JPS6181782A - 抗ウイルス・ヒト抗体を産生するマウス−ヒトハイブリド−マ及びその製造法並びにその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）　産業上の利用分野 本発明は、抗ウィルス・ヒト抗体を産生するマ「クスー
ヒトハイブリドーマとその製造法、並びにその使用方法
に関する。その目的とするところは、！！’！　霧ｉＴ
ｈヘルペスウィルス Ｈ　Ｓ）、水痘帯状包疹ウィルス（　Ｖ　ａｒｉｃｅｌ
　ｌａｚｏｓｔｅｒ　ｖｉｒｕｓ，　Ｖ　Ｚ　Ｖ　）　
、ナイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏ　　ｖ
ｉｒｕｓ，　ＣＭＶ）　、インフルエン１Ｆウイルス、
狂犬病ウィルス、日本脳炎ウィルス。

おたふくかぎウィルス、Ｂ！ｌ！肝炎ウィルス、ロタウ
ィルス等のウィルス感染症の診断及び治療等に役立つと
ころの抗ウィルス・ヒト抗体を産生ずる、マウス−ヒト
ハイブリドーマを提供することにある。

（Ｃ１１　　従来の技術 細胞融合の技術を用いて、特異的な抗体を産生するがや
がては死滅する運命にあるリンパ球又はＢ細胞（抗体産
生細胞）と、培養器の中で永久に増殖しつづけるミエロ
ーマ細胞（骨髄腫細胞）を融合させることにより、特異
抗体を永続的に産生分泌するハイブリドーマ（融合細胞
）株を樹立させる方法は公知である。かかる方法によつ
°Ｃ作成されたハイブリドーマが産生ずるモノクローナ
ル抗体は、高い精度と信頼度をもつ純粋な化学試薬とし
て、検査試薬や標識試薬，アフィニティークロマトグラ
フィーなどに応用ができる他．各種疾病の治療薬，予防
薬としての応用も期待できるものである。

ところで、モノクローナルなウィルス抗体をｊｑようと
する場合には、ウィルス抗体産生細胞とミエローマ細胞
とを融合さけ、クローニングにＪ、ってウィルス抗体産
生性のハイブリドーマを得ればよいことは一般論として
は知られている。そして、１１体的には、例えば、１，
°１公昭５０ー２２７６ｇ公報には、インフルエンザウ
ィルス又は狂犬病ウィルスで免疫されたＢＡＬＢ／ｃマ
ウスの牌臓柵胞（抗体産性細胞）と、同種のマウスのミ
エローマ細胞とを融合させハイブリドーマを得、これを
クローニゲすることによって、モノクローナルな抗ウィ
ルス・マウス抗体を産生ずるハイブリドーマを得たこと
が開示されている。また、特開昭５８−１７５４８９号
公報には、単１１４ヘルペスウイルスで免疫したマウス
の牌臓細胞とマウスのミエローマ細胞とを融合させ、抗
単純ヘルペスウィルス・マウス抗体を産生するハイブリ
ドーマを１９たことが開示されている。

（ハ）発明が解決しようとする問題点 以上のごとく、抗ウイルス抗体を産生するハイブリドー
マに関しては、具体的な成功例は抗ウィルス・マウス抗
体を産生ずるマウス−マウスハイブリドーマだりである
。しかし、ヒトの病気の診断や治療のためには、同種タ
ンパクである抗ウィルス・ヒト抗体の方が有用でかつ安
全であり、そのためには、ヒトの抗体産性細胞を用いて
マウス−ヒトハイブリドーマやヒト−ヒトハイブリドー
マを樹立する必要がある。しかしながら、動物の場合と
異なり、ヒトの場合には、ヒトをあらかじめ多量のウィ
ルスで免疫し有効に刺激された抗体産生細胞を採取して
細胞融合に用いるといった方法をとるわけにはいかない
ので、適切な抗体産生細胞の採取・調整が困難であると
いった問題等があり、未だ明確な成功例の報告がない。

（４　問題点を解決するための手段（その１）本発明者
らは、抗ウィルス・ヒト抗体を産生するマウス−ヒトハ
イブリドーマを１７ることを目的として鋭意研究を行な
った結果、ｉｎ　ＶｉｔｒＯでマイト−ジエンの存在下
にウィルス又はウィルス由来の蛋白若しくは糖蛋白で感
作したヒトの抗体産生細胞と、マウスのミエローマ細胞
とを融合させるという方°法によって、抗ウィルス・ヒ
ト抗体を産生ずるマウス−ヒトバイブリド−７を１ｑる
ことができた。

本発明においてヒトの抗体産生細胞とは、ヒ１−のリン
パ球（又はＢ細胞）であって、抗体を分泌している又は
分泌づる能力を持った細胞をいう。

これは牌臓、リンパ節、末梢血、骨髄、扁桃、アデノイ
ド等の細胞の中に含まれている。本発明の目的のために
は、いかなるソースのリンパ球でも用いることができる
が、好ましいのは扁桃又はアデノイドから採取されたも
のである。

マウスのミエローマ細胞としては、８−アザグアニン耐
性株を用いるのが有利であり、公知のものとしては、Ｂ
ＡＬＢ／ＣマウスのＰ３Ｘ６３Ａ（１８株、Ｐ３−ＮＳ
Ｉ／１〜Ａｇ４−１株、Ｐ３×６３Ａり８１Ｊ１株、５
Ｐ２１０．Ｊ１４株、Ｐ３Ｘ６３△ｇ　　８．６，５．
３株、　ＭＰＣｌｌ−４５，６，ＴＧ　　１，７株。

５ｐ−ｉ株等がある。

本発明においては、ヒトの抗体産生細胞とマウスのミエ
ローマ細胞とを融合させるに先立って、ヒトの抗体産生
細胞をｉｎ　ＶｉｔｒＯでマイト−ジエンの（Ｐ右下に
感作する。

（ホ）　　作　　用 ヒトの場合、正常人でも各種ウィルスに対する抗体を産
生じ１９る能力のあるリンパ球を有しているが、その数
が少ないためにそのままでは目的とするハイブリドーマ
を得るために利用することができない。また、例えば、
ヒトをインフルエンザワクチンで免疫すると、ヒトの体
内にインフルエンザウィルスに対する抗体を産生ずる抗
体産生細胞がある程度増加するけれども、その増加の程
廓は、目的とするハイブリドーマを効率良く冑るのに必
ずしも充分な程ではない。これに対し、本発明のｉｎ　
ＶｉｔｒＯでヒトの抗体産生細胞を感作する方法によれ
ば、感作により細胞の分化及びＷＪ殖を促進し目的とす
る抗体産生細胞の故を任意に増大させることができる。

かくして感作された抗体産生細胞を用いて細胞融合を行
なうことによって、効率良く目的とするハイブリドーマ
を１昇ることができる。

（へ）　問題点を解決するための手段（その２）本発明
において用いられるウィルスとしては特に限定はなく、
例えば、Ｈ８Ｖ、ＶＺＶ、ＣＭＶ。

インフルエンザウィルス、狂犬病ウィルス、日本脳炎ウ
ィルス、Ｊ５だふくかぜウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、
ロタウィルスを用いることができるが、その後の細胞融
合によって、感作に用いたウィルスに対する抗体を産生
ずるハイブリドーマが得られるので、目的に応じて感作
用ウィルスは選択する必要がある。また感作のためには
、ウィルスそのものではなくても、ウィルス由来の蛋白
若しくはｔｊ！Ｊ蛋白を用いることもできる。

マイト−ジエンは、リンパ球の分化及び増殖を１２進ざ
けるらのなら何でもよいが、例えば、ポークウイドマイ
トージエン（ＰＷＭ）、プロティンΔ、フィトヘムアグ
ルチニン（ＰＨＡ）、コンカナバリンＡがある。好まし
いのはＰＷＭであり、通常２〜２００μ７／ｄ、好まし
くは２０〜１００μび／雇の示で用いられる。

感作の方法・条件は特に限定されるものではないが、抗
原（ウィルス又はウィルス由来の蛋白若しくは糖蛋白）
の温度は１　　［７／ｄ〜１μ≦ｌ／ｄ、。

リンパ球（抗体産生細胞）の溌磨は１ｘ１０５〜１×１
０７個／ｒｒ１１が適当であり、培養温度は３５〜４０
°Ｃで培養時間は４〜１０日、好ましくは６〜８日であ
る。培養液は人、牛、馬等の血清を含むものなら何でも
良いが、特に胎児生向清（Ｆｅ２）を含む培養液（例え
ばＲＰ　Ｍ　Ｉ　１６４０）が好ましい。

かくして得られたウィルスで感作したヒトの抗体産生細
胞とマウスのミエローマ細胞とは、次いで公知の方法に
従って細胞融合せしめられる５例えば、抗体産生細胞と
ミエローマ細胞融を１０：１〜１：１０．好ましくは１
：１〜に３の比率で混合し、適当な細胞融合用溶液、例
えば約３５％ポリエチレングリコール（分子Ｈ１，ｏｏ
ｏ〜Ｇ、　０００程度）および約７．５％ジメチルスル
ホキシドを含むＲＰＭ　Ｉ　１６４０を加えて、空温〜
３７°Ｃで１〜故分間撹拌し、その後１０％ＦＣ３加Ｒ
ＰＭ　Ｉ　１６４０で徐々に希釈し、洗浄の後ｆ−ＩＡ
Ｔ（ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン）選択
培養液にて細胞濃度か　　　　゛１〜５×１０５個／ｄ
となるように調整する。これを０，２雇ず・つ、例えば
９Ｇ穴プレートに分注し、５％ＣＯ２を含む空気中Ｔ：
３５〜３８℃で２〜３週間培養する。ＨＡＴ培た液中で
はハイブリドーマのみが生存し、８−アザグアニン耐性
のミエローマ細胞及びミエローマ同士の融合細胞は生存
し得ないく未融合の抗体産生細胞は数日で死滅する。）
培養後、培養液中の抗体価をチェックし、目的とする抗
体を産生じているハイブリドーマのみを選択し単離する
（クローニング）。培養液中の抗体価のチェックは、ラ
ジオイムノアッセイ法（Ｒ１へ）、酵素抗体法（ＥＬＩ
ＳΔ）、螢光抗体法などの、抗原への抗体の結合そのも
のを検出する方法と、ウィルスの生物活性を阻害する抗
体の活性をみる方法等で行なうことができる。クローニ
ングによって選択された、本発明の抗ウィルス・ヒト抗
体を産生ずるマウス−ヒトハイブリドーマは、凍結して
保存することができ、また、これを適当な方法で大釘に
培養することもできる。かかるハイブリドーマのレルラ
イン（細胞株）又は複製された細胞も本発明の範囲に含
まれるものである。

また、クローン化されたハイブリドーマと実質的に同一
、の抗ウィルス・ヒト抗体を産生ずる限り゛、その変異
株等も本発明の範囲に含まれる。

（ト）　　発明の効果 本発明のハイブリドーマを、適当な方法で大量に培養す
ると、培養上清から抗ウィルス・ヒト抗体を得ることが
できる。また、このハイブリドーマを動物に移植して腫
瘍化し、その腹水や血清から抗ウィルス・ヒト抗体を得
ることもできる。抗ウィルス・ヒト抗体の精製は、モノ
クローナル抗体を用いるアフィニティクロマトグラフイ
ー等の方法によって行なわれる。

（チ）以下、実施例により本発明を詳述する。

実施例１　（Ｈ８Ｖに対するモノクローナル抗体を産生
ずるハイブリドーマ） （１）Ｈ８Ｖ抗原の作製 単層に増殖したＶ　ｅｒｏ細胞（約２　Ｘ　１０８個）
に。

４．４ｘ　１０’　Ｐ　Ｆ　Ｕ　／蛇のＨ８Ｖ　（Ｋ２
Ｓ株）を接種した。３７℃で２時間吸着させたのち、２
％ウシ血清を含むＭＥＭ培地で２４時間培養した。この
細胞をリン酸緩ｔ１１１生ｉｌ１食塩水で洗浄したのら
、超音波により細胞を破壊した。これを６００Ｏｒｐｍ
で３０分間遠心した上清を得これを３０％シヨ等溶液の
上に重層し、３０００Ｏｒｐｍで３時間遠心した。遠心
管の底に沈澱したベレットをウィルス抗原として用いた
。

（２］Ｈ３Ｖによるリンパ球感作 ヒトの扁桃リンパ球を１８養液Ａ　（ＲＰＭ　Ｉ　ｌＧ
４０＋２０％胎児牛血清＋２０７１１Ｍ　　ＨＥＰＥＳ
＋２ｍＭグルタミン＋１ＴｒＬＭＮａピルビン酸＋　０
．０２　ｍｙ／ｍ（ｌセリン＋８０μ７／ｍ１ゲンタマ
イシン）に：’！遊さけた。細胞濃度は１７ｘ　１０５
個／Ｉｎ１であった。このキ■胞浮遊液をＬＺｄずつ、
培養プレート（２４穴）の１２穴に入れた。それらを３
穴ずつ４群に分け、第１群は無添加、第２群にはＨ３Ｖ
　（Ｋ２Ｓ株。

部分精製標品）　１（３ｎｇタンパク／ｄ、第３群には
ＰＷｌｖ１２０μび／威、第４群には同量のＨ８ＶとＰ
ＷＭを添加した。この培養プレートを３７℃、５％Ｃｏ
２−空気で６日間培養した。

（３）　　マウス・ミエローマ細胞Ｐ３ｘ６３Ａ９８Ｕ
　１株（Ｐ３Ｕ　Ｉと略記する）とのｉｌｌ胞融合。

前もつＵ　Ｐ　３　Ｕ　１を培養液Ｂ　（ＲＩ’Ｍ　Ｉ
　１６４０＋１０％胎児牛血清＋２　ｍＭグルタミン＋
８０μｇ／ｄゲンタマイシン）中で培養しＣおいた。使
用時の細胞濃度は６Ｘ１０５個／ｄであった。上記（２
）の感作リンパ球（３穴を一緒にした）４群とＰ３ＵＩ
を、それぞれ別々に無血清ＲＰＭ　Ｉ　１６４０で２回
洗浄した。各群のリンパ球と５　ｘ　１０’個のＰ３Ｕ
　Ｉとを試験管の中で一緒にした。１５００ｒｐｍで５
分間遠心し、上清を捨てた。細胞ベレットを、試験管を
たたくことによって、よく分散させた。これに０．５ｄ
のポリエチレングリコール液（ＲＰＩＶＩ１１Ｇ４０５
．７５蛇＋ポリエチレングリコール１０００３．５ｄ＋
ジメチルスルホキサイド０．７５　ｍｆり　　（ＰＥＧ
液と略記する）を加えて、細胞をゆるやかに浮遊させた
。１分後に０．５ａｅ　＋　ＲＰ　ｆｖｌ　Ｉ　１６４
０を加え、さらに１分後に１ｄＲＰＭＩ、ざらに２分後
に屯ｄのＨＡＴｊ８養液（ＲＰＭ　Ｉ　１８４０＋２０
％胎児牛血清＋８０μｇ／ｄゲンタマインシン＋９５μ
Ｍヒボギサンチン＋０．４μＭアミノプテリン＋　１．
６μＭチミジン）、さらに２分後には４　ｍｅのＨＡ　
Ｔ　１８た。１￥を加えた。最後に、ｌ−Ｉ　Ａ　Ｔ　
１８養液で２５ｍ細胞浮遊液どした。これを培養プレー
ト（９６穴）１枚に蒔いＣ１３７℃、５％ＣＯ２含有空
気中で培養した。

−週間毎に半量の培養液を新しいｌ−Ｉ　Ｔ培養）１ｋ
〈トＩＡＴからＡを除去したもの）で交換していきハイ
ブリドーマを得た。

（４）　　ヒトＩ（ＩＧと抗Ｈ８Ｖ抗体の測定酵素抗体
法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。

ヒｔ−ＩｑＧを測定するためにヤギ抗ヒトＩＯＧ抗体（
１０μ９／ｒｄ’）を、あるいは抗Ｈ８Ｖ抗体を測定す
るためにＨ８Ｖ　（Ｋ２Ｓ株）１μびタンパク／ｒＲ１
をそれぞれファルコン・ミクロテスト■の９６穴プレー
トに固定した。このプレートにハイブリドーマ培養上清
６０μ文を加えて、室温で１時間放置した。０．０５％
Ｔｗｅｅｎ２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水（Ｔｗ
ｅｅｎ　−Ｐ　Ｂ　Ｓ　）で３回洗浄ののち、ヤギ抗ヒ
トＩ（ＩＧ抗体−アルカリフォスファターゼ（２０００
倍希釈液）を６０μ文加えて、室温で１時間反応させた
。さらにＴｗｅｅｎ−ＰＢＳで３回洗浄しＩｃのら、Ｐ
−ニトロフェニルフオスクエ−１−を１Ｍジェタノール
アミン＋１　　ｍＭ　　ＩＶＩ（１（Ｊ２のｐＨ９，８
溶液に０．６ｍｙ／１ｒｄｌの割合で溶かしたｉ８　Ｗ
４１００μ文を加えた。３０分から６０分後に４０５ｍ
μの吸光度を測定し、標準１ｇＧ液あるいは標ハＩ−Ｈ
ＳＶ陽性血清との比較から、その値を算出した。

全群とも９６穴プレ一ト１枚に細胞を蒔き、９６穴中の
、ハイブリドーマが成育してきた穴の数、さらにそのう
ちヒトＩｇＧを産生しているハイブリドーマをもつ穴の
数、そして抗１−Ｉ　Ｓ　Ｖ抗体を産生している穴の数
を第１表に示した。第１表には、３つの扁桃より、リン
パ球を分離した例を示したが、どの場合にもＨ３ＶとＰ
ＷＭを加えたとぎに最も多くの抗Ｈ３Ｖ抗体産生ハイブ
リドーマが成育した。

（以下余白） 第１表 （以下余白） （５）抗Ｈ３Ｖ抗体産生ハイブリドーマのクローニング クローニングは限定希釈法を用いた。抗Ｈ８Ｖ抗体陽性
の穴より細胞を取り出し、細胞数を数え培養液Ｂを用い
１個／穴あるいは１００個／穴細胞を蒔いた。２週間後
に細胞が十分増殖したの０、の上清に抗Ｈ８Ｖ抗体があ
るか否かをＥＬＩＳＡによって測定し抗Ｈ３Ｖ抗体産生
ハイブリドーマをクローニングした。

（６）　　抗Ｈ３Ｖモノクローナル抗体の調製得られた
ハイブリドーマの１つ［）３４を無血ン４培地ＩＴＥＳ
　（ＲＰＭ　１１６４０２容＋ダルペツトｆｖｌ　６Ｍ
１容十Ｆ１２１容＋インシュリン８．５μび／１ｒｄｌ
＋トランスフェリン２μ７／ｄ十エタノールアミン２０
μＭ＋セレナイト２．５ｘ　１Ｏ−ｆｌ　Ｍ　）で培養
した。

その培養上清４８０ｄを得て、これを限外濾過（アミコ
ンＰＭ３０）で１４ｍ１２にした。これを０．０２１ｖ
ｌリン酸ナトリウム（＋）Ｈ７，８）透析し、同緩廚液
で平衡化したＤＥ５２カラム（２ｃｍ×１４ｃｍ　）に
かけた。

未吸着分画（２１ｄ）にとｌ〜モノクローナル抗体が回
収された。酵素抗体法で測定したとき、培養上で西には
１．９μｌＪ／戒、精製モノクローナル抗体標品には２
８μ９／ｒｄのヒトＩ（ＩＧが含まれていた。

ドデシル６ｊｔ　Ｍナトリウム−ポリアクリルアミド（
５％ゲル）電気泳動にかけると、分子量約１６万の位置
に単一のバンドが形成された。

（刀　抗Ｈ８Ｖモノクローナル抗体の特異性螢光抗体法
により、モノクローナル抗体の特異性を調べた。Ｈ３Ｖ
Ｉ型のＫ２Ｓ株の感染したベロー細胞をスライドグラス
上にアセトンで固定し、これにモノクローナル抗体を含
むハイブリドーマ培養り清を室温で１時間反応させ、洗
浄後、さらにフルオレッセインイソチオシアネートでラ
ベルされたヤギ抗ヒトＴ（ＩＧ（１０倍希釈液）を室温
で１時間反応させた。こうして作成したスライドを「ご
光顕微鏡で−ｒＡ察した。その結果、ハイブリドーマ［
）３４，７４．モして５−１１の産生ずるモノクローナ
ル抗体はいずれもウィルスの感染した細胞の細胞膜と細
胞質に反応し、非感染細胞には全く反応しないことが判
った。ざらにＨ３Ｖの１型のＨａｙａｓｈｉｄａ株やＨ
８Ｖ２型のＹＳ−４株の感染した細胞にも反応すること
が判った。

実施例２　（ＶＺＶに対するモノクローナル抗体を産生
ずるハイブリドーマ） （１１ＶＺＶ抗原の作製 ヒト胎児肺細胞（Ｈｅ　Ｌ）の培養液中にＶＺＶ（Ｋ　
ａｗａｇｕｃ旧株）を接種し、細胞変性が現れてきた時
点で細胞をラバーポリスマンで取り出した。

細胞を１分間超音波処理して破壊したのち、３０００ｒ
ｐｍで１０分間遠心した。その上清をセシウム・クロラ
イドの層に乗せて、２３００Ｏｒｏｍで３時間遠心した
。密度１．４と１．２の間に■Ｓｖは集まった。このウ
ィルス分画をさらに２５０００ｒｐｍ、　１時間半の遠
心で沈澱させ、沈澱をリン酸緩衝生理食塩水に分散させ
て、５秒間３回超音波処理を行なった。かくして得られ
たウィルス標品を紫外線照射によって不活化したのち、
以下の実験に用いた。

（２］ＶＺＶによるリンパ球の感作とハイブリドーマの
作製。

ヒト扁桃リンパ球を１８養液八に２．６Ｘ　１０”個／
ｄに）ネ遊させた。これに上記（１）で得られたＶＺＶ
（最終温度１１ｎＯプロティン／戒）とＰＷＭ（２０μ
’Ｊ　、’　ｍ（！　）を加えＣ１３，５，または７日
間培養した。こうして感作したリンパ球を実施例１−（
２）と同様にして細胞融合した。こうして形成されてき
たハイブリドーマの培俄上清について、Ｉ（ＩＭあるい
はＩｇＧ抗ｖＺＶモノクローナル抗体を酵素抗体法によ
って測定した。その結果を第２表に示した。

第２表より、ＶＺｖに対するＩ（ＩＧ型のモノクローナ
ル抗体を産生ずるハイブリドーマが得られていることが
わかる。

（以下余白） 第２表 本　感作リンパ球とＰ３ＵＩとを、１）ＥＧ浴溶液入れ
ないで６合したしのである。すなわら、ハイブリドーマ
を形成しない感作リンパ球では１（ＩＧＩＡＶＺＶが陽
性にならないことを確認するための、コントロールであ
る。

なお、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）の場合ら、実施
例２と同様の方法で、同様の効率でハイブリドーマが形
成された。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトの抗体産生細胞とマウスのミエローマ細胞とを
   融合させて得られた、抗ウィルス・ヒト抗体を産生する
   マウス−ヒトハイブリドーマ及びそれに由来する細胞株
   。 ２、抗ウィルス・ヒト抗体が、単純ヘルペスウィルス（
   ＨＳＶ）又は水痘帯状包疹ウィルス（ＶＺＶ）又はサイ
   トメガロウイルス（ＣＭＶ）に対する抗体である、特許
   請求の範囲第１項記載のマウス−ヒトハイブリドーマ及
   びそれに由来する細胞株。 ３、抗ウィルス・ヒト抗体がＩｇＧ抗体である、特許請
   求の範囲第１項記載のマウス−ヒトハイブリドーマ及び
   それに由来する細胞株。 ４、ヒトの抗体産生細胞が扁桃又はアデノイドから採取
   された細胞にある、特許請求の範囲第１項記載のマウス
   −ヒトハイブリドーマ及びそれに由来する細胞株。 ５、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでマイト−ジエンの存在下にウィ
   ルス又はウィルス由来の蛋白若しくは糖蛋白で感作した
   ヒトの抗体産生細胞と、マウスのミエローマ細胞とを融
   合させることを特徴とする、抗ウィルス・ヒト抗体を産
   生するマウス−ヒトハイブリドーマの製造法。 ６、マイト−ジエンがポークウイドマイトージエン（Ｐ
   ＷＭ）である、特許請求の範囲第５項記載のマウス−ヒ
   トハイブリドーマの製造法。 ７、感作を胎児牛血清を含む培養液中で行なう、特許請
   求の範囲第５項記載のマウス−ヒトハイブリドーマの製
   造法。 ８、感作に用いるウィルスが単純ヘルペスウィルス（Ｈ
   ＳＶ）又は水痘帯状包疹ウィルス（ＶＺＶ）又はサイト
   メガロウイルス（ＣＭＶ）である、特許請求の範囲第５
   項記載のマウス−ヒトハイブリドーマの製造法。 ９、増殖せしめた細胞から抗ウィルス・ヒト抗体を得る
   ために、増殖用の細胞として、ヒトの抗体産生細胞とマ
   ウスのミエローマ細胞を融合させて得られた、抗ウィル
   ス・ヒト抗体を産生するマウス−ヒトハイブリドーマ及
   び／又は該ハイブリドーマに由来する細胞株を使用する
   ことを特徴とする方法。