JPS6174589A - Ｌ−トリプトフアンの製造方法 - Google Patents
Ｌ−トリプトフアンの製造方法Info
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- JPS6174589A JPS6174589A JP19732684A JP19732684A JPS6174589A JP S6174589 A JPS6174589 A JP S6174589A JP 19732684 A JP19732684 A JP 19732684A JP 19732684 A JP19732684 A JP 19732684A JP S6174589 A JPS6174589 A JP S6174589A
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- tartaric acid
- tryptophan
- indole
- producing
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はＬ −） ＩＪブトファンの製造法に関するも
のである。
のである。
Ｌ −） ＩＪブトファンは家者類、→゛乳動物の必須
アミノ酸の一種であり、医薬、栄養剤および飼料添加物
として利用されているが、従来その一製法として微生物
起源の酵素の作用を利用する方法が知られている。
アミノ酸の一種であり、医薬、栄養剤および飼料添加物
として利用されているが、従来その一製法として微生物
起源の酵素の作用を利用する方法が知られている。
例えばトリプトファナーゼの作用により、インドールと
Ｌ−セリンまたはインドールとピルビン酸とアンモニウ
ムイオンとからＬ−トリプトファンを製造する方法が知
られている（特公昭４７−４６３４８号公報および特公
昭４９−４６９１７号公報）。
Ｌ−セリンまたはインドールとピルビン酸とアンモニウ
ムイオンとからＬ−トリプトファンを製造する方法が知
られている（特公昭４７−４６３４８号公報および特公
昭４９−４６９１７号公報）。
これらの方法はＬ −トＩＪブトファンの他の製造法の
一極である合成法に比較して光学的（こ活性なし一体の
みを直接生産できるという利点があるがＬ−セリン、ピ
ルビン酸、オギザロ酢９、Ｌ−７ステインはいずれも工
業的に安価な製造法がなくしたがってＬ−トリプトファ
ンの製法そのものに高い原料コストがかかるという問題
がある。
一極である合成法に比較して光学的（こ活性なし一体の
みを直接生産できるという利点があるがＬ−セリン、ピ
ルビン酸、オギザロ酢９、Ｌ−７ステインはいずれも工
業的に安価な製造法がなくしたがってＬ−トリプトファ
ンの製法そのものに高い原料コストがかかるという問題
がある。
そこで本発明者らは、前記の問題の解消されたＬ−トリ
プトファンの製法を確立する目的で研究を行ったところ
、特定の出発原料を使用するとともに特定の酵素の作用
を組合せて使用すればかかる問題が回避できるという事
実を見出した。
プトファンの製法を確立する目的で研究を行ったところ
、特定の出発原料を使用するとともに特定の酵素の作用
を組合せて使用すればかかる問題が回避できるという事
実を見出した。
すなわち本発明の上記目的は、
（イ） Ｌ−酒石酸および／またはその塩、（ロ） ア
ンモニウムイオン、 および ｒ−ｔ インドールを界面活性剤を存在させまたは存
在させることなく、 に） Ｌ−Ｍ５酸を脱水する能力を有する微生物及びそ
の処理物から選ばれる少なくともｌ＝１ 並びに （ホ） Ｌ−酒石酸、アンモニウム及びインドールとか
らし一トリプトファンを生成する能力を有する微生物、
特にトリプトファナーゼ及びトリプトファナーゼを含む
微生物の処理物の少なくとも１種 の共存下で反応させるという手段によって達成可能なの
である（発明の構成）。
ンモニウムイオン、 および ｒ−ｔ インドールを界面活性剤を存在させまたは存
在させることなく、 に） Ｌ−Ｍ５酸を脱水する能力を有する微生物及びそ
の処理物から選ばれる少なくともｌ＝１ 並びに （ホ） Ｌ−酒石酸、アンモニウム及びインドールとか
らし一トリプトファンを生成する能力を有する微生物、
特にトリプトファナーゼ及びトリプトファナーゼを含む
微生物の処理物の少なくとも１種 の共存下で反応させるという手段によって達成可能なの
である（発明の構成）。
そして、より本発明の目的を効果的に達成するためには
反応系に界面活性剤を存在させまたはＬ−酒石酸ないし
はその塩、およびインドールの少なくとも一種を逐次的
に反応系に添加し、そして前記酒石酸を脱水する能力を
有する微生物として／ニードモナス（Ｐｓｅ−ｕｄｏｍ
ｏｎａｓ）属に属する微生物を採用すればよいことも見
出した。
反応系に界面活性剤を存在させまたはＬ−酒石酸ないし
はその塩、およびインドールの少なくとも一種を逐次的
に反応系に添加し、そして前記酒石酸を脱水する能力を
有する微生物として／ニードモナス（Ｐｓｅ−ｕｄｏｍ
ｏｎａｓ）属に属する微生物を採用すればよいことも見
出した。
以下、本発明の構成を詳しく説明するとともに本発明の
効果を実施例とともに述べる。
効果を実施例とともに述べる。
本発明に使用されるし一酒石酸はブドウ酒を製造する際
に副生する生酒石を原料とする抽出法や安価なマレイン
酸をエポキシ化して得うレる／スーエボキ／コ・・り酸
を生七学的に変換する方法によって得られる。
に副生する生酒石を原料とする抽出法や安価なマレイン
酸をエポキシ化して得うレる／スーエボキ／コ・・り酸
を生七学的に変換する方法によって得られる。
またその塩としてはナトリウム塩、カリウム塩、カルシ
ウム塩およびアンモニウム塩などの一般的な塩である。
ウム塩およびアンモニウム塩などの一般的な塩である。
好ましい塩はアンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウム
塩である。
塩である。
本発明においてはＬ−酒石酸とその塩を併用することも
可能である。
可能である。
アンモニウムイオンは、アンモニアまたはアンモニウム
塩を用いることによって系中に生じさせたものである。
塩を用いることによって系中に生じさせたものである。
アンモニウム塩としては酒石酸アンモニウム、酢酸アン
モニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸
アンモニウム等がある。
モニウム、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸
アンモニウム等がある。
本発明に使用されるし一酒石酸脱水する酵素としては酒
石酸デヒドラターゼ（ｄｅｈｙｄｒａ−ｔａｓｅ） （
Ｅ、 Ｃ，４，２，ｌ、 ３２ ）があり、または前記
酵素を有する微生物としてはシュードモナス・プチダ（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣ１
７６４２、シュードモナス・フルオレスセンス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＡＴＣ
Ｃ１７６３４、シュードモナス・エスピー（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｓｐ、）ＡＴＣＣ１５９２５等がある。
石酸デヒドラターゼ（ｄｅｈｙｄｒａ−ｔａｓｅ） （
Ｅ、 Ｃ，４，２，ｌ、 ３２ ）があり、または前記
酵素を有する微生物としてはシュードモナス・プチダ（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣ１
７６４２、シュードモナス・フルオレスセンス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＡＴＣ
Ｃ１７６３４、シュードモナス・エスピー（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｓｐ、）ＡＴＣＣ１５９２５等がある。
好ましい微生物はシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣｌ ７６４２
である。
ｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣｌ ７６４２
である。
／ニードモナス属に属する微生物には低基Ａ持異性アミ
ノ酸ラセマーゼを有するものが存在することが知られて
いるが、本発明の反応条件系で得られたトリプトファン
はその旋光度がＬ−型であることからラセマーゼの活性
発現はほぼ完全に抑止される。
ノ酸ラセマーゼを有するものが存在することが知られて
いるが、本発明の反応条件系で得られたトリプトファン
はその旋光度がＬ−型であることからラセマーゼの活性
発現はほぼ完全に抑止される。
さらに／ニードモナス属のし一酒石酸脱水酵素がインド
ールやトリプトファンによって著しい不可逆的な阻薔を
受けないこと？見出したこと、および高濃度インドール
やトリブトファ／Ｖこよるし一酒石酸脱水酵素阻害が問
題になる場せには存置活性剤の添加および／または反応
基質の逐次添、ＤＯ法を採用することｅこよってその阻
害は回避できる。
ールやトリプトファンによって著しい不可逆的な阻薔を
受けないこと？見出したこと、および高濃度インドール
やトリブトファ／Ｖこよるし一酒石酸脱水酵素阻害が問
題になる場せには存置活性剤の添加および／または反応
基質の逐次添、ＤＯ法を採用することｅこよってその阻
害は回避できる。
これらの要件を満たすし一酒石酸脱水酵素およびその生
産菌として柵々検討した結果目」記シーートモナス属微
生物が見出された。
産菌として柵々検討した結果目」記シーートモナス属微
生物が見出された。
本発明者らはトリプトファナーゼおよびその生産菌には
ピルビン酸およびＬ−セリンを共に基質としてＬ−１リ
プトフアンを生成し得るもの（タイプＩ）とＬ−セリン
は良好す基質になるがピルビン酸はほとんどないし全く
基質にならないもの（タイプ■）とがある。
ピルビン酸およびＬ−セリンを共に基質としてＬ−１リ
プトフアンを生成し得るもの（タイプＩ）とＬ−セリン
は良好す基質になるがピルビン酸はほとんどないし全く
基質にならないもの（タイプ■）とがある。
さらにＬ−ｆｉ石酸および該り一酒石酸を脱水する能力
を有する微生物またはその処理物の共存下でＬ−酒石酸
とインドールとアンモニウムイオンとからＬ−）リグト
ファ／を生成する能力を有するトリプトファナーゼまた
はトリプトファナーゼ生産菌はタイプＩに属するものの
中に含まれる。
を有する微生物またはその処理物の共存下でＬ−酒石酸
とインドールとアンモニウムイオンとからＬ−）リグト
ファ／を生成する能力を有するトリプトファナーゼまた
はトリプトファナーゼ生産菌はタイプＩに属するものの
中に含まれる。
何故タイプｌとタイプ■に分類さｎるかは不明であるが
、要するに本発明に利用できるトリプトファナーゼまた
はトリプトファナーゼ生産菌は何でも良いという訳では
なく必要条件としてタイプＩに属し、かつＬ−酒石酸お
よび該Ｌ−酒石酸脱水酵素生産菌またはその処理物の共
存する系においてインドールとアンモニウムイオンとか
らＬ−トリプトファンを生成する活性を有するものに限
定される。
、要するに本発明に利用できるトリプトファナーゼまた
はトリプトファナーゼ生産菌は何でも良いという訳では
なく必要条件としてタイプＩに属し、かつＬ−酒石酸お
よび該Ｌ−酒石酸脱水酵素生産菌またはその処理物の共
存する系においてインドールとアンモニウムイオンとか
らＬ−トリプトファンを生成する活性を有するものに限
定される。
上記条件を満足するトリプトファナーゼを有する微生物
としては好ましくはプロテウス・レットゲリ（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ）ＡＴＣＣ２１１１８，２９
９４４、工／エリシアーｊす（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ） ７７Ｂ−１（微工研菌第７８１４号）であ
る。
としては好ましくはプロテウス・レットゲリ（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ）ＡＴＣＣ２１１１８，２９
９４４、工／エリシアーｊす（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ） ７７Ｂ−１（微工研菌第７８１４号）であ
る。
この限定条件下においてすぐれたトリプトファナーゼな
いしその生産菌で、Ｌ−酒石酸脱水酵素またはその生産
菌ないし菌体処理物とをＭｉ台せて利用することが可能
である。
いしその生産菌で、Ｌ−酒石酸脱水酵素またはその生産
菌ないし菌体処理物とをＭｉ台せて利用することが可能
である。
培養菌体からトリプトファナーゼ？抽出して用いる場合
には抽出法としては公知の方法が十分適用できる（「発
酵と代謝」第３１号第１０２〜１１２頁（１９７５年）
）。
には抽出法としては公知の方法が十分適用できる（「発
酵と代謝」第３１号第１０２〜１１２頁（１９７５年）
）。
前記のＬ−酒石酸脱水酵素や後記のトリプトファナーゼ
はそれらを有する微生物の培養液から遠心分離法等ｔこ
より集菌した生菌体、その乾燥菌体あるいは菌体を磨砕
、自己消化、音波処理等の処理により得られたいわゆる
菌体処理物、前記の抽出物ならびに該抽出物より得られ
る酵素の粗製物であってもよい。
はそれらを有する微生物の培養液から遠心分離法等ｔこ
より集菌した生菌体、その乾燥菌体あるいは菌体を磨砕
、自己消化、音波処理等の処理により得られたいわゆる
菌体処理物、前記の抽出物ならびに該抽出物より得られ
る酵素の粗製物であってもよい。
なおいずれの酵素生産菌も、その培地としては炭素源、
窒素源、無機塩および必要に応じて加えられる微量の栄
養素とからなるものであれば天然培地であっても合成培
地であっても使用できる。ただし本発明に用いられるし
一酒石酸脱水酵素およびトリプトファナーゼは誘導酵素
であるために培地中に前者の場合には０．１−１５重１
％のＬ−酒石酸を、また後者の場合には０６１〜０．５
重量％の１１．−トリプトファンを添加するなどの方法
により酵素を誘導生産する必要がある。
窒素源、無機塩および必要に応じて加えられる微量の栄
養素とからなるものであれば天然培地であっても合成培
地であっても使用できる。ただし本発明に用いられるし
一酒石酸脱水酵素およびトリプトファナーゼは誘導酵素
であるために培地中に前者の場合には０．１−１５重１
％のＬ−酒石酸を、また後者の場合には０６１〜０．５
重量％の１１．−トリプトファンを添加するなどの方法
により酵素を誘導生産する必要がある。
培地の炭素源としてはグルコース、フラクトース、糖蜜
等の糖類やグリセロールのほかクエン酸、酢酸、酒石酸
、フマル酸、リンゴ酸などの有礪酸が使用できる。
等の糖類やグリセロールのほかクエン酸、酢酸、酒石酸
、フマル酸、リンゴ酸などの有礪酸が使用できる。
窒素源としてはアンモニア、塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、＃酸アンモニウム等の無機および有機アン
モニウム、肉エキス、酵母エキス、コーン・ステイープ
・リカー、カゼイン加水分解物、大豆なん白加水分解物
、フイノシエ・ミールあるいはその消化物、脱脂大豆粕
等の天然有機窒素源が使用可能である。
ンモニウム、＃酸アンモニウム等の無機および有機アン
モニウム、肉エキス、酵母エキス、コーン・ステイープ
・リカー、カゼイン加水分解物、大豆なん白加水分解物
、フイノシエ・ミールあるいはその消化物、脱脂大豆粕
等の天然有機窒素源が使用可能である。
無機物としては９ノ酸第１カリウム、す／酸第２カリウ
ム、硫酸マグネ７ウム１．塩化第２鉄がある。
ム、硫酸マグネ７ウム１．塩化第２鉄がある。
培養は振とうあるいは通気下ンこおける眞拌等の好気的
条件下で行われる。
条件下で行われる。
培養温度は２０〜５０℃でｐｆ（は中性ないしは微アル
カリ性付近である。
カリ性付近である。
培養期間は通常０．３〜３日間である。
界面活性剤を使用する場合にはアニオン系、カチオン系
またはノニオン基の各界面活性剤が使用できるが好まし
くはノニオン系界性剤ｐ−ｔ−オクチルフェニルエーテ
ル（’Ｔｒ ｉ ｔｏｎＸ−１００’（和光補薬製の商
品名）〕などである。
またはノニオン基の各界面活性剤が使用できるが好まし
くはノニオン系界性剤ｐ−ｔ−オクチルフェニルエーテ
ル（’Ｔｒ ｉ ｔｏｎＸ−１００’（和光補薬製の商
品名）〕などである。
本発明の通常の手順は、次の具体例および実施例で述べ
るがこれは手順を具体的に説明するためのものであって
、本発明がこれらの具体例に限定されるべきではない。
るがこれは手順を具体的に説明するためのものであって
、本発明がこれらの具体例に限定されるべきではない。
通常両辞素ないし両酵素生産誼を同一反応系に共存させ
Ｌ−白石酸とインドールとアンモニウムイオンとを基質
にいつぎにＬ −トＩＪプトファノを生成せしめるいわ
ゆる一段法を採用する。
Ｌ−白石酸とインドールとアンモニウムイオンとを基質
にいつぎにＬ −トＩＪプトファノを生成せしめるいわ
ゆる一段法を採用する。
一段法では化学的にも生化学的ンこも不安定なオギザロ
酢酸、ビルと／酸を単離する必要がないことのほか本酵
累反応系ではＬ−ｆｉ石騒とアンモニアとから両ｉＡと
の共同作用で生成する。舌性中間体が直ちにインドール
：・こけ那して効率的にＬ −トＩＪブトファンに転化
すせることが十分期待される。
酢酸、ビルと／酸を単離する必要がないことのほか本酵
累反応系ではＬ−ｆｉ石騒とアンモニアとから両ｉＡと
の共同作用で生成する。舌性中間体が直ちにインドール
：・こけ那して効率的にＬ −トＩＪブトファンに転化
すせることが十分期待される。
反応系におけるし一酒石酸、インドール、アンモニウム
イオンの量は特に制御ａシないが通常それぞれ反応系の
全重量を基準に０．１〜２０重量％である。
イオンの量は特に制御ａシないが通常それぞれ反応系の
全重量を基準に０．１〜２０重量％である。
しかし好ましくはＬ−酒石酸はＩ重量％以下、インドー
ルはＯ６１重遣％以下となるように連続的または間欠的
に逐次添加する。
ルはＯ６１重遣％以下となるように連続的または間欠的
に逐次添加する。
一方、Ｌ−酒石酸脱水酵素およびトリプトファナーゼの
量は酵素の処理方法、基質の濃度、酵素の活性の程度、
その池の反応条件に合わせて決定される。
量は酵素の処理方法、基質の濃度、酵素の活性の程度、
その池の反応条件に合わせて決定される。
なお必要に応じて添加される補酵素（ビリドキサールリ
／駿）および界面活性剤の量はそれぞれ２００Ｐ以下、
５重量％以下である。
／駿）および界面活性剤の量はそれぞれ２００Ｐ以下、
５重量％以下である。
反応は温度２０〜５０℃、ｐｉ（５〜１１の各範囲で行
われる。
われる。
かくして反応が終了したら目的物であるし一トリプトフ
ァンを単離する。
ァンを単離する。
単離はイオン交換法、活性炭吸着法等周知の方法により
行う。
行う。
以下実施例をもって本発明の効果を具体的に示す。
なお以下の実施例におけるＬ −トＩＪブトファンの確
認と定量は薄層シリカゲルクロマトグラフィー、高速ア
ミノ酸分析計、高速液体クロマトグラフィー、および旋
光計により行った。
認と定量は薄層シリカゲルクロマトグラフィー、高速ア
ミノ酸分析計、高速液体クロマトグラフィー、および旋
光計により行った。
実施例１
ンユードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐ
ｕ−ｔｉｄａ） ＡＴＣＣｌ ７６４２をブイＥ７培地
Ｉ Ｑ ｍｌに一白金耳接礪し、３０℃で２０時間振と
う培養した。この培養液Ｉ Ｑ ｍｌを下記の培地Ｉに
示す培地１００ ｍｌに、接隠し３０”Ｃで１５時間培
養を行った。
ｕ−ｔｉｄａ） ＡＴＣＣｌ ７６４２をブイＥ７培地
Ｉ Ｑ ｍｌに一白金耳接礪し、３０℃で２０時間振と
う培養した。この培養液Ｉ Ｑ ｍｌを下記の培地Ｉに
示す培地１００ ｍｌに、接隠し３０”Ｃで１５時間培
養を行った。
（培地Ｉ）
Ｌ−酒石酸・２カリウム塩 ０．７％
Ｎ）ｆ、ｃｌ Ｏ，２％Ｋｆ（２ＰＯ
，０，１％ ＩＶｌｙＳＯ４・７ｆ（，００，０１％ＣａＣ１ｔ ・
２ＨｚＯＯ，０１％ ｎ母エキス ０．００５％一方、プロテウ
ス・レットゲリ （Ｐｒｏｔｅｕｓｒｅｔｔｇｅｒｉ）
ＡＴＣＣ２９９４４をプイヨ／培地１０ ｍｌに一白
金耳接種し３０℃で１５時間振とう培養した。この培養
液ｌ Ｑ ｍｌを培地■に示す培地１００ ｊｌに接種
し３０℃で２０時間振とり培養した。この培養液Ｉ Ｑ
ｇｌを下記の培地■に示す培地１００ ｍｌに接種し
３０″Ｃで１８時間培養を行った。
，０，１％ ＩＶｌｙＳＯ４・７ｆ（，００，０１％ＣａＣ１ｔ ・
２ＨｚＯＯ，０１％ ｎ母エキス ０．００５％一方、プロテウ
ス・レットゲリ （Ｐｒｏｔｅｕｓｒｅｔｔｇｅｒｉ）
ＡＴＣＣ２９９４４をプイヨ／培地１０ ｍｌに一白
金耳接種し３０℃で１５時間振とう培養した。この培養
液ｌ Ｑ ｍｌを培地■に示す培地１００ ｊｌに接種
し３０℃で２０時間振とり培養した。この培養液Ｉ Ｑ
ｇｌを下記の培地■に示す培地１００ ｍｌに接種し
３０″Ｃで１８時間培養を行った。
（培地■）
Ｌ−Ｔｒｐ Ｏ，６％ポリペプト
ン ＬＯ％ ａ母エキス ０．３％ コーン・スチーブ・リカー ０．２％ Ｍｆ ５０４ ・ ７ Ｈｚ （Ｊ
Ｏ，０１％Ｋｔ（２Ｐａ４０． ｔ％ 実施例２ 〔Ｌ−酒石酸脱水酵素を有する微生物を変えた実施例〕 実施例１のＬ−酒石酸脱水酵素を有する微生物をシュー
ドモナス・プチダＡＴＣＣ１７６４２と、ンユードモナ
ス・エスピーＡＴＣＣ１５９２５とシュードモナス・フ
ルオレッセンス ＡＴＣＣ１７６３４にかえて実施例１
に準じて実験した。
ン ＬＯ％ ａ母エキス ０．３％ コーン・スチーブ・リカー ０．２％ Ｍｆ ５０４ ・ ７ Ｈｚ （Ｊ
Ｏ，０１％Ｋｔ（２Ｐａ４０． ｔ％ 実施例２ 〔Ｌ−酒石酸脱水酵素を有する微生物を変えた実施例〕 実施例１のＬ−酒石酸脱水酵素を有する微生物をシュー
ドモナス・プチダＡＴＣＣ１７６４２と、ンユードモナ
ス・エスピーＡＴＣＣ１５９２５とシュードモナス・フ
ルオレッセンス ＡＴＣＣ１７６３４にかえて実施例１
に準じて実験した。
その結果、前者の微生物を使用した場合し一トリプトフ
ァンは３ Ｌ２１／（ｌで後者のそれは２８．０１／１
であった。
ァンは３ Ｌ２１／（ｌで後者のそれは２８．０１／１
であった。
実施例３
実施例１におけるトリプトファナーゼを有する微生物で
あるプロテウス・レットゲリＡＴＣＣ２９９４４の代わ
りにプロテウス・レットゲリＡＴＣＣ２１１１８、エン
エリヒア・コリ（Ｅｓ−ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）
７７Ｂ−１（＠工研菌寄第７８１４号）を使用して実施
例１と同様の実験を行った。
あるプロテウス・レットゲリＡＴＣＣ２９９４４の代わ
りにプロテウス・レットゲリＡＴＣＣ２１１１８、エン
エリヒア・コリ（Ｅｓ−ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）
７７Ｂ−１（＠工研菌寄第７８１４号）を使用して実施
例１と同様の実験を行った。
その結果前者の微生物を使用した場合Ｌ−トリプトファ
ンが３ＬＯｆ／ｌで、後者のそれは２０、（Ｈ’＃であ
った。
ンが３ＬＯｆ／ｌで、後者のそれは２０、（Ｈ’＃であ
った。
実施例４
実施例１の実験で界面活性剤であるノニオン系界面活性
剤（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００和光純薬製）を加えて実
施例１と同様の実験を行った。
剤（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００和光純薬製）を加えて実
施例１と同様の実験を行った。
その結果、添加量とＬ−トリプトファンの生成量との関
係は第１表のとおりであったｔ第１表 実施例５ 〔界面活性剤を反応系に存在させた実験例〕実施例１と
同様ｔこ培養したシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣ１７６４２
の培養液５０ ｍｌから集菌した−とプロテウス−Ｌ’
７トゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ）ＡＴＣ
Ｃ２９９４４の培養液５０肩ｌから集菌した菌を、ビリ
ドキサルリン酸５ダとＴｒｉｔｏｎＸ−１０００，５％
を含むｐＨ３，５の水溶液５０ｘｉ ｆこ加え、Ｌ−酒
石酸２アンモニウムとインドールを第２表に示すように
分割添加した。
係は第１表のとおりであったｔ第１表 実施例５ 〔界面活性剤を反応系に存在させた実験例〕実施例１と
同様ｔこ培養したシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ） ＡＴＣＣ１７６４２
の培養液５０ ｍｌから集菌した−とプロテウス−Ｌ’
７トゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ）ＡＴＣ
Ｃ２９９４４の培養液５０肩ｌから集菌した菌を、ビリ
ドキサルリン酸５ダとＴｒｉｔｏｎＸ−１０００，５％
を含むｐＨ３，５の水溶液５０ｘｉ ｆこ加え、Ｌ−酒
石酸２アンモニウムとインドールを第２表に示すように
分割添加した。
その分割方法を第２表に示す。
第２表
Ｌ−酒石酸の添加残存量と、Ｌ−トリプトファンの生成
風を図面の屈折線Ｃと曲線りに示す。
風を図面の屈折線Ｃと曲線りに示す。
比較のため反応の開始時に分７Ｊ ｍ加した合計量と同
じ量のし一酒石酸２−アンモニウムを一括添加した。そ
の結果は、図面に示すＬ−酒石酸の残存量とＬ −トＩ
Ｊブトファンの生成量を曲４ＡとＢに示す。
じ量のし一酒石酸２−アンモニウムを一括添加した。そ
の結果は、図面に示すＬ−酒石酸の残存量とＬ −トＩ
Ｊブトファンの生成量を曲４ＡとＢに示す。
本発明法は次の効果を有する。
ｉ）反応基質として化学的にも生化学的にも不安定なピ
ルビン酸を直接使用せずその代りに原料入手が容易なし
一酒石酸を使用することにより、従来法の最大の問題点
であった原料問題を大幅に改善し工業的に有利な方法を
提供することができた。
ルビン酸を直接使用せずその代りに原料入手が容易なし
一酒石酸を使用することにより、従来法の最大の問題点
であった原料問題を大幅に改善し工業的に有利な方法を
提供することができた。
ｉ）二つの酵素を併用するための条件を見出したことに
より一段法酵素反応が可能とな。
より一段法酵素反応が可能とな。
つな結果酵素反応工程を著しく合理化することができた
。
。
図面は本発明の原料の一括添加法を分割添加法のし一酒
石酸２−アンモニウム塩の残存量とＬ−トリプトファン
の生成量が時間とともにどのように変化するかを示すグ
ラフである。 曲線Ａは一括添加法における反応系内のし一酒石酸２ア
ンモニウム塩の残存量 曲線Ｂは一括添加法における生成Ｌ −トＩＪブトファ
ンの量 曲線Ｃは分割添加法におけるし一酒石酸２−アンモニウ
ム塩の残存量 曲線りは分割添加法における生成Ｌ−トリプトファンの
量
石酸２−アンモニウム塩の残存量とＬ−トリプトファン
の生成量が時間とともにどのように変化するかを示すグ
ラフである。 曲線Ａは一括添加法における反応系内のし一酒石酸２ア
ンモニウム塩の残存量 曲線Ｂは一括添加法における生成Ｌ −トＩＪブトファ
ンの量 曲線Ｃは分割添加法におけるし一酒石酸２−アンモニウ
ム塩の残存量 曲線りは分割添加法における生成Ｌ−トリプトファンの
量
Claims (5)
- （１）（ｉ）Ｌ−酒石酸を脱水する能力を有する微生物
及びその処理物から選ばれる少なくとも１極並びに（ｉ
ｉ）Ｌ−酒石酸、アンモニウムイオン及びインドールか
らＬ−トリプトファンを生成する能力を有する微生物及
びその処理物から選ばれる少なくとも１種の共存下でＬ
−酒石酸及び／又はその塩とアンモニウムイオン、及び
インドールとを反応させることを特徴とするＬ−トリプ
トファンの製造方法。 - （２）Ｌ−酒石酸を脱水する能力を有する微生物がシュ
ードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生
物である特許請求の範囲第１項記載のＬ−トリプトファ
ンの製造方法。 - （３）Ｌ−酒石酸とアンモニウムイオンとインドールか
らＬ−トリプトファンを生成する能力を有する微生物が
プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属、エシエリヒア（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属に属する少なくとも１種の微生
物である特許請求の範囲第１項記載のＬ−トリプトファ
ンの製造方法。 - （４）（ｉ）Ｌ−酒石酸を脱水する能力を有する微生物
及びその処理物から選ばれる少なくとも１種並びに（ｉ
ｉ）Ｌ−酒石酸、アンモニウムイオン及びインドールか
らＬ−トリプトファンを生成する能力を有する微生物及
びその処理物から選ばれる少なくとも１種及び（ｉｉｉ
）界面活性剤の共存下で、Ｌ−酒石酸とアンモニウムイ
オン、及びインドールとを反応させることを特徴とする
Ｌ−トリプトファンの製造方法。 - （５）インドール及びＬ−酒石酸の少なくとも１種が、
反応系に逐次添加される特許請求の範囲第１項または第
４項記載のＬ−トリプトファンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19732684A JPS6174589A (ja) | 1984-09-20 | 1984-09-20 | Ｌ−トリプトフアンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19732684A JPS6174589A (ja) | 1984-09-20 | 1984-09-20 | Ｌ−トリプトフアンの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6174589A true JPS6174589A (ja) | 1986-04-16 |
Family
ID=16372600
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19732684A Pending JPS6174589A (ja) | 1984-09-20 | 1984-09-20 | Ｌ−トリプトフアンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6174589A (ja) |
-
1984
- 1984-09-20 JP JP19732684A patent/JPS6174589A/ja active Pending
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