FI104219B - Diagnostinen menetelmä ja testaustarvikesarja multippeliskleroosin määrittämiseksi - Google Patents

Diagnostinen menetelmä ja testaustarvikesarja multippeliskleroosin määrittämiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI104219B
FI104219B FI922480A FI922480A FI104219B FI 104219 B FI104219 B FI 104219B FI 922480 A FI922480 A FI 922480A FI 922480 A FI922480 A FI 922480A FI 104219 B FI104219 B FI 104219B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
prosomal
antibodies
antigen
multiple sclerosis
human
Prior art date
Application number
FI922480A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI104219B1 (fi
FI922480A0 (fi
FI922480A (fi
Inventor
Klaus Scherrer
Original Assignee
Biomerieux Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biomerieux Sa filed Critical Biomerieux Sa
Publication of FI922480A0 publication Critical patent/FI922480A0/fi
Publication of FI922480A publication Critical patent/FI922480A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI104219B1 publication Critical patent/FI104219B1/fi
Publication of FI104219B publication Critical patent/FI104219B/fi

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/285—Demyelinating diseases; Multipel sclerosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Electrotherapy Devices (AREA)
  • Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
  • Lubrication Of Internal Combustion Engines (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Separation Of Suspended Particles By Flocculating Agents (AREA)
  • Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
  • Vehicle Body Suspensions (AREA)
  • Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Electric Propulsion And Braking For Vehicles (AREA)

Description

104219
Diagnostinen menetelmä ja testaustarvikesarja multippeliskleroosin määrittämiseksi
Keksinnön tausta 5 Ala Tämä keksintö koskee menetelmää ja diagnostista testaustarvike-sarjaa, jotka ovat hyödyllisiä multippeliskleroosin erotusdiagnoosissa.
Tekniikan taso
Multippeliskleroosi ("MS") on sairaus, joka ilmenee yleensä toistu-10 vina, yhden tai useamman tautipesäkkeen aktivoitumiseen viittaavina neurologisina toimintahäiriöjaksoina. Sen oireet ovat moninaisia ja epämääräisiä ja niihin kuuluvat näön heikentyminen, silmävärve, kyvyttömyys puhua selkeästi, värinä- ja asentoaistin toiminnan huononeminen, ryhdyntävapina, lihasten yh-teistoiminnanhäiriö, raajan heikkous tai halvaus, spastisuus ja rakko-on-15 gelmat. Harrison's Principles of Internal Medicine, s. 1995 - 2000 (11. laitos, 1987). Ikävä kyllä MS:lle ei tunneta tehokasta hoitoa.
Jotta MS saataisiin diagnosoitua varmasti, täytyy ilmaantua ainakin kaksi neurologista oireiluepisodia samoin kuin selkeät kliiniset merkit vaurioista useammassa kuin yhdessä keskushermoston kohdassa. Yksi ongelma 20 sellaisessa diagnostisessa menetelmässä on se, että 10-20 vuoden jakso voi kulua neurologisten oireiluepisodien välillä, jd.
Toinen ongelma on se, että MS:n oireet ovat niin epämääräisiä, että se voidaan sekoittaa moniin muihin tiloihin. Potilaan erotusdiagnoosissa on näin ollen tärkeää sulkea pois ne tilat, joilla on samanlaiset oireet ja jotka 25 voidaan hoitaa tehokkaasti. Potilas voi kärsiä esimerkiksi useiden reseptilääk-keiden sivuvaikutuksista (esimerkiksi fenytoiini, joka voi aiheuttaa silmävär-vettä, huimausta ja lihasheikkoutta), pernisiöösistä anemiasta tai useista in-fektoista. Sellaiset tilat voidaan yleensä hoitaa tehokkaasti.
Näin ollen on olemassa tarve suhteellisen yksinkertaiselle laitteelle, • ♦ « 30 joka olisi hyödyllinen määritettäessä kärsiikö joku kenties MS:stä vai ei.
” \ * Keksinnön yhteenveto f.· · On yllättävää kyllä havaittu, että suurella joukolla MS-potilaita (yli yhdeksälläkymmenellä prosentilla niistä, jotka testattiin yhdessä koesarjassa) on prosomi-vasta-aineita verenkierrossaan, kun taas hyvin harvoilla niistä, jot-35 ka eivät tautia sairastaneet, oli sellaisia vasta-aineita (< 3 % testatuista).
• · • · · 2 104219
Keksintö sisältää näin ollen menetelmän, jossa käytetään multippeliskleroosin erotusdiagnostiikassa "prosomaalista antigeeniä" (esim. prosomia, prosomaalista proteiinia, fragmenttia tai sen johdannaista) oli lähde mikä hyvänsä. Sellainen menetelmä hyödyntää tyypillisesti immunokemiallista rea-5 genssia, joka sisältää yhden tai useamman prosomaalisen antigeenin. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään. Keksintö kohdistuu edelleen diagnostisiin tes-taustarvikesarjoihin, joita käytetään multippeliskleroosin diagnoosissa ja joille on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksissa 5, 6 tai 8 esitetään.
10 Sellainen menetelmä sisältäisi tyypillisesti sen, että hankitaan see rumia potilaalta jonka epäillään kärsivän multippeliskleroosista; saatetaan kuvattu immunokemiallinen aine yhteyteen seerumin kanssa; ja havaitaan prosomaalisen antigeenin ja seerumissa läsnä olevien, sen kanssa reagoivien, minkä tahansa vasta-aineiden sen kanssa muodostamien immuunikompleksi- 15 en läsnäolo.
Kuvioiden lyhyt kuvaus
Kuvio 1 on valokuvajäljenne, joka esittää immunologista reaktiota 19 multippeliskleroosipotilaan seerumien ja HeLa-soluista puhdistettujen pro-somien välillä.
20 Kuvio 2 on valokuvajäljenne, joka esittää immunologista reaktiota 8 muun multippeliskleroosipotilaan seerumien ja HeLa-soluista puhdistettujen prosomien välillä.
Edullisten suoritusmuotojen kuvaus I. Prosomaaliset antigeenit 25 "Prosomaalinen antigeeni" tässä käytettynä tarkoittaa prosomia, prosomaalista proteiinia, fragmenttia tai sen johdannaista, oli lähde mikä ta-hansa, esimerkiksi solut tai ne jotka on tuotettu geeniteknologisin keinoin.
Prosomit ovat eräänlaisen hyvin yleisiä ribonukleopro-teiinipartikkeleita jotka vaihtelevat koostumukseltaan. Ne koostuvat noin 95 .·*:·. 30 %:sesti tai enemmän proteiinista ("prosomaalisesta proteiinista") ja noin 5 %:sesti tai vähemmän RNA:sta ("pRNA"). Prosomit muodostavat morfolo- • · f gisesti ja biofysikaalisesti yhtenäisen, halkaisijaltaan 12 nnrsen, vadelman tai sylinterinmuotoisten partikkelien luokan, jotka vaihtelevat yksilölliseltä proteiini-ja RNA-koostumukseltaan. Ainakin 25 erilaista prosomaalista proteiinia on 1 · · j... 35 havaittu. Prosomeja on havaittu kaikkien tähän mennessä testattujen lajien • · • · · 3 104219 soluista. Tämän keksinnön tarkoituksia varten ihmisperäiset prosomit (ja pro-somaaliset antigeenit) ovat edullisia.
Prosomit voidaan eristää. Normaalisolujen postmitokondriaalinen supematantti fraktioidaan differentiaalisentrifugaatiolla polyribosomien, 5 postpolyribosomaalisten partikkeleiden muodostamien sakkojen ja sytosoli-fraktion poistamiseksi. Prosomeja on saatu postpolyribosomaalisesta sakasta sakkaroosigradienttisedimentaatiolla puskureissa, joiden ionivahvuus on suuri. Katso esim. Martins de Sa ym., "Prosomes: ubiquity and inter-species structural variation," J. Molec. Biol., 187: 151 - 158 (1986); Schmid ym., 'The 10 prosome an ubiquitous morphologically distinct RNP particle associated with repressed mRNPs and containing ScRNA and a characteristic set of proteins", EMBO J., 3: 29 - 34 (1984). Näissä oloissa prosomi sedimentoituu terävänä piikkinä jonka sedimentaatioarvo on noin 19S.
On myös karakterisoitu prosomiproteiineja, jotka auttavat prosomin 15 muodostumisessa. Katso esim. Schmid ym., supra. Prosomiproteiinit p27K ja p33K - jotka vastaavat proteiineja joiden arvioitu molekyylipaino on 27 ja vastaavasti 33 kilodaltonia on sekvensoitu ja ne on tunnistettu saman omistajan samaan aikaan vireillä olevassa PCT-hakemuksessa nro PCT/EP91/01 945 (WO-patenttijulkaisu nro WO 92/07 269, julkaistu 30. huhtikuuta 1992) tunnis-20 tusnumeroilla SEQ ID NO:2 ja vastaavasti SEQ ID NO:4. "Fragmentti" on tyypillisesti prosomaalisen proteiinin epitooppiosa.
Peptidien tai niiden fragmenttien valmistus keksinnössä käytettäväksi voidaan saada aikaan rekombinantti DNA-menetelmin tai yhdellä tunnetuista orgaanisen kemian peptidisynteesimenetelmistä.
25 Orgaanisen kemian menetelmät ovat erityisen hyödyllisiä kun syn- tetoidaan pienempiä peptidifragmentteja joilla on haluttu aktiivisuus. Kun fragmentin sekvenssi tiedetään, synteesi on varsin suoraviivaista peptidikemi-an ammattimiehelle. Orgaanisen kemian peptidisynteesi menetelmiin kuuluu ·:·. haluttujen aminohappojen kytkeminen toisiinsa kondensaatioreaktion avulla 30 joko homogeenisessa faasissa tai kiinteän faasin avulla. Kiinteää faasia
I « I
käyttävän menetelmän on kuvannut Merrifield, J. Am. Chem. Society, 85, 2149 (1963) ja Wang, J. Am. Chem. Soc., 95, 1328 (1974).
. I < I
Rekombinantti-DNA-menetelmiiin kuuluu halutun peptidin tai frag-:·. mentin valmistus siten että ekspressoidaan rekombinantti-polynukleotidi, jolla ,’«··, 35 on polynukleotidisekvenssi, joka koodittaa yhtä tai useampaa kyseessäolevaa peptidiä soveliaan mikro-organismin ollessa isäntänä. Yleensä menetelmään 4 104219 kuuluu se, että kloonäusvehikkeliin (esim. plasmidiin, faagi-DNA:han tai muuhun DNA-sekvenssiin joka kykenee replikoituinaan isäntäsolussa) tuodaan DNA-sekvenssi; mainittu kloonausvehikkeli tuodaan sopivaan isäntäsoluun; ja viljellään näin transformoitua isäntäsolua. Tyypillisiin isäntäsoluihin kuuluvat 5 bakteerit kuten E. coli. Pseudomonas ja Bacillus subtilis.
Kun peptidit on kerran tehty, voidaan myös määrittää keksinnössä hyödylliset fragmentit. Soveliaita immunokemiallisesti aktiivisia peptidifrag-mentteja voidaan löytää sen menetelmän keinojen mukaisesti, joka on kuvattu Geysenin ym. WO-patenttihakemuksessa 86/0 6487; Geysen ym., Proc. Nat'l 10 Acad. Sei., (81) 3998 - 4002 (1984); ja Geysen ym., J. Immunol. Meth., (102) 259- 274 (1987), joka perustuu "pep-scan" -menetelmään. Tässä menetelmässä syntetoidaan sarja limittäisiä peptidejä, jotka vastaavat kyseessä olevan kokonaisen peptidin osittaisia sekvenssejä, ja tutkitaan niiden reaktiivisuutta vasta-aineiden suhteen.
15 Lisäksi peptidien funktionaalisia johdannaisiakin voidaan käyttää.
Sellaisiin funktionaalisiin johdannaisiin kuuluvat peptidien happoadditiosuolat (kuten suola-, bromivety-, fumaari-, fosfori-, askorbiini-, viini-, sitruuna-, maito-, omena-, palmitiinihapon ja muiden tunnettujen happojen), peptidien amidit ja erityisesti C-terminaaliset amidit; esterit ja erityisesti C-terminaaliset esterit; ja 20 N-asyylijohdannaiset, erityisesti N-terminaaliset asyylijohdannaiset ja erityisesti N-asetyylijohdannaiset. Kaikkia funktionaalisia johdannaisia pidetään '; ;' keksinnön mukaisina "polypeptideinä", "peptideinä" ja "peptidifragmentteina".
« t (
Jotkin prosomit, prosomaaliset proteiinit, fragmentit ja johdannaiset voidaan tunnistaa sen perusteella että niillä on reaktiivisuutta tiettyjen vasta-V . 25 aineiden kanssa jotka ovat kaupallisesti saatavilla Organon Teknika nv:lta,
Turnhout, Belgia. Kaupallisesti saatavia monoklonaaiisia vasta-aineita ovat ne, jotka ovat suuntautuneet prosomaalisia proteiineja p23K, p25K, p27K, p29K (p28K, p33K), p30/33K ja p31K ja anti-p21K ("prosominkaltainen partik-keli") vastaan. Näitä vasta-aineita kuvataan perusteellisemmin julkaisussa • « · 30 Reagent Research News, (Tammikuu 1990) joka on saatavilla Organon Tek-• · * _ nika nvilta.
?,; · II. Vasta-aineet A. Kohteen vasta-aineet
Testattavan näytteen täytyy sisältää kohteen vasta-aineita. Sellai- « · · 35 siin näytteisiin kuuluvat veri ja verifraktiot kuten plasma tai seerumi. Testatta-valta kohteelta voidaan hankkia verinäyte, tyypillisesti laskimopunktiolla, ja 5 104219 punasolut ja hyytymät edullisesti poistetaan. Vasta-aineet voidaan poistaa sitten millä tahansa sopivalla tekniikalla.
B. Muut vasta-aineet
Muut vasta-aineet joita käytetään diagnostisissa tarvikesarjoissa ja 5 keksinnön mukaisessa menetelmässä, valitaan sen erityisen testin mukaan, jota on määrä käyttää. Esimerkiksi ihmisen IgG-vasta-ainetta vastaan suunnatut leimatut vasta-aineet ovat hyödyllisiä tietyissä keksinnön suoritusmuodoissa, kun halutaan havaita kohteesta otetussa näytteessä mitä tahansa läsnä olevia vasta-aineita, jotka reagoivat prosomaalisen vasta-aineen kansio sa. Näiden vasta-aineiden immunologisesti aktiiviset vasta-ainefragmentit ovat samoin hyödyllisiä. Prosomaalisia proteiineja vastaan suunnatut vasta-aineet soveltuvat prosomien sitomiseen kiinteään kantajaan (sellaiset vasta-aineet eivät edullisesti olisi ihmisvasta-aineita tai "humanisoituja" vasta-aineita). Sellaiset vasta-aineet voivat olla polyklonaalisia tai monoklonaalisia 15 vasta-aineita.
Tyypillisesti käytettyihin leimausaineisiin kuuluvat erilaiset radioaktiiviset isotoopit, fluoresoivat yhdisteet, lateksi, entsyymit, väriainesoolit tai metalliyhdisteet, joita käytetään soolipartikkeleina.
Ihmisvasta-aineita vastaan suunnattuja leimattuja vasta-aineita 20 (esimerkiksi peroksidaasilla leimattuja) on kaupallisesti saatavilla esimerkiksi ... Miles Laboratories Ltd.:ltä, Slough, Englanti.
;1;' Ihmisvasta-aineita vastaan tuotettuja monoklonaalisia vasta-aineita voidaan tuottaa myös biologisesti puhtailla solulinjoilla, jotka ovat peräisin ' kuolemattomiksi tehdyistä, vasta-ainetta tuottavista soluista. Kuolemattomiksi I « 25 tehtyjä vasta-aineita tuottavia soluja voidaan hankkia sinänsä tunnetulla ta-·.*·: valla, ja yleensä siihen kuuluvat vaiheet: 1) sopivia soluja, kuten lymfosyyttejä, indusoidaan tuottamaan spesifisiä vasta-aineita, 2) tehdään nämä solut kuolemattomiksi ja 3) valitaan näistä soluista klooneja, jotka tuottavat vasta-aineita, joilla on haluttu spesifisyys ja affiniteetti. Yksi menetelmä olisi esimer-30 kiksi Kohlerin ja Millsteinin menetelmä, Nature, voi. 256, 495-497 (1975).
• Tämä menetelmä käsittää sen, että hiiriä immunisoidaan ihmisvasta-aineella, • · : pernasolut eristetään ja nämä fuusioidaan hiiren myeloomasolujen kanssa, « »«· jolloin saadaan hybridoomia. Tietenkin voitaisiin käyttää muitakin eläimiä kuin hiiriä.
I | | II· I · I ·
• I I
R 104219 6
Muita menetelmiä vasta-aineiden tuottamiseksi kuvataan US-patentissa nro 4 816 397 (menetelmiä rekombinantti-vasta-aineiden tuottamiseksi) ja US-patentissa nro 4 816 567 (kimeerisiä rekombinanttivasta-aineita).
III. Diagnostisia menetelmiä 5 Prosomaalisia antigeenejä, jotka osoittautuvat antigeenisiksi MS- vasta-aineen kanssa, voidaan käyttää menetelmissä ja tarvikesarjoissa, jotka on suunniteltu niin että niillä voidaan havaita näiden vasta-aineiden läsnäolo ihmisissä.
Prosomaalisia antigeeniä, jolla on haluttu immunogeeninen aktiivi-10 suus, ja joka on tuotettu esimerkiksi isännissä, jotka on transformoitu rekom-binanttisilla DNA-molekyyleillä, voidaan käyttää immunologissa reagensseissa tai immunologisissa diagnostisissa testitarvikesarjoissa.
Tässä käytettynä "immunokemiallinen reagenssi" tarkoittaa, että prosomaalinen antigeeni tai antigeenit on sidottu, suoraan tai epäsuorasti, sois veliaaseen kantajaan. Tyypillisesti käytettyihin kantajiin kuuluvat mikrotesti-kuopan tai kyvetin sisäseinämä, putki tai kapillaari, membraanisuodatin, testi-liuska, tai sellaisen partikkelin pinta kuten lateksipartikkeli, pieni pallo, punasolu, väriainesooli, metallisooli tai metalliyhdiste soolipartikkelina.
Yhdessä menetelmässä, jolla havaitaan testinesteessä olevia pro-20 teiineja vastaan suunnattujen vasta-aineiden läsnäolo (esim. sellaisen ihmi-... sen seerumissa, jonka arvellaan kärsivän multippeliskleroosista), immunoke- ;·; miallinen reagenssi saatetaan kontaktiin testinesteen kanssa. Tämän jälkeen 'peptidin ja testinesteessä läsnä olevien vasta-aineiden välillä muodostunei-·· den immunokompleksien läsnäolo mitataan immunokemiallisen reaktion läs- 25 näoloa silmällä pitäen. Immunokemiallinen reaktio on edullisesti kerrosreaktio • · (joka käyttää joko leimattua peptidiä tai leimattua vasta-ainetta joka on suun-:T: nattu ihmisvasta-ainetta vastaan), agglutinaatioreaktio (joka käyttää myös sooleja), kompetitioreaktio tai inhibitioreaktio.
;*.*·. Immunologisiin diagnostisiin testaustarvikesarjoihin kuuluvat radi- 30 oimmunologinen määritys tai entsyymiimmunologinen aktiivisuusmääritys ("EIA") kuten on kuvattu Schuursin ym. uudelleen myönnetyssä US-patentti-·«j : julkaisussa nro 32 696 ja metallisoolipartikkeli-immunomääritykset ("SPIA") * »t · kuten on kuvattu US-patentissa nro 4 313 734 Leuveringille, joiden sisällöt liitetään tähän tällä viitteellä. "SPIA"-testaustarvikesarjoissa käytetään me- ,·«, 35 tallin, metalliyhdisteen tai metallilla tai metalliyhdisteellä päällystettyjen po- « * lymeeriyhdisteiden vesipohjaisia soolidispersioita.
104219
Yhdessä edullisessa immunomäärityksessä jolla havaitaan MS-vasta-aineita, ennalta määrätty määrä prosomaalista antigeeniä adsorboidaan kiinteän faasin päälle, proteiinia sitovalle pinnalle. Testinäyte, josta on määrä määrittää vasta-aineet (esim. potilaan seerumi) saatetaan sitten kontaktiin 5 pinnan kanssa, johon on sidottu prosomaalinen antigeeni, ja testinäytteessä olevat vasta-aineet sitoutuvat immobilisoituun antigeeniin. Radioaktiiviset tai entsyymileimatut immunoglobuliinikoettimet (esim. vasta-aineet tai vasta-ainefragmentit, jotka reagoivat vain ihmisen IgG.n kanssa) saatetaan sitten kontaktiin pinnan kanssa ja sitoutuvat immobilisoituihin vasta-aineisiin. Kiinte-10 ään kantajaan sitoutuneen leimatun koettimen määrä voidaan määrittää ja se osoittaa vasta-aineen olemassaolon testinäytteessä.
Yhdessä radioimmunomääritystyypissä prosomaalista antigeeniä vastaan suunnatut vasta-aineet (esim. ne jotka on kuvattu Scherrerin ym. US-patentissa nro 5 059 521) kiinnitetään kiinteään faasiin, esimerkiksi koeputken 15 sisäpintaan. Prosomaalinen antigeeni lisätään sitten putkeen, niin että nämä vasta-aineet saadaan sidotuksi. Putkeen, joka on päällystetty näin muodostuneella antigeeni-vasta-ainekompleksilla, lisätään potilaan seeruminäyte, ja samalla tietty määrä prosomaalista antigeeniä vastaan suunnattuja vasta-aineita, jotka on leimattu radioaktiivisella isotoopilla kuten radioaktiivisella jo-20 dilla. Mikä tahansa vasta-aine, joka on suunnattu potilaan seerumista löytyvää prosomaalista antigeeniä vastaan, kilpailee leimattujen vasta-aineiden kanssa antigeeni-vasta-ainekompleksin pinnalla olevista vapaista sitoutumiskohdista.
Ill
Kun seerumin on kerran annettu vuorovaikuttaa, ylimääräinen neste poiste- '. |, taan, koeputki pestään ja radioaktiivisuuden määrä mitataan. Suhteellisen V'. 25 matala määrä radioaktiivisuuslukema osoittaa positiivista tulosta, ts. että poti- *; *; laan seerumi sisältää vasta-aineita.
· · ’· ”· Yhdessä ΕΙΑ-testityypissä mikrotiitterilevy päällystetään prosomaa- *V : lisella antigeenillä ja tähän lisätään potilaan seeruminäyte. Inkubaatiojakson jälkeen, joka sallii minkä tahansa vasta-aineen vuorovaikutuksen antigeenin :T: 30 kanssa, levy pestään ja lisätään ihmisvasta-aineita vastaan suunnattu vasta- ainevalmiste, esim. joka on saatu laboratorioeläimestä, ja johon on kytketty . \( entsyymileima, inkuboidaan jotta reaktio voisi tapahtua, ja levy pestään sitten uudestaan. Sen jälkeen entsyymisubstraatti lisätään mikrotiitterilevylle ja in-' ; ·' kuboidaan tietty ajanjakso, jotta entsyymi voisi vaikuttaa substraattiin, ja lo- 35 pullisen valmisteen absorbanssi mitataan. Suuri muutos absorbanssissa :"'; osoittaa positiivista tulosta.
8 104219
Vaihtoehtoisesti prosomaaliset proteiinit voidaan uuttaa ja sitten fraktioida matriisissa. Erotetut proteiinit immobilisoidaan siirtämällä membraa-nille ja saatetaan reagoimaan kohteesta peräisin olevan vasta-aineen kanssa. Membraani pestään sitten edullisesti. Leimatut (suoraan tai epäsuorasti), ih-5 misvasta-aineita vastaan suunnatut vasta-aineet saatetaan sitten reagoimaan sen määrittämiseksi, tapahtuiko sitoutumista kohteen vasta-aineiden ja pro-somaalisen proteiinin välillä.
Keksinnön diagnostiset testitarvikesarjat voivat sisältää myös lisäosia kuten puskureita, standardeja (negatiivisia ja positiivisia) ja materiaaleja to (esim. kemikaaleja), jotka ovat välttämättömiä jotta leima voitaisiin havaita. Jos leima on entsyymi, tämä entsyymin substraatti voi kuulua testitarvikesar-jaan; jos leima on väriaineen, metallin tai metalliyhdisteen soolipartikkeli, tes-titarvikesarja voi havaitsemisen tehostamiseksi sisältää kemikaaleja, joilla liuotetaan kiinteään kantajaan sitoutunut leima.
15 Keksintöä selventää viittaus seuraavaan kuvaavaan esimerkkiin.
Esimerkki
HeLa-soluista peräisin olevat prosomit hankittiin sen menetelmän mukaisesti, joka on kuvattu esimerkissä 1 Scherrerin ym. US-patentissa nro 5 059 521 julkaistu 22. lokakuuta 1991. Nämä prosomit puhdistettiin edelleen 20 ajamalla ne 0,5 %:sen sarkosyyligradientin läpi.
Seerumi hankittiin 27 potilaalta joiden oli aiemmin diagnosoitu, tai joiden epäiltiin, kärsivän multippeliskleroosista ("Ryhmä A"). Myös 35 henkilön t* j!f seerumit, joista yhdenkään ei uskottu kärsivän multippeliskleroosista, testattiin
• I I
' I negatiivikontrolleina ("Ryhmä B"). HeLa-soluista peräisin olevat puhdistetut 25 prosomit ladattiin 13 %:seen polyakryyliamidi-SDS-geeliin (SDS-PAGE).
« · · *; *| Elektroforeesin jälkeen prosomaaliset proteiinit täplitettiin nitroselluloosamem- :.’*i braanille (Bio-Rad). Membraaniliuskat leikattiin irti ja kyllästettiin 5 %:sella •«· ·* kuoritulla maidolla PBS:ssä yhden tunnin ajan. Nämä inkuboitiin sitten eri see rumien kanssa kahden tunnin ajan huoneenlämmössä (laimennos 1:1000). :T: 30 Sen jälkeen kun oli pesty kolmesti kyllästetyssä puskurissa, näiden seerumien reagoivat vasta-aineet detektoitiin sekundäärisesti ihmisen IgG-vasta-ainetta . ·. vastaan suunnatulla vasta-aineella, joka oli konjugoitu peroksidaasiin (Miles
Labs. Ltd., Slough, England) inkuboimalla kaksi tuntia huoneenlämmössä ja paljastettiin H202-kloorinaftolilla. Negatiivinen kontrolli korvattiin laimennus- 35 puskurilla.
104219 g 25:llä 27:stä ryhmän A seerumeista (93 %) nähtiin prosomi-positiivisia reaktioita molekyylipainoalueen ollessa 25 - 35 kilodaltonia. Suurin osa näistä seerumeista reagoi positiivisesti yksinkertaisena tai kaksinkertaisena proteiinijuovana, mutta eri molekyylipainoalueilla (se on: 25 kDa, 27 kDa, 5 31 kDa ja vastaavasti 33 kDa). Tulokset esitetään kuvissa 1 ja 2.
Yksi ryhmän B seerumeista osoitti prosomipositiivisia reaktioita. Spesifisten esimerkkien ja suoritusmuotojen käyttöä ei pitäisi ymmärtää rajoituksiksi keksinnön suoja-alalle, jonka määrittävät liitteenä olevat patenttivaatimukset.
· · · • · * • · · • · • e m · » • i i • · * · · • « · • · ·
Ml • « · • · · · · · • · « • » · * f
I I I « I

Claims (10)

104219
1. Menetelmä joka on hyödyllinen multippeliskleroosin erotusdiag-noosissa, tunnettu siitä, että: 5 a) saatetaan kohteen näyte, joka sisältää vasta-aineita, kontaktiin immunokemiallisen reagenssin kanssa joka sisältää prosomaalisen antigeeninpä b) havaitaan niiden immuunikompleksien läsnäolo, jotka muodostuvat prosomaalisen antigeenin ja näytteessä läsnäolevien, sen kanssa rea-10 goivien minkä tahansa vasta-aineiden välillä.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että: a) sidotaan prosomaalinen antigeeni kiinteän kantajan pinnalle; b) saatetaan mainittu prosomaalinen antigeeni kontaktiin näytteen 15 kanssa, joka sisältää kohteen vasta-aineita; c) annetaan riittävästi aikaa immunologiselle reaktiolle prosomaalisen antigeenin ja sen kanssa reagoivien, näytteessä läsnä olevien vasta-aineiden kanssa, mikä täten määrittää ensimmäisen kiinteän faasin ja ensimmäisen nestefaasin; 20 d) erotetaan ensimmäinen nestefaasi ja kiinteä faasi; e) saatetaan mainittu ensimmäinen kiinteä faasi kontaktiin sellaisen reagenssin kanssa, joka sisältää sellaisia metallisoolidispersiopartikkeleita, joihin on kiinnittynyt immunoglobuliini, joka on suunnattu sen lajin immunoglo-buliinia vastaan, johon mainittu kohde kuuluu, jolloin muodostuu metal-25 lisoolipartikkelin ja kohdelajin immunoglobuliinia vastaan suunnatun vasta- • · · *| aineen konjugaatti; " f) annetaan aikaa niin että toinen immunologinen reaktio voi ta- : pahtua, jotta mainittu reagenssi saadaan sitoutumaan mihin tahansa kohteen prosomaalista antigeeniä vastaan suunnattuun sitoutuneeseen immunoglobu-:T: 30 liiniin, mikä johtaa mainitun reagenssin sitoutumiseen siihen mainitun sitoutu- neen antigeenin osaan, joka on käynyt vaiheen c reaktion läpi, jolloin muo-. \ dostuu toinen kiinteä ja toinen nestemäinen faasi; g) erotetaan toinen kiinteä ja toinen nestemäinen faasi; ja h) havaitaan metallisoolin läsnäolo tai määrä joko toisessa kiinte- ; ' .. 35 ässä faasissa tai toisessa nestemäisessä faasissa. I I 104219
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u nn e 11 u siitä, että prosomaalinen antigeeni on prosomi, joka on peräisin ihmissoluista.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u nn e 11 u siitä, että prosomaalinen antigeeni on prosomaalinen proteiini, joka valitaan ryh- 5 mästä prosomaalisia proteiineja, joiden molekyylipainot ovat noin 25, 27, 31 tai 33 kilodaltonia.
5. Sellainen diagnostinen testaustarvikesarja, jota käytetään diagnosoitaessa multippeliskleroosia ihmiskohteessa, jolla epäillään olevan multippeliskleroosi, tunnettu siitä, että se käsittää: 10 prosomaalisen antigeenin, joka on esillä siten, että se voi reagoida immunologisesti vasta-aineiden kanssa jotka ovat immunologisesti reaktiivisia sen kanssa ja jotka ovat läsnä mainitun kohteen näytteessä; ja keinon määrittää ovatko mainitut vasta-aineet reagoineet prosomaalisen antigeenin kanssa.
6. Sellainen diagnostinen testaustarvikesarja, jota käytetään mul tippeliskleroosin diagnoosissa ihmiskohteessa, jolla epäillään olevan multippeliskleroosi, tunnettu siitä se sisältää: prosomaalisen antigeenin joka on esillä siten, että se voi reagoida immunologisesti vasta-aineiden kanssa jotka ovat immunologisesti reaktiivisia 20 sen kanssa ja jotka ovat läsnä mainitun kohteen näytteessä; ja ihmisvasta-aineita vastaan suunnattuja leimattuja vasta-aineita tai ;; ihmisvasta-ainetta vastaan suunnattuja leimattuja vasta-ainefragmentteja, jot- ka voidaan saattaa reagoimaan kohteen minkä tahansa sellaisen vasta-aineen kanssa, joka reagoi prosomaalisen antigeenin kanssa. V \ 25
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen diagnostinen tes- *; taustarvikesarja, tunnettu siitä, että leima, jota käytetään leimaamaan · · mainitut ihmisvasta-aineita vastaan suunnatut vasta-aineet tai ihmisvasta-ai- • ·· : neita vastaan suunnatut vasta-ainefragmentit, voi olla radioaktiivinen iso tooppi, fluoresoiva yhdiste, ei-peroksidaasientsyymi, väriainesooli tai me-v : 30 talliyhdiste jota käytetään soolipartikkelina. :T:
8. Sellainen testaustarvikesarja, jota käytetään multippeliskleroosin . *. erotusdiagnoosissa, tunnettu siitä, että se sisältää: kiinteän faasin joka on päällystetty prosomaalisella antigeenillä; ihmisvasta-aineita vastaan suunnattuja vasta-aineita tai ihmisvasta-35 aineita vastaan suunnattuja vasta-ainefragmentteja, jotka on kytketty suoraan tai epäsuorasti entsyymileimaan ei-kiinteässä faasissa; ja 104219 tai epäsuorasti entsyymileimaan ei-kiinteässä faasissa; ja substraatti leimassa käytetylle entsyymille.
9. Jonkin patenttivaatimuksen 5-8 mukainen diagnostinen tes-taustarvikesarja, tunnettu siitä, että prosomaalinen antigeeni on proso- 5 mi, joka on peräisin ihmissoluista.
10. Jonkin patenttivaatimuksen 5-8 mukainen diagnostinen tes-taustarvikesarja, tunnettu siitä että prosomaalinen antigeeni on prosomaalinen proteiini, joka valitaan ryhmästä prosomaalisia proteiineja, joiden molekyylipaino on noin 25, 27, 31 tai 33 kilodaltonia. « 4 • · · • · « • · • · • · · • · * • · • · · • « · « ( « · c • · o tl • · · • · · * » Ψ I · „ 104219
FI922480A 1991-06-21 1992-05-29 Diagnostinen menetelmä ja testaustarvikesarja multippeliskleroosin määrittämiseksi FI104219B (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP91401443 1991-06-21
EP91401443 1991-06-21

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI922480A0 FI922480A0 (fi) 1992-05-29
FI922480A FI922480A (fi) 1992-12-22
FI104219B1 FI104219B1 (fi) 1999-11-30
FI104219B true FI104219B (fi) 1999-11-30

Family

ID=8208577

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI922480A FI104219B (fi) 1991-06-21 1992-05-29 Diagnostinen menetelmä ja testaustarvikesarja multippeliskleroosin määrittämiseksi

Country Status (13)

Country Link
US (1) US5472848A (fi)
EP (1) EP0519536B1 (fi)
JP (1) JP3225248B2 (fi)
KR (1) KR930000951A (fi)
AT (1) ATE118893T1 (fi)
AU (1) AU656198B2 (fi)
CA (1) CA2069546C (fi)
DE (1) DE69201463T2 (fi)
DK (1) DK0519536T3 (fi)
ES (1) ES2072083T3 (fi)
FI (1) FI104219B (fi)
IE (1) IE66243B1 (fi)
ZA (1) ZA923679B (fi)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030092089A1 (en) * 2001-11-14 2003-05-15 Moscarello Mario Anthony Method for diagnosing multiple sclerosis and an assay therefore
WO2004034031A2 (en) * 2002-10-11 2004-04-22 The Regents Of The University Of California A method for diagnosis and prognosis of multiple sclerosis

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL7807532A (nl) * 1978-07-13 1980-01-15 Akzo Nv Metaal-immunotest.
US4533496A (en) * 1984-05-08 1985-08-06 Monsanto Company Method of isolating monoclonal antibodies from hybridoma cultures
FR2586814A1 (fr) * 1985-08-30 1987-03-06 Centre Nat Rech Scient Anticorps monoclonaux anti-proteines p 27 k et p 31 k de prosomes et leur application a titre de reactifs de diagnostic et/ou d'identification de cellules
US4859612A (en) * 1987-10-07 1989-08-22 Hygeia Sciences, Inc. Metal sol capture immunoassay procedure, kit for use therewith and captured metal containing composite
JPH01309686A (ja) * 1988-06-08 1989-12-14 Otsuka Pharmaceut Co Ltd 多機能プロテアーゼ
DE69123723T2 (de) * 1990-10-11 1997-04-17 Pro Soma Sarl Diagnostisches verfahren und reagenz für hiv

Also Published As

Publication number Publication date
AU656198B2 (en) 1995-01-27
DE69201463T2 (de) 1995-06-14
DE69201463D1 (de) 1995-03-30
ATE118893T1 (de) 1995-03-15
JPH0694707A (ja) 1994-04-08
CA2069546C (en) 2005-08-16
ZA923679B (en) 1993-01-27
US5472848A (en) 1995-12-05
AU1829892A (en) 1992-12-24
EP0519536B1 (en) 1995-02-22
EP0519536A1 (en) 1992-12-23
FI104219B1 (fi) 1999-11-30
FI922480A0 (fi) 1992-05-29
ES2072083T3 (es) 1995-07-01
KR930000951A (ko) 1993-01-16
IE922001A1 (en) 1992-12-30
IE66243B1 (en) 1995-12-13
DK0519536T3 (da) 1995-06-06
JP3225248B2 (ja) 2001-11-05
FI922480A (fi) 1992-12-22
CA2069546A1 (en) 1992-12-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Agnello et al. Evidence for a subset of rheumatoid factors that cross-react with DNA-histone and have a distinct cross-idiotype.
Faaber et al. Cross-reactivity of anti-DNA antibodies with proteoglycans.
US4353982A (en) Immunochemical assay for creatine kinase-MB isoenzyme
US5187065A (en) Method and materials for detecting lyme disease
WO1983004312A1 (en) Monoclonal antibody mixtures and use thereof for enhanced sensitivity immunoassays
JPH09512630A (ja) 診断マーカーとしてのヒト好中球リポカリン（ｈｎｌ）の使用および抗−ｈｎｌ−抗体調製物
CA2201152A1 (en) A monoclonal antibody to human ventricular myosin light chains
JP3499570B2 (ja) Ｔｓｈレセプター自己抗体を検出するためのレセプター結合アッセイ
JP2592121B2 (ja) ＩｇＡ腎臓病の診断のための方法及びキツト
CA1265048A (en) Protein which is characteristic of rheumatoid arthritis
JPH06502912A (ja) アナライト変異体分析
Lindmark et al. Quantitation of Specific IgG Antibodies in Rabbits by a Solid‐phase Radioimmunoassay with 125I‐Protein A from Staphylococcus aureus
HUSBY et al. Smooth muscle antibody in heroin addicts
EP0245052A2 (en) Detection of inflammation and novel antibodies therefor
FI104219B (fi) Diagnostinen menetelmä ja testaustarvikesarja multippeliskleroosin määrittämiseksi
JPH04507285A (ja) 抗イディオトープ免疫検定法
US5430129A (en) Purified, native dystrophin
CA1218299A (en) Antibodies against bacterial peptidoglycans, processes for preparing them and methods of quantitively measuring them
Trieshmann Jr et al. The characterization of human anti-IgG autoantibodies by liquid isoelectric focussing
JPH0232258A (ja) ヒトの体液中の抗体力価の測定法及びクラス特異性抗体の測定法
Wells et al. Human anti-IgM iso-antibodies in subjects with selective IgA deficiency
Wagatsuma et al. Antibody recognition of the recombinant human nuclear antigens RNP 70 kD, SS-A, SS-B, Sm-B and Sm-D by autoimmune sera
JPH0249162A (ja) がんの血清測定法
JPS6212859A (ja) 特定の細菌ポリペプチド及びそれに対する抗体の定量法
Forghani et al. Radioimmunoassay of measles virus antigen and antibody in SSPE brain tissue

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired