JPS602038B2 - グルコシルモラノリン誘導体の製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は下記の一般式（０） （但し（０）式中Ｒは水素または低級アルキル基を表わ
す。

）で表わされる４−（Ｑ−Ｄーグルコシル）ーモラノリ
ンおよび４一（Ｑ一○ーグルコシル）一Ｎ−低級アルキ
ルモラノリンの製造法に関するものである。本発明者等
は安全且つ有効な糖尿病治療薬の開発を目的として鋭意
研究を進め、一般式（０）で表わされる４一（Ｑ−Ｄー
グルコシル）ーモラノリンおよび４一（Ｑ−Ｄ−グルコ
シル）−Ｎ−低級アルキルモラノリンが、糠負荷時にお
いて、すぐれた皿糖上昇抑制作用を有し、医薬たとえば
糖尿病治療薬として極めて有用な物質であることを発明
するに至り、特許出願した。

（袴顔昭５４一１５９４１７号、及び特願昭５５一７６
８３８号）則ち、下記一般式（ｍ）（Ｒは前記と同じ。

）にて表わされるモラ／リンまたはＮ−低級アルキルモ
ラノリンとサイクロデキストリンまたは可溶澱粉を含む
水溶液にサィクロデキストリングリコシルトランスフヱ
ラーゼ（ Ｅ．Ｃ．２．４．１．１９ ，
ｃｙｃＩＭｅｘｔｒｉｎｇｌｙｃｏｓｙｌｔ的ｎｓｆ
ｅ紅ｓｅ）を作用させると、下記の一般式（１）（Ｒは
前記と同じ。

ｎは０〜２０までの整数をわす。）にて表わされる化合
物の混合物が生成る。通常この反応は未反応のモラノリ
ンまたはＮ−低級アルキルモラノリン、ｎ＝０の４−（
Ｑ−Ｄ−グルコシル）ーモラノリンまたは４−（Ｑ−Ｄ
−グルコシル）一Ｎ−低級アルキルモラノリン、ｎニ１
の４一（Ｑ−Ｄ−マルトシル）−モラノリンまたは４−
（Ｑ−Ｄ−マルトシル）−Ｎ−低級アルキルモラノリン
、ｎｉ２の４−（Ｑ−○ーマルトトリオシル）−モラノ
リンまたは４一（Ｑ−Ｄ−マルトトリオシル）一Ｎ一低
級アルキルモラノリン、ｎ＝３の４一（Ｑ一Ｄ−マルト
テトラオシル）ーモラノリンまたは４一（Ｑ一Ｄ−マル
トテトラオシル）一Ｎ−低級アルキルモラノリン、ｎ＝
４の４一（Ｑ一Ｄ−マルトベンタオシル）ーモラノリン
または４一（Ｑ一Ｄーマルトベンタオシル）−Ｎ−低級
アルキルモラノリン、ｎ＝５以上のオリゴグルコシルモ
ラノリンまたはＮ−低級アルキルオリゴグルコシルモラ
ノリンの混合物として得られる。各成分の生成する割合
は反応条件によって変化するが、一般にｎ＝０，１，２
，３が多く、ｎが更に大きくなるに従って少なくなる。
医薬品として実用に供するためには、ｎ＝０の４一（Ｑ
一Ｄ−グルコシル）ーモラノリン又は４−（Ｑ−Ｄ−グ
ルコシル）−Ｎ−低級アルキルモラノリンが、その活性
および調整の容易である点から見て最も有利であるが、
これらを医薬として供するには単一品でなければならな
いので、混合物より４一（〇一○ーグルコシル）−モラ
ノリンまたは４一（Ｑ−Ｄーグルコシル）一Ｎ−低級ア
ルキルモラノリンをセフアデックス等を用いて分子量分
画し、単離しなければならない。従って混合物を簡単な
反応によって４‐（Ｑ−Ｄーグルコシル）ーモラノリン
または４一（Ｑ一Ｄーグルコシル）−Ｎ−低級アルキル
モラノリンにすることができれば、単離操作工程を非常
に有利にすることができると同時に他の生成物を４一（
Ｑ−Ｄーグルコシル）−モラノリンまたは４一（Ｑ−Ｄ
ーグルコシル）一Ｎ−低級アルキルモラノリンに変化さ
せ得るのであれば、収量も著しく増大し、生産上非常に
有利となる。本発明者等はこの点に注目し、鋭意研究を
した結果、混合溶液にＱ−１．４ーグルカングルコハイ
ドロラーゼ（Ｅ．Ｃ，３，２．１．３，Ｑ−１．４‐Ｇ
ＩｕｃａｎｇＩＭｏｈｙｄｍｌａｓｅ）を作用させると
いう非常に簡単な処理で、ｎ＝１以上のオリゴグルコシ
ルモラノリンまたはＮ一低級アルキルオリゴグルコシル
モラノリンをそれぞれｎ＝０の４一（Ｑ−Ｄーグルコシ
ル）ーモラノリンまたは４一（Ｑ−Ｄ−グルコシル）−
Ｎ−低級アルキルモラノリンに、極めて好収量で変える
ことができることをつきとめ、本発明を完成するに至っ
た。本発明に使用されるＱ−１．４−グルカングルコハ
イドロラーゼは、リゾブス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕ
ｓ ｎｌｖｅ船）、リゾプス・デレマール（ＲｈｉＺｏ
ｐ瓜戊ｌｅｍ肌）、アスベルギルス・ニガ−（Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌ瓜ｎｉ袋ｒ）、アスベルギルス・アワモリ（
Ａｓｐｅてｇｉｌｌ瓜ａｗａｍｏ【ｉ）等の糸状菌によ
って主として産生され、別名グルコアミラーゼ（ＧＩ比
ｏａｍｙｌａｓｅ）、アミログルコシダーゼ（Ａｍｙｌ
ｏｇｌ比ｏｓｉｄａｓｅ）、ｙーアミラーゼ（Ｑ‐Ａｍ
ｙｌａｓｅ）、タ力・アミラ−ゼＢ（Ｔａｋａ−ａｍｙ
ｌａｓｅＢ）等と呼ばれる。

本発明を実施するためには結晶酵素、粗酵素リゾープス
・ニベウス等の本酵素を含む培養液等が使用でき、Ｑー
アミラーゼ（Ｑ−Ａｍｙｌａｓｅ）、８ーアミラーゼ（
８−Ａｍｙｌａｓｅ）等の他の炭水化物分解酵素が共存
していても良い。

Ｑ−１．４ーグルカングルコ／・ィドロラーゼの作用は
、澱粉の非還元性末端からグルコース単位で分解するも
のである。勿論、マルトース、マルトトリオース、マル
トテトラオース、およびそれ以上のＱ−１．４で結合し
たオリゴ糖も同様にグルコースまで分解する。即ち、澱
粉（ｓｔａｒｃｈ）十ｎ比○→ｎ・グルコースＧ−Ｇ−
……−Ｇ＋ｍＨ２０→ｍＧ （但し上式にてｎ，ｍは整数、Ｇはグルコース、Ｇ−Ｇ
はは−１．仏溝合を意味する）と書くことができる。

なお、本発明に使用される酵素の起源が糸状菌に限定さ
れるものでないのは明白である。本発明の第１の特徴は
、構造式（Ｗ）で表わされるマルトースはＱ−１．４ー
グルカノグルコハイドロラーゼによってすみやかに分割
されグルコースとなるが、構造式（ロ）にて表わされる
４一（Ｑ一Ｄーグルコシル）ーモラノリンおよび４−（
Ｑ−○ーグルコシル）−Ｎ−低級アルキルモラノリンは
Ｑ−１．４グルカノグルコハイドロラーゼによって殆ど
分解されず、構造式（１）の化合物中ｎ＝０をのぞくオ
リゴグルコシルモラノリンおよびＮ−低級アルキルオリ
ゴグルコシルモラノリンがマルトースほど遠くはないが
、実質的に十分な速度で分解されるという従前は全く知
られていなかった新規な事実を明らかにしたことにある
。

以下この点について更に詳しく説明する。

今、グルコースをＧ、モラノリンまたはＮ−低級アルキ
ルモラノリンをＭＲ，ｍを整数、Ｑ−１．４グルカング
ルコハイドロラーゼをＧ・Ａ、結合をＱ−１．４ｋｍ，
ｋｍ‐，，・・・・・・，ｋ２，ｋ．を各段階の反応速
度定数とすると、本発明の反応は一般的にと書くことが
できる。

実際の反応はグルコースｍの異なる混合物として上式の
各段階の反応が同時に進行する訳である。従って本発明
の目的とするＧ−ＭＲが反応液中に蓄積するためにはｋ
ｍ， ｋ・・・・・・ｋ２は十分大きく、それに対して
ｋ，は十分小さくなければならない。図１はこの点を明
らかにするものである。図１について以下に説明する。
１２５叫の三角フラスコに一定量のＮーメチルオリゴグ
ルコシルモラノリンをダウエツクス５０Ｗ×２（Ｈ＋）
１汎こ吸着させ、これを５０の‘の蒸留水に懸濁して、
Ｑ−１．４−グルカングルコハイド口ラーゼ１０の夕を
加え、４０００でインキユベートして、経時的に５００
一Ｚをサンプリングしてゲルコースを定量する。

基質がマルトースの場合は、ダウェックス５０Ｗ×２（
日十）を１タ混合した状態で４０００でインキユベート
する。グルコ−スの定量：反応液５００Ａ夕に０．洲舷
（ＯＨ）２１の‘、５％ＺｎＳ０４１の【を加え、２０
００夕で１０分間遠心分離する。上蒲３０山〆を取り、
市販のグルコース発色液（ベーリンガー・マンハィム会
社製、新ブラッド・シュガー・テスト）３私を加え、よ
く鷹梓後、室温に３５分放置後４２加ｍで吸光度を測定
する。別にグルコース標準試薬（９．１雌／ｄｌ）を同
様に処理して、４２皿ｍで吸光度を測定し、これより反
応液中に生成したグルコース量を定量する。酵素：生化
学工業■製、リゾープス・ニベウス由来のＱ−１．４ー
グルカングルコノ・ィドロラーゼ（結晶）約２２ユニッ
ト／敬酵素活性：１の‘の酵素溶液を１．０％澱粉溶液
５奴、０．０９Ｍ酢酸バッファー（ｐＨ４．５）４のＺ
と混じ、４０午０でインキュベートして生成する還元糖
（グルコース）をフエーリング・レーマン・スクールの
方法（Ｆｅｈｌｉｎｇ−Ｌｅｈｍａｎ−Ｓｃｈ肌ｒｉＭ
ｅｔｈｏｄ）で定量する。

酵素１ユニットは３び分間に１０の９のグルコースを生
成する活性。

基質および樹脂に吸着させた基質量： 実験結果を図１に示した。

横軸は反応時間であり、縦軸は生成したグルコースを完
全に分解した時に対する割合で示している。但し、Ｎー
メチルグルコシルモラノリンの分解は図１で示されるよ
うに甚だ少ないので、Ｎーメチルオリゴグルコシルモラ
ノリンの場合はマルトースの分解速度と比較する意味で
、それぞれグルコシルモラノリン、Ｎーメチルグルコシ
ルモラノリンまで分解した時を１００として％で示した
。なお、グルコース定量後、反応液を炉過してイオン交
換樹脂（ダゥヱックス５０Ｗｘ２）を集め、十分に水洗
後、０．州アンモニア水で溶出し、減圧下で濃縮乾固後
、蒸留水に溶かし、高速液体クロマトグラフィーにかけ
、（ウオーターズ社製ＡＬＣ／ＧＰＣ−２４ｇ型、Ｍ−
ボンダパックーＮ比カラム、ァセトニトリル：水＝７０
：３０，１．５ｃｃ／分）、島津■製クロマトパックＣ
−ＲＩ〜型で分析し、反応生成物を確認した。この結果
Ｎーメチルモラノリンの生成は４−（Ｑ−Ｄーグルコシ
ル）一Ｎーメチルモラノリン、４一（Ｑ一Ｄーマルトシ
ル）一Ｎーメチルモラノリン、４一（Ｑ−Ｄ−マルトト
リオシル）一Ｎ−メチルモラノリン、４一（Ｑ一Ｄ−マ
ルトテトラオシル）−Ｎーメチルモラノリンの場合にそ
れぞれ約３％、２％、２％、１％、２％であった。同様
のことがオリゴグルコシルモラノリンの場合についても
認められた。オリゴグルコシルモラノリンの場合はＮ−
メチルオリゴグルコシルモラノリンの場合より、酵素反
応は速かで、Ｎーメチルオリゴグルコシルモラノリンと
同じ反応条件下で反応時間１時間で、マルトースはほぼ
完全に分解されたが、４一（Ｑ−Ｄ−グルコシル）ーモ
ラノリンの分解は約３％、４一（Ｑ−Ｄ−マルトシル）
ーモラノリンで５３％、４一（ｏ−○ーマルトトリオシ
ル）ーモラノリンで５０％であった。（分解％の意味は
Ｎーメチルオリゴグルコシルモラノリンの場合と同じで
ある。）なお、以上の実験にて強酸性イオン交換樹脂ダ
ウェツクス５０Ｗ×２に吸着（マルトースの時は混合）
させているが、この理由は後に更に詳しく説明する。

また、過剰の強酸性イオン交換樹脂の共存は酵素反応を
阻害するが、反応液１００必中に４タ程度までは実質的
に問題はない。更にモラノリン、Ｎ−低級アルキルモラ
ノリン、オリゴグルコシルモラノリン、Ｎ−低級アルキ
ルオリゴグルコシルモラノリンで樹脂が飽和されると、
更に多くの樹脂を加えても反応は阻害されなくなる。通
常Ｑ−１．４ーグルカングルコ／・ィドロラーゼはバッ
ファー溶液中で実施されるが、蒸留水中で反応しても若
干活性が減少する程度で問題はない。本発明の第２の特
徴は、混合物を酸カチオンィオン交換体に吸着して、Ｑ
−１．４−グルカングルコ／・ィドロラーゼを反応させ
ると、反応液混合物の濃度を著しく高められると同時に
、反応が混合物の状態によって影響されなく、且つ徴量
生成するモラノリンまたはＮ−低級アルキルモラノリン
による生成物阻害（ｐｒｏｄｕｃｔｉｎｎｉｂｉｔｉｏ
ｎ）を受けなくなり、生産上非常に有利をもたらすこと
を可能とした点である。

以下この点について更に詳しく説明する。

モラノリン、Ｎ−低級アルキルモラノリン、オリゴグル
コシルモラノリン、Ｎ−低級アルキルオリゴグルコシル
モラノリンはＱ−１．４ーグルカングルコハイドロラー
ゼを阻害する。

その阻害の強さを第１表にまとめた。

阻害の測定方法は次のとおりである。

酵素：生化学工業■製、リゾープス・ニベウス由来のグ
ルコアミラーゼ（結晶）を蒸留水に５０ムタ／の‘とな
るように溶かして使用する。

基質こ可溶性澱粉を１．４％となるように熱時バッファ
ー溶液に溶かし、自然冷却後使用する。

バッファー溶液：０．１Ｍリン酸バッファー（ＰＨ５．
７）反応液： 方法：反応液を４０℃、１０分インキュベート後、０．
刈Ｂａ（ＯＨ）２ 水溶液１舷、５％ＺｎＳ０４水溶液
１の‘を加え２０００夕で１０分遠心後、上清３０山夕
をとりグルコース発色試薬（ベーリンガー・マンハィム
社製、新ブラッド・シュガ−・テスト）３の‘を加え、
３筋ご室温に放置後、４２瓜ｍで吸光度を測定する。

阻害％＝（Ｃ−Ｂ）−び−Ｂ′）ＸＩ。

〇Ｃ−Ｂ 但し Ｃ：コントロールの吸光度 Ｔ：テストの吸光度 Ｂ′：ブランク（１）の吸光度 Ｂ：プランク（０）の吸光度 希釈系列の阻害％を求め、５０％阻害する濃度（ＩＣ５
ｏ）を求める。

第１表にて阻害の弱い場合は（ ）内に示した濃度での
阻害％で示した。第１表第１表に見られるように、モラ
ノリン、Ｎ−低級アルキルモラノリンの阻害は非常に強
く、グルコシル化されると一般に阻害は弱くなる。

従って低濃度で反応を実施する時、反応は進行するが、
通常数十〜数百（ムタ／の‘）の濃度にて反応は実質的
に阻害される。この濃度は第１表より明らかなように混
合物中各成分の混合比、低級アルキル基の種類によって
異なるが、特にモラノリン、Ｎ−低級アルキルモラノリ
ンはグルコシル化された物質に比較して数百〜数千倍阻
害が強いので、モラノリン、Ｎ−低級アルキルモラノリ
ンの含まれる量によって著しく異なる。然るに実際の生
産にては可能な限り高濃度で実施することが生産コスト
の面で非常に有利であり、また混合物の状態によって反
応が影響されないことが必要である。本発明者等はこの
点に注目し、鋭意に研究した結果、混合物を酸カチオン
ィオン交換体に吸着した状態で酵素を作用させると、数
千（山夕／の‘）以上の濃度で反応が進み、且つ混合物
の状態によっても反応が影響されないという驚くべき新
規な事実を発見し、本発明を完成した。なお、実施例１
，２，３，５の反応は強酸性イオン交換樹脂に吸着しな
いで酵素を反応させても、反応は全く進行しなかった。
以下に実施例によってより具体的に説明する。

実施例 １バチルス・マセランスの培養：５００の‘の
三角フラスコにコーンステイープリカー１％、可溶性澱
粉１％、（ＮＨ）２Ｓ０４０．５％、ＣａＣ０３０．５
％、靴７の培養液１５０凧【を加え、１２０℃１８分加
熱滅菌する。

べプトン１％、イースト０．５％、グルコース０．３％
、グリセロール１．５％、ＮａＣＩＯ．３％、レバー粉
末（ＯＸＯＩＤＯＲ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｄｌｉｖｅ
ｒｄｉｇｅｓｔ）０．１％、寒天１．５％の斜面培地上
で充分生育しているバチルス・マセランス『０３４９の
珠を３白金耳接種し、３７０で３日間培養する。この培
養液３００の‘を同じ培地組成９そのジャー・ファーメ
ンタ−（内容量１５〆）に接種し、３７０３日間十分に
通気燈拝しながら培養すると遠心上燈液として約１３０
〜１５山単位（単位の定義は次に示す）の酵素液を得る
。イクロデキストリングリコシルトランスフエラゼの活
性の単位：０．０９Ｍ酢酸緩衝液剤５．５に可溶性澱粉
（半井化学、生化学研究用）０．７％を溶解し、基質溶
液とする。

基質溶液９５０ムクに酵素液５０ム〆を加え、４０午Ｃ
ＩＯ分反応させ、０．州酢酸０．５の‘を加え反応を止
める。反応液１００山そをとり、０．２９ＭＫＩ水溶液
に０．０１Ｍになるようにヨードを溶解したヨード溶液
０．８の【と水３の‘を加え、鰻梓後６６仇ｍで吸光度
を測定する。（ＡＴ）同様に基質溶液９５０山そ、に水
５０仏夕、０．州酢酸０．５の‘加えた溶液１００山そ
をとり、ヨード溶液を加え６６皿ｍで吸光度を測定する
。（ＡＲ）この時・単位＝Ａ今三三ＸＩ。

〇×２で、これは酵素溶液１の‘が４０℃、１分間に１
％の吸光度の減少を生じせしめる活性である。

粗酵素液の調製：バチルス・マセランスＩＦＯ乳９０の
培養液を遠０分離して、上燈液を得る。

これを凍結乾燥して少量の水に溶かし、酵素の濃縮液を
得る。５℃にて外液に蒸留水を用いて十分透析し、低分
子を除いた内液を粗酵素液として用いる。

次に、モラノリン６．５夕を少量の水に溶かし、洲塩酸
でＰＨを５．７に調整する。（調整後３２．５凧【）４
６０ユニット／の‘のサィクロデキストＩＪングリコシ
ルトランスフェラーゼの粗酵素液１３００泌にＱ−サィ
クロデキストリン２６夕を溶かし、これにモラノリン水
溶液を加え、ｐＨを５．６７に再調整する。３９℃で３
日間振蟹して反応させる。

反応液を遠Ｄ分離して、上燈液をダウェックス５０Ｗ×
２（日十）のカラム（樹脂量５０の‘）に通過させ、塩
基性物質を吸着させる。十分水洗後樹脂の一部（約２の
‘）をとり、０．州アンモニア水で溶出し、溶出液を減
圧下に濃縮乾固する。得られた粉末を少量の水に溶かし
、ウオーターズ社製高速液体ク。マトグラフィー（ＡＬ
Ｃ／ＧＰＣ−２４隻塾、ムーポンダパツク−ＮＨ２カラ
ム、アセトニトリル：水＝７０：３０，１．５の【／分
）にかけ、島津■クロマトパツク（Ｃ−Ｒ山型）で分析
した。（Ｑ−１．４−グルカノグルコハイドロラーゼを
反応させる前の混合物の組成）残りの樹脂約４８の【を
水１２００の‘に懸濁し、リゾープス・ニベウス由来の
Ｑ−１．４−グルカングルコハイドロラーゼ（約２２ユ
ニット／雌）１２０のｐを加え、４ぴ０でインキューべ
−トして、経時的にサンプリングして反応液中に生じた
グルコースを定量して、反応進行状態員を追跡した。グ
ルコースは反応後急速に増加し、反応５時間で反応終点
の８９％に達した。更に反応を続け、２弦ｒで反応を止
めた。反応後樹脂を炉別し、十分に水洗後０．州アンモ
ニア水で溶出し、溶出液を減圧下に濃縮乾固し、得られ
た粉末を同様に高速液体クロマトグラフィーにかけ、ク
ロマトバツクで反応後の混合物の状態を分析した。この
結果を以下に示した。実施例 ２図２で表わされる混合
物２夕をダウェックス５０Ｗ×２（日十）１０Ｍに吸着
させ、５００泌の水に懸濁させ、Ｑ−１．４−グルカン
グルコノ・ィドロラーゼ（約２２ユニット／地）５０雌
を加える。

４０００で１７時間反応後、反応液を炉遇して樹脂を集
め、０．州アンモニア水で溶出し、溶出液を減圧下に濃
縮乾固して、ウオーターズ社製高速液体クロマトグラフ
ィー（ＡＬＣ／ＧＰＣ−２４塁塾）にかけ、島津製クロ
マトパック（Ｃ−ＲＩＡ型）で分析した。

それを図３に示した。図２、図３における各成分の混合
比は以下に示した。

実施例 ３ 実施例２の条件下で、４０午０で２６時間反応させた。

この結果、モラノリン５．８％、４一（Ｑ−○−グルコ
シル）−モラノリン９３．２％で、他の成分は認めなか
った。実施例 ４ 図２で表わされる混合物２００雌を４その水に溶かし、
ＰＨを０．即日ＣＩで５．７を調整して、Ｑ−１．４‐
グルカングルコハイドロラーゼ（約２２ユニット／池）
２００雌を加える。

４０３０で４１時間反応させた後、反応液をダウェック
ス５０Ｗ×２（日１）１０の‘の力ラムにかけ、十分に
水洗後、０．印アンモニア水で熔出する。

溶出液を減圧下に濃縮乾固し、少量の水に溶かし、実施
例１と同じ条件下で高速液体クロマトグラフィーにかけ
る。この結果、モラノリン６％、４−（Ｑ−○ーグルコ
シル）ーモラノリン９３．４％で他の成分は認めなかっ
た。実施例 ５Ｎーメチルモラノリン１夕を少量の水に
溶かし、ＩＮの塩酸でｐＨを５．７に調整する。

（調整後１０肌）別に３３６ユニット／の【のサイクロ
デキストリングリコシルトランスフェラーゼ粗酵素液７
９０の‘にＱ−サィクロデキストリン１６夕を溶解する
。両液を混じ、ｐＨを５．６に再調整後、３９００で２
日振蓬し反応させる。反応液を遠心分離して、上澄液を
ダゥェックス５０Ｗ×２（Ｈ＋）のカラム（樹脂量８机
）に通過させ、塩基性物質を吸着させる。十分水洗後、
樹脂の一部（約２の上）をとり、０．州アンモニア水で
漆出し、減圧下に濃縮乾固し、実施例１と同じ条件で液
体クロマトグラフィーにかけ、クロマトパックで分析す
る。（Ｑ−１．４−グルカングルコ／・ィドロラーゼを
反応させる前の混合物の組成）残りの樹脂約６の‘を水
１５０の‘に懸濁して、Ｑ−１．４ーグルカングルコハ
イドロラーゼ（約２２ユニット／雌）９０の９を加え４
０００で４８時間反応させ、反応液を炉過して樹脂を集
め、十分水洗後０．州アンモニア水で溶出し、溶出液を
減圧下に濃縮乾固し、液体クロマトグラフィーにかけ、
クロマトパックで分析する。この結果を以下に示した。

反応前 反応後 Ｎ−メチルーモラノリン １９‐０％ ２１．
３％４一（ｑ−Ｄーグルコシル）−Ｎ−メチルモラノリ
ン １１．９ ６１．７４一（ｄ一Ｄーマルト
シル）一Ｎ−メチルモラノリン １３．３ １
５．４４−（ｑ−Ｄ−マルトトリオンノり１３．１
１．６−Ｎ−メチルモラノリン４一（ｑ−Ｄ−マルト
テトラオシ １１．９ ０ル）−Ｎ−メチルモラノ
リン４−（ｑ一Ｄーマルトベンタオン ル）−Ｎーメチルモラノリン １０．９ ｏ４
一（ｑ−Ｄ−マルトヘキサオシル）−Ｎ−メチルモラノ
リン １０．４ ｏ４−（Ｑ−Ｄ−マルトヘプタ
オシル）−Ｎ−メチルモラノリン ８．１ ０
実施例 ６Ｎ−プロピルモラノリン１夕を少量の水に溶
かし、ＩＮ塩酸でｐＨを５．７に調整する。

（調整後２０のと）別に２６０山／泌の粗酵素液７６０
の“こ１６夕のＱ−サィクロデキストリンを溶解する。
画液を混じ、斑を５．７に再調整後３９℃で３日間振鑑
し反応させる。反応液を遠心分離して上燈液をダゥェッ
クス５０Ｗ×２（Ｈ＋）のカラム（樹脂量８の‘）に通
過させ塩基性物質を吸着させる。十分水洗後、樹脂の一
部（約２の‘）をとり、０．州アンモニア水で溶出し、
減圧下に濃縮乾固し実施例１と同じ条件で、液体クロマ
トグラフィーにかけ、クロマトパツクで分析する。（Ｑ
−１．４−グルカングルコノ・ィドロラーゼを反応させ
る前の混合物の組成）残りの樹脂約６のヱを水１５０磯
に懸濁して、Ｑ−１．４−グルカングルコハイドロラー
ゼ（約２２ユニット／机９）１５の９を加え４０こ０で
２錨時間反応させる。反応液を炉遇して樹脂を集め、十
分水洗後０．州アンモニア水で溶出し、溶出液を減圧下
に濃縮乾園し、液体クロマトグラフィーにかけクロマト
パックで分析する。この結果を以下に示した。

【図面の簡単な説明】

図１はＮーメチルオリゴグルコシルモラノリンにＱ−１
．４ーグルカングルコハイドロラーゼを作用した時の各
化合物の分解％を表わす。 図中１はマルトースを、一×一は４−（Ｑ−Ｄーグルコ
シル）一Ｎ−メチルモラノリンを、★は４−（Ｑ−○ー
マルトシル）−Ｎーメチルモラノリンを、一△一は４−
（Ｑ一Ｄーマルトトリオシル）−Ｎ−メチルモラノリン
を、一〇一は４一（Ｑ−Ｄ−マルトテトラオシル）‐Ｎ
−メチルモラノリンを表わす。図２、図３は実施例２に
おけるＱ−１．４ーグルカングルコハイドロラーゼを反
応させる前後の高速液体クロマトグラフィー（ウオータ
ーズ社製ＡＬＣ／ＧＰＣ−２４４型）の結果である。 Ｍーボンダパツク−ＮＨ２カラムを用い、アセトニトリ
ル：水７０：３０，１．５の‘／分で展開し、島津製ク
ロマトバツクＣ−ＲＩＡ型で分析した。縦軸は示差屈折
率、横軸は展開時間、図中の数字はリテンションタィム
（分）、Ｓはソルベント、Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ
，日，１はオリゴグルコシルモラノリンを示す。第１図 第３図 第２図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次の一般式（I） ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｒは水素又は低級アルキル基を表わし、ｎは整数を
   表わす。 ）で表わされるもののうちｎが０〜２０の化合物及び次
   の一般式（III）▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｒは前記と同じ。 ）で表わされる化合物を含有する混合物（但し（I）に
   おいてｎ＝０の化合物のみを含む場合を除く。）を含む
   溶液に、直接、又は必要に応じて酸カチオン交換体を加
   えた後、α−１．４−グルカングルコハイドロラーゼを
   作用させることを特徴とする次の一般式（II）▲数式、
   化学式、表等があります▼（Ｒは前記と同じ。 ）で表わされるグルコシルモラノリン誘導体の製法。２
   酸カチオン交換体を加えないことを特徴とする特許請
   求の範囲第１項記載の製法。 ３ 混合物を酸カチオン交換体に予め吸着させて後α−
   １．４−グルカングルコハイドロラーゼを作用させるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の製法。 ４ 酸カチオン交換体の共存下にα−１．４−グルカン
   グルコハイドロラーゼを作用させることを特徴とする特
   許請求の範囲第１項記載の製法。