JPS63301827A - 血液保存及び賦活用薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は血液保存及び賦活用薬剤に関する。

［従来の技術及び発明が解決しようとする問題点］ 我が国においては、従来、採血した血液の保存にクエン
酸ナトリウム、クエン酸及びブドウ糖からなる血液保存
剤（以下ｒＡＣＤ液」という、）又はクエン酸ナトリウ
ム、クエン酸、ブドウ糖及びリン酸二水素ナトリウム・
２水和物からなる血液保存剤（一般にはｒＣＰＤ液」と
略称されている。）が使用されている。またヨーロッパ
やアメリカ合衆国においては、クエン酸ナトリウム、ク
エン酸、ブドウ糖、リン酸二水素ナトリウム・２水和物
及びアデニンからなる血液保存剤（一般にはｒｃＰＤ−
Ａ液」と略称されている。）が使用されている。

しかしながら、上述した血液保存剤を使用して＋ｆｉｔ
液を保存する場合にあっても、（Ｉ）　　保存中に赤血
球の形状が変化する（２）　　保存中に赤血球の酸素放
出能が低下する（３）ヘマトクリット値（以下ｒＨｔ値
」という、）が高い赤血球にあっては溶血が激しい［即
ち、具体的には、Ｈｔとは血液中の有形成分（赤血球、
血小板、白血球など）を示し大部分は赤血球である。そ
して、現状の濃厚赤血球はＨｔ値が７０〜８０％であり
、現状の血液保存剤はＨｔ値が８０％以上と高い濃厚赤
血球の保存には不適といわれている。なお、正常のヒト
のＨｔ値は男３６〜４８％、女３４〜４２％といわれて
いる。］ という問題点が生ずる。

かかる問題は、近年、採血した血液から血漿。

血小板、白血球を分離した濃厚赤血球の保存需要が高ま
るに伴い極めて重要となっている。即ち、採血液から血
漿、血小板、白血球などの分離率を高めることは血漿分
画製剤の生産量増加及び輸血の際の弊害（例えば発熱、
抗体産生等白血球に付随した副作用）の軽減等の利点が
あるものの、採血した血液から血葉、血小板、白血球な
どの赤血球以外の分離率を高め、Ｈｔ値がＬ昇すると、
上述した赤血球のより大きな酸素放出能の低下、赤血球
の形状の変化、及び溶血が激しくなるという問題を生ず
る。

したがって、本発明は、保存血液とりわけ濃厚赤血球に
おける赤血球の形状変化、赤血球の酸素放出能の低下及
び溶血の防ＩＥに有効な血液保存及び賦活用薬剤を提供
することを目的とする。

［問題点を解決するための手段１ 本発明者等は、赤血球における物質の細胞膜透過性及び
エネルギー代謝について鋭意検討を重ねた結果、赤血球
の機能発現に有効かつ細胞膜強化に有効な薬剤を見出し
本発明を完成するに到りた。

即ち、本発明は、次式（Ｉ）： Ｃ−０Ｒ。

０−Ｐ−ＯＲ２ Ｒ３ 〔式中、Ｒ，は水素原子又は炭素ａ１〜１２のアルキル
基を表わし、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立に、水素原
子、アルカリ金属又は炭素数１−１２のアルキル基を表
わす、〕 で示されるホスホエノールピルビン酸：Ｌ−アスコルビ
ン酸−リン酸エステル又はその薬学的に許容される塩；
糖類；アデニン及び薬学的に許容される有機酸系緩衝剤
を含有することを特徴とする血液保存及び賦活用薬剤に
係るものである。

式（Ｉ）で示されるホスホエノールピルビン酸にあって
、Ｒ，、Ｒ２又はＲ３が炭素数１−１２のアルキル基で
ある場合、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロ
ピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチルＬ
　　５ｅａ−ブチルス（、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−７
ミル基、イソアミル基、５ｅｅ−７ミル基、活性アミル
基、ｔｅｒｔ−アミル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチ
ル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、
ｎ−ウンデシル基、ｎ−ドデシル基等である。

また、Ｒ２及びＲ３がアルカリ金属である場合、具体的
には、ナトリウム又はカリウム等である。

しかしながら、ホスホエノールピルビン酸は、通常、ホ
スホエノールピルビン酸ナトリウム永和物として入手で
きるので、ナトリウム塩水和物を用いるのが好ましい。

本発明に用いるし一７スコルビン酸−リン酸エステル（
以下ｒＡＰＪという、）としては、次式（Ｉ１）： ％式％ で示されるＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステル、 次式（ｍ）： Ｑ＝Ｐ−ＯＨ ＯＨ で示されるＬ−アスコルビン＠−３−リン酸エステルな
ど薬学的に許容されるリン酸エステルが挙げられる。

ＡＰの薬学的に許容される塩としては１例えば、ナトリ
ウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等
が挙げられる。

本発明にあって糖類としては、具体的には、マルトース
、シ＝Ｉｓ等の三糖類及びガラクトース、マンニトール
等の単糖類が挙げられる。

更に本発明にあって、薬学的に許容される有機〜酸系緩
衝剤が使用され、好ましくは生体内で強い毒性を示さな
いか又は生体内に存在することが知られている有機酸塩
を挙げることができる。

即ち、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、
ピルビン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、酒石酸ナトリ
ウム等を挙げることができる。これらの有機酸系緩衝剤
としては、ｐＨ調整用緩衝剤として働くほか、血液凝固
を起すフィブリンの生成を抑制する作用を有するものが
好ましい。

本発明の血液保存及び賦活用薬剤には前述の各成分のほ
かに、有機酸を加えてもよく、その好ましい例としては
、生体内で強い毒性を示さないか又は生体内に存在する
ことが知られている有機酸を挙げることができる。即ち
、例えば、クエン酸、酢酸、ピルビン酸、乳酸、酒石酸
等を挙げることができる。これらの有機酸としては、ｐ
Ｈｍ整川緩衝剤として働くほか、血液凝固を起すフィブ
リンの生成を抑制する作用を有するものが好ましい。

本発明の血液保存及び賦活用薬剤は、好ましくは溶液の
形で使用される０例えば、ホスホエノールピルビン酸モ
ノナトリウム；ＡＰナトリウム塩又はマグネシウム塩；
マルトース、マンニトール又はショ糖；アデニン及びク
エン酸トリナトリウムを含有する血液保存及び賦活用薬
剤にあっては、ホスホエノールピルビン酸モノナトリウ
ム１Ｏ−１ｏｏミリモル／１．ＡＰナトリウム塩又はマ
グネシウム珈５〜１００ミリモル／又、マルトース、マ
ンこトール又はショ［４０〜２００ミリモル／ｌ、アデ
ニン０．１〜５ミリモル／ｌ及びクエン酸トリナトリウ
ム１〜５０ミリモル／立を含有しかつ塩化ナトリウムで
浸透圧調整をする（　２８０〜３５０ｔｍＱｓｔｓ／ｋ
ｇ　）のが好ましく、ホスホエノールピルビン酸モノナ
トリウム１５〜５０ミリモル／２、ＡＰナトリウム塩又
はマグネシウムｍ５〜５０ミリモル／ｌ、マルトース、
マンニトール又はショ糖５０〜１５０ミリモル／ｌ、ア
デニン０．２〜２ミリモル／ｌ及びクエン酸トリナトリ
ウム５〜２０ミリモル／見を含有しかつ塩化ナトリウム
で浸透圧調整をする（２８０〜３５０ｓｒｓ層／ｋｇ　
）のが更に好ましい、この他、リン酸又はそのアルカリ
金属塩、例えばリン酸二水素ナトリウムを好ましくは１
〜２０ミリモル／Ｕ添加することが特に好ましい。

なお、上記調製液を使用する場合、採血した血液１００
−当たり１０〜１５０＋Ｊ添加するのがよい。

（作用］ 本発明の血液保存及び賦活用薬剤にあって、前記式（Ｉ
）で示されるホスホエノールピルビン酸は赤血球の細胞
膜を透過し、赤血球内での解糖系の代謝により、２．３
−ジホスホグリセレート（以下ｒ２，３−ＤＰＧＪとい
う、）やアデノシン三リン酸（以下ｒＡＴＰＪ　という
、）を生成する。この２．３−ＤＰＧは、赤血球の酸素
親和性を調節する役割があり、血液保存中に赤血球の酸
素放出能が低下するのを防止する。アデニンもまた赤血
球の細胞膜を透過し、赤血球内でＡＴＰを生成する。こ
のようにして細胞内で生成するＡＴＰは、細胞膜のリン
酸化、赤血球の形態維持、生体内外での赤血球の生存に
寄与する。また糖類は、赤血球の細胞膜の強化に寄与し
赤血球の構造を維持し溶血を防止する。更に、有ａ酸及
び薬学的に許容される有機酸系緩衝剤は、血液の保存に
際し、赤血球内で生成する炭酸ガスの排出及びそれに関
連した酸−塩基平衡を維持する役割を果たす、とりわけ
クエン酸ナトリウムを含有する場合、これが赤血球細胞
膜を透過することはないが、ｐＨに対する緩衝作用があ
り、ｐＨの維持に有効であると共に赤血球の凝集を起す
フィブリン生成の抑制に有効である。

［実施例］ 以下、実施例及び試験例に基づき、本発明を更に詳細に
説明する。

実ｊ（例−一ユ　　　　　　　　　　び　　　　　　　
　　　　　の■ マルトース４６．８ｇ（Ｉ３０ミリモル）、リン酸二水
素ナトリウム１１２永和物０．９４ｇ（６ミリモル）、
アデニン０．１３５ｇ　（Ｉミリモル）、ホスホエノー
ルピルビン酸モノナトリウムやｌ水和物８．３２ｇ（４
０ミリモル）、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステ
ルナトリウム・３水和物５．６４ｇ　（Ｉ５ミリモル）
及びクエン酸トリナトリウム１．７６ｇ（６ミリモル）
を水に溶解し、１文水溶液（ｐＨ６、５）とした。

実ｊＥ例二−ヱ　　　血　　　　　　び　　　　　　　
　　　　　の週ｌ マルトース４６．８ｇ　（Ｉ３０ミリモル）、リン酸二
水素ナトリウム・２水和物ｏ、９４ｇ（６ミリモル）、
アデニン０．０６８ｇ（０，５ミリモル）、ホスホエノ
ールピルどン酸モノナトリウム・ｌ水和物６．２４ｇ（
３０ミリモル）、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エス
テルマグネシウム・５水和物５．６９ｇ（Ｉ５ミリモル
）及びクエン酸トリナトリウム２．９４ｇ（Ｉ０ミリモ
ル）を水に溶解し、１１水溶液（ｐＨ６，５）とした。

実ｊ１例ニー１　　　血　　　　　　び　　　　　　　
　　　　　のμ１波 マルトース４６．８ｇ（Ｉ３０ミリモル）、アデニン０
．０８８ｇ（０，５ミリモル）、ホスホエノールピルビ
ン酸モノナトリウム・ｌ水和物６．２４ｇ（３０ミリモ
ル）、Ｌ−アスコルビン醜−２−リン酸エステルマグネ
シウム拳５水和物５．６９ｇ（Ｉ５ミリモル）及びクエ
ン酸トリナトリウム２．９４ｇ（Ｉ０ミリモル）を水に
溶解し、１！Ｌ水溶液（ｐｉ（６、５）とした、゛試験
例 １　１　、血　　・ ヒトの新鮮面を血液バッグに採取し、遠心分離により白
血球、血小板及び血漿等を分離し、　Ｈｔ値が９０〜９
５％の濃厚赤血球を得た。

（Ｉ）で得られた濃厚赤血球１５０−に実施例ｌで調製
した組成液１５０−を加えた。これを４〜６℃で保存し
、１週間毎にサンプリングし、赤血球中の２．３−ＤＰ
Ｇ及びＡＴＰ並びに上清中のヘモグロビンを測定した。

結果を第１表に示す。

第１表 （ａ）溶血の程度を示し数値が大きい程溶血が激しいこ
とを示す。

したがって、濃厚赤血球に実施例１で調製した組成液を
加えると、保存血液における２、３−ＤＰＧとＡＴＰは
長期間に亘り保持され、赤血球の溶血もこの間著しく生
じていないことが明らかとなった。特に２．３−ＤＰＧ
は１〜３週間後では保存開始前に比し増加した。

（Ｉ）で得られた濃厚赤血球と実施例１で調製したＭ１
成液との混合液を測定前に３７℃で３０分間インキュベ
ートした以外は（２）と同様の試験を行なった。結果を
第２表に示す。

第２表 （ａ）溶血の程度を示し数値が大きい程溶血が激しいこ
とを示す。

輸血直前にインキュベート処理を行うと、２．３−ＤＰ
Ｇ、ＡＴＰ値ともに大幅な改善がみられており、ホスホ
エノールピルビン酸ナトリウム及びＬ−アスコルビン酸
−２−リン酸エステルナトリウム塩の添加の効果は明確
に現われている。

（Ｉ）で得られた濃厚赤血球１５０−に実施例２で調製
した組成液１５０−を加えた以外は、（２）及び（３）
と同様の試験を行なった。但し、インキュベートは３７
℃、６０分間とした。

結果を第３表及び第４表に示す。

第３表　４〜６℃で保存した場合 第４表　３７℃、６０分間インキュベートした場合（ａ
）溶血の程度を示し数値が大きい程溶血が激しいことを
示す。

６週間後も保存赤血球の活性は極めて高レベルに保持さ
れている。２．３−ＤＰＧ及びＡＴＰは新！ｇ面と同じ
程度であり、本保存剤の有用性が明確に出ている。

（Ｉ）で得られた濃厚赤血球１５０−に実施例３で調製
した組成液１５０−を加えた以外は、（２）及び（３）
と同様の試験を行なった。但し、インキュベートは３７
℃、６０分間とした。

結果を第５表及び第６表に示す。

第５表　４〜６°Ｃで保存した場合 （ａ）溶血の程度を示し数値が大きい程溶血が激しいこ
とを示す。

第６表　３７℃、６０分間インキュベートした場合（ａ
）溶血の程度を示し数値が大きい程溶血が激しいことを
示す。

保存開始時には２．３−ＤＰＧ及びＡＴＰの鼻血球内濃
度は新鮮血よりも高く、６週間後であっても保存血液の
赤血球内の２．３−ＤＰＧ及びＡＴＰの濃度は新鮮血と
同等のレベルに保持され、また溶血も極めて少なく、保
存後の赤血球の活性を極めて高レベルに維持することが
できることが判明した。

［発明の効果］ 本発明の血液保存及び賦活用薬剤によれば、採血した血
液、とりわけ採血後流血球を濃縮した濃厚赤血球中にあ
って赤血球の活性を長期に亘り維持しながら保存するこ
とが可能である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＿１は水素原子又は炭素数１〜１２のアルキ
   ル基を表わし、Ｒ＿２及びＲ＿３は、それぞれ独立に、
   水素原子、アルカリ金属又は炭素数１〜１２のアルキル
   基を表わす。〕 で示されるホスホエノールピルビン酸；Ｌ−アスコルビ
   ン酸−リン酸エステル又はその薬学的に許容される塩；
   糖類；アデニン及び薬学的に許容される有機酸系緩衝剤
   を含有することを特徴とする血液保存及び賦活用薬剤。 ２、糖類がマルトース、ショ糖、ガラクトース又はマン
   ニトールである請求項１記載の血液保存及び賦活用薬剤
   。 ３、薬学的に許容される有機酸系緩衝剤がクエン酸ナト
   リウムである請求項１記載の血液保存及び賦活用薬剤。 ４、ホスホエノールピルビン酸モノナトリウム１０〜１
   ００ミリモル／ｌ、Ｌ−アスコルビン酸−リン酸エステ
   ルナトリウム塩又はマグネシウム塩５〜１００ミリモル
   ／ｌ、マルトース、マンニトール又はショ糖４０〜２０
   ０ミリモル／ｌ、アデニン０．１〜５ミリモル／ｌ及び
   クエン酸トリナトリウム１〜５０ミリモル／ｌを含有し
   、必要に応じて浸透圧補正のための塩化ナトリウムを添
   加した水溶液からなる請求項１記載の血液保存及び賦活
   用薬剤。 ５、ホスホエノールピルビン酸モノナトリウム１０〜１
   ００ミリモル／ｌ、Ｌ−アスコルビン酸−リン酸エステ
   ルナトリウム塩又はマグネシウム塩５〜１００ミリモル
   ／ｌ、マルトース、マンニトール又はショ糖４０〜２０
   ０ミリモル／ｌ、アデニン０．１〜５ミリモル／ｌ、ク
   エン酸トリナトリウム１〜５０ミリモル／ｌ及びリン酸
   又はそのアルカリ金属塩１〜２０ミリモル／ｌを含有し
   、必要に応じて浸透圧補正のための塩化ナトリウムを添
   加した水溶液からなる請求項１記載の血液保存及び賦活
   用薬剤。