JPS6144808A - プロ―リポソーム組成物及びリポソームの水性分散物を作る方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は膜状の脂肪性物質（ｍｅｍｂｒａｎｅ　１ｉｐ
ｉｄｓ）をベースとする組成物と、該組成物に水性の液
体を加えて脂肪性物質の胞を作る方法と、該胞を水に分
散させたものに関する。膜状の脂肪性物質とは、水と共
に２重層（ｂｉｌａｙｅｒ）を形成している脂質を意味
する。それには主にレシチンのようなリン脂質と糖脂質
のような関連物質とがある。リン脂質の胞は又リポソー
ム又はリポサム（ｌｉｐｏｓｏｍｅ）としても知られて
いる。一般的な用語によｎば、水性の頭載を取り囲む脂
質＠２重層はすべて一般的にはリポソームとして知られ
ている。ニューサイエンティスト１９８０年１０月１６
日号の１５０ページ乃至１５３ページに記載されたアー
ル・ファーフィールド氏の論文には膜状の脂肪性物質か
らリポソームの製造について次のように記載されている
。

リポソームとはごく微細な袋体（小胞）であって細胞膜
と同じ様な働きをする。リポソームは人工的に造り出さ
れる物質であるが、幾つかの生物学的な性質を示しその
物質自体が生物細胞の環境の中に受は入れられている様
に思われる。ある物は細胞膜と合体し、まるでリボンー
ム自体がその細胞器官であるかのような機能を果たすも
のもある。従って広範囲に亘って選択した物質をリポソ
ームと一体化させ、これを細胞内に導入させることかで
きる。例えば薬物を目標地点へ正確に送り、その場所で
薬剤に最大の効能を発揮させることが出来る。しかも包
んでいる物質については、生物学的に分解されるのであ
る。

リポソームが薬物を目標地点番こまで運ぶ手段に供する
ことができることから、このリポソームについて鋭意研
究が進められていることは特に驚くべきことではない。

しかしながら種々の困難な問題があってリポソームの価
値ある性質を商業的に利用する上で妨げとなっている。

これら問題点を要約すると次の通りである。

（１）従来の技術によって作られるリポソームは胞が多
層構造で大きくなる傾向にあって取り込まれる水性液体
の量は比較的少ない。従がってかかる胞の中に入り込む
ことのできる薬物（その他物質）の濃度が有効となるま
で高くなることはめったにない。

（２）　　肥を単一の層構造になし空間容量を太き（し
たリポソームを作る技術は知られている。しかしこの技
術にあっては複雑な装置を坏要とし、条件を注意深くコ
ントロールせねばならず商業的な作業には適していると
は言えない。

（３）　　リポソームが分散して存在すると懸濁液中の
胞が漏えいしたり機械的に破損する等貯蔵に際してしば
しば不安定なものとなる。

リポソームの構造と取込み率（ｃｎＬｒａｐｍｅｎｔｅ
ｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）の改善を目的とした幾つかの方法
が文献に記載されている。シカ氏とパパハージョポロス
氏の論文オランダバイオメディカルプレス１９８１第３
章ナイトエルゼビル／ノースの「リポソーム：物理的構
造から治療学への応用」には、リポソームは次の３つの
カテゴリーに分けることができることが記載されている
。

１）多層構造の胞。これは膜脂質の二重層を同心円に配
列し該二重層間に水性の媒体を介在させたものである。

これらは膜脂質を有機溶剤中で分解させ、有機溶剤を蒸
発させて取り除き、脂質を薄いフィルムとして例えば丸
いフラスコの底部の壁に残すことにより形成することが
できる。

水性の緩衝剤を攪拌しながら加えることによって得られ
るリポソームのサイズは直径３０ミクロン以下である。

夫々の胞の中に二重層が多数存在するため、取り込まれ
る水性の液体は比較的少なく、１モルの脂質４こっき１
乃至４リツトルのオーダであって、薬物の取込み率も２
０パ一セント未満とかなり低い。廊の大きさは超音波処
理によって小さくすることができるが、この処理によっ
て取込み率は上昇しない。

＋１）　　多層の胞（ｔｎｕｌｔｉ−１ａｔｎｅｌｌｅ
ｒ　ｖｅｓｉｃｌｅｓ、以下ＭＬＶ）を一層強（超音波
処理すると、単層の小さな胞（ｓｍａｌｌ　ｕｎｉｌａ
ｍｅｌｌｅｒ　ｖｅｓｉｃｌｅｓ、以下５ＵＶ）が形成
され、直径は一般的には２０乃至５　Ｑ　ｎｍである。

またＳＵＶは、脂質のエタノール希釈溶液（脂質最大３
０重量鳴）を水相中に速やかに注入することによっても
形成することができる。ＳＵＶの代表的な水性空間容積
は脂質１モルにつき０．２乃至１．５リツトル、薬剤取
り込み率が１％以下と余りにも低すぎて商業的に利用す
ることができない。

１１１）単層の大きな胞（ｌａｒｇｅ　ｕｎｉｌａｍｅ
ｌｌａｒ　ｖｅｓｉｃｌｅｓ。

以下ＬＵＶ）は、脂質のエーテル希釈溶液を水性の液体
中に注入することによって形成することができる。エタ
ノールの注入技術の場合とは異なり、有機溶剤中の脂質
濃度は得られるリポソームのサイズに影響を与えないよ
うである。

それ故、この技術を用いることによって直径が０．１５
乃至０．２５ミクロン、水性空間の容積が脂質１モルに
つき８乃至１７リツトルの胞を作ることができる。しか
し、薬物の取込み率は１パ一セント未満と低すぎて有効
なものとならない。

ＬＵＶは、過剰の有機相の中でリン脂質と緩衝剤の油中
水型エマルジョンとし、次に圧力を下げて有機相を除去
することによって作ることができる。この技術によれば
、直径が０．１７乃至０．８ミクロンの範囲内、空間容
積が脂質１モルにつき４乃至１４リツトルの範囲内、薬
物取込み率が２０乃至６０鴫のＬＵＶを得られることが
報告されている。しかし調製技術が難しく、複雑な装置
を必要とし、大規模の開業的作業に適しているとはいえ
ない。

ＥＰＡ６９３０７には不活性でかつ揮発性の溶剤又は気
体の存在下にて、燐脂質の水溶液を超音波による放射処
理をすることによってリポソーム溶液を作る方法が記載
されている。

実施例１に於て、過剰の水を加えながら燐脂質のエタノ
ール溶液に超音波放射し、水性の分散液には更に長い時
間（７５分）超音波の放射を行なう。この方法は商業的
規模の作業にあたっては実用的とは言えない程の非常に
烈しい処理を要し、また得られるリポソーム分散剤の薬
物取込み量は低い。

本発明は従来技術の問題点を解決するものである。本発
明はブローリポソーム又はプローリポサＡ　（ｐｒｏ−
１１ｐｏｓｏｔｎｅ　）なる組成物を明らかにし、水性
の液体を単に攪拌しながら加えるだけで前記組成物を変
換して、リポソームが水に分散したものにする方法を明
らかにするものである。得られるリポソームの分散剤に
於て、リポソームは、脂質１グラムにつき空間容積が２
　ｍ１以上の層状（層数が少ないものと多いものがある
）の胞であって薬物取込み率が２０％以上、望ましい条
件では４゜・ル以上を達成することができる。

また、組成物はスプレー可能な形にすることもできる。

エアゾルの液体粒子を形成し、水性の媒体と接触させる
とリポソーム分散剤は自然発生的に形成される。

本発明は過剰の水の存在ドにて肥すなわちリポソームを
自然発生的に形成する組成物を明らかにすることを１つ
の目的としており、該組成物は（ａ）　　少（とも１種
の膜脂質と、 （ｂｌ　　該脂質の溶剤として用いられる少くとも１種
の水混和性の有機液体と、 ｔｃ）４０重ｔ％以ドの水 とを含み、（ａｌと（１））の重量比は４０：１．ｖ＞
ら１；２０である。

コレら組成物ハ、リポソームの原４　（ｐｒｏｇｅｎｉ
ｔｏｒｓ　）というべきもの。すなわちブローリポソー
ム又はブローリポサムである。

本発明は、リポソームの水性分散剤を形成する方法を明
らかにすることをもう１つの目的としており、該方法は
希釈ｏＴ＆なブローリポソームの組成物を過剰の水と混
合させることによって行なうものである。

本発明は水性のリポソーム分散剤を明らかにすることを
更に目的としてＳす、該分散剤は、直径が約０．１乃至
２．５ミクロンの範囲内の膜脂質から形成され取り込ん
だ水性液体が脂質１グラムにつき２ｍ１ＰＪ上であるリ
ポソームを含んでεす、水性の分散剤中には、脂質の溶
剤である水混和性の有機液が検出可能な量だけ存在する
ことに特徴を有している。

本発明の組成物はスプレー可能な形にて供することもで
きる。この場合の特に有利な点として、本発明は揮発性
の液体噴射某（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔ　）としてエアゾ
ル組成物を明らカ）にするものであって、該組成物は、 ｔａ）　　少なくとも一種の膜脂質と、（ｂ）　　脂質
の溶剤である少（とも１棟の水混和性の液体と、 ｔｅｌ水 とを含み、水は（ａ）　（ｂ）　（ｃ）のトータル重量
が２０重量％以下であって、ｔａｒとｔｔ）ｌの重量比
率は４０：１から１＝２０である。以ド、これをエアゾ
ル組成物（ａｅｒｏｓｏｌ　ｃｏ＋ｎｐｏｓｉｔｉｏｎ
ｓ　）と称して説明を行なうことにする。

適当な膜脂質として燐脂質が挙げられ、例えば大豆レシ
チン、ダβ黄レシチン等の天然レシチンや、例えばジパ
ルミトイルホスファチジルコリンのような合成レシチン
が例示される。他に糖脂質のような物質を用いてもかま
わない。リポソーム分散剤を内科用として使用する場合
、当然のことながら脂質は薬理学的に受容しうる品質の
ものでなければならない。そうでない場合は分析用グレ
ード或はそれ以下の燐脂質を用いることもできる。

実際のところ、グレードの劣る燐脂質は、りａマドグラ
フィによって不純物を取り除いた物質よりも水中での分
散が一層谷易に行なわれることが時々あり、この理由か
らグレードの劣る燐脂質が一層好んで用いられることが
ある。このことは純度の高い脂質材料を用いなければな
らないと一般的には考えられていた従来技術と対照的で
ある。

使用することのできるその他の膜脂質として、長鎖ジア
ルキル　ジメチルアンモニウム化合物が含まれ、例えば
ジ−ステアリル　ジメチルアンモニウム　クロライドの
様なジ−ステアリルジメチルアンモニウム化合物やシー
タロウ　ジメチルアンモニウム　クロライドのようなシ
ータロウ　ジメチルアンモニウム化合物が例示される。

これらは合成物質であるから、レシチン等の天然に産し
うる物質と比べて品質が一定しており、更には酸化しに
くいという利点がある。

本発明の組成物を薬理学用として供するとき、成分（ｂ
Ｉは、非毒性であらねばならない。成分ｔｂ＋はクリセ
ロール、プロピレン　グリコール、エタノール等の脂肪
族のアルコールが望ましい。イソプロピルアルコール、
メタノール、フタノール、エチレン　グリコール等を用
途に応じて用いることもできる。

希釈可能なブローリポソームの組成物にあっては、成分
（ａ）と成分（ｂｌの重量比率は４〇二１から１；２０
の範囲であって、望ましくは１０：１から１＝５、更に
望ましくは２：１から１：２の範囲内である。成分（ｂ
）はリポソームの生成を早める働きがあるが、これはお
そらく膜脂質の橋頭グループ（ｐｏｌａｒ　ｈｅａｄ　
ｇｒｏｕｐｓ　）の水化に影響を与えるからだと思われ
る。成分ｔｂ）は更に系の取込み率を向上させることに
もなる。もし成分（ｂ）が極端に少ないときは、水の添
加によるリポソームへの変更は遅々としており、取込み
率も低い。成分ｔｂｌが極端に多ければ、組成物は有機
液体中で膜脂質の希釈溶液となり、有機液体は無駄にな
るだけで取込み率は低下する。過剰の水を組成物に加え
ても、成分（ｂｌは連続した相の中で溶解してしまい、
系の中でそれ以上の役割は何も果たさない。

ブローリポソームの組成物は、重量にて５〜４０％、特
に５〜２０％の水を含むのが良い。水は２つの有効な機
能を果たす。まず第１に水の比率が適正であると、リポ
ソームの自然発生的な生成が高められ、過剰の水が加え
られると、リポソームのサイズや、系の取込み率に影響
を及すことができる。第２に、水はリポソーム内部の水
相に取り込まれる薬剤のキャリヤ（担体）或は溶剤とし
て作用することができる。

特に望ましい希釈性のブローリポソームの組成物は、成
分ｔａｌが重量にて３５〜５５％、成分（ｂｌが重量に
て３０〜５５％、そして水が重量にて５〜２０％である
。組成物は水で容易に希釈され、取込み率の高いリポソ
ーム分散剤を形成することができる。

本発明のエアゾル組成物は一般的には５〜４０％、望ま
しくは１０〜４０％の膜脂質成分（ａｌと、２０％以下
、望ましくは１０％以下の水分（ｃ１を含み、残部エタ
ノール等の水混和性溶剤であって、すべてのパーセンテ
ージは成分（ａｌ　（ｂｌ　（ｃ１のトータルされた重
量に於ける重量であられされている。

ブローリポソームは、微細な液体粒子として排出される
から、水はリポソームの形成を促進する上では重要では
ないが、水溶性の生物学的に活性な物質が含まれている
ときには有効なものとなりうる。エタノールが成分１ｂ
）として用いられるときは、プロピレングリコール或は
グリセロールの比率を小さくすることによって、スプレ
一時に起こりうる揮発性に関する問題をほとんど解消す
ることができる。すなわち、プロピレン　グリコール或
はグリセロールはエタノールの一部或は全部と取り換え
て用いることができる。膜脂質成分ｔａ＋の水混和性溶
剤成分（ｂ）に対する重量比率は１：２から１：１０で
あることが望ましい。

エアゾル組成物には揮発性の液体噴射楽が含まれ、該渠
トシテアークト７　（Ａｒｃｔｏｎ）　１２（ｃＱ’２
Ｆ２）或はアークトン１１４　（ｃｚＣ４Ｆ４　）の如
き過フッ化炭素が望ましい。もしブタンの使用が許され
るところでは、ブタンを用いても可い。噴射渠は一般的
には組成物全体の中で重量にて５０〜９５％、通常は６
０〜８０％を占める。生物学的に活性な物質を正確な分
量だけ運ばねばならないときには、噴射薬の割合は概し
て前記範囲の上限の方になる。

例えばエアゾル容器からスプレーすると、噴射薬は速や
かに揮発し、エアゾルの残存する成分がスプレーノズル
によって決まるサイズ、望ましくは８ミクロン以下の液
体粒子の形にてブローリポソーム組成物として残る。こ
れら粒子は水と接触すると、自然発生的にリポソームの
分散剤に形成し、大変有効な薬物のキャリヤとなる。従
って、本発明は喘息、気管支炎等の気道の問題を治療す
るエアゾル剤として特に適している。

本発明のスプレー可能な組成物と一体に用いることので
きる薬物として、サルブタモール（ｓａｌｂｕｔａｍｏ
ｌ）、チルブタライフ　（ｔｅｒｂｕｔａｌｉｎｅ）、
オルシプレナライ７　（ｏｒｃｉｐｒｅｎａｌｉｎｅ）
、イソプレナライア　（ｉｓｏｐｒｅｎａｌｉｎｅ）、
レプロテロール（ｒｅｐｒｏｔ　ｅ　ｒｏｌ　）、ピル
ブチ０−　Ｊｌ／　（ｐｉｒｂｕｔｅｒｏｌ）、ブタン
ナイド（ｂｕｄｅｓｏｎｉｄｅ）、ベクロメタソーネ（
ｂｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ジープロブリオネー
ト（ｄｉ−ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）、ソージウム　り
ロモグリケ−）　（ｓｏｄｉｕｍ　ｃｈｒｏｍｏｇｌｙ
ｃａｔｅ）、７　ｘ　／チロール（ｆｅｎｏｔｅｒｏｌ
　）、イブラトロピ°ウム（ｉｐｒａｔｒｏｐｉｕｍχ
へ９−メタソーネ　バＬ／Ｌ／−ト（ｂｅｔａ−ｍｅｔ
ｈａｓｏｎｅｖａｌｅｒａｔｅ）、リミテｏ　−Ｌ　Ｊ
Ｌ／　（ｒｉｍｉｔｅｒｏｌ）、テオフィリン（ｔｈｅ
ｏｐｈｙｌｌｉｎｅ）及びケトチフエン（ｋｅｔｏｔｉ
ｆｅｎ）等が挙げられる。

本発明のブローリポソーム組成物とスプレー可能な組成
物は（ａｌ　（ｂｌ　Ｉｃ）にその他罪揮発性の成分を
含有しても可い。具体的には、グリセリル　トリパルミ
テー）　（ｇｌｙｃｅｒｙｌ　ｔｒｉｐａｌｍｉｔａｔ
ｅ）やソルビタン脂肪酸エステル等の脂肪酸エステルが
重量（成分１ａｌ　（ｂ）　ＩｃＩのトータル重量にて
）にて２５喘以下含むことが望ましい。例えば、これら
物質の１つは商標・名５ＰＡＮで販売されている。５Ｐ
ＡＮを重量にて５〜１５％含むことによって空間容積は
増大し、取込み率は上昇する傾向にある。この効果は安
いグレードの膜脂質を用いたときに特に著しい。

何故この様な効果が得られるのかわからないが、ＳＰＡ
’Ｎが過度の攪拌を受ける試料に対して特に有効である
という事実から、５ＰＡＮはいくつかの点でリポソーム
を強化するものと思われる。

コレステロール等の天然及び合成の植物性脂肪及び油は
、リポソーム剤に従来から加えられて２す、必要に応じ
Ｃ本発明の組成物にあっても、約２分の１以下の膜脂質
と置き換えて含有させることかできる。曲標名ＴＷＥＥ
Ｎにて販売されている高いＨＬ　Ｂ界面活性剤等は必要
でもなければ望ましくもなく、却って本発明の組成物の
中に含まれると、水性分散剤中のリポソームは成分ｔａ
ｇ　［１］）　（ｃ）の重量にて１〜２％以下の量が反
対に凝集することになる。例えば、ステアリルアミンと
ジ−セチル燐酸塩のネットバランスを変える少量の物質
を、この目的のために重量にて約２０％以下の成分（ａ
）（ｂｌ　（ｃ１の中に含めることができる。コレステ
ロール、ステアリルアミン及び七チル燐酸塩等の添加剤
を投入してリポソームの安定性を改善させることもでき
る。

本発明のリポソーム分散剤は薬用として内科及び外科の
両方に適用することができる。これらは又例えば診断学
、殺虫剤、園芸等のその他の分野に於いても潜圧的な価
値を有している。最近はリポソームを、１つの又はその
他の生物学的特性によって利益をもたらす化合物例えば
薬物、蛋白質、酵素、ホルモツ、ビタミン、マーカー化
合物の担体（ｃａｒｒｉｅｒｓ）として使用することに
関心が高まっている。

生物学的に利益をもたらす化合物といった広いグループ
の中には、人間及び家畜用の薬剤を含むものであるがこ
れに限定するものではない。なお、本明細薔中では「生
物学的に活性な化合物」と称している。多くの場合、生
物学的に活性な化合物は希釈可能な組成物又はエアゾル
組成物の中に含める必要がある。リポソーム分散剤の取
込み率をどのようにして最大ならしめるかについては、
活性成分の特性によって決められる。油溶解性の成分は
、成分（ａｌと（ｂ）の混合物中で最も良く石ける。

不溶性の成分を、成分ｔａＪと（ｂ）の混合物中でと（
微小な粒子の形にて分散させることもできる。水溶性の
成分を成分（ａｌとｔｂ）の混合物に濃縮した水溶液と
して加えることもできる。本発明の組成物は最初は膜脂
質を有機溶剤の中で分解させることによって調製するこ
とが望ましい。これは室温でも或いは高い温度でも行な
うことができるが、窒素の存在ドで行なうのが望ましい
。その他好脂性の成分、例えば５ＰＡＮ等の脂肪親和性
の薬剤をこの段階で添加し、次に必要な分量の水を加え
混合物を平衡にさせる。なお、ここで用いられる水とい
う言葉には緩衝溶液や、活性成分の溶液の様な水性の液
体を含むものである。親水性の薬物を加える場合、最少
量の水に該成分の溶液を加えることによって行なうのが
望ましい。混合物を平衡にさせた後、追加の水を加える
とブローリポソーム組成物が生じる。

ブローリポソームの組成物は約５０〜６０℃の高い温度
では殆んど透明な液体である。水分の量次第では、室温
まで冷却されると組成物の中には層か分離するものがあ
る。この層の分離は有害なものでなく、過剰の水の添加
によって分散を一層容易にしてリポソームを形成する。

過剰の水（ここで用いられる水には緩衝剤溶液等の水性
の液体を含むものとする）を加えると、層は再び配列し
直されてリポソーム分散剤が形成される。ある程度攪拌
することによって良く分散するが、攪拌はほとんど行な
わなくても、又全（行なわなくても可い。過度の攪拌を
行なうとリポソームは破壊し、取込み率を低下させるこ
とになる。

分散は室温のときが、より速く且つより容易に行なわれ
るけれども、室温或は高温に於て過剰の水を加えること
もできる。或は又この種の液状のブローリポソーム組成
物を水成環境の中にスプレーすることによりリポソーム
分散剤に変えることもできる。

多（の場合、限られた量の活性成分（例えば薬物）をで
きるだけ多（捕獲しつるようにリポソームを調製するこ
とができる方法について経済的に検討を加える必要があ
る。薬物の取り込む量が最大となるように、ブローリポ
ソームの調製、希釈養生法、リポソームの内側と外側の
浸透圧のバランス制御、膜脂質の選択、表面活性剤／安
定剤の使用、表面の電荷平衡を変えること等、種々の条
件を最適なものとする必要がある。脂質と薬物の比が５
：１以下であれば、さしたる困難もなくかかる目的を達
成することができる。

一方、例えば薬物が安いとか、或はたやすく再生しつる
ような場合には取込み率は重要なことではない。かかる
場合、より高レベルの薬剤を用いたり、或は該薬剤を緩
衝剤と一緒に用いてブローリポソームの組成物からリポ
ソーム分散剤を形成することができる。必要に応じて、
濾過、透析、或は遠心法等によって過剰の薬剤を除去し
再使用することもできる。

リポソーム分散剤に於て、得られた胞の大部分は直径が
０．１から２．５ミクロンの範囲内である。

粒子の平均サイズは一般的に０．２〜０，７ミクロンの
範囲内であって、更にサイズを小さくしたい場合には分
散剤を膜状のフィルターを通して押し出せばよい。肥は
しばしば２つの集団を形成することが認められる。すな
わち、平均直径が約１．８ミクロンで取り込まれた水性
の液体の約３分の１を含有する大きな粒子の集団（もっ
とも、かかる粒子の数はトータル数の約５％を占めるに
すぎない。）と、平均直径が約０．２ミクロンで取り込
まれた水性の液体の約３分の２を含有する小さな粒子の
集団である。胞は一般的には幾つかの脂質から成る複合
層を含み、膜脂質１グラムにつき少くとも２ｍｌ、場合
によっては４〜８　ｍｅもの水性の液体を取り込む。こ
こで空間の容積は、放射性を持たせて検出可能とした（
ｌａｂ’ｅｌｌｅｄ）イヌリンを水性のリポソーム分散
液に加えるという標準的な方法によって測定した。これ
らリポソームの分散液は、脂質の溶剤である水混和性の
有機液体、すなわち最初のブローリポソーム或はスプレ
ー可能な組成物である成分（ｂｌを検出可能な量だけ含
有している点に特徴がある。従来のリポソーム分散剤は
水混和性の有機液体を全く含有していないものが殆んど
である。これらのもの（すなわちエタノール注入技術や
ＥＰＡ６９３０７によって作られたもの〕は、サイズが
小さく且つ更間容積の小さい胞となる。

本発明の特徴の中でも特に注目されるべき点として、経
口投手の薬剤どして用いることができるということが挙
げられる。例えば、ブローリボツムの組成物をカプセル
の中に入れれば丸ごと呑み込むことができる。カプセル
の仕様に応じて、中身は胃腸管のどこかで解放され、体
内（ｉｎ−ｖｉｖｏ　）で肥を形成する。薬剤は胞の脂
質の復層の中で保護されたままである。吸収されにくく
不安定な薬剤（例えばインシュリン）をこのように保護
することによって吸収の手助けとなりうることが示唆さ
れる。これに関連しＣＳ肥は水性環境のイオン強度に関
係なく　ｐｆ（が３．２〜８．６の範囲内で形成されう
ろことが認められた。肥が目然発生的に形成された後に
水性の環境の中で残浮する一切の［自由（ｆｒｅｅ）　
Ｊな薬剤は非毒性であるから、除去する必要がないもの
と考えられる。或は又、リポソームの分散剤を試験管内
（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）で作り出すことができる。製法が
単純なので、分散剤は使用の直前に作ること１ができる
。従って、従来のリポソームの分散剤が本来的に有して
いた問題、すなわち保存の安定性に乏しいという問題を
解消することができる。しかし、本発明にかかるリポソ
ームの分散剤は保存安定性にも優れることを示している
。

（以下余白） 次なる実施例は本発明を例示するものである。

実施例１ （１）一般的な方法と術語 リポソームはブローリポソームの技術を用いて作った。

この技術はブローリポソームを脂質（レシチン）と、エ
チルアルコールと、水とを適当な比率で結合することに
よって調製し、該ブローリポソーム組成物に水を加える
ことによって行なうものである。これらの混合物には、
水溶性の薬剤のモデル（ｍｏｄｅｌ）として作用するた
めにグリコース５％（Ｗ／Ｗ）を含有している。種々の
試料を調製してテストを行なったが、レシチンＬ、アル
コールＡ１及び水Ｗの重量の基本的な比率は同じであっ
て、例えばＬ：Ａ：Ｗ１５０：４０：１０である。

すべての場合に１０％（ｗ／ｗ　’）の５ＰＡＮを加え
た。

なお、この成分は調製された基本的な組成物に添加され
るべきものと考えられ、独立した存在であることが示さ
れた。

（２）　　ブローリポソーム組成物の・ブローリポソー
ムは１〜５グのバッチ（ｂ　ａｔｃｈ）にて作られた。

所定の調製物を作るのに必要とされる適当な重量のレシ
チンを、Ｎ２の存在下、約５０〜６０℃の温度の相当量
のアルコール中に先ず溶かす。次に水分を２つのパート
に分けて加えた。第１のパートは５％（Ｗ／Ｗ）濃度の
グルコースを生ずるのに必要とされる適当量のグルコー
ス溶液（５００Ｗ／ｍ／りであって、第２のパートは最
終的な調製物を作るのに必要とされる蒸留水の量である
。調製物１グラムにつき５ＰＡＮ１００７ｒ９をレシチ
ンと共に加えた。Ｌ　：　Ａ　：　ｗ、’ｓｏ　：　４
０：１０に５ＰＡＮ　１０％を加えた代表的な調製物の
１２当たりの組成は次の通りである。

５００■　　レシチン（ＢＤＨ卵黄） ４００Ｗｉ　　　（５００μＩりエチルアルコール１０
０■　　　（１００μｊ）グルコース（５００ｒＩＩｇ
／ｍｌ）水溶液 １００η　　Ｓ　ＰＡＮ ブローリポソーム組成物は、次のリポソーム生成段階へ
移す前にＮ２の存在下で更に１５分間平衡させた。

（３）　　リポソームの調製 平衡にさせた後、ブローリポソーム組成物は２５℃まで
冷却した。次にリポソームは５ＱｍＭの燐酸塩の緩衝剤
（ｐＨ７，４）を２段階に分けて調製した。第１の段階
では、４−の緩衝剤を加えた（ＳＰＡＮ１０％を含有す
るブローリポソーム組成物１，１りについて）。この添
加物は下の方に落ちて行くから、試料は添加中と更に添
加後の１分間激しく手で揺すった。試料は次に２５℃に
て３０分間平衡させ、１５分後と３０分後の夫々につき
１分間更に揺すった。第２段階では、ブローリポソーム
組成物１７当たり６７！の緩衝剤を加え、試料は更に３
０分間２５℃にて平衡させた。試料は１５分毎に１分間
手で揺すった。

（４）取込み能力の測定 取込み能力（Ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ　Ｅｆｆｉｃｉｅｎ
ｃｙ）は、調製物に加えられたグルコースとリポソーム
の中に残ったものとの比率として計算されるものであっ
て、ゲルを濾過する分離管（ｃｏｌｕｍｎ）を用いて、
リポソームを捕獲されなかった過剰のグルコースの中か
ら分離し、自由なグルコースと捕獲されたグルコースの
割合を酸素の作用によって測定することにより求めるの
である。

リポソーム分散剤の部分標本０．５　ｍｌを、５ｅｐｈ
ａｄｅｘＧ−５０（ファイン）を含有する濾過用分離管
（長さ２０■、直径１．０　ｃｍ　）の下を通過させ、
５０ｍＭの燐酸塩緩衝剤（ｐＨ７，’４）と平衡させた
。リポソームは同じ緩衝剤を用いて溶離（ｅｌｕｔｅ　
）　した。

リポソーム分はオパールの様な閃光を放つので容易に識
別ができ、最初は通常５−程度が集められた。自由なグ
ルコースを分析するために、リポソームの溶離後３ｔｎ
ｌずつ連続的に集めた。

（５）取込み能力 広範囲に亘って試料を調製し、それら　・試料について
行なった測定結果を第１表に示す。これらはエタノール
を用いて行ったものである。しかしながら、他の水混和
性の液体を用いた場合、実施例１６〜１９に示される如
く、取込み率は幾分高（なる様だが、略同じようなパタ
ーンを示すであろうことを予想することができる。溶剤
の混合物を用いることもできる。エタノールよりも分子
量の大きな溶剤を用いると、リポソームを確実に自然発
生させるにはエタノールを用いた場合よりも多くの溶剤
を必要とすることが認められる。

ブローリポソームの組成比を変えて取込み能力を調べた
結果を第１表に示す。

（以下余白） 第　　１　　表 ※全での試料には５ＰＡＮＩＯ％（ｗ／ｗ）が含まれで
いる。

これら一連の実験結果をまとめ、取込み能力を３相のダ
イアグラムに表わしたものを第１図に示す。第１図に於
いて、領域１はグルコースの取込み率が４０〜５０％の
リポソームが得られた組成物を示している。領域２．３
．４はグルコースの取込み率がそれぞれ、３０〜４０％
、２０〜３０％及び２０％以下の組成物であることを示
している。得られた結果についてＢＤＨ卵黄レシチンの
バッチを用いて再現性を調べたところ、良好であッｆニ
ー（＋／−５％）。しかし、バッチ間（ｉｎｔｅｒ−ｂ
ａｔｃｈ）には変動があった。Ｌ：Ａ：Ｗが５０：４０
：１０のブローリポソームから形成されたリポソームに
ついて大きな関心が持たれた。しかしながら、その他の
ブローリポソームから形成されたリポソームは構造が異
なるのではないかと疑うことは根拠がないことである。

リポソームの冷凍破断箇所のレプリカの代表的な電子顕
微鏡写真を第２ａ図、第２ｂ図及び第２Ｃ図に示す。リ
ポソームは通常は直径０．１５〜２．５μであって、中
央部の水性のコアの周りに３つ又は４つの二重層が存在
して現われる。第２Ｃ図のリポソムムの破断面に於いて
リポソームはかなりの水量を含んでいることを示してい
る。

（６）　　リポソーム生　に伴う事　の経過について水
（又は緩衝剤）をブローリポソームに加えたときに生じ
る事象について、　　ｎ０ｍ、ｒ・と電子顕微鏡検査法
を用いて調べた。使用した試料の殆んどのものが、高温
（５０〜６０℃）では透明な液体である。水を殆んど含
まない試料は２５℃まで冷却されても透明のままである
が、かなりの水（４０％以上）を含んだ試料は相が分離
するという傾向を示した。冷却速度の違いによって、透
明なゲル（冷却速度が遅い）を分離したり、ファツジ（
ｆｕｄｇｅ）状の析出物（冷却速度が速い）を分離した
りする。緩く攪拌すると、両方の場合とも均一な硬さの
ペーストが形成される。

２５℃のブローリポソーム組成物に過剰の水を加えた場
合にも、同じ様な相の分離が生じる。

Ｐｎ６ｍ、ｒ、の測定によれば、この分離は脂質の二重
層の生成に対応することを示している。二重層の析出は
３０〜４０％（ｗ／ｗ）の水を加えた後に生じる。

冷凍破面を電子顕微鏡でみれば、二重層は積み重なって
形成されるが、リポソームは殆んど形成されていないこ
とを示している。リポソームのポケットは析出したばか
りの新鮮な試料に認められることもあるが、比較的稀な
ことである。更に水を加えて攪拌すると、通常はリポソ
ームが形成される。然し乍ら、試料の水分含有量が５０
〜６０％未満の場合はリポソームは殆んど認められない
。

第３図にリポソームが形成される過程を図式化して示し
ている。第３図にブローリポソーム溶液は通常は透明な
液体である（ａ）。少量の水を加えると二重層が拡がっ
てネットワークが形成される（ｂ）。

更に水を加えると、二重層の中に水封入体が取り込まれ
る（ｃ）。攪拌するとこの構造は壊れてリボン了ムが形
成される（ｄ）。この図は、ｎ、ｍ、ｒ、と電子顕微鏡
の調査結果と一致しており、ブローリポソームから形成
されたリポソームは多量の水性空間を含み、二重層の厚
みは殆んど厚くならないという事実を説明している。こ
のプロセスに於いて、水混和性の有機液体の役割は、最
初は脂質を束縛されない自由なネットワークとして確実
に析出させ、過剰の水を効果的に浸透させることにある
。

なお、ブローリポソームの組成が異なれば当然のことな
がら、この事象が起こる順序は若干変動する。脂質濃度
が非常に高い試料の場合は容易に溶液とはならず、析出
した二重層は緊密にパックされた積層体となって水が容
易に浸透しない。水含有量が多い試料はリポソームが形
成される最終段階までに閉じてしまう傾向にあり、一方
アルコール含有量の多い試料は過剰の水を用いなければ
析出し難い。

本発明のブローリポソームによる方法では、簡単な技術
を用いて安血な原料から多量のリポソームを調製すると
いう素晴らしい方法を明らかにするものである。本方法
によって形成されたリポソームは内部容積が大きく、薬
剤を包みこむには理炉的である。ブローリポソーム組成
物に薬剤を一体化することにより、廃物部が最少にし薬
剤の充填度を高める（３０〜４０％）ことができる。或
は又、薬剤か安価で高い捕獲率又は取込み能力を必要と
しない場合、薬剤はブローリポソーム組成物からリポソ
ームの形成に於いて用いられる水相と共に加えることも
できる。過剰の薬剤はその後、濾過、透析又は遠心分離
によって除去し高濃度の活性成分を含有したリポソーム
が残る。

実施例２〜６ スプレー可能な組成物を次のとおり調製した。

成分　　　　濃　度（ｗｔ％） 卵黄レンチン　　　２０　　　１５　　２０　　　１５
　　　１５ＳＰＡＮ４０　　　　５　　　−−　　　−
　　−　　−水　　　　　　　　　１０　　　１０　　
　２０−１０ブチル ■。キット、、エア　　０．１　　　　　０．１　　　
　０．１　　　　　０．１　　　　　０．１テオフイリ
ン　　　　　　　　１．０　　−　　　−−　　　１．
０サルブタモール　　−−０，２５−−−ベクロメタソ
ーネ　　１．０　　　−　　　−　　　１．０　　　　
−ブーピレングリコール　−　　　　１０　　　　−　
　　　１０　　　　７３．９無水アルコール　　６３，
９　　６３，９　５９．６５　　７３．９　　　　一実
施例２又は実施例５の試料の１重量部はアークトン（Ａ
ｒｃｔｏｎ）　１２の９重量部と混合した。１０マイク
ロリツトル容量のエアゾール流量バルブ４１回当たり（
ｐｅｒ　ｄｏｓｅ　）、１００マイクログラムのベクロ
メタソーネを噴出する。

実施例３又は実施例６の試料の２重量部は、アークトン
１２とアークトン１１４の混合物の８重量部と混合した
。１００マイクロリツトルの分量番こはテオフィリン２
００マイクログラムが含まれている。

実施例４の試料の４重量部をアークトン１２の６重量部
と混合した。１００マイクロリツトルの分量にはサルブ
タモル　１００マイクログラ１１カ含まれている。

実施例７〜１３ 薬剤とブローリポソームの組成を変え、実施例１におい
て説明した項目（１）〜（４）と同じ手順を繰り返した
。下記の点を除いては、標準のブローリポソームとして
次のものを用いた。

卵黄レシチン　　５００■− ３ＰＡＮ　４０　　　　１００”ｊ エチルアルコール　　　４００Ｗ！ｇ 薬剤を含む水　　１００■ どの場合も、ゲル−濾過の代わり番こ遠ノ已１分離法を
用いてリポソーム懸濁液を二相番こ分離した。懸濁液の
遠心分離は１００，０ＯＯＧで４５分間行なった。

上澄液を薬剤成分とするためをと分析した。上澄液と沈
澱物との重量を記録し、沈澱物（残留％）と関連する薬
剤の％を計算した。

１１ｊユ 薬剤　　　グルコース　２５及び２５０■／７！残留　
　１８％ 実施例８ 薬剤　　　テトラサイクライン　６及び６０”１９／ｍ
／！残留　　４３％ １１月１ 薬剤　　　カーポジスティン　１１１ｖ／ｍｊ＋残留　
　２３％ 実施例１０ 薬剤　　　ｐ−アミノ安息香酸　５ダ／−残留　　２３
％ 実施例１１ 薬剤　　テオフィリン　５．９η／７！残留　　２４％ 実施例１２ 薬剤　　テオフィリン　５．９■／ゴ 膜脂質　　卵黄レシチンに代えて使用したジステアリル
　ジメチルアンモニウム　クロライド残留　　２０％ 実施例１３ 薬剤　　テオフィリン　５．９キ／ゴ ブローリポソーム　　５ＰＡＮ　４０を削除残留　　２
２％ 実施例１４〜１９ ブローリポソームの組成を変えて、実施例１において記
載した項目ｆｌ）〜（４）の手順を繰り返した。

グルコースを薬剤として用いた。グルコースの残留％は
透析によって求めた。

実施例１４ プ０−１ノボ゛′−４卵黄レシチン　　２８０ｗ９の組
成　　　　っ、ユｆ。−＃１４０■燐酸ジセチル　　　
８０η エチルアルコール　　　４００ｗ１ 薬剤を含む水　　１００〜 薬剤　　　　　グルコース　１００ｍｇ／ｆｎｌ残留　
　　　　３２％ 実施例１５ ブローリポソーム　　卵黄レシチン　　　４５０■の組
成　　　　　グリセリル　　　　　　９０■トリパルミ
テート エチルアルコール　　３７０Ｗ９ 薬剤を含む水　　　９０キ 薬剤　　　　　グルコース　１００■／−残留　　　　
　２２％ 実施例１６ ブローリポソーム　　卵黄レシチン　　、５００■の組
成　　　　　　　エチレン列コール　　４００ｒＩＩｇ
薬剤を含む水　　１００”’９ 薬剤　　　　　グルコース　１００■／−残留　　　　
　３０鳴 実施例１７ ブローリポソーム　　　ホスファチシフレコリン　　５
００Ｗ９の組成　　　　　　エ、ｆ２．ア）、：、−）
ウ　　、。。１．ｖ薬剤を含む水　　　１００〜 薬剤　　　　　グルコース　５００Ｔｎ９／７！残留　
　　　　４０％ 実施例１８ ブローリポソーム　　卵黄レシチン　　　　５００■（
７）　ｍ　成力ピレングツコール　　　　４００〜薬剤
を含む水　　　１００■ 薬剤　　　　　グルコース　１００”Ｐ／−残留　　　
　　３５％ 実施例１９ ブローリポソーム　　卵黄レシチン　　　　５００１Ｉ
ｖノ組成インプロノ寸ノール　　　４００ｍｇ薬剤を含
む水　　　１００キ 薬剤　　　　　グ／ｌ／：］−ス１００ｍｇ／＋ｎｌ残
留　　　　　３６％

【図面の簡単な説明】

第１図はグルコースの取込み率が高いリポソーム分散剤
を生じる領域を示すものであって、脂質／アルコール／
水（Ｌ：Ａ：Ｗ）の三相ダイアグラム、第２ａ乃至第２
Ｃ図は（Ｌ：Ａ：Ｗ１５０：４０：１０）の組成たるブ
ローリポソームから調製したリポソームのレプリカの冷
凍破断面の電子顕微鏡写真、第３図はブローリポソーム
組成物からリポソームの形成過程を示すダイアグラムで
ある。 出願人　ファレスファーマスーチ力ルリサーチェヌブイ 第１［］　　　　　　　　　　　　　アルコーノＬ　　
　（ｗ／νＶ）図面の浄書（内容１蛮λなし） 第２図 手続補正命令発ζ；ゝ 昭和６０年７　月２４日

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）過剰の水の存在下にて胞又はリポソームを自然発
   生的に形成し、 （ａ）少なくとも１種の膜脂質と、 （ｂ）該脂質の溶剤である少なくとも１種の水混和性の
   有機液体と、 （ｃ）４０重量％以下の水 とを含み、（ａ）と（ｂ）の重量比は４０：１乃至１：
   ２０である均一な混合物から成る組成物。
2. （２）（ｃ）の比率は５〜４０％であって、希釈可能で
   ある特許請求の範囲第１項に記載の組成物。
3. （３）エアゾル組成物として用いられ、揮発性の液体噴
   射薬中にて、 （ａ）少なくとも１種の膜脂質と、 （ｂ）該脂質の溶剤である少なくとも１種の水混和性の
   液体と、 とが含まれており、水は（ａ）（ｂ）（ｃ）のトータル
   重量が２０重量％以下、（ａ）と（ｂ）の重量比率は４
   ０：１乃至１：２０である特許請求の範囲第１項に記載
   の組成物。
4. （４）２５％以下の脂肪酸エステルが存在する特許請求
   の範囲第１項乃至第３項の何れかに記載の組成物。
5. （５）成分（ｂ）はエタノール又はプロピレン　グリコ
   ールである特許請求の範囲第１項乃至第４項に記載の組
   成物。
6. （６）コレステロールがステアリルアミン及び／又は燐
   酸セチルと共に存在している特許請求の範囲第１項乃至
   第５項の何れかに記載の組成物。
7. （７）生物学的に活性な化合物が存在している特許請求
   の範囲第１項乃至第６項の何れかに記載の組成物。
8. （８）成分（ａ）は３５〜５５重量％、成分（ｂ）は３
   ０〜５５重量％、水は５〜２０重量％である特許請求の
   範囲第２項又は第４項乃至第７項の何れかに記載の組成
   物。
9. （９）成分（ａ）と（ｂ）の比率は１：２乃至１：１０
   である特許請求の範囲第３項乃至第７項の何れかに記載
   の組成物。
10. （１０）エアゾル状の液体粒子は１個の平均直径が８ミ
    クロン以下である特許請求の範囲第１項乃至第９項の何
    れかに記載の組成物。
11. （１１）特許請求の範囲第１項又は第２項又は第４項乃
    至第８項の何れかに記載の組成物を過剰の水と混合する
    ことによってリポソームの水性分散剤を作る方法。
12. （１２）混合工程はインビトロで行なわれる特許請求の
    範囲第１１項に記載の方法。
13. （１３）混合工程はインビボで行なわれる特許請求の範
    囲第１１項に記載の方法。
14. （１４）直径が約０１〜２．５ミクロンの範囲である膜
    脂質から形成され、脂質１グラムあたり２ｍｌ以上の水
    性液体が取り込まれたリポソームを含む水性のリポソー
    ム分散剤であって、水性分散剤には脂質の溶剤である水
    混和性の有機液体が検出可能な量だけ存在することを特
    徴としている。