JPS62201571A - 新規キトサナ−ゼ生産菌 - Google Patents
新規キトサナ−ゼ生産菌Info
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- JPS62201571A JPS62201571A JP61042613A JP4261386A JPS62201571A JP S62201571 A JPS62201571 A JP S62201571A JP 61042613 A JP61042613 A JP 61042613A JP 4261386 A JP4261386 A JP 4261386A JP S62201571 A JPS62201571 A JP S62201571A
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- chitosan
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は高活性なキトサナーゼを産生ずる新規なキトサ
ナーゼ生産菌に関するものである。
ナーゼ生産菌に関するものである。
キトサンは、カニやエビの甲かく中に含まれるアミノ糖
からなる多糖類の１種であるキチンの脱アセチル化物で
ある。そして、キトサンはユニークな特性を有すること
から最近注目されており、例えば、金属の選択的吸着剤
、有機材料用凝固剤、パブケイジングフィルム等に広く
利用可能である。
からなる多糖類の１種であるキチンの脱アセチル化物で
ある。そして、キトサンはユニークな特性を有すること
から最近注目されており、例えば、金属の選択的吸着剤
、有機材料用凝固剤、パブケイジングフィルム等に広く
利用可能である。
さらに利用性を向上させるためにキトサンを分解して低
分子のものにすることが行なわれている。
分子のものにすることが行なわれている。
例えば、１９８４年アカデミツク プレス インコーポ
レーション（八ｃａｄｅｍｉｃ Ｉ’ｒｅｓｓ Ｉｎｃ
、） より発行されたキチン キトサン アンド リ
レーテッド エンザイムズ（ＣＨＩＴＩＮ、 ＣＩＩ
ＩＴ［］ＳＡＮ ａｎｄ Ｒ１１ｉｌ、ＡＴ１２ＤＩＥ
ＮＸＹＭ［Ｅｓ）のＰ１６１〜Ｐ１７９には、土壌から
キトサンを分解する微生物が単離され、該微生物は、キ
トサンを分解する酵素であるキトサナーゼを有すること
が記載されている。具体的には、該微生物はバチラス
サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎ
ｓ）でありキトサナーゼはキトサンを加水分解すること
が示されている。
レーション（八ｃａｄｅｍｉｃ Ｉ’ｒｅｓｓ Ｉｎｃ
、） より発行されたキチン キトサン アンド リ
レーテッド エンザイムズ（ＣＨＩＴＩＮ、 ＣＩＩ
ＩＴ［］ＳＡＮ ａｎｄ Ｒ１１ｉｌ、ＡＴ１２ＤＩＥ
ＮＸＹＭ［Ｅｓ）のＰ１６１〜Ｐ１７９には、土壌から
キトサンを分解する微生物が単離され、該微生物は、キ
トサンを分解する酵素であるキトサナーゼを有すること
が記載されている。具体的には、該微生物はバチラス
サーキュランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎ
ｓ）でありキトサナーゼはキトサンを加水分解すること
が示されている。
本発明は、上記文献記載のバチラス サーキュランスが
産生ずるよりも高い活性を有するキトサナーゼを産生ず
る新規微生物を提供することを目的とする。
産生ずるよりも高い活性を有するキトサナーゼを産生ず
る新規微生物を提供することを目的とする。
本発明は、キトサナーゼ生産能を有する微生物を自然界
より広く検索した結果、アルカリゲネス属の特定の微生
物がキトサナーゼを多虫に産生じ、かつ該キトサナーゼ
が高活性を有することを見出し、本発明を完成したので
ある。
より広く検索した結果、アルカリゲネス属の特定の微生
物がキトサナーゼを多虫に産生じ、かつ該キトサナーゼ
が高活性を有することを見出し、本発明を完成したので
ある。
すなわち、本発明は、アルカリゲネス属に属するキトサ
ナーゼ生産菌アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉ −ｇｅｎ
ｅｓ） Ｍ ＨＫ −１株を提供する。
ナーゼ生産菌アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉ −ｇｅｎ
ｅｓ） Ｍ ＨＫ −１株を提供する。
本発明で用いるアルカリゲネスＭＨＫ−株１は、微工研
閑寄第８６６２号（ＦＥＲＭ Ｐ−８６６２）として寄
託されているものであり、次に示す菌学的性質を有する
。
閑寄第８６６２号（ＦＥＲＭ Ｐ−８６６２）として寄
託されているものであり、次に示す菌学的性質を有する
。
（υ形 態
大きさ０．５〜０．８ Ｘ １．６〜２．２ μｍのダ
ラム陰性桿菌で胞子を形成せず、運動性を示し、好気性
である。集落な金縁、円形、半レンズ状から偏平状であ
り、表面は平滑でにぷい光沢があり、粘稠、無色である
。
ラム陰性桿菌で胞子を形成せず、運動性を示し、好気性
である。集落な金縁、円形、半レンズ状から偏平状であ
り、表面は平滑でにぷい光沢があり、粘稠、無色である
。
［ｉｉｌ生育状態
コロイダルキトサン １％
グルコース ０．１
ＫＨ２Ｐ０． ０．１
Ｍｇ５Ｌ・７Ｈ２００，０５
寒 天 １．５の培地（ｐｌ（
７，０＞で２８℃、９６時間培養すると明確なコロニー
を形成する。
７，０＞で２８℃、９６時間培養すると明確なコロニー
を形成する。
（ｉｉｉｌ理学的性質
硝酸塩の還元 ： 陽 性
Ｖ−Ｐテスト ： 陰 性
インドールの生成 ： 生成せず
硫化水素生成 ： 生成せず
デンプンの加水分解： 分解する
ウレアーゼ ： 陽 性
オキシダーゼ ・ 〃
カタラーゼ 〃
本発明の菌株は種々の土壌をスクリーニングし、次の方
法により土壌から分離した。
法により土壌から分離した。
コロイダルキトサン１％、ペア”）７０．１％、にＩ＋
２１’０４０．１％、ＭｇＳＯ４・７１１□００．０５
％、寒天１．５％含有の培地上で土壌試料の懸濁液を１
白金耳量画線し、これを２８℃で９６時間培養した後コ
ロニーを採取し、これを繰返して菌株を培養した。
２１’０４０．１％、ＭｇＳＯ４・７１１□００．０５
％、寒天１．５％含有の培地上で土壌試料の懸濁液を１
白金耳量画線し、これを２８℃で９６時間培養した後コ
ロニーを採取し、これを繰返して菌株を培養した。
この様にして得た菌株を、ペプトン１％、酵母エキス１
％、ＮａＣｊ！ ０．５％、寒天１．５％の培地に移し
て２８℃で４日間培養した後、室温で保存し、１力月毎
に新しい培地に植え継ぎ保存した。
％、ＮａＣｊ！ ０．５％、寒天１．５％の培地に移し
て２８℃で４日間培養した後、室温で保存し、１力月毎
に新しい培地に植え継ぎ保存した。
次に本発明の菌株から生産されるキトサナーゼの理化学
的性質を次に示す。
的性質を次に示す。
作 用 ：キトサンに作用して、これを分解する。
ｐＨ：４〜１０
温 度 ＝ ２０〜５０℃
温度安定性：０〜５０℃、６０分処理で８０％以上の残
存活性を示す。
存活性を示す。
等 電 点：ρ１１５付近
尚、本発明で得られるキトサナーゼは培養埴液中に存在
するので、キトサンを分解させる際、遠心分離操作によ
る上清液をそのまま使用してもさしつかえないが、キト
サナーゼを単離する場合は、上記理化学的性質を考慮し
て種々の方法を適宜組合せることによって行うことがで
きる。具体的には、硫安分画法、アセトン分画法、透析
法、イオン交換クロマト法、核酸除去法、限外濾過法、
電気泳動法、その他通常用いられている方法を用いる。
するので、キトサンを分解させる際、遠心分離操作によ
る上清液をそのまま使用してもさしつかえないが、キト
サナーゼを単離する場合は、上記理化学的性質を考慮し
て種々の方法を適宜組合せることによって行うことがで
きる。具体的には、硫安分画法、アセトン分画法、透析
法、イオン交換クロマト法、核酸除去法、限外濾過法、
電気泳動法、その他通常用いられている方法を用いる。
本発明の菌株を用いれば、つまりアルカリゲネスＭＨＫ
−１株を培養すると、キトサナーゼが多蚤に産生じ、か
つ培養物から高活性のキトサナーゼを得ることができる
。
−１株を培養すると、キトサナーゼが多蚤に産生じ、か
つ培養物から高活性のキトサナーゼを得ることができる
。
次に実施例により本発明を説明する。
実施例
先ず、グルコース１％、ペプトン１％、酵母エキス１％
、Ｎａα ０．５％の培地をｌＮ−Ｎａ叶でｐＨ７，０
に、＠整し、その８０ｍを５００１Ｔ１１！坂ロフラス
コに分注し滅菌した。次に、保存培地からアルカリゲネ
スＭＨＫ−１株（Ｆ Ｅ ＲＭ Ｐ−８６６２’）を
−白金耳接種して２８℃で２４時間培養した。
、Ｎａα ０．５％の培地をｌＮ−Ｎａ叶でｐＨ７，０
に、＠整し、その８０ｍを５００１Ｔ１１！坂ロフラス
コに分注し滅菌した。次に、保存培地からアルカリゲネ
スＭＨＫ−１株（Ｆ Ｅ ＲＭ Ｐ−８６６２’）を
−白金耳接種して２８℃で２４時間培養した。
本培養はキトサン１％、ペプトン０．１％、酵母エキス
０．１％、Ｋ１１゜ＰＯ，０，１％、ＭｇＳＯ４・７１
１□００．０５％の培地（ｐＨ７，０＞を８０ｍ１づつ
別の５００ｍ１坂ロフラスコに分注し滅菌後、前培養液
１＋ｕｉ！を接種し、２８℃で９６時間振トウ培養した
。この操作を繰返し菌を馴化した。
０．１％、Ｋ１１゜ＰＯ，０，１％、ＭｇＳＯ４・７１
１□００．０５％の培地（ｐＨ７，０＞を８０ｍ１づつ
別の５００ｍ１坂ロフラスコに分注し滅菌後、前培養液
１＋ｕｉ！を接種し、２８℃で９６時間振トウ培養した
。この操作を繰返し菌を馴化した。
培養終了後１０分間遠心分離し上清液を粗キトサナーゼ
液として採取した。
液として採取した。
この粗キトサナーゼ液を３０倍に希釈し、該希釈液０．
５ｍｉ！に対し１％キトサン液１ｍｌ及び酢酸ソーダバ
ッファー１ｍｌを加え３７℃で３０分間反応（キトサン
を分解）させた。
５ｍｉ！に対し１％キトサン液１ｍｌ及び酢酸ソーダバ
ッファー１ｍｌを加え３７℃で３０分間反応（キトサン
を分解）させた。
反応終了後、沸騰水に浸して反応を停止させ、反応液の
キトサナーゼ活性を測定した。
キトサナーゼ活性を測定した。
尚、キトサナーゼ活性の測定は全還元糖を定量すること
により行なった。つまり、０．５ Ｍ Ｎａ２ＣＬ水溶
液１１に０．５ ｇのフェリシアン化カリウムを溶解さ
せた液３ｍｌ！とサンプル１ｍｌ！を試験管に入れて混
合し、さらに純水２ｍｌ’を加えた。次にガラスビー玉
で試験管にふたをし、沸とう湯浴中に１５分間浸たした
。その後、冷却し、４２０１ｍにおける吸光度を測定し
た。得られた値を用い、グルコサミンを標準物質として
作成した検１線からキトサナーゼ活性を定量した。
により行なった。つまり、０．５ Ｍ Ｎａ２ＣＬ水溶
液１１に０．５ ｇのフェリシアン化カリウムを溶解さ
せた液３ｍｌ！とサンプル１ｍｌ！を試験管に入れて混
合し、さらに純水２ｍｌ’を加えた。次にガラスビー玉
で試験管にふたをし、沸とう湯浴中に１５分間浸たした
。その後、冷却し、４２０１ｍにおける吸光度を測定し
た。得られた値を用い、グルコサミンを標準物質として
作成した検１線からキトサナーゼ活性を定量した。
結果を次に示す。
馴化回数 キトサナーゼ活性
１回 ５Ｕ／ｍｌ！
３回 １０ 〃
５回 １８ 〃
８回 ２０ 〃
上記活性は、従来の技術の項で述べた文献記載の細菌が
産生じたキトサナーゼ活性１〜２Ｕ／ｒｒｉに比べて、
極めて高いことがわかる。
産生じたキトサナーゼ活性１〜２Ｕ／ｒｒｉに比べて、
極めて高いことがわかる。
Claims (1)
- アルカリゲネス属に属するキトサナーゼ生産菌アルカリ
ゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）ＭＨＫ−１株（微工
研菌寄第８６６２号）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61042613A JPS62201571A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 新規キトサナ−ゼ生産菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61042613A JPS62201571A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 新規キトサナ−ゼ生産菌 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62201571A true JPS62201571A (ja) | 1987-09-05 |
Family
ID=12640870
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61042613A Pending JPS62201571A (ja) | 1986-02-27 | 1986-02-27 | 新規キトサナ−ゼ生産菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62201571A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02163082A (ja) * | 1988-12-13 | 1990-06-22 | Kanai Gakuen | キトサナーゼの製造方法 |
| JP2002085086A (ja) * | 2000-09-19 | 2002-03-26 | Chiba Inst Of Technology | 好熱性細菌によるキトサンオリゴ糖の製造方法 |
| US6402953B1 (en) | 1998-03-10 | 2002-06-11 | Rwe Nukem Gmbh | Adsorption means for radionuclides |
-
1986
- 1986-02-27 JP JP61042613A patent/JPS62201571A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02163082A (ja) * | 1988-12-13 | 1990-06-22 | Kanai Gakuen | キトサナーゼの製造方法 |
| US6402953B1 (en) | 1998-03-10 | 2002-06-11 | Rwe Nukem Gmbh | Adsorption means for radionuclides |
| JP2002085086A (ja) * | 2000-09-19 | 2002-03-26 | Chiba Inst Of Technology | 好熱性細菌によるキトサンオリゴ糖の製造方法 |
| JP4613322B2 (ja) * | 2000-09-19 | 2011-01-19 | 学校法人千葉工業大学 | 好熱性細菌によるキトサンオリゴ糖の製造方法 |
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