JPS62182658A - アセトアルデヒド−蛋白質縮合体のアセトアルデヒド含有決定基を認識する抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アセトアルデヒド−蛋白質縮合体のアセトア
ルデヒド含有決定基を認識し更に流体および細胞中、ア
セトアルデヒド−蛋白質縮合体の検出および測定にを効
である抗体の調製に関する。

〔従来の技術〕

アルコール中毒については、その有毒な精神的、肉体的
および社会的影響は十分立証されている。

すなわち、過剰のアルコール消費について早期に検証す
ることは、社会に対し重要な目標である。

過剰の慢性的アルコール消費を診断する今日的方法は、
特異性もしくは感度のいずれか、または双方を欠いてい
る。例えば、表に現われないアルコールによる問題の認
識において助成する、事故による骨折および一般的外傷
は特異的でない。何故なら、これらは多くの条件および
環境において生起し得るからである。一方、今日の実験
室的試験、例えば赤血球の量並びに成る種の血清酵素レ
ベルは十分に特異性を有するが、感度は十分でない。何
故なら、アルコール中毒の治療を受ける一集団のほんの
一部の人においてもこれらの試験において値が変化する
からである（スキンナー等、Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｉｎ
ｔｅｒｎａｌ　Ｍｏｄ、１０１　：　８４７−８５１（
１９８４））　−アセトアルデヒドはアルコール（エタ
ノール）の代謝産物であり、アルコール飲用後ヒトの血
液中に見出される。アセトアルデヒドはまた血液中の存
する蛋白質、すなわち血漿蛋白質および赤血球内の蛋白
質の双方に共有結合することが知られている。血液蛋白
質は、循環しながら種々の期間残存することが知られて
おり、血漿蛋白質については数日から数週間であり、更
に赤血球蛋白質については最大３力月である。

正常な人の血液中のアセトアルデヒドのレベルは無視す
ることができるが、２０〜１００μＭのアセトアルデヒ
ドの血液レベルがアルコール中毒者に認められる。しか
し、この後者のレベルでも、少量のアセトアルデヒドの
みが蛋白質に結合し、その結果アセトアルデヒドと結合
した蛋白質の検出は、従来利用された技術では不可能で
ある。

血液中に長期間存続する蛋白質に対する、存在するアセ
トアルデヒド−蛋白質縮合体レベルを測定するための鋭
敏な方法により、アセトアルデヒド暴露の量と時間、従
って長期間にわたって飲酒されたアルコールの相対的量
を累積的に記録することが出来る。このような方法は、
今日利用でき、高放射性アセトアルデヒドを利用する（
スゲ−エンおよびペターソン、カーｏｃ、　Ｓｏｃ、　
Ｅｘ　、　［■剥、・Ｍｅｄ、、　１７７．２２６−２
３３．１９８４　；　スチーブンス等、Ｊ、　Ｃｌ１ｎ
、　Ｉｎｖｅｓｔ、　　６７．３６１−３６９．１９８
１　；アイスラエル等、　ｒＡＩｄｅｈｙｄｅ　　Ａｄ
ｄｕｃｔｓ　　ｉｎ　　Ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ’　　。

３１頁、１９８５年）。これらの方法は高価であり、手
軽に実施することが困難であり、特別な注意を必要とし
更にヒトに適用可能であるか否か明確でない。

〔発明の要約〕

本発明は、放射性同位体を用いることなく、ヒトの血液
溶解物の如き溶液中のアセトアルデヒド−蛋白質縮合体
を検出しかつ定量するための鋭敏且つ特異的方法を提供
する。この方法は、次の抗体を用いる。すなわち、抗原
に対して生産された抗体であって、該抗体は、第１アセ
トアルデヒド−蛋白質縮合体； 第２アセトアルデヒド−蛋白質縮合体；及び蛋白質； から成る群から選択された蛋白質又はアセトアルデヒド
−蛋白質縮合体と交差反応性であり、そして 前記第１縮合体は前記抗原の前記蛋白質成分に相当する
蛋白質成分を含有しており； 前記第２縮合体は前記抗原の前記蛋白質成分とは異る蛋
白質成分を含有しており；そして前記蛋白質は前記抗原
の前記蛋白質成分に相当する； ことを特徴とする抗体。

別（７＞Ｍ様において、抗体が抗原に対し生産され、こ
の抗１７セトアルデヒドー蛋白質縮合体に交差反応性で
あることを特徴とし、この縮合体は該抗原の蛋白質成分
に相当する蛋白質成分又はそれとは異なる蛋白質成分か
ら成る群から選ばれる蛋白質成分を含んでいる。

〔発明の説明〕

本発明による抗原および抗体の調製方法並びに流体中の
アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を測定する際の後者（
抗体）の使用を添附図面を参照しつつ説明する。

アセトアルデヒド−ヒト赤血球蛋白縮合体は下記実施例
１に示すようにして調製した。

以下余白 実新ｌ辻１ エチレンジアミン四酢酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）を最終
濃度が５ｍＭになるまでヒト血液に添加し、混合物を３
０００Ｘｇで２０分間遠心分離した。血漿は除去し、保
存した。赤血球上のパフ様の皮膜を吸引除去し、廃棄し
た。赤血球を１０倍容の０．９％ＮａＣ１で洗浄し、３
回再度遠心分離した。最終赤血球ペレットを溶解し、そ
して０．２５倍容のトルエンを添加し、次いで２０℃で
３０分間攪拌し、遠心分離することによってメンブレン
を抽出した。

下層の水層（このヘモグロビンが主要蛋白成分であった
）２ｍｌを、４８０ｍＭアセトアルデヒド（メルク社）
を含むリン酸塩で緩衝させた食塩水（ＰＢＳ）（ｐ１１
７．４）と２０℃で混合し、６０分間反応を続行させた
。水０．７　ｍｌ中のシアノ水素化ホウ素ナトリウム（
ＮａＣＮＢＩＩｓ）２７２１Ｗを加え、３０分間に反応
させて共存結合したアセトアルデヒドを還元し安定化せ
しめた。次に、この混合物を１ｍ　ＭＮａ）ＩｚＰＯ４
（ｐｌ＋　７．０　）　２１に対して９０分間、新たな
１　ｍ　Ｍ　Ｎａ１ｌｔＰＯａ、　２　Ｅに対して１６
時間、そして最後に１　ｍ　Ｍ　ＮａＨｚＰＯａ　１１
２に対して２４時間透析させた。この処理によって、バ
イオ−ラッド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）キット（Ｂｉｏ−Ｒａ
ｄ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ＃４２３７　。

１９８３年４月）によって測定したところ、９６％のヘ
モクロビンが、固定（ｆａｓｔ）ヘモグロビンに転化し
た。この操−作をアセトアルデヒドを省いて実施して対
照試料を得たが、このヘモグロビンを、クロマトグラフ
試験したところ、ヘモグロビンの６〜１０％が固定ヘモ
グロビンであることを認めた。

この明細書の目的に対しては「固定ヘモグロビン」なる
用語は、バイオ−ラッドシステムにお゛けるクロマトグ
ラフがグルコースと接合したヘモグロビン様である接合
体ヘモグロビンを意味する。

前記実施例を３ＨラベルしたＮａＣＮＢＩＩｓを用いて
繰り返した。アセトアルデヒドの組入れ量は蛋白質■当
り略々４４ｎｍｏ＋　（即ち４４　ｎｍｏｌ　／　ｔｒ
ｇ蛋白質）と想定した。

赤血球蛋白を２４０ｍＭの代わりに１００８Ｍのアセト
アルデヒドで処理した場合にはヘモグロビンの固定ヘモ
グロビンへの転化率は５％未満であった。

この明細書の目的に対して２４０ｍＭアセトアルデヒド
で処理することによって調製した縮合体は高度に結合し
た縮合体と呼ぶことにする。

アセトアルデヒド−ヒト血漿蛋白縮合体は下記実施例２
に示すようにして調製した。

夫隻拠１ 飽和硫酸アンモニウム（ｐＨ７、１）　　２７　ｍｌを
ヒト血５１９　ｍ　ｔｔに添加し、４℃で２時間混合し
た。

血漿蛋白を含む沈澱物を１１００００Ｘで２０分間遠心
分離した。得られたベレットをＰＢ３１８ｍｊ！に溶解
し、力価１／２のＰＢＳ　１　＃に対して４℃で１時間
透析した。媒質を新たな力価１／２のＰＢＳに変えて、
透析を更に１８時間！ｌ！続した。最終濃度を１６可蛋
白７ｍｌに調整した。上記蛋白溶液５ｍｌをＰＢＳ中４
８０ｍＭアセトアルデヒド５ｍｆｆ１に加えた。反応を
２０℃で６０分間継続させ、その汲水２ｍｌ中のＮａＣ
ＮＢｆｌｚ７００ｍｇを添加した。４５分後に、得られ
た混合物を、ＰＢＳＩＮに対して４℃で２時間、引続き
ＰＢＳ５Ａに対して４℃で１８時間透析した。

上記実験を３ＨラヘルしたＮａＣＮＢＩＩ：＋を用いて
繰り返した。組み入れられたアセトアルデヒドの量は７
２６ｎｍｏｌ　／■蛋白と想定した。

アセトアルデヒドーキーホールリムベソ１−ヘモシアニ
ン縮合体は下記実施例３に示すようにして調製した。

大衡斑主　。

飽和硫酸アンモニウム中の濃度１０■／ｍｌのキーホー
ルリムペットヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｃａｌｂｉｏｃ
ｈｅｍ　＃３７４８１１　、　Ｂグレード）を５％Ｎａ
ｚＣＯｉ　４１に対して４℃で４日間、そしてｐＨ８，
７に調整したＰＢＳに対して１日間透析した。５■／ｍ
ｊｌ！ＫＬＨ２ｍｊ＋を４８０ｍＭアセトアルデヒド２
ｍｌと２０℃で混合した。６０分後、Ｉ＋、、ＯＯ，５
ｍｊ２中のＮａＣＮＢＩＩｚ　６３　■を添加し、混合
物を３時間放置し、次にＰＢＳ　（ｐ）１９．５）　０
．５に対して４℃で６時間、その後ＰＢＳ　（ｐＨ９，
５）　２１に対して４℃で１０時間透析した。

前述の如く、アルコール液中のアルデヒド濃度は２０ｕ
Ｍ〜１００μＭの範囲である。高度に結合したアルデヒ
ド−蛋白縮合体に応答して生成した抗体と生体内で認め
られるアセトアルデヒド濃度で生成した縮合体との交叉
反応性を求めるために、実施例４におけるようにして縮
合体を調製した。

実施健土 １８■蛋白／ｍＩ！に希釈した赤血球溶解物を、アセト
アルデヒドを含まないもの又はアセトアルデヒドを２０
　μＭ、　　１００／ｊＭ、　１．０ｍＭもしくは１０
ｍＭ含む、ＰＢＳ中の１０　ｍＭ　ＮａＣＮｒｌＨ：＋
　５００ｍ１ｌに対して、密閉フラスコ中２０℃で６時
間透析した。この処理後の全固定ヘモグロビンは、対照
（アセトアルデヒド含まず）　＝　１０．９４％、２０
ｕ　Ｍ　＝　１２．０９％、１００　ｐ　Ｍ　＝　１６
．２２％、１ｍＭ＝４９．６％、１０ｍＭ＝７４．０％
であった。

前記の如く、処理プロセスの最初からシアノ水素化ホウ
素を添加した場合にはアセトアルデヒドの蛋白中への組
入れが著しく起る。

多クローン抗体は以下のようにして調製した。

２ケ月令の雌マウス（ＢＡＬＢ−ＣＸＳＪＬＩＦ＋株）
ニ対して、上で調製した蛋白−アセトアルデヒド縮合体
１００μｇを、蛋白４■／　ｍ　ｌを含む食塩水及び完
全フロインドアジュバントの１＝１容＠濁液で皮下注射
した。１週間隔で更に４回注射した。次いで被験動物を
出血により殺した。この血漿をＥＤＴ＾に対し５ｍＭと
して、そして蛋白結合アセトアルデヒドの検出及び測定
用試薬として使用した。

アセトアルデヒド−蛋白縮合体のアセトアルデヒド含有
エピトープとは良好に反応するが、縮合体中の他のエピ
トープとは反応しない免疫グロブリンを生産する細胞系
を選抜するための、実施例５のプロセスは以下の通りで
ある。

ｌ施炎工 免疫感作された動物からのｌ１１１！臓細胞を、ニス°
バー　（Ｅｓｈｈａｒ）、バイオサイエンシズ・アンド
・メディシン（（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　Ｍ
ｅｄｉｃｉｎｅ）　、ティー。

スプリンガー（Ｔ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）　Ｗ、３〜４１
頁、プレナムプレス社（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ）　
Ｅ　、ニューヨーク（１９８５年）に記載の方法に従っ
て悪性骨髄腫細胞とハイブリダイズせしめた。試験した
４２０のウェルの中から、アセトアルデヒド−ヒト赤血
球蛋白質縮合体と強く反応しそしてアセトアルデヒド−
ヒト血漿蛋白質縮合体とも反応する１６個のクローンを
見い出した。さらに、これらの細胞の培養物は、アセト
アルデヒド−ヒト赤血球蛋白質縮合体中のアセトアルデ
ヒド含有エピトープに対して良好な親和性を存しそして
修飾されていない赤血球蛋白質と極めて弱ぐ反応するか
または全く反応しない免疫グロブリンをもたらした。

抗体と、アセトアルデヒド−蛋白質縮合体および蛋白質
との間の反応の測定は、非特異的部位をブロックするた
めにウシアルブミンよりむしろゼラチン０．２％を用い
たという相違点を除いて、アマージャム社（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ　Ｃｏ、）（英国）ＣａｔＮ−８３１に記載の如
（に、β−ガラクトシダーゼに結合したヒツジの抗マウ
ス免疫グロブリンを用いるエンザイムリントド第２抗体
イムノアブソーパントアッセイ　ＣＩ’ＬＩＳＡ　）に
よって実施した。固体用を被覆するために用％ｓだ抗原
はｔｏｏ、ｒｊｇ／ｍβの濃度で　１００μｌの容量で
あった。もちろん、抗原−抗体結合を検出し測定するた
めの他の技法を用いることができるということが理解さ
れよう。

例えば、ラジオイムノアッセイアフィニティークロマト
グラフィー技法、免疫電気泳動、螢光イムノアッセイ、
凝集反応アッセイおよび補体結合ア・７セイを用いるこ
とができる。

第１図かられかるように、アセトアルデヒド−ヒト赤血
球蛋白質縮合体を用いたマウスの免疫感作によって、ア
セトアルデヒドに結合していない血漿蛋白質とは反応す
ることなくアセトアルデヒド−ヒト血漿蛋白質縮合体と
強く反応する免疫グロブリンを含有する血漿が得られる
。従って、このような免疫グロブリン（抗体）は、血漿
蛋白質中の小さなエピトープのみに結合したアセトアル
デヒド基を認識するのに特異的な試薬を提供する。

第２図かられかるように、アセトアルデヒド−ヒト赤血
球蛋白質縮合体を用いて免疫感作した動物の血漿はアセ
トアルデヒド−ＫＬＨ縮合体とも反応するが修飾されて
いないＫ　Ｌ　Ｈとは反応しない。このことは、抗体に
よるアセトアルデヒド残基の認識が小さなエピト−プに
向けられており蛋白質部分に特異的なものではないとい
うことを示している。

第３図および第４図に示されているように、アセトアル
デヒド−ヒト血漿蛋白質縮合体で免疫感作されたマウス
は、アセトアルデヒド−赤血球蛋白質縮合体およびアセ
トアルデヒド−Ｋ　Ｌ　Ｈ縮合体と強くかつ特異的に反
応するが修飾されていないその各蛋白質とは反応しない
免疫グロブリンを生じた。

第５図は、密に結合したアセトアルデヒド−血漿蛋白質
縮合体の注入後に生じた免疫グロブリンは、アルコール
中毒患者（ａｌｃｏｈｏｌｉｃ）の血中に見られる範囲
内のアセトアルデヒド濃度を用いて調製したアセトアル
デヒド−赤血球蛋白質縮合体とよく反応することを示し
ている。

第６図は、アセトアルデヒド−Ｋ　Ｌ　Ｈ縮合体を用い
た免疫感作により、アセトアルデヒド−血漿蛋白質縮合
体およびアセトアルデヒド−赤血球蛋白質縮合体の両方
に反応性であるがそれらの修飾されていない各蛋白質に
は反応しない免疫グロブリンが生ずることを示している
。

アセトアルデヒド−赤血球蛋白質縮合体を用いて免疫感
作された動物の血漿は、アセトアルデヒド−赤血球蛋白
質縮合体および修飾されていない赤血球蛋白質の両者と
反応するが、第７図に示されるように、縮合体に対して
は３０〜４０％だけ一層活性である。

第８図は、アルコール中毒患者の血中に見られ。

るアセトアルデヒド濃度において調製した赤血球蛋白質
縮合体が、約５０００倍のアセトアルデヒド濃度におけ
る結合によって生成された密に結合したアセトアルデヒ
ド−赤血球蛋白質に対する反応と比較すると、良好な免
疫学的反応を惹起しないことを示している。

第９図は、１６個の選ばれたハイブリドーマクローンの
免疫グロブリンの特異性比（アセトアルデヒド−赤血球
蛋白質縮合体に対する結合親和性／赤血球蛋白質に対す
る結合親和性）を示している。これらのハイブリドーマ
クローンの２５％が高い特異性比を有する免疫グロブリ
ンを合成したことがわかる。

前述の記載より、試験管内的にアセトアルデヒドと密に
結合された蛋白質は、慢性的に動物体内に注射すると、
蛋白質に結合したアセトアルデヒド残基を特異的に認識
し定量することができる循環性の抗体を生じることが認
められる。後の蛋白質は最初の注射された蛋白質と相違
していることがある。

また、上記方法によって生じた抗体はアルコール中毒患
者の血中に存在する濃度のアセトアルデヒドと結合した
蛋白質と反応するに十分な程感受性であるので、アセト
アルデヒド−蛋白質縮合体濃度、および従って個体によ
るアルコールの相対的消費を測定することができるとい
うことも認識されよう。

さらに、アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を用いて慢性
的に注射された動物から得られた免疫グロブリン生産性
肺臓細胞は、骨髄腫細胞とハイブリダイズされそして選
ばれることによって、蛋白質に結合したアセトアルデヒ
ド基を認識する特異性を増大させた免疫グロブリンを生
産する細胞をもたらす。

【図面の簡単な説明】

第１図は、アセトアルデヒド−ヒト赤血球蛋白質縮合体
に対して生産された抗体と、アセトアルデヒド−ヒト血
漿蛋白質縮合体（−０−）及びヒト血漿蛋白￥ｒ　（−
△−）との間の交差反応性を示すグラフである。 第２図は、アセトアルデヒド−ヒト赤血球蛋白質縮合体
に対して生産された抗体と、アセトアルデヒド−キーホ
ールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）縮合体（−・−
）及びキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）（
−０〜）との間の交差反応性を示すグラフである。 第３図は、アセトアルデヒド−ヒト血漿蛋白質縮合体に
対して生産された抗体と、アセトアルデヒド−ヒト赤血
球蛋白質縮合体（−０−）及びヒト赤血球蛋白質（−へ
一）との間の交差反応性を示すグラフである。 第４図は、アセトアルデヒド−ヒト血醤蛋白質縮合体に
対して生産された抗体と、アセトアルデヒド−Ｋ　Ｌ　
Ｈ縮合体（−・−）及びＫＬＨ（−０−）との間の交差
反応性を示すグラフである。 第５図は、アセトアルデヒド−ヒト血漿蛋白質縮合体に
対して生産された抗体と、種々のアセトアルデヒド濃度
において生成した多数のアセトアルデヒド−ヒト赤血球
蛋白質縮合体との間の交差反応性を示すグラフである。 第６図は、ア↓トアルデヒドーＫＬＨ縮合体に対して生
産された抗体と、種々のア七トアルデヒドー蛋白質縮合
体及びそれらの対応する蛋白質との間の交差反応性を示
すグラフであり、このグラフは、蛋白質縮合体中のアセ
トアルデヒド含有決定基が抗体により認識されること、
及び対応する蛋白質のみは認識されないことを示してい
る。 第７図は、アセトアルデヒド−ヒト赤血球蛋白質縮合体
に対して生産された抗体と、アセトアルデヒド−ヒト赤
血球蛋白質縮合体及びヒト赤血球蛋白質との間の交差反
応性を示すグラフであり、このグラフは、該抗体が、修
飾さていない赤血球蛋白質の認識に対してよりも縮合体
の認識に対して一層高い能力を有することを示すもので
ある。 第８図は、１００μＭアセトアルデヒドの濃度で調製さ
れたアセトアルデヒド−ヒト赤血球蛋白質縮合体に対し
て生産された第１抗体、及び２４０ｍＭアセトアルデヒ
ドの濃度で調製されたアセトアルデヒド−ヒト赤血球蛋
白質縮合体に対して生産された第２抗体と、アセトアル
デヒド−ヒト血漿蛋白質縮合体及びヒト血漿蛋白質との
間の交差反応性を示すグラフである。 第９図は、アセトアルデヒド−ヒト赤血球蛋白質縮合体
及びヒト赤血球蛋白質に対する、多数の選択されたハイ
ブリドーマクローンからの抗体の相対的親和性を示すグ
ラフであり、そして非常に高い特異性比を有する免疫グ
ロブリンを合成するクローンの単離を示す。 以下ぷ白 図面の沙門（内容に変更なし） 蛋白質縮合体 マウス血漿（１／ｆｌｌ釈） 蛋白質縮合体 マワスｍ差Ｃ１／４状） 縮合体 マウス血漿（１／稀釈） 縮合体 マウス血漿（１／稀釈） ＩＧ−５− 免疫感作：アセトアノげヒト−ヒト血漿蛋白質縮合体 マウス血漿（１／稀釈） ＩＧ−６− 免疫感作ニア七トアルデヒドーキーホールリンイットヘ
モゾアニン マウス血漿（１／稀釈） Ｕ−年探獣卦懸駆 胃ｐ躬牡ｌ！ｌ麺

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、抗原に対して生産された抗体であって、該抗体は、 第１アセトアルデヒド−蛋白質縮合体； 第２アセトアルデヒド−蛋白質縮合体；及び蛋白質； から成る群から選択された蛋白質又はアセトアルデヒド
   −蛋白質縮合体と交差反応性であり、そして 前記第１縮合体は前記抗原の蛋白質成分に相当する蛋白
   質成分を含有しており； 前記第２縮合体は前記抗原の前記蛋白質成分とは異る蛋
   白質成分を含有しており；そして 前記蛋白質は前記抗原の前記蛋白質成分に相当する； ことを特徴とする抗体。 ２、抗原に対して生産された抗体であって、該抗体はア
   セトアルデヒド−蛋白質縮合体と交差反応性であり、該
   縮合体は前記抗原の蛋白質成分に相当する蛋白質成分又
   はこれとは巽る蛋白質成分から成る群から選択された蛋
   白質成分を含有している、ことを特徴とする抗体。 ３、前記抗体と前記第１アセトアルデヒド−蛋白質縮合
   体との交差反応性が、前記抗体と前記蛋白質との交差反
   応性の５０倍以上である、特許請求の範囲第１項記載の
   抗体。 ４、選択された流体中のアセトアルデヒド−蛋白質縮合
   体の検出及び定量のための方法であって、抗原に対する
   抗体を製造する段階（この抗体は、第１アセトアルデヒ
   ド−蛋白質縮合体； 第２アセトアルデヒド−蛋白質縮合体；及び蛋白質； から成る群から選択された蛋白質又はアセトアルデヒド
   −蛋白質縮合体と交差反応性であり、そして 前記第１縮合体は前記抗原の蛋白質成分に相当する蛋白
   質成分を含有しており； 前記第２縮合体は前記抗原の前記蛋白質成分とは異る蛋
   白質成分を含有しており；そして 前記蛋白質は前記抗原の前記蛋白質成分に相当する； ことを特徴とする）； 前記抗体を前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体と反応
   せしめることにより複合体を形成せしめる段階；及び、 前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を測定する段階； を含んで成る方法。 ５、前記複合体を、エンザイムリンクドー第２抗体イム
   ノアブゾルベント−アッセイ系とさらに反応せしめる、
   特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６、前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を前記複合体
   から解離せしめ、そして測定する、特許請求の範囲第４
   項記載の方法。 ７、前記選択された流体がヒト血液である、特許請求の
   範囲第４項第５項、又は第６項記載の方法。 ８、選択された流体中のアセトアルデヒド−蛋白質縮合
   体の検出及び定量のための方法であって、抗原に対する
   抗体を製造する段階（この抗体はアセトアルデヒド−蛋
   白質縮合体と交差反応性であり、該縮合体は前記抗原の
   蛋白質成分に相当する蛋白質成分又はこれとは異る蛋白
   質成分から成る群から選択された蛋白質成分を含有して
   いることを特徴とする）； 前記抗体を前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体と反応
   せしめることにより複合体を形成せしめる段階；及び 前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を測定する段階； を含んで成る方法。 ９、前記複合体を、エンザイムリンクドー第２抗体イム
   ノアブゾルベント−アッセイ系とさらに反応せしめる、
   特許請求の範囲第８項記載の方法。 １０、前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を前記複合
   体から解離せしめ、そして測定する、特許請求の範囲第
   ８項記載の方法。 １１、前記選択された流体がヒト血液である、特許請求
   の範囲第８項第９項、又は第１０項記載の方法。 １２、選択された流体中のアセトアルデヒド−蛋白質縮
   合体の検出及び定量のための方法であって、抗原に対す
   る抗体を製造する段階（この抗体は、第１アセトアルデ
   ヒド−蛋白質縮合体； 第２アセトアルデヒド−蛋白質縮合体；及び蛋白質； から成る群から選択された蛋白質又はアセトアルデヒド
   −蛋白質縮合体と交差反応性であり、そして 前記第１縮合体は前記抗原の蛋白質成分に相当する蛋白
   質成分を含有しており； 前記第２縮合体は前記抗原の前記蛋白質成分とは異る蛋
   白質成分を含有しており；そして 前記蛋白質は前記抗原の前記蛋白質成分に相当する； ことを特徴とし；ここで前記抗体と前記第１アセトアル
   デヒド−蛋白質縮合体との交差反応性が、前記抗体と前
   記蛋白質との交差反応性の５０倍以上である）； 前記抗体を前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体と反応
   せしめることにより複合体を形成せしめる段階；及び 前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を測定する段階； を含んで成る方法。 １３、前記複合体を、エンザイムリンクドー第２抗体イ
   ムノアブゾルベント−アッセイ系とさらに反応せしめる
   、特許請求の範囲第１２項記載の方法。 １４、前記アセトアルデヒド−蛋白質縮合体を前記複合
   体から解離せしめ、そして測定する、特許請求の範囲第
   １２項記載の方法。 １５、前記選択された流体がヒト血液である、特許請求
   の範囲第１２項第１３項、又は第１４項記載の方法。 １６、アセトアルデヒド−蛋白質縮合体と交差反応性の
   抗体の生産を実質上１００μＭ又はこれより低い濃度に
   おいて刺激する抗原。 １７、蛋白質とアセトアルデヒドとの縮合により生成し
   たアセトアルデヒド−蛋白質縮合体を１５０〜３００ｍ
   Ｍの範囲の濃度で含んで成る抗原。 １８、５０〜９０％の接合したヘモグロビンを含んで成
   るヘモグロビン構成物を含有するアセトアルデヒド−蛋
   白質縮合体を含んで成る抗原。