JPS6188873A - 形質転換菌及びｌ−トリプトフアンの製造法 - Google Patents
形質転換菌及びｌ−トリプトフアンの製造法Info
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- JPS6188873A JPS6188873A JP59207943A JP20794384A JPS6188873A JP S6188873 A JPS6188873 A JP S6188873A JP 59207943 A JP59207943 A JP 59207943A JP 20794384 A JP20794384 A JP 20794384A JP S6188873 A JPS6188873 A JP S6188873A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
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- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［技術分野］
本発明は形質転換によりＬ−トリプトファン生産能が高
められた微生物及びこれを用いたし−トリプトファンの
製造法に関する。
められた微生物及びこれを用いたし−トリプトファンの
製造法に関する。
［従来技術及び発明が解決しようとづ−る問題点］［−
トリプトファンは必須アミノ酸の一種として重要な化合
物であり、特に栄養学的に不足し易い物質であるためそ
の経済的な製造法の開発が強く望まれており、そのため
従来より種々の方法が提案されているが、就中、醗酵法
による方法が注目を集め、その際特にそのｌ礎となるＬ
−トリプトファン生産性微生物の改良は重要な課題とな
っている。
トリプトファンは必須アミノ酸の一種として重要な化合
物であり、特に栄養学的に不足し易い物質であるためそ
の経済的な製造法の開発が強く望まれており、そのため
従来より種々の方法が提案されているが、就中、醗酵法
による方法が注目を集め、その際特にそのｌ礎となるＬ
−トリプトファン生産性微生物の改良は重要な課題とな
っている。
従来、物質生産性微生物の改良には一般に人工的突然変
異法が利用されてきたが１、Ｌ−トリプトファンの生産
性の観点からは必らずしも充分満足し得るものは畳られ
ていない。また、最近開発された遺伝子組換え技術を利
用して微生物の改良褒ぜんとする試みもなされているが
工業的に利用可能なものとしては未だ成功の域には達し
ていない。
異法が利用されてきたが１、Ｌ−トリプトファンの生産
性の観点からは必らずしも充分満足し得るものは畳られ
ていない。また、最近開発された遺伝子組換え技術を利
用して微生物の改良褒ぜんとする試みもなされているが
工業的に利用可能なものとしては未だ成功の域には達し
ていない。
遺伝干犯換え技術による微生物の改良は一般に先ず遺伝
子をその供与細胞から取出し、試験管内でベクターＤＮ
Ａと結合させ、得られた組換え体ＤＮＡを宿主細胞に取
り込ませる。そして、目的とする組換え体ＤＮＡを有す
る宿主細胞を増殖せしめ、次いで導入遺伝子を発現せし
めることによって目的の産物を１ｑる。この際用いられ
るベクターとしては、通常プラスミドまたはバクテリオ
ファージが知られている。しかしながら、プラスミドは
細胞内に複数存在し、遺伝子増幅の効果が大きいが、一
般に宿主菌内で不安定で、短小化や脱落がおこりやすく
、このため宿主菌内での安定化手法が確立されない限り
大規模な発酵生産には適さない。一方バクテリオファー
ジをベクターとして用いる場合には、導入遺伝子は染色
体ＤＮＡに組み込まれるため宿主菌内でかなり安定であ
る、一方、この方法では宿主域が限られる等の制約があ
るため、菌の改良に用いるには問題がある。
子をその供与細胞から取出し、試験管内でベクターＤＮ
Ａと結合させ、得られた組換え体ＤＮＡを宿主細胞に取
り込ませる。そして、目的とする組換え体ＤＮＡを有す
る宿主細胞を増殖せしめ、次いで導入遺伝子を発現せし
めることによって目的の産物を１ｑる。この際用いられ
るベクターとしては、通常プラスミドまたはバクテリオ
ファージが知られている。しかしながら、プラスミドは
細胞内に複数存在し、遺伝子増幅の効果が大きいが、一
般に宿主菌内で不安定で、短小化や脱落がおこりやすく
、このため宿主菌内での安定化手法が確立されない限り
大規模な発酵生産には適さない。一方バクテリオファー
ジをベクターとして用いる場合には、導入遺伝子は染色
体ＤＮＡに組み込まれるため宿主菌内でかなり安定であ
る、一方、この方法では宿主域が限られる等の制約があ
るため、菌の改良に用いるには問題がある。
そこで本発明者らは、広い範囲にわたる宿主菌を用いる
ことができ且宿主菌内で導入遺伝子が安定に存在し得る
よう導入すべき遺伝子をプラスミドやバクテリオファー
ジ等のベクターＤＮＡを用いないで直接宿主菌の染色体
ＤＮＡに挿入（インテグレーション）して形質転換する
手法を確立し、この手法を応用してＬ−トリプトファン
高生産性微生物を得るべく種々研究を重ねた結果本発明
をなりに至った。
ことができ且宿主菌内で導入遺伝子が安定に存在し得る
よう導入すべき遺伝子をプラスミドやバクテリオファー
ジ等のベクターＤＮＡを用いないで直接宿主菌の染色体
ＤＮＡに挿入（インテグレーション）して形質転換する
手法を確立し、この手法を応用してＬ−トリプトファン
高生産性微生物を得るべく種々研究を重ねた結果本発明
をなりに至った。
ｃ問題点を解決するための手段］
本発明によれば、Ｌ−トリプトファン生産能を有する微
生物の染色体ＤＮＡの実質的にＬ−ｔ−リブトファンの
生合成を調整する遺伝情報を有する部分（以下、Ｔ ｒ
ｐｍ伝子と称する。）を、プラスミドやバクテリオファ
ージ等のベクターＤＮＡを用いないでバチルス属に属す
る微生物から選ばれる宿主菌の染色体ＤＮＡに直接挿入
（インテグレーション）することにより、Ｔ ｒｐＪ伝
子が新たに付加された染色体ＤＮＡを有するＬｌ−リフ
トファン高生産性微生物及び該Ｔｒｐ遺伝子に更に選択
可能なマーカー遺伝子を連結させたものを宿主菌の染色
体ＤＮＡに挿入し、目的とするＬ−トリブトフ？ン高生
産性微生物の選別が容易な当該微生物が提供される。
生物の染色体ＤＮＡの実質的にＬ−ｔ−リブトファンの
生合成を調整する遺伝情報を有する部分（以下、Ｔ ｒ
ｐｍ伝子と称する。）を、プラスミドやバクテリオファ
ージ等のベクターＤＮＡを用いないでバチルス属に属す
る微生物から選ばれる宿主菌の染色体ＤＮＡに直接挿入
（インテグレーション）することにより、Ｔ ｒｐＪ伝
子が新たに付加された染色体ＤＮＡを有するＬｌ−リフ
トファン高生産性微生物及び該Ｔｒｐ遺伝子に更に選択
可能なマーカー遺伝子を連結させたものを宿主菌の染色
体ＤＮＡに挿入し、目的とするＬ−トリブトフ？ン高生
産性微生物の選別が容易な当該微生物が提供される。
本発明によれば、更にこれらの形質転換により得られる
Ｌ−ｔ−リブヒフアン生産性微生物をＪ８Ｊａに培養し
て培養物中にＬ−トリプトファンを生成せしめ、これを
採取することを特徴とする高収率のＬ−トリプトファン
が経済的に有利に得られる製造法が提供される。
Ｌ−ｔ−リブヒフアン生産性微生物をＪ８Ｊａに培養し
て培養物中にＬ−トリプトファンを生成せしめ、これを
採取することを特徴とする高収率のＬ−トリプトファン
が経済的に有利に得られる製造法が提供される。
以下に本発明の微生物とその取１４法及びこれを用いた
Ｌ−トリプトファンの製造法について更に詳細に説明す
る。
Ｌ−トリプトファンの製造法について更に詳細に説明す
る。
本発明に於けるＴ ｒｐｉ伝子は、通常Ｌ−トリプトフ
ァン生産能を有する微生物の染色体ＤＮＡより適当な制
限酵素によって切出されたものが用いられるが、宿主菌
の染色体ＤＮＡとの相同性が高いものであれば原則とし
てその由来については特別な制限はなく、例えば、土壌
や他の天然物から分離されるＬ−トリプトファン生産能
を有する野生株は勿論のこと、それらを紫外線照射や化
学１カ質による処理をして得られる人工的突然変異株或
いは遺伝子組換え技術を用いてＩＩ′７られるＬ−トリ
プトファンの生合成を調整する遺伝情報を含む相換えＤ
ＮＡ等いずれでし良い。尚、この場合、Ｔｒｐ遺伝子は
ｌ−トリプトファンの生合成を調整する遺伝情報を有す
る部分のみからなり、他に余分な部分を含まないもので
あることが望ましいが、用いる制限酵素の秤類によって
はＴｒ１１遺伝子の他にその前後に若干他の部分を含む
ことがあり、そのようなものであっても宿主菌との相同
性や目的とするＬ−ｔ−リブトフ７ンの生合成に悪影響
を及ぼさない限り用いることができる。また、Ｔｒｐ遺
伝子はＬ−トリプトファンの生合成を調整する遺伝情報
のずべてを有する必要はなく、その一部分のみを含んで
いるＤＮＡでも用いることができる。
ァン生産能を有する微生物の染色体ＤＮＡより適当な制
限酵素によって切出されたものが用いられるが、宿主菌
の染色体ＤＮＡとの相同性が高いものであれば原則とし
てその由来については特別な制限はなく、例えば、土壌
や他の天然物から分離されるＬ−トリプトファン生産能
を有する野生株は勿論のこと、それらを紫外線照射や化
学１カ質による処理をして得られる人工的突然変異株或
いは遺伝子組換え技術を用いてＩＩ′７られるＬ−トリ
プトファンの生合成を調整する遺伝情報を含む相換えＤ
ＮＡ等いずれでし良い。尚、この場合、Ｔｒｐ遺伝子は
ｌ−トリプトファンの生合成を調整する遺伝情報を有す
る部分のみからなり、他に余分な部分を含まないもので
あることが望ましいが、用いる制限酵素の秤類によって
はＴｒ１１遺伝子の他にその前後に若干他の部分を含む
ことがあり、そのようなものであっても宿主菌との相同
性や目的とするＬ−ｔ−リブトフ７ンの生合成に悪影響
を及ぼさない限り用いることができる。また、Ｔｒｐ遺
伝子はＬ−トリプトファンの生合成を調整する遺伝情報
のずべてを有する必要はなく、その一部分のみを含んで
いるＤＮＡでも用いることができる。
このようなＴｒ１１遺伝子を含む染色体ＤＮＡを有する
微生物としては、例えば、バチルス・アミロリクエファ
シェンス、バチルス・アミロリティカス、バチルス・ア
ルカロフイラス、バチルス・コアギユランス、バチルス
・ライケニホルミス、バチルス・ナラトウ、バチルス・
ズブチルス、バチルス・ステアロサーモフィラス等のバ
チルス属に属する微生物や、それらの変異株、および、
それらを親株として遺伝子組換えによって育種した株が
掲げられる。また、これらの染色体ＤＮＡを他の微生物
の染色体ＤＮＡやプラスミド、バクテリオファージその
他のＤＮＡと遺伝子工学的手法により処理した組換えＤ
ＮＡが掲げられる。また、これらＤＮＡよりＴ ｒｐ遺
伝子を切出すのに用いられる制限酵素としては特に制限
はないが、Ｔｒｐ遺伝子中に切断部位が少ないほうが望
ましく、例えば、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、Ｓａｌ
Ｉ、３ａｃ工、ｐｖｕ［、ＸｈＯ■、Ｘｂａ 工、Ｘｂ
ｏＩ。
微生物としては、例えば、バチルス・アミロリクエファ
シェンス、バチルス・アミロリティカス、バチルス・ア
ルカロフイラス、バチルス・コアギユランス、バチルス
・ライケニホルミス、バチルス・ナラトウ、バチルス・
ズブチルス、バチルス・ステアロサーモフィラス等のバ
チルス属に属する微生物や、それらの変異株、および、
それらを親株として遺伝子組換えによって育種した株が
掲げられる。また、これらの染色体ＤＮＡを他の微生物
の染色体ＤＮＡやプラスミド、バクテリオファージその
他のＤＮＡと遺伝子工学的手法により処理した組換えＤ
ＮＡが掲げられる。また、これらＤＮＡよりＴ ｒｐ遺
伝子を切出すのに用いられる制限酵素としては特に制限
はないが、Ｔｒｐ遺伝子中に切断部位が少ないほうが望
ましく、例えば、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、Ｓａｌ
Ｉ、３ａｃ工、ｐｖｕ［、ＸｈＯ■、Ｘｂａ 工、Ｘｂ
ｏＩ。
ＭＩＩＪ ■等があげられる。
Ｔｒｐ遺伝子を導入すべき宿主菌としては、その染色体
ＤＮＡがＴ ｒｐｍ伝子と相同性を有するものであれば
原則として如何なるものでも良いが、実際上は本発明の
本来の目的である醗酵法によるＬ−トリプトファンの製
造に適した微生物であることが必要であり、かかる観点
から病原菌及び工業的使用の際管理が繁雑なものや使用
不能なものは除外される。実用的には培養が容易で、工
業的に実際に使用の実績もあるバチルス属に属する微生
物が用いられ、その際特に、その染色体ＤＮＡより−ｒ
ｒ１１３ｉｆｆ伝子が取り出された微生物と同種のもの
を宿主菌とした場合には所謂セルフクローニングとなり
遺伝子操作にＪ：る形質転換菌であっても組換えＤＮＡ
実験指針上は何らの制限もなく好都合である。本発明に
用いられる宿主菌としては、好ましくは、トリプトファ
ンの生成蓄積により微生物固有のトリブトファン生合成
のフィードバック抑制機構の解除された菌、例えば、ト
リプトファンアノ−ログ（５−フルオロトリプトファン
、５−メチルトリプトファン等）耐性菌であり、゛代表
的なものを例示すれば、例えば、特開昭４８−１８８２
８、同４９−２０３９１、同４９−８５２８９、同５１
−６４９２１、同５３−１３５８、同５３−３９５１７
、同５６−９２７９６、同５８−９４３９１、同５８−
１０７１９０、同５８−１０７１９３、同５８−１０７
１９４、同５８−１０７１９５、同５８−１３８３８９
、同５８−２２０６９３、同５９−１２００９１、同５
９−１３０１８１等に記載の菌が掲げられる。
ＤＮＡがＴ ｒｐｍ伝子と相同性を有するものであれば
原則として如何なるものでも良いが、実際上は本発明の
本来の目的である醗酵法によるＬ−トリプトファンの製
造に適した微生物であることが必要であり、かかる観点
から病原菌及び工業的使用の際管理が繁雑なものや使用
不能なものは除外される。実用的には培養が容易で、工
業的に実際に使用の実績もあるバチルス属に属する微生
物が用いられ、その際特に、その染色体ＤＮＡより−ｒ
ｒ１１３ｉｆｆ伝子が取り出された微生物と同種のもの
を宿主菌とした場合には所謂セルフクローニングとなり
遺伝子操作にＪ：る形質転換菌であっても組換えＤＮＡ
実験指針上は何らの制限もなく好都合である。本発明に
用いられる宿主菌としては、好ましくは、トリプトファ
ンの生成蓄積により微生物固有のトリブトファン生合成
のフィードバック抑制機構の解除された菌、例えば、ト
リプトファンアノ−ログ（５−フルオロトリプトファン
、５−メチルトリプトファン等）耐性菌であり、゛代表
的なものを例示すれば、例えば、特開昭４８−１８８２
８、同４９−２０３９１、同４９−８５２８９、同５１
−６４９２１、同５３−１３５８、同５３−３９５１７
、同５６−９２７９６、同５８−９４３９１、同５８−
１０７１９０、同５８−１０７１９３、同５８−１０７
１９４、同５８−１０７１９５、同５８−１３８３８９
、同５８−２２０６９３、同５９−１２００９１、同５
９−１３０１８１等に記載の菌が掲げられる。
Ｔ ｒｐ３］］伝子の上記宿主菌の染色体ＤＮＡへの形
質転換は、公知の方法、例えば、コンビ−テントセル法
（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ８１．７４１ （１９
６１）〕或いはプロトプラスト法（Ｍｏｌｅｃ、 ｇｅ
ｎ。
質転換は、公知の方法、例えば、コンビ−テントセル法
（Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ８１．７４１ （１９
６１）〕或いはプロトプラスト法（Ｍｏｌｅｃ、 ｇｅ
ｎ。
Ｑｅｎｅｔ、 １６８．．１１１ （１９７９） ）
等によって行なわれる。尚、形質転換にあたりＴ ｒｐ
ｍ伝子の宿主菌染色体ＤＮＡへの挿入（インテグレーシ
ョン）を行なわせるためＴ ｒｐｍ伝子をＴ４リガーゼ
等の酵素を用いて環状としておく必要があり、更に頻度
を高めるため予めＴｒｐ遺伝子を充分に濃縮しておくこ
とが好ましい。また、形質転換の有無を確認するため宿
主菌（受容菌）として丁ｒｐ遺伝子の一部が変異してト
リプトファン要求性になった株、例えばバチルス５Ｏ−
５３（特開昭５９−１７００４７）、ＡＪ１１７１２
＜特開昭５８−８９１９４）、ＵＯＴ ０５３１（東
京大学応用微生物研究所）等を用いることで、形質転換
株をトリプトファン非要求性株として選択できる。ただ
し、トリプトファンの生合成経路中、律速となる酵素を
コードする遺伝子が変異した株を用いると、形質転換株
のトリプトファン生産性向上の効率が低下するので律速
となる酵素をコードしている遺伝子が変異していないト
リプトファン要求性株を用いることが望ましい。
等によって行なわれる。尚、形質転換にあたりＴ ｒｐ
ｍ伝子の宿主菌染色体ＤＮＡへの挿入（インテグレーシ
ョン）を行なわせるためＴ ｒｐｍ伝子をＴ４リガーゼ
等の酵素を用いて環状としておく必要があり、更に頻度
を高めるため予めＴｒｐ遺伝子を充分に濃縮しておくこ
とが好ましい。また、形質転換の有無を確認するため宿
主菌（受容菌）として丁ｒｐ遺伝子の一部が変異してト
リプトファン要求性になった株、例えばバチルス５Ｏ−
５３（特開昭５９−１７００４７）、ＡＪ１１７１２
＜特開昭５８−８９１９４）、ＵＯＴ ０５３１（東
京大学応用微生物研究所）等を用いることで、形質転換
株をトリプトファン非要求性株として選択できる。ただ
し、トリプトファンの生合成経路中、律速となる酵素を
コードする遺伝子が変異した株を用いると、形質転換株
のトリプトファン生産性向上の効率が低下するので律速
となる酵素をコードしている遺伝子が変異していないト
リプトファン要求性株を用いることが望ましい。
但し、これらの転換は形質転換の有無を確認するための
処理であって確認法としては必ずしもこの方法にのみ限
られるものではない。形質転換により１９られた閑の中
から目的とする菌を選択するには、形質転換菌がＴ ｒ
ｐａ伝子転子入された結果、トリプトファン非要求性（
Ｔｒｐ”、アントラニル酸非要求性でもある。）に変わ
ること及びＴ ｒ９′）Ｍ転子が増幅された結果Ｌ−ト
リプトファンの生産性が高められたことを利用して、ア
ントラニル酸を添加した培地中でのＬ−トリプトファン
の生産性を調べ、Ｌ−トリプトファンの生産性の向上し
た株を得る。
処理であって確認法としては必ずしもこの方法にのみ限
られるものではない。形質転換により１９られた閑の中
から目的とする菌を選択するには、形質転換菌がＴ ｒ
ｐａ伝子転子入された結果、トリプトファン非要求性（
Ｔｒｐ”、アントラニル酸非要求性でもある。）に変わ
ること及びＴ ｒ９′）Ｍ転子が増幅された結果Ｌ−ト
リプトファンの生産性が高められたことを利用して、ア
ントラニル酸を添加した培地中でのＬ−トリプトファン
の生産性を調べ、Ｌ−トリプトファンの生産性の向上し
た株を得る。
尚、形質転換の際に導入したトリプトファン遺伝子と染
色体ＤＮＡの欠損している部分との組換えにより、トリ
プトファン非要求性となった形質転換も生じるが、この
場合にはＴ ｒｐｉｕ伝子の転子は生じない。上記の場
合にはかかる形質転換の頻度が比較的大きく、Ｔ ｒｐ
３１２仏子の増幅された形質転換株の選択に手間がかか
る。
色体ＤＮＡの欠損している部分との組換えにより、トリ
プトファン非要求性となった形質転換も生じるが、この
場合にはＴ ｒｐｉｕ伝子の転子は生じない。上記の場
合にはかかる形質転換の頻度が比較的大きく、Ｔ ｒｐ
３１２仏子の増幅された形質転換株の選択に手間がかか
る。
かかる難点の改善のためにはＴｒｔｌｆｌ仏子に選択可
能なマーカー遺伝子を連結したものを用いることができ
る。
能なマーカー遺伝子を連結したものを用いることができ
る。
本発明の方法において用いる選択可能な遺伝子マーカー
とは、宿主菌内で発現するものであればいずれもよく、
−例をあげると次のようなものがある。薬剤耐性遺伝子
、アミノ酸生合成遺伝子、核酸生合成遺伝子、ビタミン
生合成遺伝子、その他の生体内物質の生合成遺伝子なと
、薬剤耐性遺伝子の例としては、クロラムフェニコール
耐性、テトラサイクリン耐性、エリスロマイシン耐性、
カナマイシン耐性、ネオマイシン耐性、ストレプトマイ
シン耐性、ペニシリン耐性、リン」マイシン耐性などが
ある。
とは、宿主菌内で発現するものであればいずれもよく、
−例をあげると次のようなものがある。薬剤耐性遺伝子
、アミノ酸生合成遺伝子、核酸生合成遺伝子、ビタミン
生合成遺伝子、その他の生体内物質の生合成遺伝子なと
、薬剤耐性遺伝子の例としては、クロラムフェニコール
耐性、テトラサイクリン耐性、エリスロマイシン耐性、
カナマイシン耐性、ネオマイシン耐性、ストレプトマイ
シン耐性、ペニシリン耐性、リン」マイシン耐性などが
ある。
以下に本発明のＬ−トリプトファン高生産性微生物の取
得法について、代表的な例を示し、更に具体的に説明す
る。但しこれらは単なる例示であり本発明はこれらのみ
に限られない。
得法について、代表的な例を示し、更に具体的に説明す
る。但しこれらは単なる例示であり本発明はこれらのみ
に限られない。
プラスミドｐＴ Ｐ ４の有するクロラムフェニコール
耐性遺伝子を常法によりファージρ１１ＤＮＡにクロー
ニングし、次いで該ファージＤＮＡを制限酵素ＥＣ０Ｒ
Ｉで切断して、予めＥＣ０ＲＩで切断しておいたプラス
ミド１）ＢＲ３２２ＤＮＡと、それら生じたＤＮＡ断片
の末端の数が同じになるようなｍ度で混合し、Ｔ４ファ
ージリガーゼを用いて結合反応を起こさせる。このＤＮ
Ａを用い、塩化カルシウム処理した大腸菌Ｃ６００ｔｒ
ｐ。
耐性遺伝子を常法によりファージρ１１ＤＮＡにクロー
ニングし、次いで該ファージＤＮＡを制限酵素ＥＣ０Ｒ
Ｉで切断して、予めＥＣ０ＲＩで切断しておいたプラス
ミド１）ＢＲ３２２ＤＮＡと、それら生じたＤＮＡ断片
の末端の数が同じになるようなｍ度で混合し、Ｔ４ファ
ージリガーゼを用いて結合反応を起こさせる。このＤＮ
Ａを用い、塩化カルシウム処理した大腸菌Ｃ６００ｔｒ
ｐ。
ｌｅｕ 、 ｔｈｒ 、 ｒｌｒ 、 ｍｋ−株を常法
により形質転換し、クロラムフェニコール、アンピシリ
ン、テトラザイクリンのいずれにも耐性を有する株大腸
菌５Ｄ−１００７（微工研受託番号第７８６０号）を取
得した。
により形質転換し、クロラムフェニコール、アンピシリ
ン、テトラザイクリンのいずれにも耐性を有する株大腸
菌５Ｄ−１００７（微工研受託番号第７８６０号）を取
得した。
該形質転換菌のプラスミド（ｐｓＤ３１６５と称する）
にはＤＢＲ３２２のＥｃｏＰＩの切断点に約２．５メガ
ダルトンのクロラムフェニコール耐性遺伝子が挿入され
ていた。
にはＤＢＲ３２２のＥｃｏＰＩの切断点に約２．５メガ
ダルトンのクロラムフェニコール耐性遺伝子が挿入され
ていた。
次に枯草菌プラスミドｐＴＡ１０１５を制限酵素Ｅｃｏ
ＲＩで切断し、同じ＜ＥｃｏＲＩで切断した大腸菌５Ｄ
−１００７のプラスミドＤＳＤ３１６５と、それら生じ
たＤＮＡ断片の末端の数が同じになるような濃度で混合
し、Ｔ４ファージリガーゼを用いて結合反応を起こさせ
る。このＤＮＡを用いバチルス５Ｄ３０ （特開昭５９
−１３０１８１参照）をコンピテントセル法で形質転換
し、クロラムフェニコール耐性を右する株を取得した。
ＲＩで切断し、同じ＜ＥｃｏＲＩで切断した大腸菌５Ｄ
−１００７のプラスミドＤＳＤ３１６５と、それら生じ
たＤＮＡ断片の末端の数が同じになるような濃度で混合
し、Ｔ４ファージリガーゼを用いて結合反応を起こさせ
る。このＤＮＡを用いバチルス５Ｄ３０ （特開昭５９
−１３０１８１参照）をコンピテントセル法で形質転換
し、クロラムフェニコール耐性を右する株を取得した。
これら形質転換株からプラスミドを分［ｆａＪＪし、制
限酵素地図をつくった所第１図のような制限酵素地図を
有するプラスミドが得られた。このプラスミドｐｓＤＹ
３０５１を含む形質転換株バチルス５Ｄ−１００６は微
工研菌奇第７８５９どして寄託されている。該形質転換
菌のプラスミドｐｓＤＹ３０５１にはｐＴ△１０１５の
ＥＣ０ＲＩ切断点に約２．５メガダルトンのクロラムフ
ェニコール耐性遺伝子が挿入されていた。
限酵素地図をつくった所第１図のような制限酵素地図を
有するプラスミドが得られた。このプラスミドｐｓＤＹ
３０５１を含む形質転換株バチルス５Ｄ−１００６は微
工研菌奇第７８５９どして寄託されている。該形質転換
菌のプラスミドｐｓＤＹ３０５１にはｐＴ△１０１５の
ＥＣ０ＲＩ切断点に約２．５メガダルトンのクロラムフ
ェニコール耐性遺伝子が挿入されていた。
次に、ｐｓＤＹ３０５１を制限酵素ＥＣ０ＲＩで部分的
に切断し、またクローンしたｉ−リブトファンアナログ
耐性枯草菌由来のトリプトファンオペロンを含むファー
ジφ１０５ＤＮＡＳＤＰ−１２（特開昭５’ｌｌ ２５
８９２号参照）も制限酵素（ＥｃｏＲＩ）で切断し、両
者ＤＮＡを混合し、Ｔ４ファージリガーゼを用いて結合
させる。このＤＮＡを用いバチルスズブチルスＢＤ２２
４（ｔｒｐＣ２ｔｈｒ −５ｒｅｃ Ｅ４）にコンピテ
ントセル法により形質転換し、クロラムフェニコール耐
性でかつＴｒｐ非要求性を示す形質転換菌を取得づる。
に切断し、またクローンしたｉ−リブトファンアナログ
耐性枯草菌由来のトリプトファンオペロンを含むファー
ジφ１０５ＤＮＡＳＤＰ−１２（特開昭５’ｌｌ ２５
８９２号参照）も制限酵素（ＥｃｏＲＩ）で切断し、両
者ＤＮＡを混合し、Ｔ４ファージリガーゼを用いて結合
させる。このＤＮＡを用いバチルスズブチルスＢＤ２２
４（ｔｒｐＣ２ｔｈｒ −５ｒｅｃ Ｅ４）にコンピテ
ントセル法により形質転換し、クロラムフェニコール耐
性でかつＴｒｐ非要求性を示す形質転換菌を取得づる。
該形質転換菌から組換えプラスミドを常法により分離精
製し、制限酵素地図を作成しｌご所、第２図のように制
限酵素地図を持つプラスミドが得られた。このプラスミ
ド（ｐＳＤＹ３２６１と称する）にはｐｓＤＹ３０５１
のＥＣ０ＲＩ切断点の１つに約５メガダルトンのＤＮＡ
が挿入されていた。この挿入ＤＮＡは、各秤トリプトフ
ァン要求株（ｔｒＤ Ａ、 ｔｒｉ） Ｂ、 ｔｒｌ）
Ｃ，ｔｒＩＩ Ｄまたはｔｒｐ Ｅ等の突然変異株）
を受容菌としてｐｓＤＹ３２６１を供与体ＤＮＡとした
時、全てにＴｒｐ非要求性の形質転換菌が高頻度に出現
せしめることから、トリプトファンの生合成を調整する
遺伝情報を右づると考えられる。
製し、制限酵素地図を作成しｌご所、第２図のように制
限酵素地図を持つプラスミドが得られた。このプラスミ
ド（ｐＳＤＹ３２６１と称する）にはｐｓＤＹ３０５１
のＥＣ０ＲＩ切断点の１つに約５メガダルトンのＤＮＡ
が挿入されていた。この挿入ＤＮＡは、各秤トリプトフ
ァン要求株（ｔｒＤ Ａ、 ｔｒｉ） Ｂ、 ｔｒｌ）
Ｃ，ｔｒＩＩ Ｄまたはｔｒｐ Ｅ等の突然変異株）
を受容菌としてｐｓＤＹ３２６１を供与体ＤＮＡとした
時、全てにＴｒｐ非要求性の形質転換菌が高頻度に出現
せしめることから、トリプトファンの生合成を調整する
遺伝情報を右づると考えられる。
プラスミドＤＮΔｐｓＤＹ３２６１を制限酵素ＥＣ０Ｒ
Ｉで切断し、アガロースゲル電気泳動法により各断片を
分離する。トリプトファンの生合成を調整する遺伝情報
を有するＤＮＡ断片を含むアガロースゲル部分を切り取
り、常法により［）ＮＡを分離・Ｒ製ｔ ル。こ（７）
ＤＮＡｆｌＪｉ片にＴ４ＤＮＡリガーゼを作用させ再結
合し、環状のＤＮＡと１′る。このＤＮＡを用いてバチ
ルスアミロリクイファシェンスＩＡＭ１５２１株山来の
アントラニル酸シンセターゼ欠損株バチルス５Ｄ−５３
（特願昭５９−１７００４７）を形質転換し、アントラ
ニル酸非要求株を選択する。これらのアントラニル酸非
要求性の形質転換株をアントラニル酸を含む液体１ａ地
中で培養し、Ｌ−１−リブトファン生産性の向上した菌
株を選択してバチルス５Ｄ−１００４（微工研受託番号
第７８５７号）を得た。
Ｉで切断し、アガロースゲル電気泳動法により各断片を
分離する。トリプトファンの生合成を調整する遺伝情報
を有するＤＮＡ断片を含むアガロースゲル部分を切り取
り、常法により［）ＮＡを分離・Ｒ製ｔ ル。こ（７）
ＤＮＡｆｌＪｉ片にＴ４ＤＮＡリガーゼを作用させ再結
合し、環状のＤＮＡと１′る。このＤＮＡを用いてバチ
ルスアミロリクイファシェンスＩＡＭ１５２１株山来の
アントラニル酸シンセターゼ欠損株バチルス５Ｄ−５３
（特願昭５９−１７００４７）を形質転換し、アントラ
ニル酸非要求株を選択する。これらのアントラニル酸非
要求性の形質転換株をアントラニル酸を含む液体１ａ地
中で培養し、Ｌ−１−リブトファン生産性の向上した菌
株を選択してバチルス５Ｄ−１００４（微工研受託番号
第７８５７号）を得た。
この菌の菌学的性質は、原株にバチスル５Ｄ−５３とア
ントラニル酸要求性を有し、Ｔ ｒｐａ仏子が増幅され
てＬ−ｔ−リブトファン生産能が高いことを除けば実質
的に同じである。
ントラニル酸要求性を有し、Ｔ ｒｐａ仏子が増幅され
てＬ−ｔ−リブトファン生産能が高いことを除けば実質
的に同じである。
得られた形質転換菌のバチルス５Ｄ−１００４のＬ−ｔ
−リブトフ７ンシンクターゼ活性の測定結果を承りと次
のとおりである。
−リブトフ７ンシンクターゼ活性の測定結果を承りと次
のとおりである。
菌 Ｌ−トリプトファン
シンセターゼ比活性
バチルス
５Ｄ−５３１００
バチルス
５Ｄ−１００４１３０
これらの菌に関して、アントラニル酸く８０ｐｐｍ）存
在下におけるスビザイゼン最小倍地（（Ｎｌ−１４）
２ ３０４ ０．２ ％ Ｋ ２ ｔｌＰＯ４１
４％ ＫＨ２ＰＯ４０，６％ クエン酸ナトリウム ・
２１１２ ０ ０．１ ％ Ｍ（ｌ
ＳＯ４７１−１２００，０２％ グルコース０，５％
〕で培養く３７℃、１．５時間）した時の１−）−リブ
トフ７ン蓄積結果を示す。
在下におけるスビザイゼン最小倍地（（Ｎｌ−１４）
２ ３０４ ０．２ ％ Ｋ ２ ｔｌＰＯ４１
４％ ＫＨ２ＰＯ４０，６％ クエン酸ナトリウム ・
２１１２ ０ ０．１ ％ Ｍ（ｌ
ＳＯ４７１−１２００，０２％ グルコース０，５％
〕で培養く３７℃、１．５時間）した時の１−）−リブ
トフ７ン蓄積結果を示す。
菌 株 Ｌ−トリプトファン
蓄Ｗ４（μび／４）
バチルス
５Ｄ−５３３２
バチルス
５Ｄ−１００４４３
また、上記の方法により、Ｌ−トリプトファンの生産性
の向上した菌株の選択を容易にするため、次の様な改良
法がある。
の向上した菌株の選択を容易にするため、次の様な改良
法がある。
上記と同様にして、トリプトファンの生合成を調整する
遺伝情報を有するＤＮＡ断片、及び、クロラムフェニコ
ール耐性の遺伝情報を有するＤＮＡ断片を分離精製し、
両者を混合して、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを作用させ、トリ
プトファンの生合成を調整する遺伝情報及びクロラムフ
ェニコール耐性の遺伝情報を有する環状のＤＮＡを作成
する。このＤＮＡを作成する。このＤＮＡを用いて、Ｉ
ＡＭ１５２１株由来の５−フルオロトリプトファン耐性
株バチルス・アミロリクイファシェンス５Ｄ−３０（特
開昭５９−１３０１８１号参照）を形質転換し、クロラ
ムフェニコール耐性の形質転換株を選択する。これらの
クロラムフェニコール耐性の形質転換株をアントラニル
酸を含む液体倍地中で培差し、Ｌ−ｔ−リブトファン生
産性の向上した菌株を選択し、バチルス５Ｄ−１００３
（微工研受託番号第７８５６号）を得た。
遺伝情報を有するＤＮＡ断片、及び、クロラムフェニコ
ール耐性の遺伝情報を有するＤＮＡ断片を分離精製し、
両者を混合して、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを作用させ、トリ
プトファンの生合成を調整する遺伝情報及びクロラムフ
ェニコール耐性の遺伝情報を有する環状のＤＮＡを作成
する。このＤＮＡを作成する。このＤＮＡを用いて、Ｉ
ＡＭ１５２１株由来の５−フルオロトリプトファン耐性
株バチルス・アミロリクイファシェンス５Ｄ−３０（特
開昭５９−１３０１８１号参照）を形質転換し、クロラ
ムフェニコール耐性の形質転換株を選択する。これらの
クロラムフェニコール耐性の形質転換株をアントラニル
酸を含む液体倍地中で培差し、Ｌ−ｔ−リブトファン生
産性の向上した菌株を選択し、バチルス５Ｄ−１００３
（微工研受託番号第７８５６号）を得た。
このｒＡａの菌学的性質は原株バチルス・アミロリクイ
ファシェンス５Ｄ−３０とクロラムフェニコール耐性で
あること及びＬ−トリプトファンの生産能が高いことを
除いて実質的には同じである。
ファシェンス５Ｄ−３０とクロラムフェニコール耐性で
あること及びＬ−トリプトファンの生産能が高いことを
除いて実質的には同じである。
得られた形質転換菌バチルス５Ｏ−１００３のＬ−トリ
プトファンシンセターゼ活性の測定結果を示すと次のと
おりである。
プトファンシンセターゼ活性の測定結果を示すと次のと
おりである。
菌 Ｌ−トリプトファン
シンセターゼ活性
バチルス
５Ｄ−３０１００
バチルス
５Ｄ−１００３１７５
これらの菌に関してアントラニルｌ（８０ｐｐｍ）存在
下におけるスピザイゼン最小借地で培養〈３７℃、１．
５時間）した時のＬ−トリプトファン蓄積結果を示す。
下におけるスピザイゼン最小借地で培養〈３７℃、１．
５時間）した時のＬ−トリプトファン蓄積結果を示す。
菌 株 Ｌ−１−リブトファン蓄積（μ’ｊ
／ ｍＱ ） バチルス・ アミロリクイ ファシェンス ５Ｄ−３０３４ バチルス ５Ｄ−１００３５８ 本発明方法に従えば、バチルス５Ｄ−１００３又はバチ
ルス５Ｄ−１００４アントラニル酸又はその塩を含む借
地で培養することによりＬ−トリプトファンを生成せし
めることができる。栄養倍地中のアントラニル酸又はそ
の塩の濃度には特に限定はないが目的Ｌ−トリプトファ
ンの収量、培養条件及び経済的観点から一般には０．１
〜３０００η／吏、好ましくは１００〜１０００■／愛
の濃度とする。
／ ｍＱ ） バチルス・ アミロリクイ ファシェンス ５Ｄ−３０３４ バチルス ５Ｄ−１００３５８ 本発明方法に従えば、バチルス５Ｄ−１００３又はバチ
ルス５Ｄ−１００４アントラニル酸又はその塩を含む借
地で培養することによりＬ−トリプトファンを生成せし
めることができる。栄養倍地中のアントラニル酸又はそ
の塩の濃度には特に限定はないが目的Ｌ−トリプトファ
ンの収量、培養条件及び経済的観点から一般には０．１
〜３０００η／吏、好ましくは１００〜１０００■／愛
の濃度とする。
本発明方法において使用することのできる借地としては
、前記微生物が培養により増殖し得るものであれば任意
のものでよく、例えば、炭素源としては、ブドウ等、糖
蜜、蔗糖、ｎ粉、澱粉糖化液、セルロース分解物等の糖
類、酢酸、エチルアルコール、グリセリンなど、窒素源
としては、アンモニア、硫安、塩安、硝安、燐安なとの
アンモニウム塩や尿素、硝Ｍ塩等が適宜使用される。無
機塩としては燐酸、カリウム、マグネシウム、マンガン
等の塩類、例えば燐酸アンモニウム、ｒＡ酸カリウム、
ｇＪｌナトリウム、硫酸マグネシウム、Ｔａ酸第−鉄、
硫酸マンガン、苛性カリ等の工業的薬品で良く、他に微
岱元素としてカルシウム、亜鉛、８累、銅、コバルト、
モリブデン等の塩類を添加してもよく、また微通有深栄
養素としてビタミン、アミノ酸、核Ｍ関連物質等は菌の
成育上特に必要ではないが、これらを添加したり、肉エ
キス、酵母エキス、］〜ンスティープリカー、ペプトン
等の有機物を添加してもよい。アントラニル酸はす１〜
リウム１Ｂｓカリウム塩、アンモニウム塩等の水溶液や
遊離酸のエタノール又はメタノール溶液として添加すれ
ば良い。
、前記微生物が培養により増殖し得るものであれば任意
のものでよく、例えば、炭素源としては、ブドウ等、糖
蜜、蔗糖、ｎ粉、澱粉糖化液、セルロース分解物等の糖
類、酢酸、エチルアルコール、グリセリンなど、窒素源
としては、アンモニア、硫安、塩安、硝安、燐安なとの
アンモニウム塩や尿素、硝Ｍ塩等が適宜使用される。無
機塩としては燐酸、カリウム、マグネシウム、マンガン
等の塩類、例えば燐酸アンモニウム、ｒＡ酸カリウム、
ｇＪｌナトリウム、硫酸マグネシウム、Ｔａ酸第−鉄、
硫酸マンガン、苛性カリ等の工業的薬品で良く、他に微
岱元素としてカルシウム、亜鉛、８累、銅、コバルト、
モリブデン等の塩類を添加してもよく、また微通有深栄
養素としてビタミン、アミノ酸、核Ｍ関連物質等は菌の
成育上特に必要ではないが、これらを添加したり、肉エ
キス、酵母エキス、］〜ンスティープリカー、ペプトン
等の有機物を添加してもよい。アントラニル酸はす１〜
リウム１Ｂｓカリウム塩、アンモニウム塩等の水溶液や
遊離酸のエタノール又はメタノール溶液として添加すれ
ば良い。
本発明方法における培養は好気的条イ１下に、例えば通
気撹拌や往復振盪方法によって培養り−ることができる
。培養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温
度３０〜４５℃、ｐＨＧ、Ｏ〜８．０及び１５〜６０Ｒ
間程度の条件で実施する。
気撹拌や往復振盪方法によって培養り−ることができる
。培養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温
度３０〜４５℃、ｐＨＧ、Ｏ〜８．０及び１５〜６０Ｒ
間程度の条件で実施する。
培養液又は培養物からの目的のＬ−ｔ−リブトファンの
採取方法は慣用方法に従って行うことができる。例えば
、培養液を遠心分離し、その上清からイオン交換樹脂処
理法、活性炭処理法などの操作を適宜組み合せて１−ｔ
−リブトファンを単動ツることができる。
採取方法は慣用方法に従って行うことができる。例えば
、培養液を遠心分離し、その上清からイオン交換樹脂処
理法、活性炭処理法などの操作を適宜組み合せて１−ｔ
−リブトファンを単動ツることができる。
実施例
以下に本発明の詳細な説明するが、本発明の範囲をこれ
らの実施例に限定するものでないことはいうまでもない
。
らの実施例に限定するものでないことはいうまでもない
。
例 １
グルコース５％、硫安０．２％、Ｋ２１−１ＰＯ４＋１
．４％、ＫＨ２ＰＯ４０，６％、クエン酸ナトリラム・
２＋−１２０１’ｊ、Ｍ（］ ＳＯ０・７１−１２００
．０２％、ｆ−ｅｓＯ４・７１−１２０ １Ｆ）ｐＨｌ
及びＭｎＳＯ４ｌｐｐｍを含む液体信地（１）ｌ−１７
，０）２ｆＬにアントラニルＨ８００ｐｐｍを添加し、
これに上で得たバチルス５Ｄ１００３を植菌し、３５℃
で５１のジャーファーメンタ−で通気撹拌培養し ｌこ
。
．４％、ＫＨ２ＰＯ４０，６％、クエン酸ナトリラム・
２＋−１２０１’ｊ、Ｍ（］ ＳＯ０・７１−１２００
．０２％、ｆ−ｅｓＯ４・７１−１２０ １Ｆ）ｐＨｌ
及びＭｎＳＯ４ｌｐｐｍを含む液体信地（１）ｌ−１７
，０）２ｆＬにアントラニルＨ８００ｐｐｍを添加し、
これに上で得たバチルス５Ｄ１００３を植菌し、３５℃
で５１のジャーファーメンタ−で通気撹拌培養し ｌこ
。
培養中、アントラニル酸濃度が５０ ｐｐｍまで減少し
た時点でアントラニル酸濃度が約１１０００ｐｐになる
ように適宜追加添加し、また培養途中グルコースを１０
０ｇ追加し、更にアンモニア水の添加により、倍増のｐ
Ｈを７．０±０．４に保ちながら１５時間培ｆ’ｓ シ
た。し−トリプトファンの蓄積は９．２ｇ／ ｌで平行
運転したバヂルスアミＯリクイファシェンス５Ｄ−３０
株の１．９７倍を示した。
た時点でアントラニル酸濃度が約１１０００ｐｐになる
ように適宜追加添加し、また培養途中グルコースを１０
０ｇ追加し、更にアンモニア水の添加により、倍増のｐ
Ｈを７．０±０．４に保ちながら１５時間培ｆ’ｓ シ
た。し−トリプトファンの蓄積は９．２ｇ／ ｌで平行
運転したバヂルスアミＯリクイファシェンス５Ｄ−３０
株の１．９７倍を示した。
実旋例２
グルコース５％、硫安０２％、Ｋ２１−（ＰＯ４１４％
、ＫＨ２ＰＯ４０，６％、クエン酸ナトリウム・２Ｈ２
０１ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０２％、Ｆｅ Ｓ
Ｏ４・ ７Ｈ２０ｌｐｐｍ 、ＭｎＳ ０４ １ ｐ
ｌ）ｍを含む倍増（ｐＨ７，０＞ ２ａニ７ントラニル
Ｗ ８００ ｐｐｍを添加し、これに形質転換菌バチル
ス５Ｄ１００４を植菌し、３５℃で５愛のジャーファメ
ンターで通気撹拌培養した。
、ＫＨ２ＰＯ４０，６％、クエン酸ナトリウム・２Ｈ２
０１ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，０２％、Ｆｅ Ｓ
Ｏ４・ ７Ｈ２０ｌｐｐｍ 、ＭｎＳ ０４ １ ｐ
ｌ）ｍを含む倍増（ｐＨ７，０＞ ２ａニ７ントラニル
Ｗ ８００ ｐｐｍを添加し、これに形質転換菌バチル
ス５Ｄ１００４を植菌し、３５℃で５愛のジャーファメ
ンターで通気撹拌培養した。
培養中、アントラニル！≠
で減少した時点でアントラニル酸濃度が約１００ｏ ｐ
ｐｍになるように適宜追加添加し、また培養途中グルコ
ースを１００９追加し、更にアンモニア水の添加により
倍増のｐＨを７．０±０，４に保ちながら１５時間培養
した。Ｌ−１−リブトファンの蓄積は７．３ｇ／ｌで平
行運転した宿主菌の約１．６６倍の蓄積を与えた。
ｐｍになるように適宜追加添加し、また培養途中グルコ
ースを１００９追加し、更にアンモニア水の添加により
倍増のｐＨを７．０±０，４に保ちながら１５時間培養
した。Ｌ−１−リブトファンの蓄積は７．３ｇ／ｌで平
行運転した宿主菌の約１．６６倍の蓄積を与えた。
第１図はプラスミドｐ’Ｓ Ｄ Ｙ ３０５１の制限酵
素地図、第２図はプラスミドｆ）ＳＤＹ３２６１の制限
酵素地図を示し、記号の意味は遺伝学分野に於ける慣用
の表示法に従った。
素地図、第２図はプラスミドｆ）ＳＤＹ３２６１の制限
酵素地図を示し、記号の意味は遺伝学分野に於ける慣用
の表示法に従った。
Claims (5)
- （１）Ｌ−トリプトファン生産能を有する微生物の染色
体ＤＮＡの実質的にＬ−トリプトファンの生合成を調整
する遺伝情報を有する部分を、バチルス属に属する微生
物から選ばれる宿主菌の染色体ＤＮＡに挿入してなるＬ
−トリプトファン生産性微生物。 - （２）Ｌ−トリプトファン生産能を有する微生物の染色
体ＤＮＡの実質的にＬ−トリプトファンの生合成を調整
する遺伝情報を有する部分に、薬剤耐性遺伝子、Ｌ−ト
リプトファン以外のアミノ酸生合成遺伝子または他の選
択可能なマーカー遺伝子を連結させ、これをバチルス属
に属する微生物から選ばれる宿主菌の染色体ＤＮＡに挿
入してなるＬ−トリプトファン生産性微生物。 - （３）宿主菌がトリプトファンアナログ耐性を有するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項または第２項記載
のＬ−トリプトファン生産性微生物。 - （４）Ｌ−トリプトファン生産能を有する微生物の染色
体ＤＮＡの実質的にＬ−トリプトファンの生合成を調整
する遺伝情報を有する部分、またはこれに薬剤耐性遺伝
子、Ｌ−トリプトファン以外のアミノ酸生合成遺伝子も
しくは他の選択可能なマーカー遺伝子を連結させたもの
を、バチルス属に属する微生物から選ばれる宿主菌の染
色体ＤＮＡに挿入してなるＬ−トリプトファン生産性微
生物を培地に培養して培養物中にＬ−トリプトファンを
生成せしめ、これを採取することを特徴とするＬ−トリ
プトファンの製造法。 - （５）培地がアントラニル酸またはその塩を含む培地で
あることを特徴とする特許請求の範囲第４項記載のＬ−
トリプトファンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59207943A JPS6188873A (ja) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | 形質転換菌及びｌ−トリプトフアンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59207943A JPS6188873A (ja) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | 形質転換菌及びｌ−トリプトフアンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6188873A true JPS6188873A (ja) | 1986-05-07 |
Family
ID=16548102
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59207943A Pending JPS6188873A (ja) | 1984-10-05 | 1984-10-05 | 形質転換菌及びｌ−トリプトフアンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6188873A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10229879A (ja) * | 1997-02-17 | 1998-09-02 | Kao Corp | 相同組換え体による蛋白質生産方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59125892A (ja) * | 1982-12-30 | 1984-07-20 | Showa Denko Kk | トリプトフアンオペロン遺伝子を持つ溶原性フア−ジ、これを溶原化したトリプトフアン生産性枯草菌及びその利用 |
-
1984
- 1984-10-05 JP JP59207943A patent/JPS6188873A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59125892A (ja) * | 1982-12-30 | 1984-07-20 | Showa Denko Kk | トリプトフアンオペロン遺伝子を持つ溶原性フア−ジ、これを溶原化したトリプトフアン生産性枯草菌及びその利用 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10229879A (ja) * | 1997-02-17 | 1998-09-02 | Kao Corp | 相同組換え体による蛋白質生産方法 |
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