JPS62267291A

JPS62267291A - モラノリン誘導体の製法

Info

Publication number: JPS62267291A
Application number: JP11161886A
Authority: JP
Inventors: Makoto Sugiyama; 信杉山; Yoji Ezure; 洋治江連; Yoshiaki Yoshikuni; 吉国　義明; Takayuki Ozaki; 孝幸尾崎; Nobutoshi Kojima; 小島　信敏
Original assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Priority date: 1986-05-14
Filing date: 1986-05-14
Publication date: 1987-11-19

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は次の一般式（１）で表わされる化合物であって
血糖上昇抑制作用を有する物質に関するものである。

式中、Ｒは１個以上の水酸基を有する低級アルキルを表
わす。

（従来の技術）モラノリンは、下記の化学構造を有し、糖尿病治療効果
を有する医薬品として極めて有用なものである。

ｌｌモラノリンは初め、生薬桑白皮より単離されたものであ
るが（八木ら「日本農芸化学会誌」５０巻、５７１頁、
１９７６年。特開昭５２−８３９５１号公報）、その後
この化合物はストレプトミセスに属する菌を使用する醗
酵法によって製造することができるようになった（特開
昭５４−８４０９４号公報）。

本発明者らは更に優れた糖尿病治療薬を求めてこの化合
物の誘導体を種々製造してその研究を進めて来た。この
研究過程で、一般式（’Ｉ）において村が水素又は低級
アルキル基である化合物を取得するに至り、特許出願し
た（特公昭６０−２４７９８号公報他）。本発明者らは
その後も有用な化合物を探究するうち、（１）において
Ｒが水酸基を有する低級アルキルである化合物が更に有
効なる血糖上昇抑制作用を有する事実に遭遇し、この化
合物について特許出願をした（特願昭６１−２２７６０
１号）。

（発明が解決しようとする問題点）上記化合物は毒性が低くかつ強い血糖上昇抑制作用を有
し糖尿病治療薬として有用なものであることが判ったが
、このものはグルコシルモラノリンのＮ位の水素を適当
な試薬によって置換させて製造していた。しかしながら
、この方法では工業的規模での生産を志す場合に制約が
ありかつ安価でかつ恒常的な生産形態をとるに良好な条
件ではなかった。

本発明者らは本発明化合物の製造法について鋭意研究を
重ねるうち、Ｎ−置換モラノリンを原料として酵素法に
よってその目的が達成されることに想到し、本発明を完
成させたものである。

（問題点を解決するための手段）本発明の実施例にあたっては、原料物質であるＮ−置換
モラノリンを適当な溶液に溶解し、ｐＨを調整しつつα
−サイクロデキストリン、又は可溶性澱粉等を加える。

ここに酵素を入れてＮ−置換モラノリンのグルコシル化
を行う。酵素は、例えば、微生物の産生ずるものを利用
することができる。反応後はカラムクロマトグラフィー
等により生成物を取得することができる。

反応液はまた、そのまま次の反応に使用することができ
る。オリゴグルコシル−Ｎ−置換モラノリンを含む溶液
には、ｐＨを調整しっつグルコアミラーゼを加えて反応
させる。グルコアミラーゼは市販のものを使用すること
ができる。反応後は、カラ”ムクロマトグラフィー等に
より目的物質を取得することができる。目的化合物は、
セファデックス　Ｇ−１５等の通常のカラムクロマトグ
ラフィーにより精製することができる。

本発明に係る化合物の化学構造上の特徴は、環内の窒素
に置換するアルキル基が１個以上の水酸基によって置換
されているところにある。

この置換される水酸基は１個以上であればよく、特にそ
の個数を限定されることはないが、１〜４個が適当であ
る。・また、当該アルキル基の炭素数は特には限定されること
はないが、炭素数１〜４の低級アルキル基が適当である
。

本発明に係るアルキル基は直鎖状のものに限定されず分
枝したものをも含むものであるが、これらアルキル基が
１個以上の水酸基によって置換されているものではない
場合には、本発明に係るものということはできない。

以下に本発明に係る化合物の極く一部の例を掲げるが、
本発明はこれらに限定されるものではない。

４−０−α−Ｄ−グルコピラノシルーＮ−（２−ハイド
ロキシエチル）モラノリン４−０−α−Ｄ−グルコピラノシルーＮ−（２−ハイド
ロキシプロピル）モラノリン４−０−α−Ｄ−グルコピラノシルーＮ−（３−ハイド
ロキシプロピル）モラノリン４−〇−α−Ｄ−グルコピラノシルーＮ−（２，３−ジ
ハイドロキシプロピル）モラノリン本発明に係る化合物の血糖上昇抑制作用、及びその安全
性は、充分に証明されている（特願昭６０−２２７６０
１号明細書参照）。

（実施例）以下、実施例を挙げて更に詳しく説明する。

参考例バチルス・マセラ４左９音笑５００ｍ１の三角フラスコに、コーン・ステイープリカ
ー１％、可溶性澱粉１％、硫酸アンモニウム０．５％、
炭酸カルシウム０．５％、及びｐＨ７の培養液１０ｋｌ
を加え、１２０℃で１５分間加熱滅菌する。

ペプトン１％、イースト０．５％、グルコース０．３％
、グリセロール１．５％、食塩０．３％、レバー粉末（
０ＸＯＩＤ　（登録商標）　）　２．５％、寒天１．５
％の斜面培地上で充分生育しているバチルス・マセラン
スＩＦ０３４９０株を３白金耳摺種し、３７℃で３日間
振盪培養する。この培養液６００ｍ１を同じ培地組成１
８Ｉｌのジャー・ファメンター（内容量３０１）に接種
し、３７℃で３日間充分に通気攪拌しながら培養すると
、遠心上澄液として通常１３０〜１５０単位の酵素液を
得た。

０．０５Ｍ酢酸！ａ街液（ｐＨ５，５）　ニ可溶性澱粉
（半井化学製、生化学研究用）０．７％を溶解し、基質
溶液とする。この基質溶液９５０μβに酵素液５０μｌ
を加え、４０℃で１０分反応させた後、０．５Ｎ　！￥
酸０．５ｍｌを加え反応を止める。反応液１００μｌを
とり、０．２５Ｍの法度カリウム水溶液に０．０１Ｍに
なるようにヨードを熔解したヨード溶液０．８ａ＋１と
水３ｍｌを加え、攪拌後６６０ｎｍで吸光度を測定しＡ
Ｔ値とする。同様に基質溶液９５０μｌに水５０μ！、
０．５Ｎ酢酸０．５＋ｗｌを加えた溶液１００μｌをと
り、ヨード溶液を加え、６６０ｎｍで吸光度を測定して
ＡＲ値とする。

１単位＝　（（ＡＲ−ＡＴ）　／＾Ｒ）　ｘ　１００ｘ
　２１単位は、酵素溶液１＋ｎｌが４０℃で１分間に１
％の吸光度の減少を生じせしめる活性を表わす。

■ｍ製バチルス・マセランスＩＦＯ３４９０の・培養液を遠心
分離して上澄液を得、これを凍結乾燥して少量の水に溶
かし、酵素の濃縮液を得る。５℃で外液に水を用いて充
分に透析し、低分子を除いた内液を粗酵素液として用い
る。必要に応じて凍結乾燥して粉末として用いる。

実施例１（１１Ｎ−（２−ハイドロキシエチル）モラノリン５ｇ
を少量の水に熔かし、３　Ｎ　ｊｐ酸でｐｌ＋を５．７
に調整し、水で２５１にする。２５０ユニツト／１の粗
酵素液３９７５ｍ１にα−サイクロデキストリン８０ｇ
を熔がし、これにＮ−（２−ハイドロキシエチル）モラ
ノリン溶液を加え、ρ１１を５．７に再調整する。４０
℃で　　　　　　　゛３日間振盪して反応させる。反応
液を遠心分離して、遠心上澄液を強酸性イオン交換樹脂
ダウエックス５０Ｗｘ　２　（Ｈ＋　）のカラム（樹脂
量２００ｍ　ｌ　）に通過させ、塩基性物質を吸着させ
る。充分水洗後、０．５Ｎアンモニア水で溶出し、溶出
液を減圧下に濃縮乾固し、オリゴグルコシル−Ｎ＝（２
−ハイドロキシエチル）モラノリンの混合物１４．８ｇ
を得た。

このものを、高速液体クロマトグラフィーで分析した結
果、Ｎ−（２−ハイドロキシエチル）モラノリン１５％
、オリゴグルコシル−Ｎ−（２−ハイドロキシエチル）
モラノリン８５％からなる混合物であった。なお、高速
液体クロマトグラフィーの条件は、以下の通りであった
。

Ｓｕｍｉｐａｘ　Ｒ７４１（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　５Ｎ
Ｈ２，５μｔｓ、　４ｍｍＩＤ×２５ＣＩ１１）、展開
溶媒ニアセトニトリルー水（６５：３５）、流速：　１
＋ｌ／ａ＋ｉｎ＋　　ＲＩ検出（エルマ光学株式会社製
、　ＥＲＣ−７５１０）　、データー・プロセッサー（
日立製作新製、６５５−６０）。

（２）上記Ｔ１）で得たオリゴグルコシル−Ｎ−（２−
ハイドロキシエチル）モラノリンの混合物１０ｇを、５
０１の水に溶かし、ｐＨを５．１に調整する。水で総容
積を１００ｍ１とし、グルコアミラーゼ（グルコザイム
ＡＰ−６、長瀬産業株式会社製）　　２５０ｍ１を加え
る。

５０℃で２４時間反応させた後、８０℃に加熱して反応
をとめ、室温まで冷却する。反応液を遠心分離して、遠
心上澄液を強酸性イオン交換樹脂のカラム（樹脂量２０
０ｍ１）にかけ、充分水洗する。０．５Ｎのアンモニア
水で溶出し、溶出液を減圧下に濃縮乾固し、粉末を５．
６ｇ　ｉ！ｌだ。

このものは前記次間様にして高速液体クロマトグラフィ
ーで分析した結果、Ｎ−（２−ハイドロキシエチル）モ
ラノリン２８．８％、４−０−α−Ｄ−グルコピラノシ
ルーＮ−（２−ハイドロキシエチル）モラノリン７１．
０％、４−０−α−Ｄ−マルトシルーＮ−（２−ハイド
ロキシエチル）モラノリン０．２％からなる混合物であ
った。

実施例２８ｇの可溶性澱粉を５０ｍ　ｌの水に熱時にかし、これ
にＩｇのＮ−（２−ハイドロキシエチル）モラノリンを
熔解する。４０℃まで冷却した後、ｐｉを５．７に調整
してから４０００ユニツト／１の粗酵素液を５０ｍ　ｌ
加える。再度ρ１１を５．７に調整した後、４０℃で３
日間振盪して反応させる。反応後、８０℃で２０分間加
熱して反応をとめ、５０℃に冷却してｐＨを５．１に調
整した後、グルコアミラーゼ（グルコザイムへＦ−６、
長瀬産業株式会社製）　　５００＋＋＋１を加え、５０
℃で２４時間反応させる。８０℃で２０分間加熱して反
応をとめぐ室温まで冷却後、遠心分離する。遠心上澄液
を強酸性イオン交換樹脂ダウエックス５０Ｗｘ２（Ｈ”
）のカラム（樹脂量ｌＯ抛ｌ）に通過させ、塩基性物質
を吸着させる。充分水洗後、０．５Ｎアンモニア水で溶
出し、溶出液を減圧下に濃縮乾固して、粉末１．８ｇを
得た。

このものは高速液体クロマトグラフィーで分析した結果
、Ｎ−（２−ハイドロキシエチル）モラノリン２９％、
４−０−α−Ｄ−グルコピラノシルーＮ−（２−ハイド
ロキシエチル）モラノリン７０％、４−〇−α−Ｄ−マ
ルトシルーＮ−（２−ハイドロキシエチル）モラノリン
　１％、よりなる混合物であった。

なお、高速液体クロマトグラフィーの条件は、展開溶媒
がア七ト二トリルー水（ＴＯｊ　３０）であるほかは上
記と同じであった。

上記混合物粉末１．５ｇを、少量の水に溶かし、セファ
デックスＧ−１５のカラム（４８鶴φ×８５０ｆｉ）に
かけ、黒潮水で展開し、各５ｍｌずつ集めた。

各フラクションを高速液体クロマトグラフィーで分析し
、目的とするフラクションを集め、減圧下に濃縮乾固す
る。得られた粉末を含水エタノールから再結晶して、４
−０−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｎ−（２−ハイドロ
キシエチル）モラノリン５５０ｍｇを得た。融点　９９
〜１０２℃。

〔α所−＋７６．５°　（１％、水）。

実施例３８ｇの可溶性澱粉を５０ｍ１の水に熱時溶解し、これに
１８のＮ−（２，３−ジハイドロキシプロビル）モラノ
リンを溶解する。４０℃まで冷却した後、ｐＨを５．７
に調整してから４０００ユニット／ｍｌの粗酵素液５０
１を加える。再びｐｉを５．７に調整した後、４０℃で
３日間振盪して反応させる。その後実施例２と同様に処
理してＮ−（２，３−ジハイドロキシプロピル）モラノ
リン３１％、４−０−α−０−グルコピラノシル−Ｎ−
（２，３−ジハイドロキシプロビル）モラノリン６８％
、４−０−α−０−マルトシル−Ｎ−（２゜３−ジハイ
ドロキシプロビル）モラノリン１％の混合物１．６ｇを
得た。

この混合粉末１．５ｇを少量の水に熔かし、セフ・アデ
ックスＧ−１５のカラム（４８醋φＸ　８５０ｍ）にか
け、黒潮水で展開し、各５１ずつ集めた。　各フラクシ
ョンを高速液体クロマトグラフィーで分析し、目的とす
るフラクションを集め、減圧下に濃縮乾固する。得られ
た粉末を含水エタノールから再結晶して、４−０−α−
Ｄ−グルコピラノシルーＮ−（２，３−ジハイドロキシ
ブロピル）モラノリンを５０５驕ｇ得た。融点　８３〜
８６℃。

〔α虐＝＋７２．３°　（１％、水）。

Claims

【特許請求の範囲】次の一般式〔III〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔III〕〔式中、Ｒは１個以上の水酸基を有する低級アルキルを
表わす。〕で表わされるモラノリン誘導体と、サイクロ
デキストリン又は可溶性澱粉を含む水溶液に、サイクロ
デキストリングリコシルトランスフェラーゼを作用させ
て次の一般式〔II〕▲数式、化学式、表等があります▼
〔II〕〔式中、Ｒは前記と同じ。ｎは０〜１５の整数を表わす
。）で表わされるオリゴグルコシルモラノリン誘導体を
製造し、次いでこれにグルコアミラーゼを作用させるこ
とを特徴とする、次の一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕で表わされるグルコシルモラノリン誘導体を製造する方
法。