JPS62151758A - 免疫測定用材料の製造方法 - Google Patents

免疫測定用材料の製造方法

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JPS62151758A
JPS62151758A JP29191785A JP29191785A JPS62151758A JP S62151758 A JPS62151758 A JP S62151758A JP 29191785 A JP29191785 A JP 29191785A JP 29191785 A JP29191785 A JP 29191785A JP S62151758 A JPS62151758 A JP S62151758A
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JP
Japan
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antigen
antibody
labeling
freeze
bound
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Application number
JP29191785A
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English (en)
Inventor
Norio Hagi
規男 萩
Masuo Inoue
益男 井上
Kazuhisa Toyoda
和久 豊田
Misa Tanaka
美佐 田中
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tosoh Corp
Original Assignee
Toyo Soda Manufacturing Co Ltd
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 (゛産業上の利用分野) ッセイ、ラジオイムノアッセイ等の為のキット成分につ
いて、抗体が結合した不溶性支持体と標識抗原もしくは
、抗原が結合した不溶性支持体と標識抗体を低温下で液
体状態にて混和し続いて凍結乾燥することによって免疫
測定用材料を製造する方法に関する。
(従来の技術) 一般に血清、尿等の生体試料中に含有される微原又は抗
原の結合した支持体と標識抗体とは別々に保管されるこ
とが多い。また、競争法用キットにおいては、液体状態
で該不溶性支持体と該標識物を接しむると、抗原抗体反
応が起こり測定に供することができない。
(発明が解決しようとする問題点) 抗体又は抗原の結合した不溶性支持体と標識物とは、別
々に保管され、測定の際には混合する操作が必要であっ
た。特に、液体状態で保管されている場合、通常、ピペ
ッタ−で該液体を移送した後、混合するため、測定操作
が煩雑であった。
(問題点を解決するための手段) 本発明者らは、競争法免疫測定を行うにあたり、同一容
器内に抗体又は抗原の結合した不溶性支持体と標識物と
を内在させることを目的として鋭意研究を行った。その
結果抗体又は抗原の結合した不溶性支持体と標識物とを
、0℃以上10゛C以下好ましくは0°C以上4℃以下
という低温下にて混和し4時間以内好ましくは1時間以
内に凍結し、さらに凍結乾燥するとこれらの処理中には
抗原抗体反応がほとんど起こらないこと、さらKこれに
凍結乾燥物を溶解するための水又は緩衝液とサンプルで
ある血清を加えることにより競争法免疫測定が可能であ
るという知見を見出し、本発明を完成するに至った。
本発明により得られる免疫測定用組成物は自動分析機に
おいて特に有用である。従来の競争法キラ)においては
抗体又は抗原の結合した不溶性支持体と標識物とは別々
に保管され、測定ごとにピペッタ−により液体を移送す
るという方法をとっていた。しかるにこの従来方法では
、ピペッティングするシステム(用手法では、ピペット
にて移す手技)が必要となり、コスト、メンテナンスの
面に問題がある。本発明による方法では、反応容器に既
に標識物及び、抗体又は抗原の結合した不溶性支持体が
内在しているため抗原、抗体反応の開始は、サンプルで
ある血清と凍結乾燥物を溶解するための水又は緩衝液を
加えるだけでよい。よって測定の操作性が著しく向上し
た。さらに反応開始時間が明確になり、また保存性とい
う観点からも凍結乾燥物にて保管できることから安定化
が期待できる。
本発明に用いる不溶性支持体とは、免疫測定時に用いら
れる水又は緩衝液に不溶の固体であればよい。例えば合
成高分子、セル四−ス等の天然高分子、セラミックス、
ガラス、金属等を用いることが可能である。これらを公
知技術で表面処理し、抗体又は抗原を結合させる。
本発明における凍結乾燥は、公知の手法を用いて行えば
よい。例えば、混和後、4時間以内の抗体又は抗原が結
合した支持体と標識物とを一80°Cの温度で2時間凍
結させる。その後、104〜10″″” torrの減
圧下、0°Cで3〜12時間乾燥させ、さらに室温で2
〜3時間乾燥させることによって凍結乾燥した免疫測定
用材料を得ることができる。
本発明の具体的な実施方法はまず第1に試薬として標識
抗体又は標識抗原を0°Cから10℃好ましくは0℃か
ら4℃に冷却しておく。次いで、抗体又は抗原の結合し
た不溶性支持体を反応容器に入れ、この容器を0℃から
10℃好ましくは0”Cから4“Cに冷却する。さらに
この容器へ先に冷却した標識抗体又は標識抗原を加え4
時間以内好ましくは1時間以内に凍結させる。次にこれ
らを凍結乾燥して、測定用組成物とする。
測定の際には、この測定用組成物へ水又は緩衝液とさら
に、サンプルである血清を加え混和し、一定時間インキ
ユベートした後、洗浄を行い標識物の検出を行う。例え
ば、酵素標識の場合には、一定量の酵素基質を加えイン
キユベートし、その生成物の量を測定すれば良い。この
時には、未凍結乾燥物との差は殆んどなく凍結乾燥によ
りアッセイ系が質的に変化することはない。
(発明の効果) 以上の如く本発明によれば従来の競争法キットよりも扱
いが簡便になり、またその保存、輸送形態も非常に簡素
化される。さらに、末法によるキットにおいては液体の
ものとほぼ同等の測定値が得られることも特徴である。
(実施例) 以下、本発明を実施例により更に説明するが本発明は、
これら実施例のみに限定されるものではない。
実施例1 ベーター2−ミクログロブリンの競争法エンザイムイム
ノアッセイ(その1〕 合成ポリマーを基材とした直径1.6mxのビーズにヒ
トベーター2−ミクログロブリンを結合したもの10ケ
を抗原結合不溶性支持体として用い、これを径10騙の
円筒状容器へ入れた。これに100μtの酵素アルカリ
ホスファターゼ(Z、C。
五1.五1)で標識したヒトベーター2−ミクログロブ
リンのウサギ抗体を分注した。その後この容器を4℃、
10℃、25℃のインキユベーターへ1時間又は4時間
入れ、次いで一80℃の冷凍庫へ入れ、内容物を凍結し
た。さらに、これを凍結乾燥し反応用組成物とした。
□”       測定に当たっては、100μtの蒸
留水及び10μtのサンプル血清(牛血清にベーター2
−ミクログロブリンを溶解したもの)を加えた。この後
反応容器を37℃にて40分間インキュベートし、その
後これに750μtの洗浄液(11重量%のツイーン2
0、α1M)リス塩酸緩衝液pHao、[L1重量%の
牛血清アルブミン、[lL1重量%のアジ化ナトリウム
)を加え、アスピレータ−にて不要物を吸引除去した。
この洗浄操作を6回繰り返した後1100μtのjmM
−4メチルウンベリフエロンリン酸を含む基質液pH1
10を加えて37゛CKて10分間インキュベートした
。その後2.4−の反応停止液を加えて反応を停止させ
た。この液を励起波長560 nm、ケイ光波長450
 nmにてケイ光測定を行った。その結果を図1に示す
。実験に用いたヒトベーター2−ミクログロブリン(サ
ンプル)の濃度は、0,10,100,300゜100
0.110000n/7である。
縦軸の値は、サンプル抗原Onν讐の際に得られたケイ
光強度を100%としその相対強度値を示している。図
1より明らかな様に10°C以下、好ましくは4℃以下
で4時間以内好ましくは1時間以内であれば未凍結乾燥
物とほとんど同じ値が得られることが判った。
実施例2 ベーター2−ミクログロブリンの競争法エンザイムイム
ノアッセイ(その2) 合成ポリマーを基材とした直径1.6謡のビーズに人尿
由来のヒトベーター2−ミクログロブリンを結合したも
の10ケを抗原結合不溶性支持体として用い、これを径
10騙の円筒状容器へ入れた。
これに100μtの酵素アルカリホスファターゼ(K、
C!、1.5.1.5 )で標識したヒトベーター2−
ミクログロブリンのウサギ抗体を分注した。その後この
容器を氷水にて0°Cに保ち0分(標識抗体添加後すぐ
に冷凍)、50分、1時間、2時間、4時間、24時間
靜靜置た後すぐに冷凍した。さら杢 に、これら凍結乾燥し反応用組成物とした。
測定に当たっては、実施例1と同じ操作を行い反応によ
り得られたケイ光強度の測定を行った。
その結果を図2に示す。
縦軸の値は実施例1の場合と同様である。図2より明ら
かな様に、4時間以内、好ましくは1時間以内では、未
凍結乾燥物とほとんど同じ値が得ろれることか判った。
実施例3 ベーター2−ミクログロブリンの競争法エンザイムノム
ノアッセイ(その3) 合成ポリマーを基材とした直径1.6鴎のビーズにヒト
ベーター2−ミクログロブリンのウサギ抗体を結合した
もの10ケを抗体結合不溶性支持体として用い、これを
径10騙の円筒状容器へ入れた。
これに100μtの酵素アルカリホスファターゼ(K、
C!、1. A 1.3 )で標識した人尿由来のヒト
ベーター2−ミクログロブリンを分注した。その後この
容器を氷水にて0°Cに保ち、0分(標識抗原添加後す
ぐに冷凍)、30分、1時間、2時間、4時間、静置し
た後、すぐに冷凍した。さらにこれらを凍結乾燥し、反
応用組成物とした。
測定に当たっては、実施例1と同じ操作を行い反応によ
り得られたケイ光強度の測定を行った。
その結果を図3に示す。
縦軸の値は、実施例1の場合と同様である。図3より明
らかな様に、4時間以内、好ましくは1時間以内では、
未凍結乾燥物とほとんど同じ匝が得られることが判った
実施例4 L−サイロキシン(T4)の競争法エンザイムノムノア
ッセイ 合成ポリマーな基材とした直径1.6 +msのビーズ
にT、にウサギ抗体を結合したもの10ケを抗体結合不
溶性支持体として用い、これを径10騙の円筒状容器へ
入れた。これに120μtの酵素アルカリホスファター
ゼ(E、C!、1.五1.5)で標識したT4である標
識抗原を分注した。その後この容器を氷水にて0℃に保
ち、0分(標識抗原添加後すぐに冷凍)、30分、1時
間、2時間、4時間、24時間静置した後、すぐに冷凍
した。さらにこれを凍結乾燥し、反応用組成物とした。
測定に当たっては、120μtの蒸留水及び20μtの
サンプル血清(活性炭素処理した牛血清にT4を溶解し
たもの)を加えた。この後、反応容器を57”Cにて4
0分間インキエベートシ、さらにその後750μtの洗
浄g(実施例1と同組成)を加え、アスピレータ−にて
不要物を吸引除去した。
この洗浄操作を3回繰り返した後、100μtの基質液
(実施例1と同組成)を加えて、37°Cにて10分間
インキュベートした。その後500μtの結果を図4に
示す。実験に用いたT4(サンプル)の濃度は0,10
,100,1000,110000n/mlである。
縦軸の値は実施例1の場合と同様である1図4より明ら
かな様に4時間以内好ましくは1時間以内では未凍結乾
燥物とほとんど同じ値が得られることが判った。
以上の様に本発明により、競争法免疫測定用材料が凍結
乾燥された状態にて同一容器内に標識物と抗原又は抗体
の結合した不溶性支持体を内在させることができ、免疫
測定が可能であることがわかった。
【図面の簡単な説明】
図11図2及び図3は、それぞれ実施例1.実施例2及
び実施例3の各条件下におけるβ、−ミクログロブリン
濃度とケイ光相対強度との関係を示している。図4は、
実施例4の条件下におけるL−サイロキシン濃度とケイ
光相対強度との関係を示している。

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)抗体が結合した不溶性支持体と標識抗原もしくは
    、抗原が結合した不溶性支持体と標識抗体を低温下で混
    和し、凍結乾燥することを特徴とする免疫測定用材料の
    製造方法。
  2. (2)該低温が0℃以上10℃以下であることを特徴と
    する特許請求の範囲第(1)項記載の方法。
  3. (3)混和後、4時間以内に凍結乾燥することを特徴と
    する特許請求の範囲第(1)項、第(2)項記載の方法
  4. (4)免疫測定の方法が競争法であることを特徴とする
    特許請求の範囲第(1)項〜第(3)項記載の方法。
  5. (5)標識方法に酵素を用いることを特徴とする特許請
    求の範囲第(1)項〜第(4)項記載の方法。
JP29191785A 1985-12-26 1985-12-26 免疫測定用材料の製造方法 Pending JPS62151758A (ja)

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