JPS6141555B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

この発明はプリンヌクレオシド−5′−モノフオ
スフエートの製造法に関する。 プリンヌクレオシド−5′−モノフオスフエート
（以下プリンヌクレオチドと記す）は、調味料、
医薬等の用途があり、プリンヌクレオシドを、ｐ
−ニトロフエニルリン酸（特公昭39−29858）、無
機リン酸（特公昭42−1186）等をリン酸供与体と
して生化学的にリン酸化し、プリンヌクレオチド
を製造する方法が知られている。 本発明者らはシユードモナス属、エンテロバク
ター属、エロモナス属、エルビニア属、プロテウ
ス属、エシエリヒア属、アシネトバクター属、フ
ラボバクテリウム属及びセラチア属の微生物よ
り、プリンヌクレオシドをアセチルリン酸をリン
酸供与体として高い効率でリン酸化して、プリン
ヌクレオチドを生成する能力を有する多数の微生
物を見い出した。 即ち、この本発明はシユードモナス属、エンテ
ロバクター属、エロモナス属、エルビニア属、プ
ロテウス属、エシエリヒア属、アシネトバクター
属、フラボバクテリウム属又はセラチア属に属し
プリンヌクレオシドとアセチルリン酸とよりプリ
ンヌクレオチドを生成せしめ、これを採取するこ
とを特徴とするプリンヌクレオシド−5′−モノフ
オスフエートの製造法である。 本発明において使用される微生物は、エルビニ
ア属、シユードモナス属、プロテウス属、エシエ
リヒア属、アシネトバクター属、セラチア属、エ
ロモナス属、エンテロバクター属、又はフラボバ
クテリウム属に属し、ヌクレオシドとアセチルリ
ン酸からヌクレオシドに対応するプリンヌクレオ
チドを生成する能力を有する微生物である。 例えば、以下のものがある。 エルビニア・ヘルビコーラ ATCC 14537 エルビニア・ヘルビコーラ ATCC 14536 シユードモナス・マルトフイリア ATCC 17806 プロテウス・ミラビリス ATCC 15290 エシエリヒア・コリ ATCC 11246 アシネトバクター・カルコアセテカス ATCC
9036 セラチア・マルセスセンス ATCC 14226 エロモナス・パンクタータ ATCC 11163 エンテロバクター・エロゲネス ATCC 13048 フラボバクテリウム・フアスカム ATCC 14233 上記微生物を培養するための培地としては、炭
素原、窒素源、無機イオンなどを含む通常の栄養
培地が使用できる。炭素源としては、例えばグル
コース、シユクロース、デキストリン、糖密等の
糖類、フマール酸、クエン酸等の有機酸エタノー
ル、グリセリン等のアルコール等が使用できる。
窒素源としては、例えば塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウ
ム塩、アンモニア水アンモニアガスなどが好適で
ある。 必要ならば、更にアミノ酸、ビタミン等、及び
これらを含有する酵母エキス、ペプトン、肉エキ
ス、コーンステイープリカーなどの有機微量栄養
素が必要により適宜培地に添加される。 無機イオン酸としては、例えば第１鉄イオン、
マグネシウムイオン、マンガンイオン、リン酸イ
オン、カリイオンなどが必要により培地に適宜添
加される。 上記微生物の培養は常法によれば良く、例えば
培地のPHを５〜８とし、微生物を接種後、20〜40
℃にて0.5〜５日間好気的に培養すれば、より好
ましい結果が得られる。 本発明の微生物を水溶液中にプリンヌクレオシ
ドとアセチルリン酸とに作用せしめる方法はかく
して得られた培養液、この培養液から採取した菌
体又はこの菌体の処理物（例えば、洗浄菌体、ア
セトン乾燥菌体、凍結乾燥菌体、菌体破砕物、菌
体の自己消化物菌体のリゾチーム処理物、菌体の
超音波処理物、菌体を固定化したもの）、更にこ
れら菌体からえられた酵素蛋白区分その不溶化物
等を、水溶液中にてプリンヌクレオシドとアセチ
ルリン酸とに接触せしめればよい。 又、微生物の培養途中、微生物の生育を阻害し
ない程度にプリンヌクレオシドとアセチルリン酸
とを適宜培地に添加してプリンヌクレオシドとア
セチルリン酸とに本発明の微生物を作用せしめて
もよい。 本発明のプリンヌクレオシドとしては、プリン
リボシド、イノシン、グアノシン、キサントシ
ン、アデノシンなどが含まれる。従つて、プリン
ヌクレオチドとしては、プリンリボシド−5′−モ
ノフオスフエート、イノシン−5′−モノフオスフ
エート、キサントシン−5′−モノフオスフエー
ト、アデノシン−5′−モノフオスフエートなどが
生産される。 プリンヌクレオシドの使用量はいくらでもよい
が、あまり少い量では効率が悪く、あまり高い量
ではプリンヌクレオチドの収率が低下する。アセ
チルリン酸の使用量は通常プリンヌクレオシドの
等モル以上である。 反応は通常、温度20〜60℃、より好ましくは30
〜50℃、PH５〜11より好ましくはPH７〜10で行
う。反応時間は静置、撹拌、滴下等の手段、ある
いは菌体の状態によつて異るので一様ではない
が、バツチ法では通常１〜100時間程度である。 反応液中に生成蓄積したプリンヌクレオチドの
分離精製は通常のイオン交換樹脂を用いる方法や
その他の通常の手段のいずれもが使用できる。 実施例 １ 肉エキス1.0ｇ/dl、ペプトン1.0ｇ/dl、グルコ
ース1.0ｇ/dl、食塩0.5ｇ/dlを含有する栄養培地
（PH7.0）を500ml肩付きフラスコに50ml宛入れ、
120℃にて15分間加熱殺菌した。これに、斜面培
養したエルビニア・ヘルビコーラ ATCC 14537
を移種し、30℃で24時間、振とう培養した。かく
して得られた菌体を遠心分離器で集め、蒸留水に
懸濁して菌体懸濁液を調製した。 グアノシン4.0ｇ、アセチルリン酸カリウム4.0
ｇを含む反応液800mlを用意し、PHを9.0に調節し
た後、菌体懸濁液200ml（乾燥菌体重量換算2.5
ｇ）を添加し、反応PHを9.0に再調節してから、
45℃に３時間振とうしつつ保つた。その結果、反
応液中に0.31ｇ/dlのグアノシン−5′−モノフオ
スフエートが蓄積された。 実施例 ２ 実施例１と同様な方法で第１表に示す微生物を
培養し、菌体懸濁液を調製した。 ヌクレオシドとしてはイノシン１ｇ、グアニン
１ｇ、キサントシン１ｇ、又はアデノシン１ｇを
用い、それぞれについてアセチルリン酸カリウム
１ｇを含む反応液40mlを用意し、これに各細菌の
菌体懸濁液10ml（乾燥菌体重量換算120mg）を添
加して反応PHを9.0に調節後、45℃で４時間静置
した。その結果、反応終了液中に、第１表に示す
如くプリンヌクレオチドが生成蓄積された。

【表】 実施例 ３ エルビニア・ヘルビコーラ ATCC 14537を実
施例１と同様な条件下で培養し、培養液を得た
（実施例１の如く、菌体懸濁液は調製しない）。一
方、イノシン１ｇ、アセチルリン酸カリウム１ｇ
を水約50mlに溶解させ、溶液のPHを予め10.0に調
節した後、上記培養液50mlと混ぜ、混合液（100
ml）のPHを10.0に再調節した。これを45℃にて５
時間振とうした結果、0.31ｇ/dlのイノシン−
5′−モノフオスフエートが生成蓄積された。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ シユードモナス属、エンテロバクター属、エ
   ロモナス属、エルビニア属、プロテウス属、エシ
   エリヒア属、アシネトバクター属、フラボバクテ
   リウム属又はセラチア属に属し、プリンヌクレオ
   シドとアセチルリン酸とよりプリンヌクレオシド
   −5′−モノフオスフエートを生成する能力を有す
   る微生物を、水溶液中にてプリンヌクレオシドと
   アセチルリン酸とに作用せしめてプリンヌクレオ
   シド−5′−モノフオスフエートを生成せしめ、こ
   れを採取することを特徴とするプリンヌクレオシ
   ド−5′−モノフオスフエートの製造法。