JPS6255020A - 木本性植物の大量増殖法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は永年作物である木本性植物、例えばポプラ、ユ
ーカリ、アカシア、ウルシ、パラゴム等の産業上有用な
木本性植物を苗条原基（５ｈｏｏｔ　ｐｒｉｍｏｒｄｉ
ａ　）を用いて一迅速、大量に増殖する方法で、林業、
農業、造園・緑化産業分野において、遺伝的に優秀な品
種の大賞増殖法に関するものである。

（従来技術） 木本性植物を増殖する方法には種子による有性生殖法と
、無性繁殖法（挿木、組織培養〕の二種類があるが、前
者の場合、他家受精植物では花粉が一定でないため必ず
しも親の性質が子供に伝わらない。また優秀な椎間雑種
や雑種強勢によって生まれｆｃＦｔ　雑種（−代雑種）
、さらには倍数体植物等では親の遺伝子型は子供にその
まま伝わらない。一方、無性繁殖法には古くよシ挿木法
があり、優秀な品種の増殖法として一般化している。た
だ、この場合増殖スピードが遅いこと、発根性の低さ、
挿穏を大量に生産する念めの採穂園の設定が必要である
こと、さらには挿木の時期が限られること等の理由によ
シ、あらゆる木本性植物の増殖法として適切とは言えな
い。また最近目ざましい進歩をとげている組織培養は植
物の茎、茎頂、葉、機端等を滅菌した後、植物生長ホル
モン等を添加した人工培地でカルス（未分化組織集塊）
化しｔ後、植物体を再分化する技術であるが、増殖の過
程で、染色体変異や遺伝子突然変異が多発するため親と
同じ性質の子供を大量に増殖することが雌かしい場合が
ある。また長期間カルスを継代していると、一般に分化
能が低下して増殖率が低下することが多い。

なお、木本性植物においては、特にポプラ、ユーカリ等
の広葉樹において、大量増殖の目的で茎頂、側芽、子葉
、胚軸、茎等のさまざまな器官の組織培養例がある。し
かし、茎頂の場合は、いったんカルスを誘導し、苗条を
再分化させるため、どうしても得られた苗条の変異性が
問題となる。一方、茎等から不定苗条を直接誘導する方
法へある（いわゆる、マイクロプロパゲーション〕が、
この場合、連続的に苗条を得るためＫは、適当な間隔で
新しい茎切片等勿絶えず植付けることが必要であるため
、商業的な大量増殖法としては大きな欠点を持つ。

また、針葉樹等の裸子植物については、若い子葉を組織
培養することにより胚様体（ａ子の持つ胚に類似した組
織で、２極性、すなわち、苗条と根の２つの原基を有す
る器官）を作出することが可能である。例えばダグラス
７アー（Ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａ　ｍｅｎｚｉｅｓｉｉ
　）を用いて、ＭＯＥｌｔａｆａＭｏ等は振とり培養に
よって、これの胚様体を作出している（米国特許、−４
，２１７，７３０，１９８０年８月１９日）。しかし、
この場合も通常の組織培養（器官形成法ンよシは再分化
期間が短いと言う長所はあっても、完全な植物体になる
率は１５〜３０％と低い。さらに欠点としては、常に、
若い子葉を使うため、種子が多量に必要である。従って
、特定な優秀な個体を、種子を使わないで大量に増殖す
る技術にはならない。

以上のように通常の組織培養法では、木本性植物の特定
な個体を、遺伝的に安定かつ迅速に大量増殖する技術が
確立されていないのが現状である。

また近年木本性以外の一年生植物の増殖法として苗条原
基法が提案されている（田中隆荘らＪｐｎ、Ｊ、Ｇｅｎ
ｅｔ、　Ｖａｌ、　５８．４５〜７０　（１９ａ５大特
開１Ｉ８５９−１３２８２３号公報］。

苗条原基とに田中隆荘がキク科の１年生植物ハブロパッ
プスを用いて最初に発見した苗条の「原基」を有する細
胞の半球状集塊体を指し、次のような特徴をもつもので
ある。一般には苗条原基は茎頂の回転培養によって作出
される。

これは色素体を持つ細胞が層化していない直径３０〜１
．　ＯＯ０μｍの細胞集塊の１次苗条原基と、２層化し
ている直径１００〜３０００μｍの２次苗条原基からな
る、そしてこれを循環して栄養体増殖することにより細
胞の半球状集塊体、すなわち「苗条原基」を迅速かつ大
量に増殖できる方法で１）スイカ、トウモロコシ、イネ
、アサガオ、センブリ、ケシ等の一年生植物に応用され
ているが永年生の木本性植物への応用に関しては未だ提
案されていない。

（発明の目的） 本発明の目的は従来公知の有性生殖法、無性繁殖法の問
題点を解消し、−半生植物で開発された苗条原基法の木
本性植物の大量増殖法への適用を目的とする。他の目的
は木本性植物の遺伝子型および染色体型を世代をこえて
維持しながら必要な時に大量増殖する茎頂部の培養法を
目的とする。別の目的は木本性植物の中で有用な種（５
ｐｅｃｉｅｓ　）や優秀な品種（ｖａｒｉｅｔｙ　）の
大量増殖に適用できる苗条原基法を提供することを目的
とする。また他の目的は他家受精植物、種子の堆れない
５倍体、異数体、雌雄異株植物の雄性個体、さらには雑
種強勢によって生まれたＦ！　雑種や種間雑稲、層間雑
種のように遺伝学上雑種性の高い木本性植物の遺伝子型
を多年にわたって維持増殖する方法およびこの維持、増
殖の基本となる本体（苗条原基）における２次代謝産物
の生産に応用しうる方法を提供することを目的とする。

更に他の目的はウイールスフリーの木本性植物体を提供
することを目的とする。

〔発明の構成〕

本発明は、木本性植物の茎頂部を摘出し、これを無機塩
類組成物および植物生長ホルモンを含む人工培地に移植
し、１５〜３０℃の温度、２、０００〜２０，０００ル
クスの興明度の光照射の下に０．５〜１０　ｒｐｍの回
転数下に回転培養し苗条原基を増殖し、得られた苗条原
基を静置培養することによシ木本性植物を遺伝的に安定
な状態で大量に増殖することを特徴とする木本性植物の
大量増殖法である。

つぎに、本発明の増殖法を詳しく説明する。

１）苗条原基作出法 木本性植物の茎頂を殺菌液で殺菌し、滅菌水で洗浄した
後、クリーンベンチ内において実体顕微鏡下で茎頂部を
摘出しこれを無機塩類組成物および植物生長ホルモンを
含む人工液体培地に移植する。なおこの場合、ココナツ
ミルク等の分化を促進する有機物を添加することもめる
。

回転培養の条件は、温度が１５〜３０℃、照明度が２，
０００〜２０，０００ルクス、および回転数が１５〜５
　ｒｐｍである。

人工培地の組成は植物によって、かなシ変化するが、基
本となる無機塩類組成物はガンボーグ（Ｇａｍｂｏｒｇ
　）のＢ５（以下Ｂ５と称すン等の培地に含まれる組成
物を若干組成を変えて用いることができる。植物生長ホ
ルモンとしては、ナフタレン酢！（ＮＡＡ）、　　λ４
ジクロルフェノキシ酢＃Ｉ（２，４−Ｄ　Ｊ、インドー
ル−３−酢酸（工ＡＡ　）、インドール−３−プロピオ
ン酸（ＩＰＡ）、インドール−５−酪酸（よりＡ）、フ
ェニル酪酸＜ＰムＡ）、ベンゾフラン−３−酢酸（ＢＦ
Ａ）、フェニル酪酸（ＰＢＡ）等のオーキシン類および
ＫＴ−３０（協和醗酵株式会社製）、６−ベンジルアミ
ノプリン（ＢＡ）、ゼアチン（Ｚ）等のサイトカイニン
類を使用しうる。培養温度は１５〜３０℃特に２０〜３
０℃の恒温が適当であシ、これよシ低い温度では増殖の
進行が遅れ、また温度が尚すぎると生長が悪く、安定し
なくなる。苗条原基の培養には強い光が必要であシ、連
続した２、０００〜２０．０００ルクスの照明夏が適当
である。この範囲外の照明度は苗条原基の生長を悪化さ
せる。

さらに培養は回転培養する点が特徴であシ、靜機械製作
所製〕の円周面及び円周面から回転軸方向に数段にわた
って、２０４本の試験管ニ入れた茎頂部を移植した培地
を斜めに、かつ回転車が回転しても試験管にたえず一定
の方向を向くように載置し、上方から光線を照射するよ
うにする。また、回転数はα５〜５　ｒｐｍのゆるやか
な回転がよい。この場合、回転数が大き過ぎ”るとカル
スの部分が多くなシ、逆に小さくなると早生分枝の部分
が多くなシ、いずれにしても好結果は得られない。

本発明の増殖法は、特にポプラ、ユーカリ、アカシア類
に応用すると、活発に増殖する苗条原基が得られる。表
−１，２，３，４には、培地の組成および濃度を変化さ
せることによって、これらの苗条原基が形成される最適
培地の実施例を示した。表１．２．３および４において
Ｏ印の部分が苗条原基が出現し九ホルモン濃度の組合せ
部分であシ、ｘ印の部分の組合せにおいては早生分枝が
出現し、白色（無印２０部分の組合せにおいてはカルス
が出現した。

苗条原基の増殖が最も速く、かつ安定している人工培地
は次のとおシであった。

（υポプラ ■Ｎムム：α０２８９／ｌ＋Ｂム：α２ａｇ／ｌ■Ｎム
ム：　（ＬＯ２８１／Ｌ＋　ＢＡ：α４Ｍ？／Ａ■Ｎム
ム：　（ＬＯ５８１／ｌ＋　ＢＡ：α４Ｊｌｆ／Ａ■Ｎ
ＡＡ　：　ｃＬ２８１／ｌ　＋　ＫＴ−３０：　Ｑ、２
ＨＩ／を表−１，２に示すように植物生長ホルモンの組
合せによって、４組の最適培地が判明した。なお、回転
数Ｆｉ２　ｒｐｍが最適であった。

表−１ポプラの苗条原基が形成される最適ホルモン濃度
但し、Ｎムム：ナフタレン酢酸、ＢＡ：６−ベンジルア
ミノプリン Ｒコニ苗条原基　ロ：カルス　［Ｉ］＝早生分校表−２
ポプラの苗条原基が形成される最適ホルモン濃度但し、
ＫＴ−３０（サイトカイニン系）、Ｎムム：す７タレン
酢酸 コニ苗条原基　　ロ：カルス　　図：早生分枝（２）ユ
ーカリ ■Ｎ　Ａ　Ａ　：　Ｏｑ／　Ｌ　＋　Ｂ　Ａ　：α２ｔ
ｑ／ｌ■Ｎムム：α０２ｘｑ／ｌ＋ＢＡ　：α０２ｑ／
Ｌ■ＭＡム：　（ＬＯ２Ｍ９／ｌ＋ＢＡ　：α２ｑ７１
表−３に示すように、３組の最適培地が判明し九。なお
、回転数は１　ｒｐｍが最適であった。

表−３ユーカリの苗条原基が形成される最適ホルそン但
し、ＢＡ：６−ベンジルアミノプリン、Ｎムム：ナフタ
レン酢酸 回転数：　１　ｒｐｍ コニ苗条原基　　ロ：カルス　　区：早生分枝なお、こ
こでは、２種（Ｂ、　ｓａｌｉｇｎａ　、　　ｎ。

ｇｒａｎｄｉｓ　）のユーカリを使用したが、はぼ同結
果を示した。

（３）アカシア ■２．４−Ｄ　：　［ＬＯ２ｑ／ｌ＋ＢＡ　：　（ＬＯ
２ｊｌＰ／Ｌ■２．ａ−Ｄ　：　［ＬＤ　２ｑ／４＋Ｂ
ム：［１Ｌ２Ｉｑ／Ｌ表−４に示すように２組の最適培
地が判明した。なお、回転数は２　ｒｐｍが最適であっ
た。

表−４アカシアの苗条原基が形成される最適ホルモン濃
但し、ＢＡ：４−ベンジルアミノプリン、２．４−Ｄ：
　２−４ジクロルフ工ノキク酢酸回転数：２ｒｐｍ コニ苗条原基　　ロ：カルス　　図：早生分枝得られた
苗条原基は半球状の集塊で１）、例えば、ポプラは緑色
の塊状体でその基部付近にヂカルスを伴う。第１図は培
養後約４０日目のポプラの画状原基の写真である。ユー
カリでは黒紫色の塊状体で、同様にその基部にカルスを
伴う。第２図は培養後約６カ月目のユーカリの苗条原基
の写真である。アカシアも同様である。

また、これらの苗条原基は、現在すでに１０〜１２力月
にわたシ活発に維持および増殖を続けている。

次に、これらの苗条原基を苗化用の固型培地に移植し、
１５〜３０℃の温度、１０００〜４、　ＯＯＯルクスの
照明度下で静置培養すると、微小な茎葉体を多数生じる
。さらに、これを発根培地に移植すると発根し、完全な
植物体になる。なお、植物体ができるまでの期間は、静
置培養後約２０日であシ、この植物の遺伝子屋染色体型
および表現型は親植物と全く同一でるる。

苗条原基は、初期には表面がなめらかで、直径４０〜７
０μｍの隆起を有しく第３図参照）で、その構成細胞が
一様に小屋の多角細胞であって、細胞の分裂軸が重層、
並層、斜層等の多角的分裂を行う。この苗条原基（１次
面条原基）は、次第に大きくなシ、直径２００〜１００
０μｍになると（第４図参照〕、表皮系と皮層系との２
層に分化し、最外層は１〜２１Ｎ８胞で、細胞の分裂軸
は並層分裂のみが見られ、それよシ内側の内層系は多数
のやや大きな細胞の集まシで、この細胞の内部にはよく
発達した葉緑体や液胞、貯蔵物質顆粒が多数見られる。

さらに、この苗条原基（２次百条原基）は直径約４００
μｍ以上の台形状隆起物となシ、この時期の最外層の表
皮系の細胞内には大きな油体が認められ、内層の内皮系
の細胞内では葉緑体の数が増加し、液胞も大きく発達し
ている。この時期になると、この台形状隆起の周シに数
個の前記の　−１、次百条原基を新生する。以上の経路
で、苗条原基は増加し、１力月で約４倍になる。

一方、苗条原基では色素体等の２次代謝意物が盛んに生
産されるため、従来のカルス細胞法で生産されなかった
有用物質の生産方法としても有効な方法と言える。

なお、苗条原基は１力月に約１回の継代培養によって、
遺伝的に安定な状態（突然変異率は自然突然変異率と同
率の１０−６オーダである）で、迅速に大量増殖可能で
ある。

従って本発明によシ、木本性植物を多年にわたって、栄
養体で、遺伝的に安定な状態で維持増殖し、必要に応じ
てその個体群を大量に生産する技術が開発された。その
増殖速度は極めて高く、広葉樹の場合、１個の茎頂から
、年間約４１２中１７　Ｘ　１０層倍の苗条原基が得ら
れ、さらにこれとほぼ同数の植物体を大量生産すること
が可能になった。

以下、本発明の実施例を詳細に説明する。

■実施例１（ポプラＰｏｐｕ１ｕａ　ａｈａｒｋｏｗｉ
ｅｎｓｉｓ　ＸＰ、ｏａｕｄｉｎａ　） ■増殖方法 人工培地は表−５に示すＢ５改変培地を使用し九。なお
、ここで使用したＢ５の基本培地とはガンボーグが１９
７５年に発表した成分組成を意味し、Ｏ印の化合物が今
回改変した物質である。なお、植物生長ホルモンの適正
濃度は２５基盤目法で検討した。

表−５ガンボークＢ５改変培地（ポプラ用〕単位：（ｑ
／Ｌ） まず、温室または圃場で活発に生長しているポプラのミ
ドリ部分を先端から約２０ｍ切シ取シ、滅菌水で洗浄し
た後、クリーンペンチ内で実体顕微鏡下でピンセットお
よびメスを用いて、茎頂部（生長点付近）ｆｔ１１５〜
１−摘出する。

この摘出した茎頂部を表−５に示す液体培地に移植する
。培養は、ＢＳ改変培地２５−を分注しｆｉ　３０　ｍ
　（φ）Ｘ２００ｍｓの試験管内で行い、これを２０〜
３０℃、２０００〜２へ０００ルクス、２　ｒｐｍで回
転培養する。培養開始後約４０日で直径約１０＋ｗの緑
色の苗条原基集塊が得られる。以後、約１カ月ごとにこ
の苗条原基を直径約５〜１０−に分割して、前記の新鮮
な培地に植え継ぎ増殖する。増殖速度は、一度苗条原基
ができてしまえば、１月で約４倍になった。従って、月
数をｎとすると、苗条原基の増殖数は４ｎ　で表すこと
ができる。すなわち、１年間で約４１＠個中１７００万
個の苗条原基が生産されるため、これを後述する苗化培
地に移植すれば、その植物の持つ染色体型、遺伝子型を
維持しながら、同質の植物体を植物工場的に迅速大量増
殖できる。

■苗条原基の苗化法 苗条原基から完全な植物体を得るには、表−５のＢ５改
変培地から、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、６−ベンジル
アミノプリン（ＢＡ）およびＫＴ−３０を除いた基本培
地に寒天８２／ｌ（α８係〕、ナフタレン酢酸、６−ベ
ンジルアミノプリン、−１九ｔｉゼアチンを表−６，７
に示す組合せで添加する。

表−６ポプラの苗条原基の再分化培地 但し、ＮＡＡ　：ナフタリン酢酸、 ＢＡ：６−ベンジルアミノプリン ロ：苗条出現　　　ロ二一部苗条 表−７ポプラの苗条原基の再分化培地 （基本培地二Ｂ５） 但し、ＮＡＡ：ナフタリン酢酸、２：ゼアチンロ：苗条
出現　　　ロ：一部苗条 例えば、表−６では ■ＮＡＡ：Ｏｑ／ｌ＋ＢＡ：α０２η／ｌ■ＢＡＡ：α
ＯＯ１ｑ／Ｌ＋Ｂｈ：α０２岬／ｌ■ＨＡム：［ＬＯＯ
１ｑ／ｌ＋ＢＡ：Ｂ２−岬／ｌの組合せが再分化培地と
して適当であった。

また、表−７では、ＢＡＡ　：　０１９　／　ｔ　＋Ｚ
　：　２ｘｑ／Ｌの区において再分化が起った。なお、
ｐＨ（酸度〕は５．５〜５−８に調整し固型培地を用い
る。またこの培地を１００−の三角フラスコに４０−分
注し、この上に直径が５〜１０■の苗条原基集塊を静置
する。この時の培養条件の温度は１５〜３０℃、照明度
は１，０００〜４，０００ルクス（１６時間明期＋８時
間暗期；である。この結果、２〜５週間で５〜４■の茎
葉体が苗条原基集塊１個当九り８〜１５本生じる。第５
図は移植後５週間目のポプラの苗条原基の苗化した状態
を示す写真である。

次に、この苗条が約１０〜１５−に生育した時に、との
苗条を基部から切シ取り、寒天６１／１（ｒＪ、６％〕
を含む、前述の基本培地（ホルモンフリーの状態）に移
植して発根させる。この場合、寒天の濃度が低いのは培
地を軟くして発根しやすくすると共に、移植に際して根
切れを防止し移植後の成長を促進するためである。寒天
濃度はα４〜［１６９６が好ましい。なお２〜３週間た
って十分発根した状態になつ九ら、この植物をパーミキ
エライトの入ったポットに移植し、１〜２週間週間低下
で馴化した後、温室へ移し、普通の養苗法に従って強健
な苗木に育てる。

なお、本発明の苗化法は田中隆荘（１９８３）が１年生
植物の苗条原基を苗化する方法と次）　の点で異なる。

すなわち、氏はＢ５基本培地を１７５に稀釈したものを
使用して、苗化させているが、本発明においては無稀釈
のまま使用し、ホルモン濃度のみを変えている。また、
苗条出現の培地と発根出現の培地を２種類用意した点に
特徴を持つ。これによシ、ポプラ、ユーカリ、アカシア
等の苗条の生長は促進された。多分、栄養源が豊富であ
ることが原因しているものと推察される。また、発根培
地に移植することによシ、植物の発根ＩＫは数十パーセ
ント高まり、かつ発根後の生長促進も認められ、健苗生
産に大いに貢献した。

■実施例２（ユーカリ、？ｕｃａｌｙｐｔｕａ　ａａｌ
ｌｇｎａ　。

１１ｆ、ｇｒａｎｄｉａ　） ■増殖方法 人工培地は表−５（ポプラ用）に示す組成−セ鴫組成に
変更した。すなわち、ＮＡＡは０〜ＣＬＯ２ｎｐ／１％
ＢＡはα０２〜α２　ｑ／　Ｌの範囲内で行った。また
、回転数はポプラと異なシ、１　ｒｐｍが最適であった
が、他の温度、照明度についてはポプラと同条件であっ
た。

ユーカリの場合は、最初の苗条原基集塊（直径約１０　
ｍ　）ができるのに、ポプラに比べると著しく長く約６
カ月を要した。そして、その色は黒紫色を呈した。しか
し、その後は、ポプラと同様、１力月に約４倍の増殖速
度を示し、大量増殖が可能なことを示した。

■苗条原基の苗化法 ポプラと同様、Ｂ５Ｏ基本培地に植物生長ホルモンを表
−８に示すような組合せで添加する。例えば、 ■ＮＡＡ　：　０Ｍ９／ｌ＋ＢＡ　：　ｏ、ｏ　２ｑ／
ｌ■ＮＡＡ：α００１ｑ／ｊ＋ＢＡ：α０２１９／Ａの
時に、苗条Ｏ出現が最高を示した。

なお、他の温度、照明度、発根培地の条件等はポプラと
同等である。

ユーカリでは、最初の苗条原基集塊ができるのに時間が
かかるが、一度できてしまえば、後はポプラと同様、１
月に約４倍の速度で大量に増殖できる。従って、１個の
茎頂部が１年で約４１２中１７００万倍に増加する九め
、十分工場生産が可能となる。

■実施例３（アカシア、ムａａｃｉａ　ａｕｃｒｉａｕ
ｌｉｆｏｒ−ｍｉｓ　） ■増殖方法 表−５に示すＢ５改変培地の植物生長ホルモンの成分だ
けを２５基盤目法で検討した結果、次の組合せで苗条原
基が多数出現した。

■２．４−Ｄ：Ｑ、０２ＭＩＩ／ｌ＋Ｂム：α０２岬／
Ｌ■２．４−Ｄ：α０２岬／Ａ＋ＢＡ：α２　ｍｙ／　
Ｌなお、温度、照明度の条件は、ポプラ、ユーカリと同
様でめったが、回転数は２　ｒｐｍとした。苗条原基の
色線ユーカリに類似して、黒褐色を呈し良。直径１０＝
位の苗条原基集塊ができるのに、約６カ月を要したが、
その後は、ポプラと同様、１力月に約４倍の速度で増殖
した。従って、１年間で約４話中１７００万倍に増殖で
きることが判明した。

■苗条原基の再分化法 Ｂ５の基本培地に表−８に示すユーカリの再分化培地を
加えることにより、苗条は出現する。その後の発根操作
は、ポプラ、ユーカリと全く同じであ°る。

表−８ユーカリの苗条原基の再分化培地（基本培地二Ｂ
５） 単位：ｑ／を 但し、ＢＡＡ：ナフタリン酢酸、 ＢＡ：　　６−ペンジルアミツプリン ロ：苗条出現　　　ロ：一部苗条 以上広葉樹について説明したが本発明は針葉樹にも適用
できることはもちろんである。

【図面の簡単な説明】 第１図は、培養後約４０日目のポプラの苗条原基を示す
写真、纂２図は培養後約６カ月目のユーカリの苗条原基
を示す写真、第３図はポプラの一次苗条原基の横断面の
写真、第４図はポプラの二次苗条原基の横断面の写真、
第５図は移植後３週間目のポプラの苗条原基の苗化した
状態を示す写真である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、木本性植物の茎頂部を摘出し、これを無機塩類組成
   物および植物生長ホルモンを含む人工培地に移植し、１
   ５〜３０℃の温度、 ２，０００〜２０，０００ルクスの照明度、および０．
   ５〜１０ｒｐｍの回転数にて回転培養し苗条原基を増殖
   し、得られた苗条原基を静置培養して苗化し、木本性植
   物を遺伝的に安定な状態で大量に増殖することを特徴と
   する木本性植物の大量増殖法。 ２、照明度が２０００〜１００００ルクスである特許請
   求の範囲第１項記載の増殖法。 ３、木本性植物がポプラ、ユーカリ、アカシア等の広葉
   樹である特許請求の範囲第１項記載の増殖法。 ４、無機塩類組成物としてガンポークのＢ＿５培地を用
   い植物生長ホルモンとしてサイトカイニン系及びオーキ
   シン系化合物を用いる特許請求の範囲第１項または第２
   項記載の増殖法。 ５、静置培養をガンポークのＢ＿５培地を基本培地とし
   、植物生長ホルモンとして、サイトカイニン系及びオー
   キシン系化合物を用い、１５〜３０℃の温度、１０００
   〜４０００ルクスの照明度で行う特許請求の範囲第１項
   ないし第３項のいずれか１項に記載の増殖法。