JPS58116698A - プリンヌクレオシド−5′−モノフオスフエ−トの製造法 - Google Patents
プリンヌクレオシド−5′−モノフオスフエ−トの製造法Info
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- JPS58116698A JPS58116698A JP21130581A JP21130581A JPS58116698A JP S58116698 A JPS58116698 A JP S58116698A JP 21130581 A JP21130581 A JP 21130581A JP 21130581 A JP21130581 A JP 21130581A JP S58116698 A JPS58116698 A JP S58116698A
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- purine
- purine nucleoside
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明はプリンヌクレオシド−51−モノフォスフェ
ートの製造法1こ関する。
ートの製造法1こ関する。
ブリンヌクレオンドー52−モノフォスフェート(μ下
、51−プリンヌクレオチドと略す)は調味料、医薬等
の用途があり、プリンヌクレオシドを生化学的にリン酸
化して5゛−プリンヌクレオチドを製造する方法として
リン酸供ケ一体としてp−ニトロフェニルリン酸を使用
する方法(特公昭39−29858)、無機リン酸を使
用する方法(特公昭42−+18fi)、再tこアセチ
ルリン酸を使用する方法(特開昭56=82098号公
報)等が知られている。生化学的リン酸化法は化学的リ
ン酸化法tこ比べ利点が多いが、工業的に実施するには
多量の微生物菌体(あるいは酵素)を必要とし経済的に
不利であった。そこで、本発明者等はこの点t3ついて
種々研究した結果、プリンヌクレオシドをリン酸Cヒし
て5゛−ヌクレオチドを生成する住方を有する微生物を
グルコースを実質的に含有しない栄養培地で培養するこ
とにより、効率的にリン酸化できることを発見し本発明
を完成する1こ至った。
、51−プリンヌクレオチドと略す)は調味料、医薬等
の用途があり、プリンヌクレオシドを生化学的にリン酸
化して5゛−プリンヌクレオチドを製造する方法として
リン酸供ケ一体としてp−ニトロフェニルリン酸を使用
する方法(特公昭39−29858)、無機リン酸を使
用する方法(特公昭42−+18fi)、再tこアセチ
ルリン酸を使用する方法(特開昭56=82098号公
報)等が知られている。生化学的リン酸化法は化学的リ
ン酸化法tこ比べ利点が多いが、工業的に実施するには
多量の微生物菌体(あるいは酵素)を必要とし経済的に
不利であった。そこで、本発明者等はこの点t3ついて
種々研究した結果、プリンヌクレオシドをリン酸Cヒし
て5゛−ヌクレオチドを生成する住方を有する微生物を
グルコースを実質的に含有しない栄養培地で培養するこ
とにより、効率的にリン酸化できることを発見し本発明
を完成する1こ至った。
即チ、本発明はシュードモナス属、工/テロバクター属
、エロモナス属、エルビニア属、プロテウス属、エシェ
リヒア属、アシネトバクター属、フラボバクテリウム属
およびセラチア属に属しプリンヌクレオシドとリン酸供
σ1体とより51−プリ/ヌクレオチドを生成する能力
を有する微生物をグルコースを実質的1こ含有しない栄
養培地で培養し、該培養物を水溶液中でプリンヌクレオ
シド及びリン酸供学体tこ作用させて、51−プリンヌ
クレオチドを生成せしめ、これを採取することを特徴と
する5′−プリンヌクレオチドの製造法である。
、エロモナス属、エルビニア属、プロテウス属、エシェ
リヒア属、アシネトバクター属、フラボバクテリウム属
およびセラチア属に属しプリンヌクレオシドとリン酸供
σ1体とより51−プリ/ヌクレオチドを生成する能力
を有する微生物をグルコースを実質的1こ含有しない栄
養培地で培養し、該培養物を水溶液中でプリンヌクレオ
シド及びリン酸供学体tこ作用させて、51−プリンヌ
クレオチドを生成せしめ、これを採取することを特徴と
する5′−プリンヌクレオチドの製造法である。
本発明tこおいて使用される微生物は、エルビニア属、
シュードモナス属、プロテウス属、エシェリヒア属、ア
シネトバクタ−属、セラチア属、エロモナス属、エンテ
ロバクタ−属、又はフラボバクテリウム属に属し、ヌク
レオシドとリン酸供与体からヌクレオシドに対応するプ
リンヌクレオチドを生成する能力を有する微生物であり
、例えば次のような微生物が使用される エルビニア・ヘルビフーラ ATCC1
4537エルビニア・ヘルビコーラ A
TCC+4536シユードモナス・マルトフイリア
ATCC17806プロテウス・ミラビリス
ATCC15290エシエリヒア・コリ
ATCC+1246アシネトバク
ターeカルコアセテカス ATCC9036セラチア
・マルセスセンス ATCC14226
エロモナス・バンクタータ ATCC1
1163エンテロバクタ−・エロゲネス A
TCC13048フラボバクテリウム・ファスカム
ATCC142331−記微生物を培養するため
の培地は炭素源としてグルコースを使用しない栄養培地
が使用され、クルコースU、外の炭素源、例えばフラク
トース、ンユークロース、マルト−ス、ラクトース、キ
シロース、ソルビトール、マンニト−ル、リボース、ガ
ラクト−ス、ラムノース、アラビノース、マンノース等
の糖類、クエン酸、フマール酸、グルコノ酸等ノ有機酸
、エタノール、グリセリン等のアルコール等が炭素源と
して使用される。グルコースを使用した場合には他の炭
素源を使用した場合eこ比ベリン酸化活性が約偽u、下
と低く、他の炭素源を使用する際グルコースを加えると
リン酸化活性はグルコース無添加の場合に比べて著しく
低下してしまう。
シュードモナス属、プロテウス属、エシェリヒア属、ア
シネトバクタ−属、セラチア属、エロモナス属、エンテ
ロバクタ−属、又はフラボバクテリウム属に属し、ヌク
レオシドとリン酸供与体からヌクレオシドに対応するプ
リンヌクレオチドを生成する能力を有する微生物であり
、例えば次のような微生物が使用される エルビニア・ヘルビフーラ ATCC1
4537エルビニア・ヘルビコーラ A
TCC+4536シユードモナス・マルトフイリア
ATCC17806プロテウス・ミラビリス
ATCC15290エシエリヒア・コリ
ATCC+1246アシネトバク
ターeカルコアセテカス ATCC9036セラチア
・マルセスセンス ATCC14226
エロモナス・バンクタータ ATCC1
1163エンテロバクタ−・エロゲネス A
TCC13048フラボバクテリウム・ファスカム
ATCC142331−記微生物を培養するため
の培地は炭素源としてグルコースを使用しない栄養培地
が使用され、クルコースU、外の炭素源、例えばフラク
トース、ンユークロース、マルト−ス、ラクトース、キ
シロース、ソルビトール、マンニト−ル、リボース、ガ
ラクト−ス、ラムノース、アラビノース、マンノース等
の糖類、クエン酸、フマール酸、グルコノ酸等ノ有機酸
、エタノール、グリセリン等のアルコール等が炭素源と
して使用される。グルコースを使用した場合には他の炭
素源を使用した場合eこ比ベリン酸化活性が約偽u、下
と低く、他の炭素源を使用する際グルコースを加えると
リン酸化活性はグルコース無添加の場合に比べて著しく
低下してしまう。
炭素源a、外は通常の窒素源及び無機イオンが使用され
、窒素源としては、例えば塩化アンモニウム、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩、アン
モニア水、アンモニアガスなどが好適である。
、窒素源としては、例えば塩化アンモニウム、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩、アン
モニア水、アンモニアガスなどが好適である。
無機イオンとしては、例えば第1鉄イオン、マグネ/ラ
ムイオン、マンガンイオン、リン酸イオン、カリイオン
などが必要eこより培地1こ適宜添加される。
ムイオン、マンガンイオン、リン酸イオン、カリイオン
などが必要eこより培地1こ適宜添加される。
再eこ、必要ならば、アミノ酸、ビタミン等、およびこ
れらを含有する酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コー
ンステイープリカーなどの有機微’a″栄養素が適宜培
地1こ添加される。
れらを含有する酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コー
ンステイープリカーなどの有機微’a″栄養素が適宜培
地1こ添加される。
上記微生物の培養は常法tこよれば良く、例えば培地の
pHを5〜8とし、微生物を接種後20〜5− 4OCにて0.5〜5日間好気的ンこ培養すれば、より
好ましい結果が得られる。
pHを5〜8とし、微生物を接種後20〜5− 4OCにて0.5〜5日間好気的ンこ培養すれば、より
好ましい結果が得られる。
このよう?こして培養した微生物をプリンヌクレオシド
及びリン酸供学体tこ水溶液中で作用させて5′−プリ
ンヌクレオチドを生成せしめる方法は公知の方法tこ従
って行えば良く、例えば、微生物を培養して得られた培
養液、培養液から分離した微生物菌体、その他アセトン
乾燥菌体、凍結乾燥菌体、菌体破砕物、菌体の自己消化
物、リゾチーム処理物、等の菌体処理物、再1こは菌体
から抽出した酵素蛋白標品 等をプリンヌクレオシド及
びリン酸供怪体eこ水溶液中で接触させること1こより
5゛−プリンヌクレオチドが効率良く生成される。
及びリン酸供学体tこ水溶液中で作用させて5′−プリ
ンヌクレオチドを生成せしめる方法は公知の方法tこ従
って行えば良く、例えば、微生物を培養して得られた培
養液、培養液から分離した微生物菌体、その他アセトン
乾燥菌体、凍結乾燥菌体、菌体破砕物、菌体の自己消化
物、リゾチーム処理物、等の菌体処理物、再1こは菌体
から抽出した酵素蛋白標品 等をプリンヌクレオシド及
びリン酸供怪体eこ水溶液中で接触させること1こより
5゛−プリンヌクレオチドが効率良く生成される。
リンH供’4− 体としてはパラニl−qフェニルリン
酸、ポリリン酸、ビロリン酸、ヌクレオシド、アセチル
リン酸等、公知のものを使用すれば良いが、特tこアセ
チルリン酸を使用することが望ましい、リンN 供’4
− 体の使用量はプリンヌクレオシドの七ルIJ、−ト
が望ましい。
酸、ポリリン酸、ビロリン酸、ヌクレオシド、アセチル
リン酸等、公知のものを使用すれば良いが、特tこアセ
チルリン酸を使用することが望ましい、リンN 供’4
− 体の使用量はプリンヌクレオシドの七ルIJ、−ト
が望ましい。
プリンヌクレオシドとしては、プリンリボンド 6−
イノシン、グアノシン、キサント7ン、アデノシンなど
が使用され、従って、r リフヌクレオチドとしては、
プリンリポンドーダーモノフオスフエ−1・、キサント
シン−5−モノフォスフェート、アデノノン−5″−モ
ノフオスフエ−トナトカ生産される。
が使用され、従って、r リフヌクレオチドとしては、
プリンリポンドーダーモノフオスフエ−1・、キサント
シン−5−モノフォスフェート、アデノノン−5″−モ
ノフオスフエ−トナトカ生産される。
J少ない歌では効率が悪<、mい
量ではプリンヌクレオチドの収率が低下する。
尚、基質であるプリンヌクレオシドは水に溶解しeこく
く反応が遅いのて、水eこ対する溶解度を高めるため、
ホウ酸塩あるいはジメチルスルフォキサイド等を添加す
ることが望まl、い。
く反応が遅いのて、水eこ対する溶解度を高めるため、
ホウ酸塩あるいはジメチルスルフォキサイド等を添加す
ることが望まl、い。
反応は通常、温度20〜60C1より好ましくは30〜
50 tZ’1pH5〜11より好ましくはpH7〜1
0で行う。反応時間は静置、撹拌等の手段、反応条件、
あるいは菌体の状態1こよって異るので一様ではないが
、バッチ法では通常1〜100時間程度である。
50 tZ’1pH5〜11より好ましくはpH7〜1
0で行う。反応時間は静置、撹拌等の手段、反応条件、
あるいは菌体の状態1こよって異るので一様ではないが
、バッチ法では通常1〜100時間程度である。
反応液中1こ生成蓄積したプリンヌクレオチドの分離精
製は通常のイオン交換樹脂を用いる方法やその他の通常
の手段のいずれもが使用できる。
製は通常のイオン交換樹脂を用いる方法やその他の通常
の手段のいずれもが使用できる。
以下、実施例にて詳細1こ説明する。
実施例】
第1表eこ示す組成の栄養培地及びこの栄養培地eこ更
eこグルコースを2.oy/de添加した培地を調製し
、500m/容の肩付フラスコに50m1宛分注し、1
2Orにて15分間加熱滅菌した。
eこグルコースを2.oy/de添加した培地を調製し
、500m/容の肩付フラスコに50m1宛分注し、1
2Orにて15分間加熱滅菌した。
硫酸アンモニウム o、2〃
NaC1o、os tt
KCI 0.05 NKH2P
O40,1〃 Mg5O,e7H200,05// F e SO4・7T(s 0 2 ppm
ZnSO4・7H2020” 次いで、ブイヨン寒天斜面培地上tこ生育させたエルビ
ニア・へルビコーラATCC14537ヲ1白金耳宛接
種し、30℃で24時間振盪培養した。各培養液を遠心
分離して菌体を集め、5mMマグネンウムを含む0.4
M l−リス−塩酸緩衝液(pH9,0) 25++
+lVに懸濁して菌体懸濁液を調整した。
O40,1〃 Mg5O,e7H200,05// F e SO4・7T(s 0 2 ppm
ZnSO4・7H2020” 次いで、ブイヨン寒天斜面培地上tこ生育させたエルビ
ニア・へルビコーラATCC14537ヲ1白金耳宛接
種し、30℃で24時間振盪培養した。各培養液を遠心
分離して菌体を集め、5mMマグネンウムを含む0.4
M l−リス−塩酸緩衝液(pH9,0) 25++
+lVに懸濁して菌体懸濁液を調整した。
一方、グアノシン70mM及びアセチルリン酸カリウム
200 mMを含む水溶液25m1を用意し、」二記菌
体懸淘液25 ml (乾燥菌体重量換算で0.2?)
を添加し、pHを9.Oeこ再調節した後45r1こ1
.0時間振盪して反応を行った。各反応液中のグアノノ
ン−51−モノフォスフェートの生成t 全常法1−従
って定量した。その結果を第λ表eこ示す。
200 mMを含む水溶液25m1を用意し、」二記菌
体懸淘液25 ml (乾燥菌体重量換算で0.2?)
を添加し、pHを9.Oeこ再調節した後45r1こ1
.0時間振盪して反応を行った。各反応液中のグアノノ
ン−51−モノフォスフェートの生成t 全常法1−従
って定量した。その結果を第λ表eこ示す。
9−
第1表 GMP生成量(Ily/Ne)グルコース
0.31. fl、’25フラクト
ース fl、71 0.29ラクト−ス
0.62 fl、39ギンロース
0.53 0.37ソルビト−ル
0.5 ’1 0.37マンニトール
0.70 0.32マルト−ス
fl、54 0.43シユークロース
0.80 0.32リボース 0.
82 0.35ガラクト−ス 0.64
0.4 ]ラムノース 0.61
0.35アラビノース 0.82
0.367/ノース 0.89
0.36グルコン酸 0.75
0.80グリセリン 0.76 0.
37−】〇− 次tこ、炭素源としてフラクト−スを使用した第1表?
こ示す組成の培地にグルコースを0〜4 y/di!添
加して培養した菌体を用い、5“−〇MP生成に及ぼす
グルコースの影響を調べた。その結果を第3表eこ示す
。
0.31. fl、’25フラクト
ース fl、71 0.29ラクト−ス
0.62 fl、39ギンロース
0.53 0.37ソルビト−ル
0.5 ’1 0.37マンニトール
0.70 0.32マルト−ス
fl、54 0.43シユークロース
0.80 0.32リボース 0.
82 0.35ガラクト−ス 0.64
0.4 ]ラムノース 0.61
0.35アラビノース 0.82
0.367/ノース 0.89
0.36グルコン酸 0.75
0.80グリセリン 0.76 0.
37−】〇− 次tこ、炭素源としてフラクト−スを使用した第1表?
こ示す組成の培地にグルコースを0〜4 y/di!添
加して培養した菌体を用い、5“−〇MP生成に及ぼす
グルコースの影響を調べた。その結果を第3表eこ示す
。
0 100
3 33.9
2 ] 7.13
1 0.34
8.5第3表1
こ示すように、グルコースの添加?こより5’−GMP
の生成は著しく抑制されることがわかる。
1 0.34
8.5第3表1
こ示すように、グルコースの添加?こより5’−GMP
の生成は著しく抑制されることがわかる。
実施例2
1()俤のグルコース、1.()係のフラクト−ス、又
は1.0%のグルコースと1.0%のフラクト−スヲ加
工たニュートリエ/ドブロス(pHはいずれも7.+1
)を調製し、5 n n me肩イτ1フラスコIこ5
()+nlnl性分、] 2 Orで15分間加熱した
。
は1.0%のグルコースと1.0%のフラクト−スヲ加
工たニュートリエ/ドブロス(pHはいずれも7.+1
)を調製し、5 n n me肩イτ1フラスコIこ5
()+nlnl性分、] 2 Orで15分間加熱した
。
この培地1こブイヨン寒天面而培地上eこ生育させた第
午表に示す微生物を夫々1白金Yf宛接種し、30Cて
24時間振盪培養した。
午表に示す微生物を夫々1白金Yf宛接種し、30Cて
24時間振盪培養した。
得られた培養液を遠心分則して菌体を集め、実施例1と
同様の菌体懸濁液を調製した。この懸濁液] o me
(乾燥菌体120IIIgに相当)をイ/’/7]、
flr及びアセチルリン酸1.02を含む反応液40m
1tこ加え、p Hを9.01こ調節後451Ttこ4
時間保持し、各反応液中の5°−イノシン酸の生成量を
測定した。その結果を第1表ンこ示す。
同様の菌体懸濁液を調製した。この懸濁液] o me
(乾燥菌体120IIIgに相当)をイ/’/7]、
flr及びアセチルリン酸1.02を含む反応液40m
1tこ加え、p Hを9.01こ調節後451Ttこ4
時間保持し、各反応液中の5°−イノシン酸の生成量を
測定した。その結果を第1表ンこ示す。
エルビニア・へレビコーラ 0.42 1.
32 0.60ATCC14537 シュート1七1ス・マルトフイリア 0.25
0.53 0.33ATCC171’1
06 プロテウスのミラビリス 0.26 0.
65 0.37ATCC]5290 エンエリシアゆコリ 0.16 0.24
0.14ATCC11246 アンネトノ変クーカルコアセカス 0.3]
0.77 0.42ATCC9036 セラチア書マルセセンス 0.26 0.
44 0.22ATCC14226 エーロモナス・パンクタータ 0.35
0.49 0.39ATCC]1163 エンテロバクター−エロゲネス 0.36
0,68 0.36ATCC13
048 フラボバクテリウムΦファスカム 0.16
0.31 0.21ATCC14233 −13一 実施例3 7ユークロース1.0%添加L タニュー1. リz
7トブロス培地(pH7,0)を用い、実施例2と同様
の方法で培養して得られたエルビニア・ヘルビコーラA
TCC] 4537ノ培養液251I+(!を1.02
のイノシンと]、flrのアセチルリン酸カリウムを含
む水溶液5Ozltこ加えて混合し、混合液のpi(を
9.01こ調節l〜た後45Cで5時間反応させた。反
応液中の5′−イノシン酸の生成量を調べたところ、0
.35t/diであった。
32 0.60ATCC14537 シュート1七1ス・マルトフイリア 0.25
0.53 0.33ATCC171’1
06 プロテウスのミラビリス 0.26 0.
65 0.37ATCC]5290 エンエリシアゆコリ 0.16 0.24
0.14ATCC11246 アンネトノ変クーカルコアセカス 0.3]
0.77 0.42ATCC9036 セラチア書マルセセンス 0.26 0.
44 0.22ATCC14226 エーロモナス・パンクタータ 0.35
0.49 0.39ATCC]1163 エンテロバクター−エロゲネス 0.36
0,68 0.36ATCC13
048 フラボバクテリウムΦファスカム 0.16
0.31 0.21ATCC14233 −13一 実施例3 7ユークロース1.0%添加L タニュー1. リz
7トブロス培地(pH7,0)を用い、実施例2と同様
の方法で培養して得られたエルビニア・ヘルビコーラA
TCC] 4537ノ培養液251I+(!を1.02
のイノシンと]、flrのアセチルリン酸カリウムを含
む水溶液5Ozltこ加えて混合し、混合液のpi(を
9.01こ調節l〜た後45Cで5時間反応させた。反
応液中の5′−イノシン酸の生成量を調べたところ、0
.35t/diであった。
特許出願人 味の素株式会社
−14−
Claims (1)
- シュードモナス属、エンテロ・くフタ−属、エロモナス
属、エルビニア属、フロテラス属、エンエリヒア属、ア
シネトバクタ−属、フラボバクテリウム属又はセラチア
属tこ属し、プリンヌクレオシドとリン酸供与体とより
プリンヌクレ−k シト−5’−モノフォスフェートを
生成する能力を有する微生物を、グルコースを実質的e
こ含有しない栄養培地で培養し、これを水溶液中でプリ
ンヌクレオシド及びリン酸供与体に作用させてプリンヌ
クレオシド−51−モノフォスフェートを生成せしめ、
これを採取することを特徴とするプリンヌクレオシド−
51−モノフォスフェートの製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP21130581A JPS58116698A (ja) | 1981-12-28 | 1981-12-28 | プリンヌクレオシド−5′−モノフオスフエ−トの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP21130581A JPS58116698A (ja) | 1981-12-28 | 1981-12-28 | プリンヌクレオシド−5′−モノフオスフエ−トの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS58116698A true JPS58116698A (ja) | 1983-07-11 |
Family
ID=16603737
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP21130581A Pending JPS58116698A (ja) | 1981-12-28 | 1981-12-28 | プリンヌクレオシド−5′−モノフオスフエ−トの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS58116698A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102079673A (zh) * | 2010-10-21 | 2011-06-01 | 高旌 | 一种用于加速菌菇类作物生长的营养素及其使用方法 |
CN102079672A (zh) * | 2010-10-21 | 2011-06-01 | 高旌 | 一种促进皮类中药材生长的营养素 |
CN102079671A (zh) * | 2010-10-21 | 2011-06-01 | 高旌 | 一种促进根茎类中药材生长的营养素及其制备方法 |
-
1981
- 1981-12-28 JP JP21130581A patent/JPS58116698A/ja active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102079673A (zh) * | 2010-10-21 | 2011-06-01 | 高旌 | 一种用于加速菌菇类作物生长的营养素及其使用方法 |
CN102079672A (zh) * | 2010-10-21 | 2011-06-01 | 高旌 | 一种促进皮类中药材生长的营养素 |
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