JPS61502750A - 赤血球の長期間保存 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 赤血球の長期間保存 発明の背景 技術分野 本発明は、生理学的に十分に自然な状態での赤血球の保存に関する。特に本発明 は、輸血に適する状態での約４℃における、人間の赤血球の保存用の新しい浮遊 培養液に関する。本発明の新規な浮遊培養液により、赤血球の保存期間をこれま で可能であったよりも延長することができる。

従来の技術 標準的な血液銀行の処方に従って約４℃の浮遊培養液中に赤血球を保存および貯 蔵することは衆知である。

出願人の知る限りでは、赤血球の品質の維持に関して、低張圧の浮遊培養液また は透過性の塩、たとえばアンモニウム塩の添加による影響を報告した参考文献は ない。

しかし、連続的冷蔵保存の間に、人間の赤血球は、最終的に小胞へと分離する針 状物の発生を伴う形状変化を起すことが観察された。これにより赤血球の表面積 は減少し、恐らく赤血球は弾力性を減じ、肺臓のろ分のうちに赤血球が血液の循 環から除去されてしまうことに繋がる。輸血可能な赤血球に対する一般に認めら れた基準は、少（とも７０％の赤血球が輸血後２４時間循環していることを必要 とする。

本発明により、従来の方法に伴う問題点と限界とを克服できる。浸透膨張による 赤血球の表面張力の増大が針状物の発生を妨げることが理論的に考えられる。

従って、赤血球の輸血用にすでに確立された基準によって、輸血に適する状態で ４℃で赤血球をより長期間保存することができる、浸透圧性と膜透過性をもつ浮 遊培養液が開発された。浮遊培養液中にアンモニウム塩、好ましくはＮＨ＃ｌｌ およびＮＨ４００Ｃ１１３のような特定の透過性化合物を含有することは、低イ オン濃度の有害な影響を防ぐのみならず、以下に詳細を記す有益な結果をもたら すことが発見された。

発明の概要 本発明の一つの目的は、保存赤血球の輸血用品質を保ちながら、約４℃における 浮遊赤血球の保存期間を十分に増加させる赤血球用の浮遊培養液を提供すること にある・。

また本発明のもう一つの目的は、人体への輸血用の保存赤血球としての適合性を 保ちながら、従来の方法で可能である以上に、４℃における保存期間を伸ばすこ とができる赤血球の保存方法の提供にある。

本発明の記述が進むに従って、他の目的および利点Ｊよ明らかになる。

発明の詳細な説明 前述またはその他の本発明の目的、特徴および付随する利点の多くは、次の詳細 を別添の図とともに一読することで明らかになる。

第１図は、人間の赤血球のＡＴＰ量（本来の値に対するパーセント）と、種々の 浮遊培養液中における４℃での保存時間との関係を示した。

第２図に、異なる浮遊培養液中において４℃での種々の時間間隔で保存した後の 人間の赤血球の生体内生存率をパーセントで示した。

特定の理論または説明とは別に、従来の浮遊培養液中において冷蔵保存の間に、 赤血球中に好ましくない針状物が形成されるのを防ぐために、赤血球細胞の表面 張力を浸透・膨張により増大することが必要と考えられる。従って、赤血球は、 約１８０〜２２（）ｍｏｓｓ　（ミリオスモル）、特に約２００ｍ０５ｍの培養 液中に保存される。浮遊培養液のｐＨは、約６．８から７．２の範囲に、好まし くは７．０付近に保たれる。このことは、膜透過性の増加に繋がるイオン濃度の 低下を伴うので、赤血球細胞の正常なイオン濃度を、一定の透過性を有し、イ′ オン化可能な塩、好ましくは温度約１０〜２００１ＩＭ、好ましくは５０ｍＭの 酢酸アンモニウムおよび塩化アンモニウムからなるユニークな成分を浮遊培養液 中に持つことによって保つ。当然のことながら、アンモニウム以外の適当な陽イ オン、および酢酸塩、塩化物以外の適当な陰イオンもまた、それらの塩が本発明 の目的と基準にかなう限り、用いることができる。その塩の一例は、メチルアミ ン塩化水素である。浮遊培養液の他の成分は、従来用いられてきた適当な濃度の 、燐酸カリ、マンニトール、アデニン、牛すンパ液タンパク質、イノシン。

ピルベート（ｐｙｒｕｙａｔｅ）　、クエン酸カリウムおよびグリコースである ０例えばグルコースの濃度は約８０〜１５０５Ｍ、マンニトール約３０〜８０ｍ Ｍ、クエン酸カリウム約６〜９０ｍＭ、アデニン約１〜５ｍＭである。−および 二塩基性の燐酸塩の濃度は１８０〜２２０ｍ０５ｍの浮遊培養液のｐｉを約６． ８から７．２に保つように調整される。

「相当延長された」または「より長期の」保存等の語は、単に従前より知られて いる血液銀行の処理方法および浮遊培養液を用いて可能であるよりも多（の期間 、生きた状態で赤血球を保存または貯蔵できることを意味する。

実施例の説明 本発明による典型的な浮遊培養液は、次の物質からなる水溶液である。

グＪレコース　１１０＋ｗＭ　アデニン　２霧Ｈマンニト一ル５５ｍＭ　塩化ア ンモニウム　５０５Ｍクエン酸カリウム　７９■ｈ 二塩基性燐酸カリウム　２５．８ｍＭ −塩基性燐酸カリウム　１４．７ｓＭ 同様なものも、ｐＨが約７．０であり、オスモル濃度が約２００ｍ０５ｍである 限り簡単に調製できる。

成分調製の通常の工程において、血舅から分離された赤血球は、はぼ等容積の浮 遊培養液中に再浮遊される。浮遊培養液は、参考文献として用いた“Ｃｌ１ｎｉ ｃａｌＰｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｂｌｏｏｄ　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ″ｅｄｉ ｔｏｒｓ：Ｐｅｔｚ　＆５ｗ１ｓｈｅｒ、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ−Ｌｉｖｉｎｇｓ ｔｏｎ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎ、Ｙ、。

１９８１に記載されている標準的血液銀行処方に従って、約４±２℃にて保存さ れる。この文献の第１１章第２８１頁には、従来の手法による赤血球の生存率に 関するデータが示されている。

本発明による浮遊培養液中にて保存された場合、初めの４から５週目にかけての 保存期間中にアデノシン三燐酸（ＡＴＰ）の進行性の増加がみられる。ＡＴＰの 水準は、輸血後の赤血球の生存と相関関係にある。４週後の＾ＴＰの水準は、初 期値の１６５％を平均に、１１５％から２５０％にわたる値を示す、その後ＡＴ Ｐの水準は、さらに保存を続けると着実に下がり、約１１週後には初期値に達し 、およそ１６週後には初期値の５０％にまで下がる。

第１表に赤血球を１６週間まで保存した浮遊培養液中の種々の成分と溶質の濃度 を示す。本発明による優れた浮遊培養液である番号２０の溶液が、赤血球のＡＴ Ｐを第１図に示されている様に、テストされた他の溶液に比べて、より高いレベ ルでより長期間保っていることに注意されたい。

６面っ部片４北朗 第１図に、４．　８．１０．１２．１４および１６６週目おける下記の溶液中に 浮遊させた赤血球の＾ＴＰ値を示す。

すなわち（ａｌ第１表の番号７に対応する等浸透圧のクエン酸カリウム、燐酸、 マンニトール、グルコースおよびアデニン溶液、（ｂｌ第１表の番号１４に対応 する（ａ）溶液に酢酸アンモニウムを加えた溶液、（Ｃ１第１表の番号１２に対 応する＋ａ＋溶液から低張性にするためクエン酸カリウムを除いた溶液、（ｄ） 第１表の番号１３に対応する、（Ｃ）溶液に酢酸アンモニウムを加えた低張溶液 、（ａｔ第１表の番号２０に対応する（Ｃ）溶液に塩化アンモニウムを加えた低 張溶液。この結果は、低張性とアンモニウム塩の添加の両方から得られる効果を 示している。低張性による効果は、針状物の発生が遅れることと関連があるであ ろう。しかし、ＡＴＰ水準の増大の理由は明らかでない。浮遊培養液に加えられ た場合に゛、本発明のアンモニウム塩がＡＴＰを増加させるメカニズムもまた不 明である。

第２図に、１２５日後までの種々の期間、Ｔｅｌ溶液中に保存された赤血球の２ ４時間生体内生存率を示す。

アンモニウム塩を含む低張性細胞浮遊液が輸血に通することは考えにくいことは 注意に価する。従って、輸血に先立ち遠心分離により赤血球細胞は沈澱処理され 、輸血可能な溶液に移されたのち輸血される。

本発明によって保存される赤血球の溶血は約０．３から３．８％である。

これらの例及び実施例は、例示のためにのみ記述されており、本発明に基づ（種 々の変更、改変は、この技術の習熟者に示唆されるとともに、出願の要旨と添付 される請求の範囲に含まれる。

ＦＩＧ、　２ 国際調査報告

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．約８０〜１５０ｍＭのグルコース、３０〜８０ｍＭマンニトール、４〜９０ ｍＭクエン酸カリウム、１〜５ｍＭアデニンおよび１０〜２００ｍＭの透過性塩 を必須成分とし、ｐＨ約６．８から７．２、オスモル濃度約１８０〜２２０ミリ オスモルである、赤血球を生きたまま保存可能な水溶液からなる、約４℃におけ る赤血球のより長期の保存のための浮遊培養液。
2. ２．約８０〜１５０ｍＭのグルコース、３０〜８０ｍＭマンニトール、６〜９０ ｍＭクエン酸カリウム、１〜５ｍＭアデニンおよび１０〜２００ｍＭの透過性塩 を必須成分とし、ｐＨ約６．８から７．２、オスモル濃度約１８０〜２２０ミリ オスモルである、赤血球を生きたまま保存可能な水溶液における、約４℃での赤 血球のより長期保存方法。
3. ３．透過性塩が、塩化アンモニウムと酢酸アンモニウムから成るグループより選 ばれる化合物である請求の範囲第１項記載の浮遊培養液。
4. ４．グルコース約１１０ｍＭ、マンニトール５５ｍＭ、クエン酸カリウム７．９ ｍＭ、アデニン２ｍＭおよび塩化アンモニウムまたは酢酸アンモニウム５０ｍＭ を含む請求の範囲第３項記載の浮遊培養液。
5. ５．適量の一または二塩基性燐酸カリウムを用いて、ｐＨ値を約７．０に維持す る請求の範囲第４項記載の浮遊培養液。
6. ６．オスモル濃度が約２００ｍＯｓｍである請求の範囲第５項記載の浮遊培養液 。
7. ７．透過性塩が塩化アンモニウムと酢酸アンモニウムから成る群より選ばれる化 合物である請求の範囲第２項記載の方法。
8. ８．グルコース約１１０ｍＭ、マンニトール５５ｍＭ、クエン酸カリウム７．９ ｍＭ、アデニン２ｍＭおよび塩化アンモニウムまたは酢酸アンモニウム５０ｍＭ を用いる請求の範囲第７項記載の方法。
9. ９．適量の一又は二塩基性燐酸カリウムを用いてｐＨ値を約７．０に維持する請 求の範囲第８項記載の方法。
10. １０．オスモル濃度が約２００ｍＯｓｍである請求の範囲第９項記載の方法。