〜５％マンニトールおよび／または０．
０１〜’Ｉｍｇ／ｍｆｔポリエチレングリコール（分子
ｆｉ　１，０００ないし１０，０００＞を加える。投与
方法は、主に静脈注射あるいは点滴であるが、筋肉内注
射も可能である。投与量は０．０１〜１０Ｉｒｔｇ／に
９体重／日であり、望ましくは０．１〜１■／に９体重
／日である。

（ホ）以下、参考例と実施例により本発明を詳述する。

参考例１　（Ｈ８Ｖに対するモノクローナル抗体を産生
するハイブリドーマ） ［１１ＨＳ　Ｖ抗原の作製 単層に増殖したＶｅｒｏ細胞（約２　Ｘ　１０８個）に
、４，４ｘ　１０６Ｐ　Ｆ　Ｕ　（プラーク形成単位）
／ｄの１−ＩＳＶ（ＫＯ，Ｓ株）を接種した。３７℃で
２時間吸着させたのち、２％ウシ血清を含むＭＥＭ培地
で２４時間培養した。この細胞をリン酸緩衝生理食塩水
で洗浄したのち、超音波により細胞を破壊した。これを
６０００１）Ｉ）ＩＩＩで３０分間遠心した上清を得、
これを３０％ショ糖溶液の上に重層し、３００００ｒｐ
ｍで３時間遠心した。遠心管の底に沈澱したペレットを
ウィルス抗原として用いた。

（２１Ｈ８Ｖによるリンパ球感作 ヒトの扁桃リンパ球を培養液Ａ（ＲＰＭ［１６４０＋　
２０Ｘ胎児生血清＋２０１ＷＭ　　ＨＥＰＥＳ＋２　ｍ
Ｍグルタミン＋１１１１ＭＮａピルビン酸十０．０２　
ｔｎｙ／ｍｉセリン＋８０μグ／ｄゲンタマイシン）に
浮遊させた。細胞濃度は１７Ｘ　１０５個／ｄであった
。この細胞浮遊液を１．２ｄずつ、培養プレート（２４
穴）の１２穴に入れた。それらを３穴ずつ４群に分け、
第１群は無添加、第２群は１−（ＳＶ　（ＫＯ８株１部
分精製標品）１６Ｂタンパク／ａｔ！、第３群にはＰＷ
Ｍ２０μ９／ｄ、第４群には同量のＨ８ＶとＰＷＭを添
加した。この培養プレートを３７℃、５％ＣＯ２−空気
で６日間培養した。

（３）マウス・ミエローマ細胞Ｐ３ｘ６３Ａｇ８Ｕ１株
（Ｐ３Ｕ１と略記する）との細胞融合。

前もってＰ３Ｕ１を培養液Ｂ　（ＲＰＭ　ｌ　１６４０
＋１０％胎児牛血清＋２　ｍＭグルタミン＋８０μ３／
ｌｄゲンタマイシン）中で培養しておいた。使用時の細
胞濃度は６　Ｘ　１０５個／ｌ１ｒ１であった。上記（
２）の感作リンパ球（３穴を一緒にした）４群とＰ３Ｕ
１を、それぞれ別々に無血清ＲＰＭ１１６４０で２回洗
浄した。各群のリンパ球と５×１０６個のＰ３Ｕ１とを
試験管の中で一緒にした。

１５００ｒｐｍで５分間遠心し、上清を捨てた。細胞ペ
レットを、試験管をたたくことによって、よく分散させ
た。これに０．５−のポリエチレングリコール液（ＲＰ
Ｍ　１１Ｇ４０　５．７５　ｄ＋ポリエチレングリコー
ル１０００　３．５ｄ＋ジメチルスルホキサイド０．７
５　ｍｌ＞　　（ＰＥＧ液と略記する）を加えて、細胞
をゆるやかに浮遊させた。１分後に０．５ｍｌ＋　ＲＰ
　Ｍ　Ｉ　１６４０を加え３、さらに１分後に１ｍｅＲ
ＰＭＩ、さらに２分後に４戒のＨＡＴ培養液（ＲＰＭ　
Ｉ　１６４０＋２０％胎児牛血清＋８０μｇ／ｄ、ゲン
タマイシン＋９５μＭヒボキサンチン＋　０．４μＭア
ミノプテリン＋　１．６μＭチミジン）、さらに２分後
には４ｄのＨＡＴ培養液を加えた。最後に、ＨＡＴ培養
液で２５戒細胞浮遊液とした。これを培養プレート（９
６穴）１枚に蒔いて、３７℃、５％ＣＯ２含有空気中で
培養した。−週間毎に半量の培養液を新しいＨＴ培養液
（ＨＡＴからＡを除去したもの）で交換していきハイブ
リドーマを得た。

（４）　　ヒトＩｇＧと抗ＨＳ　Ｖ抗体の測定酵素抗体
法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。

ヒトＩ（ＩＧを測定するためにヤギ抗ヒトＩ（ＩＧ抗体
（１０μ！？／ｄ）を、あるいは抗１−Ｉ　Ｓ　Ｖ抗体
を測定するためにＨ８Ｖ　（Ｋ２Ｓ株）１μクタンパク
／−をそれぞれファルコン・ミクロテスト■の９６穴プ
レートに固定した。このプレートにハイブリドーマ培養
上清６０μρを加えて、室温で１時間１１１置した。０
．０５％丁ｗｅａｎ−２０を３有するリン酸緩衝生理食
塩水（Ｔｗｅｅｎ　−Ｐ　Ｂ　Ｓ　）で３回洗浄ののら
、ヤギ抗ヒトＩ（ＩＧ抗体−アルカリフォスファターゼ
（２０００倍希釈液）を６０μ文加えて、室温で１時間
反応させた。さらにＴ　ｗｅｅｎ　−Ｐ　Ｂ　Ｓで３回
洗浄したのち、ｐ−ニトロフェニルフォスクェートを１
Ｍジェタノールアミン＋１　　ｍＭ　　Ｍ！ｌ　Ｃ文ｚ
のｐＨ９，８溶液に０．６＃１ｇ／ｄの割合で溶かした
溶液１ｏｏｕｕを加えた。３０分から６０分後に４０５
　ｍμの吸光度を測定し、標準Ｉ（ＩＧ液あるいは標準
Ｈ８Ｖｌｉｌｌｉ性血清との比較から、その値を算出し
た。

全群とも９６穴プレ一ト１枚に細胞を蒔き、９６穴中の
、ハイブリドーマが生育してきた穴の数、ざらにそのう
ちヒトＩｇＧを産生しているハイブリドーマをもつ穴の
数、そして抗Ｈ３Ｖ抗体を産生じている穴の数を第１表
に示した。第１表には、３つの扉桃より、リンパ球を分
離した例を示したが、どの場合にも）−１ｓＶとＰＷＭ
を加えたときに最も多くの抗Ｈ８Ｖ抗体産生ハイブリド
ーマが生育した。

（以下余白） 第１表 （以下余白） （５）　　抗１−Ｉ　Ｓ　Ｖ抗体産生ハイブリドーマの
クローニング クローニングは限定希釈法を用いた。抗日ＳＶ抗体陽性
の穴より細胞を取り出し、細胞数を数え培養液Ｂを用い
１個／穴あるいは１００個／穴細胞を蒔いた。２週間後
に細胞が十分増殖したので、この上清に抗）−１ｓＶ抗
体があるか否かをＥＬＩＳＡによって測定し、抗Ｈ８Ｖ
抗体産生ハイブリドーマを選別した。

（６）抗Ｈ８Ｖモノクローナル抗体の調製得られたハイ
ブリドーマの１つＤ３４を無血清培地ＩＴＥＳ　（ＲＰ
Ｍ１１６４０　２容土ダルペットＭＥＭＩ容十Ｆ１２１
容十インシュリン８．５μｇ／ｒＲ１＋トランスフェリ
ン２μ９／−十エタノールアミン２０μＭ＋セレナイト
２，５Ｘ　１０−”　Ｍ　）で培養した。その培養清４
８０＃ｌｌ！を得て、これを限外濾過（アミコンＰＭ３
０）で１４ｍにした。これを０．０２　Ｍリン酸ナトリ
ウム（＋）Ｈ７，８）透析し、同緩衝液で平衡化したＤ
Ｅ５２ノＪラム（２（−Ｉ１１ｘ１４ｃｍ）にかけた。

未吸着分画（２１ｍ）にヒトモノクローナル抗体が回収
された。酵素抗体法で測定したとき、培養上清には１．
９μｇ／ｄ緒製モノクローナル抗体標品には２８μｇ／
ＩｎｌのヒトＩ（ＩＧが含まれていた。ドデシル硫酸ナ
トリウム−ポリアクリルアミド（５％ゲル）電気泳動に
かけると、分子口約１６万の位置に単一のバンドが形成
された。

参考例２ 抗１−Ｉ　Ｓ　Ｖモノクローナル抗体の性質（１）螢光
抗体法により、モノクローナル抗体の特異性を調べた。

）−Ｉ　Ｓ　Ｖ　ｉ型のＫ２Ｓ株の感染したＶ　ｅｒｏ
細胞をスライドグラス上にアセトンで固定し、これにモ
ノクローナル抗体を含むハイブリドーマ培養上清を室温
で１時間反応させ、洗浄後、さらにフルオレツレインイ
ソチオシアネートでラベルされたヤギ抗ヒトＩ　（Ｉ　
Ｇ　（１ｏ（Ｂ希釈液）を室温で１時間反応させた。こ
うし゛Ｃ作成したスライドを螢光顕微鏡で観察した。そ
の結果、ハイブリドーマＤ３４．７−４．５−１１゜１
」２そしてＨ３の産生するモノクローナル抗体はいずれ
もウィルスの感染した細胞の細胞膜と細胞質に反応し、
非感染細胞には全く反応しないことが判った。さらにＨ
８Ｖの１型のＨａｙａｓｈｉｄａ株やトｌ５Ｖ２型のＹ
Ｓ−／１株の感染した細胞にも反応することが判った。

（２）　　クローニングされたハイブリドーマより産生
されるＭＣＡ、Ｏ３４，Ｈ”２．Ｈ３のサブクラスとし
鎖を検討した。ヒツジ抗ヒト［＋Ｇ１．抗ヒｌ−１ｏＧ
２．抗ヒｔ−ＩｏＧ３及び抗ヒトＩＣｌＧ４を用いてオ
クタ−ローニー法によりサブクラスを見た結果、３つの
ＭＣＡすべてが抗１ｕＧ１抗体とのみ沈降線を生じた。

さらにアルカリ・フォスファターゼ−ヤギ抗−ヒトに鎖
、あるいは抗ヒト人鎖を用いたＥＬＩＳＡにより、Ｏ３
４はに鎖、１」２とＨ３は人類をもっていることが判明
した。

（３）　　酵素抗体法（ＥＬＩＳＡにより、Ｏ３４，Ｈ
２とＨ３のヘルペス属ウィルスに対する反応性を検討し
た。第２表に示した如く、［）３４．Ｈ２゜Ｈ３いずれ
も試験したト＋ｓｖｉ型および２型ウイルスのすべてに
反応し、非感染宿主ＨＥＬ（ｈｕｍａｎ　ｅｎｂｒｙｏ
ｎｉｃ　ｌｕｎｇ）　＠胞には反応しなかった。また他
のヘルペス属ウィルス、ＶＺＶ。

ＣＭＶや、Ｅ　ｐｓｔｅｉｎ　−Ｂ　ａｒｒウィルス（
Ｅ［３Ｖ）にも反応しなかった。従って、これら３つの
モノクローナル抗体は）−ＩＳＶ１型と２型に対して特
異的に反応することがわかった。

（以下余白） 第２表 （４）抗Ｈ８Ｖモノクローナル抗体の免疫沈降分析ヒト
モノクローナル抗体が反応するウィルス粒子の構成成分
が、何であるか決めるために、免疫沈降分析を行なった
。■ｅｒｏＩＩＩｌ胞にｌ−１ｓＶ１型（Ｆ　ｕｋｕｄ
ａ株）または２型（ＵＷ２６８株）を感染さＩｊＨ−グ
ルコサミン又はＳ−メチオニンでアイソトープ標識を行
なった。標識した細胞を、０．０１　Ｍ　　Ｔｒｉｓ　
−１−１（Ｊ　−０，１５ＭＮａＣｆ−１％デオキシコ
ール酸ナトリウム−１％Ｔｒｉｔｏｎ　ｘ　　１００−
０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＯ８）−１ｍＭフ
ェニルメチルスルフォニルフルオライド（＋）Ｈ７，４
）　　（溶解液）によって溶解した。これにモノクロー
ナル抗体を加えて、抗原・抗体複合物を形成させておぎ
、さらにプロティンＡ−セファロース４Ｂによって複合
体を吸着￥ｉ製した。これを、０．１２５ＭＴｒｉｓ　
　Ｈ（Ｊ−１％５Ｏ８−３％２−メルカプトエタノール
−１５％グリセリン（ｐＨ８，２＞で３分間１００℃処
理し、その上清を５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動にかけた。泳！！ＩＩ後ゲルを乾燥させ、Ｘ線フィ
ルムに一７０℃でさらした。結果は第１図と第３表に示
す通りでありハイブリドーマＤ３４と５−１１の産生ず
るモノクローナル抗体は、Ｘ線フィルムのバンドの重な
り具合から、いずれもＨ８ＶＩ型又は２型の糖蛋白Ｂに
対する抗体であることがわかった。同様な実験から７−
４．８−２．８−３も糖蛋白Ｂに対する抗体であること
がわかった。

（以下余白） 第３表 実施例１ 抗ＨＳ　Ｖモノクローナル抗体のウィルス中和活性 モノクローナル抗体のウィルス中和活性（力１ｉＩＩｉ
）は以下のようにして求めた。ウィルス液２５μ磨く培
養液２５μ文中にｌ５ＯＰ　Ｆ　Ｕを含む）と段階希釈
したモノクローナル抗体液２５μ塁、及び補体として新
鮮モルモット血清（７，５％ｗ／ｗ）２５μ塁を、９６
穴マイクロプレート中で混合した。３１℃で６０分間反
応させた後、９６穴マクロプレート中のＶｅｒｏ　ＭＡ
胞単層培養へ移し感染させた。３７°Ｃの炭酸ガス培養
器で２日間培養後、１０％ホルマリンで細胞を固定し０
．１５％クリスタルバイオレットで染色し、各穴のプラ
ークを観察した。ウィルス中和力価は、プラーク数を８
０％減少させるモノクローナル抗体溶液（１ｍｃ＋／ｄ
）の最高希釈倍数をもって表示した。第４表に示すよう
にモノクローナル抗体［）３４は１−４Ｓ　Ｖに結合は
するが、Ｈ８ＶＩ型。

及び２型のいずれをも中和しない。

他の２つのモノクローナル抗体Ｈ２と１−１３は、補体
非存在下において６１型及び２型の両方を中和した。第
５表はモノクローナル抗体Ｈ２の中和スペクトラム（範
囲）を示している。、Ｈ２はｌ−Ｉ　Ｓｖ１型と２型の
用いた株の全てに対して高い中和力価を保有していた。

（以下余白） 第４表 （−Ｃ）で測定した（最終濃度；２．５％而面ｖ／ｖ　
）＋：健常ヒトブールＩｑＧ 第５表 実施例２ Ｈ８Ｖ感染に対する各種モノクローナル抗体の防御効果 段階希釈した抗体溶液（１−）をＨ２，ト１３及びＨｌ
（ＩＧ（ヒトＩｊ　Ｇ）に関しては５匹、Ｄ３４に関し
ては１０匹のＢＡＬ、Ｂｃマウスを１群として腹腔内へ
投与した。３０分後にＨ８ＶＩ型（Ｍｉｙａｎ＋ａＧＣ
＋株）、　　２．５ｘ１０５ＰＦＵヲｌ１２腔内へ投与
し、感後１５目跡で生存率を判定した。結果は第２図に
示した。マウスの感染死を５０％防御するのに必要な抗
体ｍは、各々１」２が０．２０　ｍｏ／ｌｔｇ、　Ｈ３
が０．３５１Ｍｋｉ１１Ｄ３４及びＨｌ（ＪＧは各々４
０．　３８０ｍＱ／　ｋｇ以上であった。それ故、Ｈ２
はＨＵＧの１９００倍の防御効果に相当する能力がある
ことになる。

実施例３ バイプリドーマ培養上清より、ＤＥＡＥセファセル・カ
ラムクロマトグラフィーとトヨパールト（Ｗ−６５によ
って、モノクローナル抗体ｌ−１２を精製した。Ｈ２水
溶液を、０．０２　Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ７，４＞
、を含む０．１４　Ｍ塩化ナトリウム水溶液に十分透析
した。タンパク濃度を５１１’ｊ／１ｔｔｌに調整した
後、ヒト血清アルブミンを終濃度１　Ｉｔｇ／ｄになる
ように加えた。このタンパク混合液を凍結乾燥し、゛ヒ
トモノクローナル抗体製剤を作製した

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗Ｈ８Ｖモノクローナル抗体の免疫沈降分析
の結果を示す、Ｘ線フィルムの説明図である。第２図は
、モノクローナル抗体のＨ８Ｖ感染防御効果（生存率）
を示す図である。 第１図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、単純ヘルペスウィルス１型又は２型感染細胞の細胞
   膜及び細胞質と反応し、非感染細胞とはほとんど反応し
   ないという性質を有する、分子量が約１６万でＩｇＧ型
   の、単純ヘルペスウィルスに対するヒトモノクローナル
   抗体を有効成分とする、単純ヘルペスウィルス感染症の
   予防又は治療剤。 ２、単純ヘルペスウィルス１型又は２型の糖蛋白Ｂに反
   応するヒトモノクローナル抗体を用いる、特許請求の範
   囲第１項記載の単純ヘルペスウィルス感染症の予防又は
   治療剤。