JPS62130699A - モノクロ−ン抗体 - Google Patents
モノクロ−ン抗体Info
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- JPS62130699A JPS62130699A JP61201923A JP20192386A JPS62130699A JP S62130699 A JPS62130699 A JP S62130699A JP 61201923 A JP61201923 A JP 61201923A JP 20192386 A JP20192386 A JP 20192386A JP S62130699 A JPS62130699 A JP S62130699A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明はプロソマル蛋白 ［ｐｒｏｓｏｍａ １ｐｒ
ｏｔｅｉｎｓ ］に対するモノクローン抗体、これらの
抗体を生産する細胞系、免疫化学診断法、及びこの方法
で使用する診断剤に関する。
ｏｔｅｉｎｓ ］に対するモノクローン抗体、これらの
抗体を生産する細胞系、免疫化学診断法、及びこの方法
で使用する診断剤に関する。
プロソム［ｐｒｏｓｏｍｅｓ ］はリボ核蛋白［ＰＮＰ
］複合体［ｃｏＩｌｌｐ ｌ ｅｘｅｓ ］又はＰＮＰ
粒子であり、特′にダック及びマウスの赤芽球及びヒト
ヘラ［Ｈｅ１ａ ］細胞において、近年生化学的方法
により示され、電子顕微鏡によって可視化された［５Ｐ
ＯＨＲｅｔ ａｌｋ：よッＴ 定Ｍ サｈ タ。
］複合体［ｃｏＩｌｌｐ ｌ ｅｘｅｓ ］又はＰＮＰ
粒子であり、特′にダック及びマウスの赤芽球及びヒト
ヘラ［Ｈｅ１ａ ］細胞において、近年生化学的方法
により示され、電子顕微鏡によって可視化された［５Ｐ
ＯＨＲｅｔ ａｌｋ：よッＴ 定Ｍ サｈ タ。
Ｅ ｕｒ、 Ｊ 、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 １７．２９６
−３１８． （１９７０） ］ 。
−３１８． （１９７０） ］ 。
この目的で文献を引用してお（［３Ｃｈｍｉｄ ｅｔａ
ｌ、ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ ３ （１） 、 ２
９−３４゜（１９８４） コ 。
ｌ、ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ ３ （１） 、 ２
９−３４゜（１９８４） コ 。
プロソムの分子量は約６００，０００ドル１ヘンと評価
されている。プロソムは極めて安定した複合体である。
されている。プロソムは極めて安定した複合体である。
実際、これは、リボニュータレアーゼ。プロテアーゼに
、 ＩＭを超えるセシウム イオン。
、 ＩＭを超えるセシウム イオン。
及び［上記の細胞中における］抑制ｍＲＮＰｓの他の構
成分を溶解することが示されている界面活性剤′″３ａ
ｒｋｏｓｙｌ ” ［ナトリウム Ｎ−ラウロイルサル
コシネイト］に対して抵抗性がある。
成分を溶解することが示されている界面活性剤′″３ａ
ｒｋｏｓｙｌ ” ［ナトリウム Ｎ−ラウロイルサル
コシネイト］に対して抵抗性がある。
これらの複合体は、約１９ｓの沈降
［５ｅｄｉｉ＋ｅｎｔａｔｔｏｎ ］係数を有し、細胞
の型及び種によって、１−１２の小ＲＮＡ及び種に特定
の員子と全ての種に共通の員子との両者を含む蛋白の特
性集団の１又はそれ以上の員子［ｍｅｍｂｅｒ ］を含
む、これらの員子蛋白の分子量は１９，０００及びｓｏ
、ｏｏｏの間で変り、プロソムあたりの蛋白の分子数は
２０のオーダーである。
の型及び種によって、１−１２の小ＲＮＡ及び種に特定
の員子と全ての種に共通の員子との両者を含む蛋白の特
性集団の１又はそれ以上の員子［ｍｅｍｂｅｒ ］を含
む、これらの員子蛋白の分子量は１９，０００及びｓｏ
、ｏｏｏの間で変り、プロソムあたりの蛋白の分子数は
２０のオーダーである。
プロソマル蛋白の集団［ｐｏｐｕ ｆａｔ ｉｏｎ ］
は少なくとも２５の識別員子を包含し、従って約２５の
異なる型のプロソムが存在し得る。
は少なくとも２５の識別員子を包含し、従って約２５の
異なる型のプロソムが存在し得る。
現在まで、プロソムの生理学的及び診断的意義は明らか
ではなかった。黙しながら１発明者等は。
ではなかった。黙しながら１発明者等は。
プロソムが細胞の分化及び全生体についてさえも細胞間
の連絡及び自己免疫疾患に関連する多くの重要な生理学
的過程に関与することがあることの徴候を有している。
の連絡及び自己免疫疾患に関連する多くの重要な生理学
的過程に関与することがあることの徴候を有している。
例えば１発明者等は、細胞。
及び胚の発達及び細胞分化の間の生物の官能状態と関連
する生理学的特異性を示すプロソムの分化分布［ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ］を
見出だした。
する生理学的特異性を示すプロソムの分化分布［ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ］を
見出だした。
特に、胚の上皮細胞において、一定の型のプロソマル抗
原が１分化の異なる段階に従って、核内に２次いで細胞
質内に、かつ次いで細胞質のセクター内に証明されるこ
とができる。
原が１分化の異なる段階に従って、核内に２次いで細胞
質内に、かつ次いで細胞質のセクター内に証明されるこ
とができる。
他の著しい発見は、一定の場合にプロソムが存在し、プ
ロソマルＲＮＡに結合した単一蛋白成分の多重コピーか
らのみ多分なるものである。更に。
ロソマルＲＮＡに結合した単一蛋白成分の多重コピーか
らのみ多分なるものである。更に。
プロソムの定量分布が赤芽球の分化の段階に応じて変る
ばかりでなく、更に各種のプロソマル蛋白がその後の分
化段階を通じてその分布が異なることが発見されたが、
核内の蛋白は細胞質内のものと同一の分子量を有するこ
とが発見された。
ばかりでなく、更に各種のプロソマル蛋白がその後の分
化段階を通じてその分布が異なることが発見されたが、
核内の蛋白は細胞質内のものと同一の分子量を有するこ
とが発見された。
プロソムは、細胞が染色体からプラズマ膜へ及びそれを
超えて広がるネットワークの部分を構成することを示す
ことができる。このことは細胞動的構造と形質発現及び
制御のカスケイドの一連の段階［プロソムに与えられる
主な役割］との間の関係を示唆するものである。プロソ
ム及びプロソマル蛋白の決定及び特に分化検出は１例え
ば癌の場合におけるように、遺伝子制御の障害に関連す
る異常の診断の有力な手段と考えられる。
超えて広がるネットワークの部分を構成することを示す
ことができる。このことは細胞動的構造と形質発現及び
制御のカスケイドの一連の段階［プロソムに与えられる
主な役割］との間の関係を示唆するものである。プロソ
ム及びプロソマル蛋白の決定及び特に分化検出は１例え
ば癌の場合におけるように、遺伝子制御の障害に関連す
る異常の診断の有力な手段と考えられる。
従って、プロソムは、その構造及び存在により。
所定の細胞の生理学的状態を反映する細胞成分の新しい
クラスを代表する。
クラスを代表する。
このように、プロソムを同定覆る手段を利用できること
は必要であることが分った。これは例えば次のような目
的のためである。
は必要であることが分った。これは例えば次のような目
的のためである。
△） 実験目的で：
１） 生存するヒト及び動物の細胞の詳細な構造の分析
； ２） 転写後の形質発現の制御の研究；及び Ｂ） 診断目的で： １） 病的状態又は病原体との関連で所定の細胞のプロ
ソマル免疫表現型の障害の定義；２） 分化及び発展の
状態に関連する細胞の同定１例えば成人細胞の間の胚型
の細胞の同定。
； ２） 転写後の形質発現の制御の研究；及び Ｂ） 診断目的で： １） 病的状態又は病原体との関連で所定の細胞のプロ
ソマル免疫表現型の障害の定義；２） 分化及び発展の
状態に関連する細胞の同定１例えば成人細胞の間の胚型
の細胞の同定。
従って、この発明は１例えばプロソム関連視象の検出に
有用であり、一定のプロソム関連障害に治療的に適用で
きるプロソマル蛋白に対して指向したモノクローン抗体
に関する。
有用であり、一定のプロソム関連障害に治療的に適用で
きるプロソマル蛋白に対して指向したモノクローン抗体
に関する。
この発明は、従って、プロソム関連現象の検出法、及び
特に試料中のプロソム関連障害を診断する方法であって
、該試料を少なくとも１種のプロソマル蛋白に対して特
に指向したモノクローン抗体と共に培養することを包含
し、モノクローン抗体が直接的又は間接的に標識を付与
され１次いで該標識とプロソマル蛋白及び／又は該モノ
クローン抗体との結合が測定される方法にも関する。
特に試料中のプロソム関連障害を診断する方法であって
、該試料を少なくとも１種のプロソマル蛋白に対して特
に指向したモノクローン抗体と共に培養することを包含
し、モノクローン抗体が直接的又は間接的に標識を付与
され１次いで該標識とプロソマル蛋白及び／又は該モノ
クローン抗体との結合が測定される方法にも関する。
従って、この発明は、標識にカップルしたプロソマル蛋
白に対して特に指向したモノクローン抗体を包含する診
断剤にも関する。
白に対して特に指向したモノクローン抗体を包含する診
断剤にも関する。
この発明の方法において、試料は、ｌＩ織動物質好まし
くは顕微鏡検査に適したその切片］又は診断すべき生体
に由来する液体媒体［血液又はその分画、尿又はリンパ
液］、又はある場合には完全生体自体［例えばｉｎ Ｉ
ｍａｇｉｎｇ］であることができる。
くは顕微鏡検査に適したその切片］又は診断すべき生体
に由来する液体媒体［血液又はその分画、尿又はリンパ
液］、又はある場合には完全生体自体［例えばｉｎ Ｉ
ｍａｇｉｎｇ］であることができる。
この発明の方法に用いる標識は、免疫測定において一般
に用いられる任意の標識であることができる。その例に
は、放射性原子又は化合物、酵素。
に用いられる任意の標識であることができる。その例に
は、放射性原子又は化合物、酵素。
赤芽球のような粒子、ラテックス粒子、染料の分散ゾル
粒子、金属又は金属化合物、染色体９発蛍光団１等があ
る。標識は直接的又は間接的にモノクローン抗体に結合
することができる。直接結合は好ましくは共有結合によ
って、場合により連結分子を用いて形成することができ
る。標識とモノクローン抗体との間の間接的結合は１例
えばモノクローン抗体と標識特定抗原、又は第２の抗体
又はそのフラグメント又は蛋白Ａ又は類似化合物と。
粒子、金属又は金属化合物、染色体９発蛍光団１等があ
る。標識は直接的又は間接的にモノクローン抗体に結合
することができる。直接結合は好ましくは共有結合によ
って、場合により連結分子を用いて形成することができ
る。標識とモノクローン抗体との間の間接的結合は１例
えばモノクローン抗体と標識特定抗原、又は第２の抗体
又はそのフラグメント又は蛋白Ａ又は類似化合物と。
−〇−
例えばアビジン又はビオチンと結合す、るモノクローン
抗体を用い、これと標識ビオチン又はアビジンとをそれ
ぞれ反応させることによって、形成することができる。
抗体を用い、これと標識ビオチン又はアビジンとをそれ
ぞれ反応させることによって、形成することができる。
液体試料に適用されるこの発明の方法によれば。
任意の型の通常の免疫測定が適用できる。そのコニをあ
げると、サンドイッチ測定、固相競合測定。
げると、サンドイッチ測定、固相競合測定。
凝集測定、又は凝集抑制測定である。サンドインチ測定
においては、一般に検出される抗原は、一方では固定化
した又は固体表面に固定化される抗体と、他方では標識
され又は標識されるべき抗体との間にサンドイッチされ
る。固相競合においては、測定される抗原は例えば固相
結合抗体及び蝋識坑原と共に培養される。凝集測定にお
いては。
においては、一般に検出される抗原は、一方では固定化
した又は固体表面に固定化される抗体と、他方では標識
され又は標識されるべき抗体との間にサンドイッチされ
る。固相競合においては、測定される抗原は例えば固相
結合抗体及び蝋識坑原と共に培養される。凝集測定にお
いては。
測定する抗原は粒子結合抗体と共に培養し、これは凝集
し抗原結合で沈澱を形成する。他方、凝集抑制測定では
粒子結合抗原と共に遊離の抗体が測定する抗原と培養さ
れ得る。
し抗原結合で沈澱を形成する。他方、凝集抑制測定では
粒子結合抗原と共に遊離の抗体が測定する抗原と培養さ
れ得る。
この発明による方法で組織物質が試料として用いられる
場合には、この組織物質は場合により先ず固定されるこ
とかでき１次いで場合により物質を先ず化学的又は物理
的手段で固定した後に［Ｅされているか又は標識される
べきモノクローン抗体と共に培養され得る。
場合には、この組織物質は場合により先ず固定されるこ
とかでき１次いで場合により物質を先ず化学的又は物理
的手段で固定した後に［Ｅされているか又は標識される
べきモノクローン抗体と共に培養され得る。
この発明に用いる標識は培養後に標識の型あるいは用い
る方法の型に応じて可視的又は器具法によってその結合
について観察される。
る方法の型に応じて可視的又は器具法によってその結合
について観察される。
プロソマル蛋白に対して特に指向したモノクローン抗体
は、不滅化した［ ｌ ｍｍｏｒｔａ ｌ ｔｚｅｄ
］抗体生産細胞の生物学的純粋の細胞系によって生産さ
れる。
は、不滅化した［ ｌ ｍｍｏｒｔａ ｌ ｔｚｅｄ
］抗体生産細胞の生物学的純粋の細胞系によって生産さ
れる。
この不滅化した抗体生産細胞は、当業Ｗで既知の各種の
方法の任意のものによって得ることができ、一般には次
の■稈を軒る。１ リンパ球のような特定の細胞の生産
に適した細胞の誘導；２該細胞の不滅化；３ 所望の特
性及び親和性を有するこれらの不滅化細胞からのクロー
ンの選択。
方法の任意のものによって得ることができ、一般には次
の■稈を軒る。１ リンパ球のような特定の細胞の生産
に適した細胞の誘導；２該細胞の不滅化；３ 所望の特
性及び親和性を有するこれらの不滅化細胞からのクロー
ンの選択。
しばしば用いられる方法に（３１，コーラ等が１９７５
年に最初に記載したもので ［Ｋ ｏｅｈｌｅｒ ａ
ｎｄＭｉｌｌｓｔｅｉｎ、 Ｎａｔｕｒｅ ２５６．４
９５−４９７ （１９７５） ］ 。
年に最初に記載したもので ［Ｋ ｏｅｈｌｅｒ ａ
ｎｄＭｉｌｌｓｔｅｉｎ、 Ｎａｔｕｒｅ ２５６．４
９５−４９７ （１９７５） ］ 。
求められている抗体に対する抗原でマウスを免疫化し、
ヒ細胞を単離し、これとマウス ミエローマ細胞と融合
しいわゆるハイブリドーマを得る。
ヒ細胞を単離し、これとマウス ミエローマ細胞と融合
しいわゆるハイブリドーマを得る。
然しながら、マウスとは異なる動物も同様に免疫化する
ことができ、他の体部分からの抗体生産細胞も同様に適
している。更にこれらの抗体生産細胞はニブティン−バ
ー［Ｅ ｐｔｅｉｎ−Ｂ ａｒコビールス又はオンコシ
エン［ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ］ Ｄ ＮＡのような不滅
化形質転換遺伝物質による細胞の形質転換のような他の
方法によって不滅化することができる。
ことができ、他の体部分からの抗体生産細胞も同様に適
している。更にこれらの抗体生産細胞はニブティン−バ
ー［Ｅ ｐｔｅｉｎ−Ｂ ａｒコビールス又はオンコシ
エン［ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ］ Ｄ ＮＡのような不滅
化形質転換遺伝物質による細胞の形質転換のような他の
方法によって不滅化することができる。
上に述べたように、この発明によるプロソマル蛋白に対
するモノクローン抗体は、免疫蛍光検査。
するモノクローン抗体は、免疫蛍光検査。
及び免疫酵素又は放射免疫技術のような免疫測定の従来
の技術によってプロソムの検出又は同定に適している。
の技術によってプロソムの検出又は同定に適している。
この発明による方法の適用は、生物学の実験研究の分野
及び医学研究の分野において、特に癌研究、及び較差免
疫表現型による疾病の診断のための臨床医学において極
めて重要である。
及び医学研究の分野において、特に癌研究、及び較差免
疫表現型による疾病の診断のための臨床医学において極
めて重要である。
例えば、生物学の実験研究の分野において、この発明に
よる方法は汎存生理学複合体の役割においてプロソムの
構造の特性化１機能及び合成に用いることができる。特
に、プロソムの個別の型の較差細胞学的局在は、細胞分
画及び生化学の方法により、又は完全細胞又は組織切片
の免疫蛍光検査によって、この発明ににる方法を用いて
非常に容易となる。
よる方法は汎存生理学複合体の役割においてプロソムの
構造の特性化１機能及び合成に用いることができる。特
に、プロソムの個別の型の較差細胞学的局在は、細胞分
画及び生化学の方法により、又は完全細胞又は組織切片
の免疫蛍光検査によって、この発明ににる方法を用いて
非常に容易となる。
発達生物学において、プロソムの存在又は不在及び特定
の型の細胞における特定のプロソムの特徴的細胞学的局
在を与えることによって、プロソマルモノクローン抗体
は胚の発達における特定細胞の特性化、同定及び追跡に
有用であり、従来そうであったように９発達に関して確
立される動的組織学を可能にする。プロソムが遺伝子表
出の較差制御に関与する限り、この発明による方法は細
胞制御の基礎となる機構を解明するのに用いることがで
きる。
の型の細胞における特定のプロソムの特徴的細胞学的局
在を与えることによって、プロソマルモノクローン抗体
は胚の発達における特定細胞の特性化、同定及び追跡に
有用であり、従来そうであったように９発達に関して確
立される動的組織学を可能にする。プロソムが遺伝子表
出の較差制御に関与する限り、この発明による方法は細
胞制御の基礎となる機構を解明するのに用いることがで
きる。
医学研究の分野において、この発明による方法は、較差
免疫表現型により、特定組織の細胞の型及び細胞の分化
の段階に応じ確立されるプロツマル抗原の分布の実際の
地図を可能にする。細胞の制御に影響する病理学的条件
の場合におけるこの分布の変更、従って生理学的状態は
、この発明の方法を用いて同定することができる。
免疫表現型により、特定組織の細胞の型及び細胞の分化
の段階に応じ確立されるプロツマル抗原の分布の実際の
地図を可能にする。細胞の制御に影響する病理学的条件
の場合におけるこの分布の変更、従って生理学的状態は
、この発明の方法を用いて同定することができる。
異なる起源の病理学的条件の臨床診断にあたって、この
発明による方法は必須の手段を提供する。
発明による方法は必須の手段を提供する。
実際、この方法は、健常からそれて９例えばバイオプシ
ーによって除かれた組織の切片及び生理液体中に迅速に
認識すべき細胞の存在及び分布を可能にする。この方法
で、現在は細胞学及び組織学の高度の経験を必要とする
病理学的条件の診断が較差フルオロメトリーによって自
動化され得る。
ーによって除かれた組織の切片及び生理液体中に迅速に
認識すべき細胞の存在及び分布を可能にする。この方法
で、現在は細胞学及び組織学の高度の経験を必要とする
病理学的条件の診断が較差フルオロメトリーによって自
動化され得る。
癌に関しては、この発明による方法は発達の初期の段階
において末梢血液中の細胞の存在を検出するのに極めて
有用である。実際、健常末梢血液は未熟細胞を極めて少
数しか含有しない、対照的に、白面疾患者の末梢血液に
はかなりの数の未熟細胞が存在することが認められてい
る。
において末梢血液中の細胞の存在を検出するのに極めて
有用である。実際、健常末梢血液は未熟細胞を極めて少
数しか含有しない、対照的に、白面疾患者の末梢血液に
はかなりの数の未熟細胞が存在することが認められてい
る。
この発明は１次にあげる例によって詳細に説明する。
例 １
プロソマル のｌｉ
蛋白は電気泳動によってプロソムから抽出する。
プロソムは予めショ糖勾配［ｇｒａｄ ｔｅｎｔ ］に
基づき分割法によって他の細胞複合体から分離したもの
である。
基づき分割法によって他の細胞複合体から分離したもの
である。
プロソム蛋白の生産は次の工程からなる。
１） 遠心分離により及びショ糖勾配に基づく分割法に
よって他の細胞複合体からのプロソムの分離し、及び約
１９８の沈降係数を有する粒子の回収。
よって他の細胞複合体からのプロソムの分離し、及び約
１９８の沈降係数を有する粒子の回収。
２） ゲル電気泳動による求める蛋白の抽出。
ダック及びマウスのプロソムの生産は文献に詳細に記載
されている ［ＳＣＨＭＴＤ ｅｔａｌ、ＥＭＢｏ
Ｊｏｕｒｎａｌ ３ （１）、 ２Ｌ３４゜＜１
９８４） ］ 。
されている ［ＳＣＨＭＴＤ ｅｔａｌ、ＥＭＢｏ
Ｊｏｕｒｎａｌ ３ （１）、 ２Ｌ３４゜＜１
９８４） ］ 。
ヘラ＠胞プロソムは次の手順に従って得られた。
１） ボストーミトコンドリアーヒ澄みをヘラ細胞の培
養から文献［ＧＡＮＤＥＲＯＬ ａｌ、 Ｅｕｒ、 Ｊ
、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 ３８．４４３−４５２．１９７
３］に記載の方法で調製した； ２） ポリリボゾーム及びボスト−リボゾーム粒子の調
製は文献［Ｖ ＴＮＣＥＮＴ ｅｔ ａｌ、Ｅｕｒ。
養から文献［ＧＡＮＤＥＲＯＬ ａｌ、 Ｅｕｒ、 Ｊ
、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 ３８．４４３−４５２．１９７
３］に記載の方法で調製した； ２） ポリリボゾーム及びボスト−リボゾーム粒子の調
製は文献［Ｖ ＴＮＣＥＮＴ ｅｔ ａｌ、Ｅｕｒ。
Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １ｔ２ ６１７−６３３．Ｈ
１８０コに記載の方法で調製した； ３） 遊離の細胞質リボ核蛋白複合体は低塩含量のバッ
ファ中１５−２８％強度（重ｆｉｔ／’ｌ量）イン力イ
ネチック ショ糖勾配に再懸濁したボスト−リボゾーム
粒子のペレットの沈降によって分画した。
１８０コに記載の方法で調製した； ３） 遊離の細胞質リボ核蛋白複合体は低塩含量のバッ
ファ中１５−２８％強度（重ｆｉｔ／’ｌ量）イン力イ
ネチック ショ糖勾配に再懸濁したボスト−リボゾーム
粒子のペレットの沈降によって分画した。
この組成は次の通りである： １０ ｍＭ トリ〒タノ
ールアミン、トＩｃＩ （１）Ｈ７，４）、 ５０ｍＭ
ＫＣＩ。
ールアミン、トＩｃＩ （１）Ｈ７，４）、 ５０ｍＭ
ＫＣＩ。
及び５ｍＭ２−メルカプトエタノール、この分画はｌ’
−ｔｌｄ型のベックマン ゾーナル ロータ中で１５ｈ
、４１，０００ ｒｐｍ及び４℃で行なった。
−ｔｌｄ型のベックマン ゾーナル ロータ中で１５ｈ
、４１，０００ ｒｐｍ及び４℃で行なった。
４ ） １５−３ＯＳの範囲内で沈降した粒子は次い
で再び合せ、ベックマン型Ｔｉ６０ロータ中で１８ｈ。
で再び合せ、ベックマン型Ｔｉ６０ロータ中で１８ｈ。
４８．０００ ｒｒ）ｍ及び４℃で高速遠心分離によっ
て濃縮した。
て濃縮した。
５） 遠心分蘭ペレットをショ糖勾配［５−２１％重量
／重１］にＫＣＩの存在下で０．５Ｍ ［ロータ５Ｗ４
１ ３７．００Ｏｒｐｍ、 １７ｈ、、 ４℃］の濃
度で入れ。
／重１］にＫＣＩの存在下で０．５Ｍ ［ロータ５Ｗ４
１ ３７．００Ｏｒｐｍ、 １７ｈ、、 ４℃］の濃
度で入れ。
約１９８で沈降した分画を回収した。
全ての場合において、プロソマル蛋白はこれらの分画か
ら抽出し、ゲル電気律動の既知の方法を用いて同定した
０例えば、レムリ ［ＬＡ ＥＭＭ Ｌ Ｉ 、 Ｎａｔｕｒｅ ２２７６
８０−６８５．１９７０］による一次元ナトリウム ド
デシル ザルフエイト［ＳＤＳ］−ポリアクリルアミド
ゲル上の電気泳動、又はオファレル［０’−ＦＡＲＲＥ
ＬＬｅｔ ａｌ、 Ｃｅ１１．１２．１１３３−１１４
２．１９７７］の記載した二次元ゲル上の電気泳動であ
る。これらの電気泳動法に用いた分子量マーカーは次の
化合物である：７オスフＡリラゼー１）［９４Ｋ］、ボ
ビン面清アルブミン［６４Ｋ］、オバルブミン［４３Ｋ
］ 、カルボニック アンヒドラーゼ［３１Ｋ］、大
豆トリプシンインヒビター［２１Ｋ］及びラクトアルブ
ミン［１４Ｋ］。
ら抽出し、ゲル電気律動の既知の方法を用いて同定した
０例えば、レムリ ［ＬＡ ＥＭＭ Ｌ Ｉ 、 Ｎａｔｕｒｅ ２２７６
８０−６８５．１９７０］による一次元ナトリウム ド
デシル ザルフエイト［ＳＤＳ］−ポリアクリルアミド
ゲル上の電気泳動、又はオファレル［０’−ＦＡＲＲＥ
ＬＬｅｔ ａｌ、 Ｃｅ１１．１２．１１３３−１１４
２．１９７７］の記載した二次元ゲル上の電気泳動であ
る。これらの電気泳動法に用いた分子量マーカーは次の
化合物である：７オスフＡリラゼー１）［９４Ｋ］、ボ
ビン面清アルブミン［６４Ｋ］、オバルブミン［４３Ｋ
］ 、カルボニック アンヒドラーゼ［３１Ｋ］、大
豆トリプシンインヒビター［２１Ｋ］及びラクトアルブ
ミン［１４Ｋ］。
例２
プロソマル 一に啄する七ツクローン
一般的にいって、この発明によるプロソムの蛋白に対す
る抗体を生産するハイブリドマ細胞系を得る方法は次の
工程を包含する。
る抗体を生産するハイブリドマ細胞系を得る方法は次の
工程を包含する。
１） 例１によって調製した所望の蛋白の所定の量での
マウスの免疫： ２） 免疫マウスのと臓の除去及びヒ臓細胞の分１ｉｆ
ｔ： ３） こうして得たヒＩｊＨＩＩ胞とマウスミエローマ
細胞との融合促進剤の存在下における融合；４） 未融
合ミエローマ１ＩＩｌ胞が成長しない選択性媒体中で、
かつ適当な栄養成分の存在下での得られたハイブリッド
細胞の培養； ５） 所望の抗体を生産する細胞の選択及びこれらのｌ
１ｌｌｌｌｌのクローニング。
マウスの免疫： ２） 免疫マウスのと臓の除去及びヒ臓細胞の分１ｉｆ
ｔ： ３） こうして得たヒＩｊＨＩＩ胞とマウスミエローマ
細胞との融合促進剤の存在下における融合；４） 未融
合ミエローマ１ＩＩｌ胞が成長しない選択性媒体中で、
かつ適当な栄養成分の存在下での得られたハイブリッド
細胞の培養； ５） 所望の抗体を生産する細胞の選択及びこれらのｌ
１ｌｌｌｌｌのクローニング。
この方法の第一工程、即ちマウスの免疫は抗体合成の細
胞の記憶を刺激するように行なう。
胞の記憶を刺激するように行なう。
免疫プロトコルは、皮下又はＢｕｌ＋！内に、約２−３
週間の間隔で連続３回、所定量のプロソム蛋白を。
週間の間隔で連続３回、所定量のプロソム蛋白を。
融合の前４日及び２月の休養期間後、注射して。
同一のプロソム蛋白で皮下又は腹腔内に投与を与えるこ
とから成る。
とから成る。
各注射に用いるプロソム蛋白の爵はマウスあたり約２０
−５０μＱである。
−５０μＱである。
この方法で免疫したマウスは次いで殺し、そのヒ臓を除
き１文献［例えば、 ＭＯＯＲＥ Ｃｔ ａｌ。
き１文献［例えば、 ＭＯＯＲＥ Ｃｔ ａｌ。
“Ｃｕ１ｔｕｒｅ ｏｆ Ｎｏｒｍａｌ ｌ−１１−１
ｕ ｌ ｅｕｃｏｃｙｔｅｓ”Ｊ、Ａ、Ｍ、Ａ、坦９
５１９−５２４．１９６７］に定められたようにＲＰ
Ｍ Ｔ １６４０媒体中でヒ臓細胞回収処理をする。
ｕ ｌ ｅｕｃｏｃｙｔｅｓ”Ｊ、Ａ、Ｍ、Ａ、坦９
５１９−５２４．１９６７］に定められたようにＲＰ
Ｍ Ｔ １６４０媒体中でヒ臓細胞回収処理をする。
細胞融合は、この発明の第３工程となるもので。
プロソム蛋白に対し免疫のマウスのヒ臓細胞とマウス
ミエソーマとを、融合促進剤ポリエチレングリコールの
存在下で、コーラ、ミルスタインの技術［ＫＯＨＬＥＲ
ａｎｄ Ｍ Ｉ ＬＳＴＥ ＩＮ。
ミエソーマとを、融合促進剤ポリエチレングリコールの
存在下で、コーラ、ミルスタインの技術［ＫＯＨＬＥＲ
ａｎｄ Ｍ Ｉ ＬＳＴＥ ＩＮ。
Ｎａｔｕｒｅ２５６ ４９５−４９７ （１９７５）
］に従ッテ混合することからなる。ミエローマ細胞は
ヒ臓細胞に対して１：１０の割合で使用づる。
］に従ッテ混合することからなる。ミエローマ細胞は
ヒ臓細胞に対して１：１０の割合で使用づる。
ポリエチレン グリコールの存在下、１分間３７℃で攪
拌しながら培養後、細胞はＲＰ Ｍ Ｉ １６４０ｔｓ
体中で洗浄し、同−媒体中に再懸濁し９次いでハイブリ
ッド細胞の成長に適し１．：選択的媒体で培養する。
拌しながら培養後、細胞はＲＰ Ｍ Ｉ １６４０ｔｓ
体中で洗浄し、同−媒体中に再懸濁し９次いでハイブリ
ッド細胞の成長に適し１．：選択的媒体で培養する。
ミエローマ細胞は、酵素ヒポキサンヂン：グアニン フ
ＡスフＡリボシルトランスフェラーゼが欠けているので
、ヒボキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む
媒体を再現しない、従って。
ＡスフＡリボシルトランスフェラーゼが欠けているので
、ヒボキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む
媒体を再現しない、従って。
ハイブリドーマ細胞の成長のための選択的媒体はヒボキ
サンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む。
サンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む。
所望のプロソム蛋白に対する抗体を生産する細胞は次い
で選択されクーロンされる。 実質的量のモノクローン
抗体の生産は、この方法で選択されたハイブリッド細胞
の管中培養によるか、又はマウスに注射し、約１５日後
に求める抗体を含む酸性液体を収穫することによって行
なうことができる。
で選択されクーロンされる。 実質的量のモノクローン
抗体の生産は、この方法で選択されたハイブリッド細胞
の管中培養によるか、又はマウスに注射し、約１５日後
に求める抗体を含む酸性液体を収穫することによって行
なうことができる。
こうして得られたモノクローン抗体は一２０℃で冷凍し
て貯蔵する。
て貯蔵する。
例３
ビンセントの記載する方法［ＶＩＮＣＥＮＴｅｔ ａｔ
、Ｅｕｒ、 Ｊ 、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 １１２．６１
７−６３３゜（１９８０） ］によって得られたブック
２０ＳグロビンｍＲＮＰｓを、０．５Ｍ ＫＣＩの処
理で沈降係数４８、１３８．１６８及び１９Ｓ（プロソ
ム）の４の主要サブ複合体に尊前される。特定のプロソ
ム蛋白に対する抗体を得るため、 ［３ａｌｂ Ｃマウ
スに上記例２に定めた免疫プロトコルに従い７０インド
［Ｆ ｒｅｕｎｄ ］助剤の存在下２０μＱのプロソム
［上で得られた１９８沈降の粒子］を腹腔内及び皮下に
注射した。第２の注射の１週間後、マウス白酒をサンプ
リングし、抗体の存在をＦＬＩＳＡ及び免疫電気泳動技
術により検出した。
、Ｅｕｒ、 Ｊ 、Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 １１２．６１
７−６３３゜（１９８０） ］によって得られたブック
２０ＳグロビンｍＲＮＰｓを、０．５Ｍ ＫＣＩの処
理で沈降係数４８、１３８．１６８及び１９Ｓ（プロソ
ム）の４の主要サブ複合体に尊前される。特定のプロソ
ム蛋白に対する抗体を得るため、 ［３ａｌｂ Ｃマウ
スに上記例２に定めた免疫プロトコルに従い７０インド
［Ｆ ｒｅｕｎｄ ］助剤の存在下２０μＱのプロソム
［上で得られた１９８沈降の粒子］を腹腔内及び皮下に
注射した。第２の注射の１週間後、マウス白酒をサンプ
リングし、抗体の存在をＦＬＩＳＡ及び免疫電気泳動技
術により検出した。
第３の注射の２月後、同量のプロソムの投与を静脈内及
び腹腔内に行ない、４日後マウスを殺し。
び腹腔内に行ない、４日後マウスを殺し。
そのヒ臓を除き、ヒ臓細胞［１０”］を融合促進剤とし
てポリエチレン グリコールを用い、ＫＯＨＬＥＲ，Ｍ
ＩＬＳＴＥＩＮの方法に従い［スイスのバーゼルの Ｈ
ＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ−ＲＯＣＨＥのＴ、５ＴＡＥＩ−
ＩＥＬＩＮ研究所から提供された］ＰＡＩマウスのミエ
ローマ細胞［１０７］と融合させた。
てポリエチレン グリコールを用い、ＫＯＨＬＥＲ，Ｍ
ＩＬＳＴＥＩＮの方法に従い［スイスのバーゼルの Ｈ
ＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ−ＲＯＣＨＥのＴ、５ＴＡＥＩ−
ＩＥＬＩＮ研究所から提供された］ＰＡＩマウスのミエ
ローマ細胞［１０７］と融合させた。
プロソム蛋白に対する抗体を生産する細胞は次いで選択
的媒体で選択され、制限希釈法によってクローンした。
的媒体で選択され、制限希釈法によってクローンした。
抗体を生産するハイブリッド細胞の検出はＦＬＩＳＡ法
及び免疫電気移転法によって行なった。
及び免疫電気移転法によって行なった。
この２の試験で、２０ＳグロビンｍＲＮ Ｐ粒子を抗原
として用い、ポジチブ クローン、即ちプロソム蛋白１
１２７Ｋ及びｐ３１Ｋに対する抗体を生産するクローン
をこの抗原で選択した。
として用い、ポジチブ クローン、即ちプロソム蛋白１
１２７Ｋ及びｐ３１Ｋに対する抗体を生産するクローン
をこの抗原で選択した。
ｐ２７Ｋ及びｐ３１にプロソム蛋白に対するモノクロー
ン抗体を生産する細胞系を、パスツール研究所の国立微
生物寄託機関 ［Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎＮａ口ｏｎａｌ
ｄｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｏｒｏａ
ｎｉｓｌＩｌｓｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔｅｕｒ Ｉ
ｎ５ｔ＋ｔｕｔｅ］に、それぞれｎｏ、 ｌ−５８８
及び（−５８９として寄託した。
ン抗体を生産する細胞系を、パスツール研究所の国立微
生物寄託機関 ［Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎＮａ口ｏｎａｌ
ｄｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｏｒｏａ
ｎｉｓｌＩｌｓｏｆ ｔｈｅ ｐａｓｔｅｕｒ Ｉ
ｎ５ｔ＋ｔｕｔｅ］に、それぞれｎｏ、 ｌ−５８８
及び（−５８９として寄託した。
抗−ｐ ２７ Ｋ抗体を生産する細胞系［内部記号ＩＢ
５として指示する］は、約５．９の等電１））−１を有
するクラスＩｑＧｌの抗体を生産する。
５として指示する］は、約５．９の等電１））−１を有
するクラスＩｑＧｌの抗体を生産する。
抗−Ｆ１３１に抗体を生産する細胞系［内部記号ＡＡ４
として指示する］は、約５．２の等電ｐｌ−１を有する
クラスＩｏＧＩの抗体をも生産する６添附の第１図は次
のものを示す。
として指示する］は、約５．２の等電ｐｌ−１を有する
クラスＩｏＧＩの抗体をも生産する６添附の第１図は次
のものを示す。
２５４ ｎｍで観察した０、５ｍＫ ＣＩの存在下ショ
糖勾配中のダック２０８グロビンｍＲＮ Ｐ粒子の沈降
プロフィール［第１Ａ図］。
糖勾配中のダック２０８グロビンｍＲＮ Ｐ粒子の沈降
プロフィール［第１Ａ図］。
蛋白をクウマシイ［Ｃｏｏｍａｓｌθ］ブルーで染色し
、Ａに示す勾配の分画の蛋白の一次元ＳＤＳポリアクリ
ルアミド ゲルの写真、この図でＭは分子量マーカーを
示し、ゾーン３−６はダック プロソム蛋白に対応する
。
、Ａに示す勾配の分画の蛋白の一次元ＳＤＳポリアクリ
ルアミド ゲルの写真、この図でＭは分子量マーカーを
示し、ゾーン３−６はダック プロソム蛋白に対応する
。
次の例４と同一の方法によって二１〜ロセルロース紙に
移し蛋白ｐ ２７Ｋ ［第１０＋図］及び蛋白ｐ３１Ｋ
［第１０２図］に対で−るモノクローン抗体で後続反応
［ＥｌｌＳＡ］をしたＢで示したゲルと同種ゲル中の蛋
白の写真。
移し蛋白ｐ ２７Ｋ ［第１０＋図］及び蛋白ｐ３１Ｋ
［第１０２図］に対で−るモノクローン抗体で後続反応
［ＥｌｌＳＡ］をしたＢで示したゲルと同種ゲル中の蛋
白の写真。
例４
例３で得られたモノクローン蛋白を いる蛋白２７Ｋ及
び３１にの全般的性質の説明 この例における蛋白２７Ｋ及び３１にの語はそれぞれ分
子［％ ２７０００及び３１０００を有するプロソマル
蛋白を指すものである。
び３１にの全般的性質の説明 この例における蛋白２７Ｋ及び３１にの語はそれぞれ分
子［％ ２７０００及び３１０００を有するプロソマル
蛋白を指すものである。
プロソマル蛋白に対するモノクローン抗体の特異性及び
全般性を示すため、 ０．５ Ｍ塩化カリウム中でショ
糖勾配で解１ｌｌＩｔ後得られたダック、マウス及びヘ
ラ細胞プロソム蛋白を一次元ゲル電気泳動に付しクウマ
シイ ブルーで染色した。同種ゲルの蛋白を、トウビン
の技術によって ［ＴＯＷＢ Ｉ Ｎ ｅｔ ａｌ、 Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
ｌ、Ａｃａｄ。
全般性を示すため、 ０．５ Ｍ塩化カリウム中でショ
糖勾配で解１ｌｌＩｔ後得られたダック、マウス及びヘ
ラ細胞プロソム蛋白を一次元ゲル電気泳動に付しクウマ
シイ ブルーで染色した。同種ゲルの蛋白を、トウビン
の技術によって ［ＴＯＷＢ Ｉ Ｎ ｅｔ ａｌ、 Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ
ｌ、Ａｃａｄ。
Ｓ Ｃｉ、 Ｕ Ｓ Ａ ７Ｇ、 ４３５０−４３５
４ ］ゲルからニトロセルロース紙に移した。移した後
、ニトロセルロース紙を４℃で３％のボビン血清アルブ
ミンを含有するＰＢＳフォスフエイト バッファ中に一
夜浸漬し非−特定反応生成物を除いた０次いで、この紙
を腹水液体に由来する例３で得られたプロソム蛋白に対
する抗体と１８℃で一夜培養しＰＢＳに希釈した［１：
６００］、次いで、この紙を４回ＰＢＳで洗浄した後、
３時間ＰＢＳで希釈し［１：１０００］ １０％０％ボ
ートを含むパーオキシダーゼ標識抗体［マウスＩＯＧに
対するボート抗体］で培養した１反応後、この紙を再び
ＰＢＳで洗浄し５−１０分間４−クロロ−１−ナフトー
ルで酵素反応が可視化した。
４ ］ゲルからニトロセルロース紙に移した。移した後
、ニトロセルロース紙を４℃で３％のボビン血清アルブ
ミンを含有するＰＢＳフォスフエイト バッファ中に一
夜浸漬し非−特定反応生成物を除いた０次いで、この紙
を腹水液体に由来する例３で得られたプロソム蛋白に対
する抗体と１８℃で一夜培養しＰＢＳに希釈した［１：
６００］、次いで、この紙を４回ＰＢＳで洗浄した後、
３時間ＰＢＳで希釈し［１：１０００］ １０％０％ボ
ートを含むパーオキシダーゼ標識抗体［マウスＩＯＧに
対するボート抗体］で培養した１反応後、この紙を再び
ＰＢＳで洗浄し５−１０分間４−クロロ−１−ナフトー
ルで酵素反応が可視化した。
この実験で、ダック プロソム蛋白ｐ２７Ｋ及びｐ３１
Ｋにだいする例３で得た抗体は、ダック、マウス及びヘ
ラ細胞プロソム蛋白にポジチブに反応した。
Ｋにだいする例３で得た抗体は、ダック、マウス及びヘ
ラ細胞プロソム蛋白にポジチブに反応した。
添附の第２図は次のものを示す。
Ａでは、クウマシイ ブルー染色後のダック赤血球（ａ
）、マウス赤血球（ｂ）、及びヘラ細胞（Ｃ）の蛋白の
電気泳動からのゲルの写真で１Ｍは分子量マーカーを示
す。
）、マウス赤血球（ｂ）、及びヘラ細胞（Ｃ）の蛋白の
電気泳動からのゲルの写真で１Ｍは分子量マーカーを示
す。
Ｂでは、ニトロセルロース紙に移し蛋白ｐ３１ Ｋに対
するモノクローン抗体との反応後の同種ゲルにおける蛋
白の写真、 Ｃでは、ニトロセルロース紙に移し蛋白 ｐ２７Ｋに対
するモノクローン抗体との反応後の該蛋白の写真。
するモノクローン抗体との反応後の同種ゲルにおける蛋
白の写真、 Ｃでは、ニトロセルロース紙に移し蛋白 ｐ２７Ｋに対
するモノクローン抗体との反応後の該蛋白の写真。
例５
シト免疫蛍光研究をプロソマル抗原の同定のため各種の
型の細胞で行なった。
型の細胞で行なった。
第１段階では、室温で１５分間ＰＢＳ中３％パラフォル
ムアルデヒドを用いて固定した細胞からスミアをつくっ
た。この固定段階後、細胞を５分間０．１％「トリトン
ｘ １００Ｊで浸透させ１次いでＰＢＳ中１％ラビッ
ト血清及び０．１％ボビン血清アルブミンで予培養して
非特定反応を抑制した。
ムアルデヒドを用いて固定した細胞からスミアをつくっ
た。この固定段階後、細胞を５分間０．１％「トリトン
ｘ １００Ｊで浸透させ１次いでＰＢＳ中１％ラビッ
ト血清及び０．１％ボビン血清アルブミンで予培養して
非特定反応を抑制した。
ＰＢＳで４回連続洗浄後、細胞を１時間湿潤室内で蛋白
ｐ２７ に対するモノクローン抗体又は蛋白１）３１
Ｋに対するモノクローン抗体で培養した。
ｐ２７ に対するモノクローン抗体又は蛋白１）３１
Ｋに対するモノクローン抗体で培養した。
細胞は次いで３回３０分間洗浄し、第２蛍光標識抗体［
マウス［ＪＧ／ＦＩＴＣに対するラビット抗体］で３０
分間暗所で培養した。細胞は次いで光顕微鏡で観察し、
細胞は測定したプロソム蛋白を含有し、これらの細胞は
蛍光細胞であった。
マウス［ＪＧ／ＦＩＴＣに対するラビット抗体］で３０
分間暗所で培養した。細胞は次いで光顕微鏡で観察し、
細胞は測定したプロソム蛋白を含有し、これらの細胞は
蛍光細胞であった。
この実験はダック末梢血液細胞及びヘラ細胞について行
なった。第３図及び第４図は顕微鏡で観察した細胞の写
真である、 これらの図において； 写真３Ａ１は、蛋白ｐ２７Ｋに対する抗体と反応したダ
ック末梢白液細胞のものである。 写真３Ａ２は、蛋白
１）３１Ｋに対する抗体と反応したダック末梢白液、Ｉ
Ｉｌｌのものである。これらの２写真において成体細
胞は実質的に蛍光を欠いているが。
なった。第３図及び第４図は顕微鏡で観察した細胞の写
真である、 これらの図において； 写真３Ａ１は、蛋白ｐ２７Ｋに対する抗体と反応したダ
ック末梢白液細胞のものである。 写真３Ａ２は、蛋白
１）３１Ｋに対する抗体と反応したダック末梢白液、Ｉ
Ｉｌｌのものである。これらの２写真において成体細
胞は実質的に蛍光を欠いているが。
若い細胞は多いか少ないかはあるが蛍光であり。
分化の程度及び使用したモノクローン抗体の型に応じた
強度及び分布のプロソマル蛋白の存在を示す。
強度及び分布のプロソマル蛋白の存在を示す。
第４Ｂ１図は、蛋白ｐ２７Ｋに対するモノクローン抗体
で培養したヘラ細胞を示す。
で培養したヘラ細胞を示す。
第４Ｂ２図は、蛋白１１３１Ｋに対するモノクローン抗
体で培養したヘラ細胞を示す、この場合、細胞はすべて
蛍光であり、従ってすべてプロソマル蛋白を含む、染色
は使用したプロソマル抗体の型に応じてことなることを
注意すべきである。
体で培養したヘラ細胞を示す、この場合、細胞はすべて
蛍光であり、従ってすべてプロソマル蛋白を含む、染色
は使用したプロソマル抗体の型に応じてことなることを
注意すべきである。
この実験は、この発明によるモノクローン抗体が生存ヒ
ト及び動物細胞の分化 ［ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉＯｎ ］の研究に用いら
れることを示すものである。
ト及び動物細胞の分化 ［ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉＯｎ ］の研究に用いら
れることを示すものである。
【図面の簡単な説明】
第１図は、各種の蛋白の状態を示す写真である。
第２図は、各ゲルにおける蛋白の状態を示す写真である
。第３図は各状態の細胞の顕微鏡写真である。第４図は
各状態のヘラ細胞の顕微鏡写真である。 出願人代理人 弁理士 鈴江武彦 図面の浄書（内容に変更なし）
。第３図は各状態の細胞の顕微鏡写真である。第４図は
各状態のヘラ細胞の顕微鏡写真である。 出願人代理人 弁理士 鈴江武彦 図面の浄書（内容に変更なし）
Claims (13)
- （１）少なくとも１種のプロソマル蛋白に対して特に指
向したモノクローン抗体。 - （２）ｐ２７Ｋ及びｐ３１Ｋとして指示されたプロソマ
ル蛋白の一に対して特に指向した特許請求の範囲第１項
記載のモノクローン抗体。 - （３）細胞系ＩＢ５及びＡＡ４の一によって生産された
特許請求の範囲第１項記載のモノクローン抗体。 - （４）特許請求の範囲第１項記載のモノクローン抗体を
生産する不滅化した細胞系。 - （５）特許請求の範囲第２項記載のモノクローン抗体を
生産する不滅化した細胞系。 - （６）特許請求の範囲第３項記載のモノクローン抗体を
生産する不滅化した細胞系。 - （７）試料中のプロソム関連現象を検出する方法であっ
て、該試料を少なくとも１種のプロソマル蛋白に対して
特に指向したモノクローン抗体と共に培養することを包
含し、モノクローン抗体が直接的又は間接的に標識を付
与され、次いで該標識とプロソマル蛋白及び／又は該モ
ノクローン抗体との結合が測定される方法。 - （８）試料中のプロソム関連障害を診断する方法であっ
て、該試料を少なくとも１種のプロソマル蛋白に対して
特に指向したモノクローン抗体と共に培養することを包
含し、モノクローン抗体が直接的又は間接的に標識を付
与され、次いで該標識とプロソマル蛋白及び／又は該モ
ノクローン抗体との結合が測定される方法。 - （９）モノクローン抗体がｐ２７Ｋ及びｐ３１Ｋとして
指示されたプロソマル蛋白の一に対して特に指向したも
のである特許請求の範囲第７項又は第８項記載の方法。 - （１０）試料がパリのパスツール研究所微生物寄託機関
に寄託番号 I −５８８及び I −５８９として寄託した
細胞系によって生産されたモノクローン抗体の少なくと
も一で培養される特許請求の範囲第７項又は第８項記載
の方法。 - （１１）特にプロソマル蛋白に対して指向され、標識に
カップルされたモノクローン抗体を含む診断剤。 - （１２）モノクローン抗体がｐ２７Ｋ及びｐ３１Ｋとし
て指示されたプロソマル蛋白の一に対して特に指向した
ものである特許請求の範囲第１１項記載の診断剤。 - （１３）モノクローン抗体が特許請求の範囲第３項記載
の細胞系によって生産されたものである特許請求の範囲
第１１項記載のの診断剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8512946 | 1985-08-30 | ||
| FR8512946A FR2586814A1 (fr) | 1985-08-30 | 1985-08-30 | Anticorps monoclonaux anti-proteines p 27 k et p 31 k de prosomes et leur application a titre de reactifs de diagnostic et/ou d'identification de cellules |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6066670A Division JPH0822226B2 (ja) | 1985-08-30 | 1994-03-10 | モノクローン抗体を生産する細胞系 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62130699A true JPS62130699A (ja) | 1987-06-12 |
| JPH0671435B2 JPH0671435B2 (ja) | 1994-09-14 |
Family
ID=9322505
Family Applications (2)
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|---|---|---|---|
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