JPS62228279A - Dna配列、プラスミド及びリパ−ゼを生産する方法 - Google Patents
Dna配列、プラスミド及びリパ−ゼを生産する方法Info
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- JPS62228279A JPS62228279A JP7230786A JP7230786A JPS62228279A JP S62228279 A JPS62228279 A JP S62228279A JP 7230786 A JP7230786 A JP 7230786A JP 7230786 A JP7230786 A JP 7230786A JP S62228279 A JPS62228279 A JP S62228279A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
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- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明はリパーゼをコードするDNA配列、プラスミド
及びリパーゼを生産する方法に関する。
及びリパーゼを生産する方法に関する。
更に詳しくは、−Δ−Gly−X−Ser−Y−Gly
−B−(但し、A、X、Y、Bはアミノ酸を表す)のア
ミノ酸配列に対応するDNA配列を含むリパーゼをコー
ドするDNA配列、プラスミド及びリパーゼを生産する
方法に関する。
−B−(但し、A、X、Y、Bはアミノ酸を表す)のア
ミノ酸配列に対応するDNA配列を含むリパーゼをコー
ドするDNA配列、プラスミド及びリパーゼを生産する
方法に関する。
(従来技術)
今までにアミノ酸配列が報告されているリバーセハ、動
物のリパーゼとして■豚の膵臓のリパーゼ及び■ラット
の舌下線のリパーゼがあり、微生物のリパーゼは■5L
aphtlococcus hyicusのリパーゼが
報告されているのみで、その他の微生物のリパーゼは知
られていない。
物のリパーゼとして■豚の膵臓のリパーゼ及び■ラット
の舌下線のリパーゼがあり、微生物のリパーゼは■5L
aphtlococcus hyicusのリパーゼが
報告されているのみで、その他の微生物のリパーゼは知
られていない。
リパーゼのなかには8、トリグリセライドをアトランダ
ムに水解するリパーゼと1,3位を特異的に氷解する所
謂1.3位特異性リパーゼが知られている。かかる1、
3位特異性リパーゼはカビ(例えばリゾプス属等)に多
く、細菌ではシェードモナス(Pseudomonas
) 171のうち、シュードモナス・フラジ(Pse
udomonas fragi )が報告されている。
ムに水解するリパーゼと1,3位を特異的に氷解する所
謂1.3位特異性リパーゼが知られている。かかる1、
3位特異性リパーゼはカビ(例えばリゾプス属等)に多
く、細菌ではシェードモナス(Pseudomonas
) 171のうち、シュードモナス・フラジ(Pse
udomonas fragi )が報告されている。
(^1ford et al J、 of Lipid
Res、 5 390 ’64又、リパーゼの性質
から比較的高温域で活性を有する所謂耐熱性リパーゼが
知られている。例えば、シュードモナス(Pseudo
monas )属−リゾプス(Rhizopus) I
s、バチルス(Bacillus)属に多り、バチルス
・ステアロサーモフィルス(Bacillus sLe
arothermophilus )等が知られている
。
Res、 5 390 ’64又、リパーゼの性質
から比較的高温域で活性を有する所謂耐熱性リパーゼが
知られている。例えば、シュードモナス(Pseudo
monas )属−リゾプス(Rhizopus) I
s、バチルス(Bacillus)属に多り、バチルス
・ステアロサーモフィルス(Bacillus sLe
arothermophilus )等が知られている
。
本発明のようなリパーゼをコードするDNA配列、これ
らのDNA配列を有するプラスミド及びこれらのプラス
ミドを用いたリパーゼの生産方法は知られていない。
らのDNA配列を有するプラスミド及びこれらのプラス
ミドを用いたリパーゼの生産方法は知られていない。
(発明の目的)
本発明者等は、リパーゼをコードするDNA配列、プラ
スミド及びリパーゼの生産方法を目的とした。具体的例
としては、シュードモナス屈の一つであるシュードモナ
ス°フラジ(Pseudomonasfragi )の
有する1、3位特異性リパーゼ遺伝子をクローニングし
、リパーゼをコードするDNA配列を決定すること、そ
の他バチルス屈の一つであるバチルス・ステアロサーモ
フィルス(Bacillusstearothermo
philus)の有する耐熱性リパーゼ遺伝子をクロー
ニングし、リパーゼをコードするDNA配列を決定する
こと、かかるDNA配列を有するプラスミドを得ること
、これらのプラスミドを用いてリパーゼを生産すること
をを目的とした。
スミド及びリパーゼの生産方法を目的とした。具体的例
としては、シュードモナス屈の一つであるシュードモナ
ス°フラジ(Pseudomonasfragi )の
有する1、3位特異性リパーゼ遺伝子をクローニングし
、リパーゼをコードするDNA配列を決定すること、そ
の他バチルス屈の一つであるバチルス・ステアロサーモ
フィルス(Bacillusstearothermo
philus)の有する耐熱性リパーゼ遺伝子をクロー
ニングし、リパーゼをコードするDNA配列を決定する
こと、かかるDNA配列を有するプラスミドを得ること
、これらのプラスミドを用いてリパーゼを生産すること
をを目的とした。
(発明の構成)
本発明者等は前記目的を達成すべく鋭意研究の結果、シ
ュードモナス・フラジ(Pseudomonasfra
gi )の有する1、3位特異性リパーゼをコードする
DNA配列を含むプラスミドのクローニング、リパーゼ
をコードするDNA配列の決定、バチルス・ステアロサ
ーモフィルス(Bacillusstearother
mophilus)の有する耐熱性リパーゼをコードす
るDNA配列を含むプラスミドのクローニング、リパー
ゼをコードするDNA配列の決定及び大腸菌、バクテリ
ア等を用いたリパーゼの生産に成功し、既知のリパーゼ
と比較検討するなかで、本発明のリパーゼに共通するア
ミノ酸配列及びこれに対応する塩基配列を見出し、本発
明を完成するに到った。即ち、本発明はリパーゼをコー
ドするDNA配列、リパーゼをコードするDNA配列を
有するプラスミド及びかかるプラスミドを用いてリパー
ゼを生産する方法である。
ュードモナス・フラジ(Pseudomonasfra
gi )の有する1、3位特異性リパーゼをコードする
DNA配列を含むプラスミドのクローニング、リパーゼ
をコードするDNA配列の決定、バチルス・ステアロサ
ーモフィルス(Bacillusstearother
mophilus)の有する耐熱性リパーゼをコードす
るDNA配列を含むプラスミドのクローニング、リパー
ゼをコードするDNA配列の決定及び大腸菌、バクテリ
ア等を用いたリパーゼの生産に成功し、既知のリパーゼ
と比較検討するなかで、本発明のリパーゼに共通するア
ミノ酸配列及びこれに対応する塩基配列を見出し、本発
明を完成するに到った。即ち、本発明はリパーゼをコー
ドするDNA配列、リパーゼをコードするDNA配列を
有するプラスミド及びかかるプラスミドを用いてリパー
ゼを生産する方法である。
以下、本発明の詳細な説明する。
■まず、(al IJパーゼの遺伝情報を担う染色体D
NAを得る。
NAを得る。
本発明の目的とするリパーゼの遺伝情報を有する細菌が
好ましく、例えばランダムリパーゼや1゜3位特異性リ
パーゼを有する菌、例えば、Rh1zopus属: R
h1zopus delemar、 Rh1zopus
n1veuS 等、 Mucor 属 : Mu
cor m1ehei1 八spergillus
[、Penicillium属等のカビ類、Cand
ida属等の酵母類−、Pseudomonas m
等のバクテリア類等が好ましく、好適にはシュードモナ
ス(Pseudomonas )属が適当であり、例え
ば、1.3位特異性リパーゼを有するシュードモナス・
フラジ(Pseudomonas fragi )を用
いることができる。又、耐熱性リパーゼを有する菌が好
ましく、好適にはバチルス(Bacillus) Us
が適当であり、例えばバチルス・ステアロサーモフィル
ス(Bacillus stearothermo−p
hilus )を用いることができる。
好ましく、例えばランダムリパーゼや1゜3位特異性リ
パーゼを有する菌、例えば、Rh1zopus属: R
h1zopus delemar、 Rh1zopus
n1veuS 等、 Mucor 属 : Mu
cor m1ehei1 八spergillus
[、Penicillium属等のカビ類、Cand
ida属等の酵母類−、Pseudomonas m
等のバクテリア類等が好ましく、好適にはシュードモナ
ス(Pseudomonas )属が適当であり、例え
ば、1.3位特異性リパーゼを有するシュードモナス・
フラジ(Pseudomonas fragi )を用
いることができる。又、耐熱性リパーゼを有する菌が好
ましく、好適にはバチルス(Bacillus) Us
が適当であり、例えばバチルス・ステアロサーモフィル
ス(Bacillus stearothermo−p
hilus )を用いることができる。
その他のリパーゼ生産菌を用いることは自由である。
リパーゼの遺伝情報を担う染色体DNAは、Marmu
r等の方法(Journal of Mo1ecula
r Biology3.208−218 ’61) 、
これを改良したColemanに等の方法(Journ
al of Bacteriology 153 (2
1905−915’83)等公知の方法を利用して調製
することができる。
r等の方法(Journal of Mo1ecula
r Biology3.208−218 ’61) 、
これを改良したColemanに等の方法(Journ
al of Bacteriology 153 (2
1905−915’83)等公知の方法を利用して調製
することができる。
(b)調製された染色体DNAをAlu 1.5au
3八、Taq l 、 flap [、、flap I
I、flaeII[、l1indll1等の公知の制限
酵素の1 、fffl又は2種以上を用いて部分分解若
しくは完全骨IWすることができる。
3八、Taq l 、 flap [、、flap I
I、flaeII[、l1indll1等の公知の制限
酵素の1 、fffl又は2種以上を用いて部分分解若
しくは完全骨IWすることができる。
(C)部分分解されたDNAは、蔗糖密度勾配超遠心法
、アガロース電気泳動法等の公知の方法を用いて部分精
製することができる。(「昆虫のバイオテクノロジー」
三宅端等mp122432) (講談社0部分精製し
たDNAをベクターDNAに挿入することができる。
、アガロース電気泳動法等の公知の方法を用いて部分精
製することができる。(「昆虫のバイオテクノロジー」
三宅端等mp122432) (講談社0部分精製し
たDNAをベクターDNAに挿入することができる。
(a)ベクターDNAは、宿主内で複製でき、既知の制
限酵素切断部位を持ち、栄養要求性、薬剤耐性、温度感
受性といった有用マーカーを持つ公知のベクターを利用
することができ、例えば、pUC9、pUC8、pUc
19、pUc18、pI3R322、pTB90、pU
I3110等を利用することができる。
限酵素切断部位を持ち、栄養要求性、薬剤耐性、温度感
受性といった有用マーカーを持つ公知のベクターを利用
することができ、例えば、pUC9、pUC8、pUc
19、pUc18、pI3R322、pTB90、pU
I3110等を利用することができる。
(b) ベクターDNAをBam H1、EcoR1、
1lindl[I等の制限酵素で切断し、前記部分精製
したDNAをリガーゼ(DNA連結酵素)等を用い、公
知の方法を利用して連結し、部分精製したDNAをベク
ターDNAに挿入し、組換え体プラスミドを得ることが
できる。
1lindl[I等の制限酵素で切断し、前記部分精製
したDNAをリガーゼ(DNA連結酵素)等を用い、公
知の方法を利用して連結し、部分精製したDNAをベク
ターDNAに挿入し、組換え体プラスミドを得ることが
できる。
■かかる組換え体プラスミドを用いて大腸菌(例えば、
E、Co11 : J、M、83等)、枯草菌(例えば
、Bacillus stearothermophi
lus等)、シュードモナス屈の菌(例えば、Pseu
dmonas fragi等)等の形質転換をすること
ができる。
E、Co11 : J、M、83等)、枯草菌(例えば
、Bacillus stearothermophi
lus等)、シュードモナス屈の菌(例えば、Pseu
dmonas fragi等)等の形質転換をすること
ができる。
又、形質転換は塩化カルシウム法、プロトプラスト法等
の公知の方法を利用することができる。
の公知の方法を利用することができる。
形質転換した菌は常法により培養して増殖させることが
できる。(「昆虫のバイオテクノロジー」三宅端等編p
??−86) (講談社)■形質転換した菌から、リ
パーゼ遺伝子を含む菌を選択分離することができる。
できる。(「昆虫のバイオテクノロジー」三宅端等編p
??−86) (講談社)■形質転換した菌から、リ
パーゼ遺伝子を含む菌を選択分離することができる。
リパーゼを生産する菌株の分離にトリブチリン寒天培地
を用いることが簡便である。(Berner、 D几、
and llammond、E、G、 Lipids
、5,588 ’70 )■形質転換した菌のなかから
トリブチリン培地においてクリアーゾーンを形成(ハロ
ー形成)する菌株を分離ずれぼりパーゼ遺伝子を含む菌
を選択分離することができる。
を用いることが簡便である。(Berner、 D几、
and llammond、E、G、 Lipids
、5,588 ’70 )■形質転換した菌のなかから
トリブチリン培地においてクリアーゾーンを形成(ハロ
ー形成)する菌株を分離ずれぼりパーゼ遺伝子を含む菌
を選択分離することができる。
この菌からアルカリ法、SDS法等の公知の方法を用い
てリパーゼ遺伝子を含むプラスミドDNAを得ることが
できる。
てリパーゼ遺伝子を含むプラスミドDNAを得ることが
できる。
第3図にシュードモナス・フラジのリパーゼをコードす
るDNA配列を有するプラスミドpKK−0を各種制限
酵素により分解し、アガロースゲル電気泳動法を用いた
測定に基づいて作成した制限酵素切断地図を一例として
示す。
るDNA配列を有するプラスミドpKK−0を各種制限
酵素により分解し、アガロースゲル電気泳動法を用いた
測定に基づいて作成した制限酵素切断地図を一例として
示す。
第4図にバチルス・ステアロサーモフィルスのリパーゼ
をコードするDNA配列を有するプラスミドpB11−
7を各種制限酵素により分解し、アガロースゲル電気泳
動法を用いた測定に基づいて作成した制限酵素切断地図
を一例として示す。
をコードするDNA配列を有するプラスミドpB11−
7を各種制限酵素により分解し、アガロースゲル電気泳
動法を用いた測定に基づいて作成した制限酵素切断地図
を一例として示す。
0次に、リパーゼ遺伝子を含むプラスミドDNAをさら
に短いDNA断片に限定することができる。
に短いDNA断片に限定することができる。
゛即ち、リパーゼ遺伝子を含むプラスミドDNA(pK
K−0、pBll−7等)を各種の制限酵素を用いて切
断し、切断されたDNA断片をプラスミドベクターにサ
ブクローニングして大腸菌等を形質転換させ、前記トリ
ブチリン培地におけるクリアーゾーン形成(ハロー形成
)大腸菌等を選択し、そのプラスミドを得ることができ
る。
K−0、pBll−7等)を各種の制限酵素を用いて切
断し、切断されたDNA断片をプラスミドベクターにサ
ブクローニングして大腸菌等を形質転換させ、前記トリ
ブチリン培地におけるクリアーゾーン形成(ハロー形成
)大腸菌等を選択し、そのプラスミドを得ることができ
る。
第5図にpKK−0のll1ndlI[、Sma l、
Ba1l、EcoRlの各種制限酵素による切断DNA
断片を挿入したプラスミドを有する大腸菌のトリブチリ
ン寒天培地におけるクリアーゾーン形成(ハロー形成)
の有無の一例を示す。第5図よりシュードモナス・フラ
ジ(Pseudmonas fragi )のリパー
ゼのDNA配列が1lind m−Ba11間の約1.
0kbのDNA領域(pHB−1,0)に存在すること
が示唆される。
Ba1l、EcoRlの各種制限酵素による切断DNA
断片を挿入したプラスミドを有する大腸菌のトリブチリ
ン寒天培地におけるクリアーゾーン形成(ハロー形成)
の有無の一例を示す。第5図よりシュードモナス・フラ
ジ(Pseudmonas fragi )のリパー
ゼのDNA配列が1lind m−Ba11間の約1.
0kbのDNA領域(pHB−1,0)に存在すること
が示唆される。
又、第6図にpBll−7のl1indI[I、Sal
I % Pstl。
I % Pstl。
Acc Iの各種制限酵素による切断DNA断片を挿入
したプラスミドを有する大腸菌のトリブチリン寒天培地
におけるクリアーゾーン形成(ハロー形成)の有無の一
例を示す。第6図よりバチルス・ステアロサーモフィル
ス(Bacillus stearo−thermop
hilus)のリパーゼのDNA配列がSal 1−A
cc 1間の約1.7kbのDNA領域(pSA−1>
に存在することが示唆される。
したプラスミドを有する大腸菌のトリブチリン寒天培地
におけるクリアーゾーン形成(ハロー形成)の有無の一
例を示す。第6図よりバチルス・ステアロサーモフィル
ス(Bacillus stearo−thermop
hilus)のリパーゼのDNA配列がSal 1−A
cc 1間の約1.7kbのDNA領域(pSA−1>
に存在することが示唆される。
■次に、リパーゼのDNA配列が存在するDNA領域の
塩基配列を公知の方法(例えば、Sanger等による
dideoxy法: Sanger、F、et at
r’roc、Natl、Acad、Sci、USA 7
4.5463 ’77等の方法)を用いて決定すること
ができる。
塩基配列を公知の方法(例えば、Sanger等による
dideoxy法: Sanger、F、et at
r’roc、Natl、Acad、Sci、USA 7
4.5463 ’77等の方法)を用いて決定すること
ができる。
例えば、前記pHB−1,0の塩基配列の内、プロモー
タ一部を除いたDNA配列及びこれに対応するアミノ酸
配列を示すと第1図のようになる。即ち、第1図のオー
プンリーディングフレームより、シュードモナス°フラ
ジ(Pseudomonas fragi )の1.3
位特異性リパーゼをコードするDNA配列は、135の
アミノ酸に相当する配列からなることがわかる。
タ一部を除いたDNA配列及びこれに対応するアミノ酸
配列を示すと第1図のようになる。即ち、第1図のオー
プンリーディングフレームより、シュードモナス°フラ
ジ(Pseudomonas fragi )の1.3
位特異性リパーゼをコードするDNA配列は、135の
アミノ酸に相当する配列からなることがわかる。
又、例えば、前記pSA−1の塩基配列の内、プロモー
タ一部を除いたDNA配列及びこれに対応するアミノ酸
配列を示すと第2図のようになる。即ち、第2図のオー
プンリーディングフレームより、バチルス・ステアロサ
ーモフィルス(Bacilluss tearo th
ermoph i lus )の耐熱性リパーゼをコー
ドするDNA配列は、247のアミノ酸に相当する配列
からなることがわかる。
タ一部を除いたDNA配列及びこれに対応するアミノ酸
配列を示すと第2図のようになる。即ち、第2図のオー
プンリーディングフレームより、バチルス・ステアロサ
ーモフィルス(Bacilluss tearo th
ermoph i lus )の耐熱性リパーゼをコー
ドするDNA配列は、247のアミノ酸に相当する配列
からなることがわかる。
以上の結果、及び公知のリパーゼの塩基配列及びこれに
対応するアミノ酸配列の比較結果から、Setがリパー
ゼの活性中心であることが文献(B。
対応するアミノ酸配列の比較結果から、Setがリパー
ゼの活性中心であることが文献(B。
B、A、660 148−150 1981)から推察
され、このSetを中心にしたアミノ酸配列を整理する
と、次の表−1のようになる。
され、このSetを中心にしたアミノ酸配列を整理する
と、次の表−1のようになる。
(以下余白)
表−1
PIG −−Val−11e−Gly−11is−
Ser−Leu−Gly−Set−−RAT −−T
yr−Val−Gly−His−Ser−Gln−Gl
y−Trp−−Sta −−Phe−11e−Gl
y−11is−Set−Met−Gly−Gly−−P
se −−Leu41e−Gly−His−Ser−
Gln−Gly−Ala−−Bac −−Val−
^1a−Gly−Le+r−Ser−Leu−Gly−
Gly−(但し、PIGは豚の膵臓のリパーゼ、RAT
はラットの舌下線のリパーゼ、StaはS taph
i 1ococcushyicusのリパーゼ、Pse
はPseudomonas fragiのリパーゼ、B
acはBacillus stearothermop
hilusのリパーゼの活性中心のアミノ酸配列を表す
、)表−1より(−A−Gly−X−Ser−Y−Gl
y−8−) (但し、A、X、Y、Bはアミノ酸を表
す)のアミノ酸配列に対応するDNA配列がリパーゼに
共通のDNA配列であることがわかる。以上の結果より
、本発明は、Aが1ieu又はAla 、 XがII
i s又はLeu 、 YがGin又はLeu s若し
くはBがAla又はGlyであるようなアミノ酸配列に
対応する塩基配列を含むリパーゼをコードするDNA配
列及びかかるDNA配列を有するプラスミドである。例
えば、AがIleu、Xが1113.、YがGin、及
びBがAlaのときシュードモナス・フラジのリパーゼ
をコードするDNA配列とすることができ、AがAla
、 XがLeu 、 YがLeu及びBがGlyのと
きバチルス・ステアロサーモフィルスのリパーゼをコー
ドするDNA配列とすることができる。
Ser−Leu−Gly−Set−−RAT −−T
yr−Val−Gly−His−Ser−Gln−Gl
y−Trp−−Sta −−Phe−11e−Gl
y−11is−Set−Met−Gly−Gly−−P
se −−Leu41e−Gly−His−Ser−
Gln−Gly−Ala−−Bac −−Val−
^1a−Gly−Le+r−Ser−Leu−Gly−
Gly−(但し、PIGは豚の膵臓のリパーゼ、RAT
はラットの舌下線のリパーゼ、StaはS taph
i 1ococcushyicusのリパーゼ、Pse
はPseudomonas fragiのリパーゼ、B
acはBacillus stearothermop
hilusのリパーゼの活性中心のアミノ酸配列を表す
、)表−1より(−A−Gly−X−Ser−Y−Gl
y−8−) (但し、A、X、Y、Bはアミノ酸を表
す)のアミノ酸配列に対応するDNA配列がリパーゼに
共通のDNA配列であることがわかる。以上の結果より
、本発明は、Aが1ieu又はAla 、 XがII
i s又はLeu 、 YがGin又はLeu s若し
くはBがAla又はGlyであるようなアミノ酸配列に
対応する塩基配列を含むリパーゼをコードするDNA配
列及びかかるDNA配列を有するプラスミドである。例
えば、AがIleu、Xが1113.、YがGin、及
びBがAlaのときシュードモナス・フラジのリパーゼ
をコードするDNA配列とすることができ、AがAla
、 XがLeu 、 YがLeu及びBがGlyのと
きバチルス・ステアロサーモフィルスのリパーゼをコー
ドするDNA配列とすることができる。
次に、本発明のDNAプラスミドを用いてリパーゼを生
産することができる。
産することができる。
例えば、シュードモナス・フラジ(Pseudoa+o
nasfragi)のリパーゼの場合、前記pKK−0
、pKK−1゜1又はpHB−1,0プラスミドベクタ
ーを有する菌を公知の培地を用いて培養し、培養液上澄
よりリパーゼを分離・精製したり、或いは菌体を超音波
等の手段を用いて破壊しリパーゼを抽出・分離・精製し
て得ることができる。バチルス・ステアロサーモフィル
ス(Bacillus stearothermoph
ilus )の場合も同様である。
nasfragi)のリパーゼの場合、前記pKK−0
、pKK−1゜1又はpHB−1,0プラスミドベクタ
ーを有する菌を公知の培地を用いて培養し、培養液上澄
よりリパーゼを分離・精製したり、或いは菌体を超音波
等の手段を用いて破壊しリパーゼを抽出・分離・精製し
て得ることができる。バチルス・ステアロサーモフィル
ス(Bacillus stearothermoph
ilus )の場合も同様である。
(実施例)
以下実施例により本発明の実施態様を説明する。
実施例1
(111Jパーゼの遺伝情報を担う染色体DNAの調製
と切断 シュードモナス・フラジ(Pseudoo+onas
fragi) IPo 3458株からMarn+ur
等の方法(Journal ofMolecular
Biology 3.208−218 ’61 )を改
良したCo1en+an K等の方法(Journal
of [lacteriology153 (219
05−915’83 ’)を用いて染色体DNAを調製
した。
と切断 シュードモナス・フラジ(Pseudoo+onas
fragi) IPo 3458株からMarn+ur
等の方法(Journal ofMolecular
Biology 3.208−218 ’61 )を改
良したCo1en+an K等の方法(Journal
of [lacteriology153 (219
05−915’83 ’)を用いて染色体DNAを調製
した。
この結果、OD26(10)0 D280 =1.8程
度のかなり純粋な染色体DNAを調製することができた
。
度のかなり純粋な染色体DNAを調製することができた
。
制限酵素5au3 Aを用いて、常法により前記DNA
を部分分解し、10%−40%蔗糖密糖蜜配遠心分離を
おこなって2〜6 kb画分のDNAを調製した。
を部分分解し、10%−40%蔗糖密糖蜜配遠心分離を
おこなって2〜6 kb画分のDNAを調製した。
(「昆虫のバイオテクノロジー」三宅端等mp122−
132) (講談社)の方法を用いた。
132) (講談社)の方法を用いた。
(2)ベクターDNAの調製と切断
アンピシリン耐性を有する多コピー性プラスミドp U
C9(Vieina、J and Messing、
J、 Gene 19+259 (’82 > のプ
ラスミドDNAを常法(Molecular Clon
ing ed、 Maniatis et al p9
2−94Cold Spring l1arber L
aboratory 11.s、八、)に従ってjgI
製し、制限酵素Bao+ H1で切断し、ベクターDN
Aを調製した。
C9(Vieina、J and Messing、
J、 Gene 19+259 (’82 > のプ
ラスミドDNAを常法(Molecular Clon
ing ed、 Maniatis et al p9
2−94Cold Spring l1arber L
aboratory 11.s、八、)に従ってjgI
製し、制限酵素Bao+ H1で切断し、ベクターDN
Aを調製した。
(3)染色体DNAのベクターDNAへの挿入前記(1
)で得た染色体DNAと(2)で得たベクターDNAを
常法によりT−4DNAリガーゼを用いて ・連結さ
せた。
)で得た染色体DNAと(2)で得たベクターDNAを
常法によりT−4DNAリガーゼを用いて ・連結さ
せた。
(4)組換え体プラスミドによる大腸菌の形質転換IE
、Co11 JM83をKushner S、R,の方
法(GeneticEngineering ed、H
,Il、 [1oyer and S、N1cosia
p17 Elsevier/North−Hollan
d、Amsterdam )により処理し、(3)で得
たりガーゼ反応物を加え、アンピシリン(5eug/糟
1)、5−ブロモ−4−クロロ−3−クンドリル−/?
−D−ガラクトシド(X−gal−30μg / ml
)を含むLB寒天培地に塗布し、37℃で一夜培養し、
白色のコロニーを得た。
、Co11 JM83をKushner S、R,の方
法(GeneticEngineering ed、H
,Il、 [1oyer and S、N1cosia
p17 Elsevier/North−Hollan
d、Amsterdam )により処理し、(3)で得
たりガーゼ反応物を加え、アンピシリン(5eug/糟
1)、5−ブロモ−4−クロロ−3−クンドリル−/?
−D−ガラクトシド(X−gal−30μg / ml
)を含むLB寒天培地に塗布し、37℃で一夜培養し、
白色のコロニーを得た。
([昆虫のバイオテクノロジー」三宅端等WAp77−
86)(講談社)の方法を用いた。
86)(講談社)の方法を用いた。
(5)リパーゼ遺伝子を含む大腸菌の選択分離(a)ト
リブチリン寒天培地の調製 トリブチリンを0.5V/V%とアンピシリン(50μ
g/mg)を寒天培地に加えて、トリブチリン寒天培地
を調製した。
リブチリン寒天培地の調製 トリブチリンを0.5V/V%とアンピシリン(50μ
g/mg)を寒天培地に加えて、トリブチリン寒天培地
を調製した。
かかるトリブチリン寒天培地をリパーゼ生産菌株のスク
リーニングに用いる為である。(Berner、D、L
、 and llammond、E、G、 Lipid
s、5.588 ’70 )尚、H,Co11 JM8
3はトリブチリン寒天培地で培養してもクリアーゾーン
の形成(ハロー形成)は認められなかった。
リーニングに用いる為である。(Berner、D、L
、 and llammond、E、G、 Lipid
s、5.588 ’70 )尚、H,Co11 JM8
3はトリブチリン寒天培地で培養してもクリアーゾーン
の形成(ハロー形成)は認められなかった。
又・シュードモナス・フラジ(Pseudomonas
fragi ) IPo 3458株をトリブチリン寒
天培地で培養するとクリアーゾーンの形成(ハロー形成
)が認められた。
fragi ) IPo 3458株をトリブチリン寒
天培地で培養するとクリアーゾーンの形成(ハロー形成
)が認められた。
(blリパーゼ遺伝子を含む大腸菌の選択分離前記(4
)で得た白色のコロニー約4(100株を(alのトリ
ブチリン寒天培地にスポットして一夜i養した結果、ク
リアーゾーンを形成(ハロー形成)する菌株一つを得た
。
)で得た白色のコロニー約4(100株を(alのトリ
ブチリン寒天培地にスポットして一夜i養した結果、ク
リアーゾーンを形成(ハロー形成)する菌株一つを得た
。
この菌株の大腸菌をJM83 (pKK−0)と名付
けた。
けた。
プラスミドpKK−0の制限酵素切断地図を第3図に示
す。
す。
(7)プラスミドDNAの解析
pKK−0プラスミドを各種制限酵素により切断し、各
DNA断片をpUC9にサブクローニングして大腸菌を
形質転換させ、前記と同様にしてトリブチリン培地にお
けるクリアーゾーン形成(ハロー形成)の有無を調べた
。pKK−0のシュードモナス・フラジ染色体DNA由
来の内胴nd m−EcoRlのDNA断片を有するプ
ラスミド(pKK−1,1)及び旧ndn[−Ball
のDNA断片を有するプラスミド(pHB−1,0’)
を有する大腸菌にクリアーゾーン形成(ハロー形成)が
認められた。
DNA断片をpUC9にサブクローニングして大腸菌を
形質転換させ、前記と同様にしてトリブチリン培地にお
けるクリアーゾーン形成(ハロー形成)の有無を調べた
。pKK−0のシュードモナス・フラジ染色体DNA由
来の内胴nd m−EcoRlのDNA断片を有するプ
ラスミド(pKK−1,1)及び旧ndn[−Ball
のDNA断片を有するプラスミド(pHB−1,0’)
を有する大腸菌にクリアーゾーン形成(ハロー形成)が
認められた。
結果を第5図に示す。リパーゼ遺伝子が旧ndII[−
Ballの約1.OkbのDNA領域に存在することが
示唆された。
Ballの約1.OkbのDNA領域に存在することが
示唆された。
(81D N A塩基配列の決定
Sanger等によるdideoxy法(Sanger
、F、et alProc、Na口、Acod、Sci
、USA 74.5463 ’?? )により、pHB
−1,0プラスミドの挿入DNA断片の塩基配列を決定
した。
、F、et alProc、Na口、Acod、Sci
、USA 74.5463 ’?? )により、pHB
−1,0プラスミドの挿入DNA断片の塩基配列を決定
した。
その結果、第1図に水子ようなオープンリーディングフ
レームの存在を認めた。
レームの存在を認めた。
又、大腸菌JM83 (1)KK−0)を3%ポリペプ
トン培地(pt16.0 )を用いて37°Cで24時
間培養後、集菌し、1(10mM トリス塩酸(pH
7,5)−0,2mM硫酸亜鉛緩衝液の115倍量にサ
スペンドし凍結溶解後、超音波破壊・抽出した上澄より
210/m 1のリパーゼ活性を得た。
トン培地(pt16.0 )を用いて37°Cで24時
間培養後、集菌し、1(10mM トリス塩酸(pH
7,5)−0,2mM硫酸亜鉛緩衝液の115倍量にサ
スペンドし凍結溶解後、超音波破壊・抽出した上澄より
210/m 1のリパーゼ活性を得た。
実施例2
(1)リパーゼの遺伝情報を担う染色体DNAの調製と
切断 バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus
stearothermophilus ) IFo
12550株から実施例1と同様にして染色体DNAを
調製した。
切断 バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus
stearothermophilus ) IFo
12550株から実施例1と同様にして染色体DNAを
調製した。
制限酵素11indnlを用いて、常法により前記DN
Aを完全分解し、染色体DNAを調製した。
Aを完全分解し、染色体DNAを調製した。
(2)ベクターDNAの調製と切断
アンピシリン耐性を有する多コピー性プラスミドpUC
9を実施例1と同様にして調製し、制限酵素11ind
I[Iで切断し、ベクターDNAを調製した。
9を実施例1と同様にして調製し、制限酵素11ind
I[Iで切断し、ベクターDNAを調製した。
(3)染色体DNAのベクターDNAへの挿入前記(1
)で得た染色体DNAと(2)で得たベクターDNAを
常法によりT−4DNAリガーゼを用いて連結させた。
)で得た染色体DNAと(2)で得たベクターDNAを
常法によりT−4DNAリガーゼを用いて連結させた。
(4)組換え体プラスミドによる大腸菌の形質転換E、
Co11 JM83を用い、実施例1と同様にして白色
のコロニーを得た。
Co11 JM83を用い、実施例1と同様にして白色
のコロニーを得た。
(5)リパーゼ遺伝子を含む大腸菌の選択分離(a)ト
リブチリン寒天培地の調製 実施例1と同様にした。
リブチリン寒天培地の調製 実施例1と同様にした。
バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus
stearothermophilus ) IPO1
2550株をトリブチリン寒天培地で培養するとクリア
ーゾーンの形成(ハロー形成)が認められた。
stearothermophilus ) IPO1
2550株をトリブチリン寒天培地で培養するとクリア
ーゾーンの形成(ハロー形成)が認められた。
(b) IJパーゼ遺伝子を含む大腸菌の選択分離前記
(4)で得た白色のコロニー約6(100株を(alの
トリブチリン寒天培地にスポットして一夜培養した結果
、クリアーゾーンを形成(ハロー形成)する菌株一つを
得た。
(4)で得た白色のコロニー約6(100株を(alの
トリブチリン寒天培地にスポットして一夜培養した結果
、クリアーゾーンを形成(ハロー形成)する菌株一つを
得た。
この菌株の大腸菌をJM83 (pBll−7”)と
名付けた。
名付けた。
プラスミドpIl11−7の制限酵素切断地図を第4図
に示す。
に示す。
(7)プラスミドDNAの解析
pBll−7プラスミドを各種制限酵素により切断し、
各DNA断片をpUC9にサブクローニングして大腸菌
を形質転換させ、前記と同様にしてトリブチリン培地に
おけるクリアーゾーン形成(ハロー形成)の有無を調べ
た。pBII−7のバチルス・ステアロサーモフィルス
染色体DNA由来の内胴ndI[l−3al IのD
NA断片を有するプラスミド(pH5−6)を有する大
腸菌、Sal I−Acc 1のDNA断片を有するプ
ラスミド(pHA−1)を有する大腸菌、その他第6図
に示すプラスミドを有する大腸菌にクリアーゾーン形成
(ハロー形成)が認められた。
各DNA断片をpUC9にサブクローニングして大腸菌
を形質転換させ、前記と同様にしてトリブチリン培地に
おけるクリアーゾーン形成(ハロー形成)の有無を調べ
た。pBII−7のバチルス・ステアロサーモフィルス
染色体DNA由来の内胴ndI[l−3al IのD
NA断片を有するプラスミド(pH5−6)を有する大
腸菌、Sal I−Acc 1のDNA断片を有するプ
ラスミド(pHA−1)を有する大腸菌、その他第6図
に示すプラスミドを有する大腸菌にクリアーゾーン形成
(ハロー形成)が認められた。
結果を第6図に示す。リパーゼ遺伝子がSal 1−A
cclの約1.7kbのDNA領域に存在することが示
唆された。
cclの約1.7kbのDNA領域に存在することが示
唆された。
(81D N A塩基配列の決定
実施例1と同様にしてpHs−6プラスミドの挿入DN
A断片の塩基配列を決定した。
A断片の塩基配列を決定した。
その結果、第2図に示すようなオープンリーディングフ
レームの存在を認めた。
レームの存在を認めた。
又、大腸菌JM83 (pHs−6)を3%ポリペプト
ン培地(pH6,0)を用いて37℃で24時間培養後
、集菌し、1(10mM l−リス塩酸(pH7,5)
0.2mM硫酸亜鉛緩衝液を培養液の115倍量に
サスペンドし凍結溶解後、超音波破壊・抽出した上澄よ
り0.511J/ml!のリパーゼ活性を得た。
ン培地(pH6,0)を用いて37℃で24時間培養後
、集菌し、1(10mM l−リス塩酸(pH7,5)
0.2mM硫酸亜鉛緩衝液を培養液の115倍量に
サスペンドし凍結溶解後、超音波破壊・抽出した上澄よ
り0.511J/ml!のリパーゼ活性を得た。
実施例3
(1)ハロー欠損株のtWI製
前述トリブチリン寒天培地でハローを形成するバチルス
・ステアロサーモフィルス(Bacillusstea
rothermophilus) C021株を、ニト
ロソグアニジン処理しくJ、of Bacteriol
ogy 154 (21831−837”83 ) 、
0.2%(v/v)トリブチリン寒天培地にてハローを
形成しない変異株NL−1を得た。(2)プラスミドベ
クターの調製 実施例2と同様にして得たプラスミドpHs−6を制限
酵素Sma Iを用いて切断し、旧ndI[[リンカ
−を付け、l1indl[制限酵素で切断し、両側に旧
ndnl切断部位をもつプラスミドpH5−6−1を得
た。 (Molecular Cloning ed
、Maniatis et al p392−393C
old Spring l1arber Lab
oratory ロ、S、A、)一方、バチルス・ス
テアロサーモフィルス(Bacillus stear
othermophilus )のプラスミドp’rB
90を11indll[制限酵素で切断し、前記pH5
−6−1の11ind m D N A断片を常法によ
り連結させプラスミドを得た。
・ステアロサーモフィルス(Bacillusstea
rothermophilus) C021株を、ニト
ロソグアニジン処理しくJ、of Bacteriol
ogy 154 (21831−837”83 ) 、
0.2%(v/v)トリブチリン寒天培地にてハローを
形成しない変異株NL−1を得た。(2)プラスミドベ
クターの調製 実施例2と同様にして得たプラスミドpHs−6を制限
酵素Sma Iを用いて切断し、旧ndI[[リンカ
−を付け、l1indl[制限酵素で切断し、両側に旧
ndnl切断部位をもつプラスミドpH5−6−1を得
た。 (Molecular Cloning ed
、Maniatis et al p392−393C
old Spring l1arber Lab
oratory ロ、S、A、)一方、バチルス・ス
テアロサーモフィルス(Bacillus stear
othermophilus )のプラスミドp’rB
90を11indll[制限酵素で切断し、前記pH5
−6−1の11ind m D N A断片を常法によ
り連結させプラスミドを得た。
(3)ハロー欠損株の形質転換
前記(1)のハロー欠損株に前記(2)のプラスミドを
導入し、ハロー欠損株を形質転換した。(プロトプラス
ト法: J、of Bacteriology 149
.(3)、 824−830゛82) かかる形質転換したバチルス・ステアロサーモフィルス
(Bacillus stearothermophi
lus )をテトラサイクリン(5μg/mjりを含む
0.2%(V/V)I−リプチリン寒天培地で培養しハ
ローを形成を認めた。
導入し、ハロー欠損株を形質転換した。(プロトプラス
ト法: J、of Bacteriology 149
.(3)、 824−830゛82) かかる形質転換したバチルス・ステアロサーモフィルス
(Bacillus stearothermophi
lus )をテトラサイクリン(5μg/mjりを含む
0.2%(V/V)I−リプチリン寒天培地で培養しハ
ローを形成を認めた。
(効果)
以上詳述したように、本発明によりリパーゼをコードす
るDNA配列及びプラスミドが可能になり、遺伝子工学
的にリパーゼの生産等が可能になったものである。例え
ば、1.3位特異性リパーゼ、耐熱性リパーゼ等の産業
的に有用なリパーゼをコードするDNA配列、かかるD
NA配列を有するプラスミド、かかるプラスミドの利用
による遺伝子工学的1.3位特異性リパーゼ、耐熱性リ
パーゼ等の生産が可能になったものであり、産業の発達
に寄与するものである。
るDNA配列及びプラスミドが可能になり、遺伝子工学
的にリパーゼの生産等が可能になったものである。例え
ば、1.3位特異性リパーゼ、耐熱性リパーゼ等の産業
的に有用なリパーゼをコードするDNA配列、かかるD
NA配列を有するプラスミド、かかるプラスミドの利用
による遺伝子工学的1.3位特異性リパーゼ、耐熱性リ
パーゼ等の生産が可能になったものであり、産業の発達
に寄与するものである。
第1図はシュードモナス・フラジのリパーゼをコードす
るDNA配列及び対応するアミノ酸配列を示す図面であ
る。 (式中Aはデオキシアデニル基を、Gはデオキシグアニ
ル基を、Cはデオキシアデニル基を、Tはチミジル基を
表す。) 第2図はバチルス・ステアロサーモフィラスのリパーゼ
をコードするDNA配列及び対応するアミノ酸配列を示
す図面である。 (式中^はデオキシアデニル基を、Gはデオキシグアニ
ル基を、Cはデオキシシチジル基を、Tはチミジル基を
表す。) 第3図はシュードモナス・フラジのリパーゼをコードす
るDNA配列を有するプラスミドpKK−0(4,7k
b )の制限酵素切断地図を示す図面である。 第4図はバチルス・ステアロサーモフィルスのリパーゼ
をコードするDNA配列を有するプラスミドpBII−
7(10,2kb)の制限酵素切断地図を示す図面であ
る。 第5図はρKK−0(4,7kb ) 、pKK−0,
9(3,6kb) 、pss−t、e (4,3kb
’) 、pKK−1,1(3,8kb )、pHl1
−1.0 (3,7kb ) 、ptls−0,4(
3,1kb )の各挿入DNA断片とトリブチリン培地
におけるクリアゾーンの形成の有無(ハロー形成5Il
alo+はハロー形成有り、1lalo−はハロー形成
無し)を示す図面である。 第6図はpBII−7(10,2kb) 、pH1l−
1、ptls−6、pHP−5、pEP−4、pSA−
1(4,4kb)の各挿入DNA断片とトリブチリン培
地におけるクリアゾーンの形成の有無(ハロー形成s
Halo+はハロー形成有り、1lalo−はハロー形
成無し)を示す図面である。
るDNA配列及び対応するアミノ酸配列を示す図面であ
る。 (式中Aはデオキシアデニル基を、Gはデオキシグアニ
ル基を、Cはデオキシアデニル基を、Tはチミジル基を
表す。) 第2図はバチルス・ステアロサーモフィラスのリパーゼ
をコードするDNA配列及び対応するアミノ酸配列を示
す図面である。 (式中^はデオキシアデニル基を、Gはデオキシグアニ
ル基を、Cはデオキシシチジル基を、Tはチミジル基を
表す。) 第3図はシュードモナス・フラジのリパーゼをコードす
るDNA配列を有するプラスミドpKK−0(4,7k
b )の制限酵素切断地図を示す図面である。 第4図はバチルス・ステアロサーモフィルスのリパーゼ
をコードするDNA配列を有するプラスミドpBII−
7(10,2kb)の制限酵素切断地図を示す図面であ
る。 第5図はρKK−0(4,7kb ) 、pKK−0,
9(3,6kb) 、pss−t、e (4,3kb
’) 、pKK−1,1(3,8kb )、pHl1
−1.0 (3,7kb ) 、ptls−0,4(
3,1kb )の各挿入DNA断片とトリブチリン培地
におけるクリアゾーンの形成の有無(ハロー形成5Il
alo+はハロー形成有り、1lalo−はハロー形成
無し)を示す図面である。 第6図はpBII−7(10,2kb) 、pH1l−
1、ptls−6、pHP−5、pEP−4、pSA−
1(4,4kb)の各挿入DNA断片とトリブチリン培
地におけるクリアゾーンの形成の有無(ハロー形成s
Halo+はハロー形成有り、1lalo−はハロー形
成無し)を示す図面である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 (1)リパーゼをコードするDNA配列。 (2)−−A−Gly−X−Ser−Y−Gly−B−
−のアミノ酸配列に対応するDNA配列を含む特許請求
の範囲第(1)項記載のDNA配列。 (但し、A、X、Y、Bはアミノ酸を表す)(3)Aが
Ileu又はAla、XがHis又はLeu、YがGl
n又はLeu、若しくはBがAla又はGlyである特
許請求の範囲第(1)項又は第(2)項記載のDNA配
列。 (4)シュードモナス(Pseudomonas)属の
リパーゼをコードする特許請求の範囲第(1)から第(
3)項のいずれかに記載のDNA配列。 (5)シュードモナス(Pseudomonas)属が
シュードモナス・フラジ(Pseudomonas f
ragi)である特許請求の範囲第(4)項記載のDN
A配列。 (6)AがIleu、XがHis、YがGln、及びB
がAlaである特許請求の範囲第(4)項又は第(5)
項記載のDNA配列。 (7)バチルス(Bacillus)属のリパーゼをコ
ードする特許請求の範囲第(1)から第(3)項のいず
れかに記載のDNA配列。 (8)バチルス(Bacillus)属がバチルス・ス
テアロサーモフィルス(Bacillus stear
othermo−philus)である特許請求の範囲
第(7)項記載のDNA配列。 (9)AがAla、XがLeu、YがLeu及びBがG
lyである特許請求の範囲第(8)項記載のDNA配列
。 (10)リパーゼをコードするDNA配列を有するプラ
スミド。 (11)−−A−Gly−X−Ser−Y−Gly−B
−−のアミノ酸配列に対応するDNA配列を有する特許
請求の範囲第(10)項記載のプラスミド。 (但し、A、X、Y、Bはアミノ酸を表す)(12)A
がIleu又はAla、XがHis又はLeu、YがG
ln又はLeu、若しくはBがAla又はGlyである
特許請求の範囲第(10)項又は第(11)項記載のプ
ラスミド。 (13)シュードモナス(Pseudomonas)属
のリパーゼをコードするDNA配列を有する特許請求の
範囲第(10)項乃至第(12)項のいずれかに記載の
プラスミド。 (14)シュードモナス(Pseudomonas)属
がシュードモナス・フラジ(Pseudomonas
fragi)である特許請求の範囲第(13)項記載の
プラスミド。 (15)AがIleu、XがHis、YがGln、及び
BがAlaである特許請求の範囲第(13)項又は第(
14)項記載のプラスミド。 (16)バチルス(Bacillus)属のリパーゼを
コードする特許請求の範囲第(10)乃至第(12)項
のいずれかに記載のプラスミド。 (17)バチルス(Bacillus)属がバチルス・
ステアロサーモフィルス(Bacillus stea
rothermo−philus)である特許請求の範
囲第(16)項記載のプラスミド。 (18)AがAla、XがLeu、YがLeu及びBが
Glyである特許請求の範囲第(17)項記載のプラス
ミド。 (19)リパーゼをコードするDNA配列を有するプラ
スミドを用いてリパーゼを生産する方法。 (20)リパーゼをコードするDNA配列を有するプラ
スミドが特許請求の範囲第(11)項から第(18)項
のいずれかに記載のプラスミドである特許請求の範囲第
(19)項記載のリパーゼを生産する方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7230786A JPS62228279A (ja) | 1986-03-28 | 1986-03-28 | Dna配列、プラスミド及びリパ−ゼを生産する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7230786A JPS62228279A (ja) | 1986-03-28 | 1986-03-28 | Dna配列、プラスミド及びリパ−ゼを生産する方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62228279A true JPS62228279A (ja) | 1987-10-07 |
Family
ID=13485478
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP7230786A Pending JPS62228279A (ja) | 1986-03-28 | 1986-03-28 | Dna配列、プラスミド及びリパ−ゼを生産する方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62228279A (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01148188A (ja) * | 1987-12-03 | 1989-06-09 | Chisso Corp | リパーゼ構造遺伝子を含む組換え体dna,それを含む大腸菌、及びリパーゼの製造法 |
DE3908131A1 (de) * | 1988-03-14 | 1989-10-05 | Toyo Jozo Kk | Dna mit genetischer information von lipase |
JPH0239890A (ja) * | 1988-07-27 | 1990-02-08 | Chisso Corp | リパーゼ遺伝子 |
EP0334462B2 (en) † | 1988-03-25 | 2002-04-24 | Genencor International, Inc. | Molecular cloning and expression of genes encoding lipolytic enzymes |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60188072A (ja) * | 1984-03-09 | 1985-09-25 | Lion Corp | 組換え体dνa、その製造方法、それを含む大腸菌及びそれを用いたリパ−ゼの製造方法 |
-
1986
- 1986-03-28 JP JP7230786A patent/JPS62228279A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60188072A (ja) * | 1984-03-09 | 1985-09-25 | Lion Corp | 組換え体dνa、その製造方法、それを含む大腸菌及びそれを用いたリパ−ゼの製造方法 |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01148188A (ja) * | 1987-12-03 | 1989-06-09 | Chisso Corp | リパーゼ構造遺伝子を含む組換え体dna,それを含む大腸菌、及びリパーゼの製造法 |
DE3908131A1 (de) * | 1988-03-14 | 1989-10-05 | Toyo Jozo Kk | Dna mit genetischer information von lipase |
GB2216528A (en) * | 1988-03-14 | 1989-10-11 | Toyo Jozo Kk | DNA sequence coding lipase |
GB2216528B (en) * | 1988-03-14 | 1992-07-22 | Toyo Jozo Kk | Dna encoding lipase from chromobacterium sp |
EP0334462B2 (en) † | 1988-03-25 | 2002-04-24 | Genencor International, Inc. | Molecular cloning and expression of genes encoding lipolytic enzymes |
JPH0239890A (ja) * | 1988-07-27 | 1990-02-08 | Chisso Corp | リパーゼ遺伝子 |
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