JPS6140799A - 環状−(1→2)−β−D−グルカンの製法 - Google Patents
環状−(1→2)−β−D−グルカンの製法Info
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- JPS6140799A JPS6140799A JP16369084A JP16369084A JPS6140799A JP S6140799 A JPS6140799 A JP S6140799A JP 16369084 A JP16369084 A JP 16369084A JP 16369084 A JP16369084 A JP 16369084A JP S6140799 A JPS6140799 A JP S6140799A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
「産業上の利用分野]
本発明は、環状−(1→2)−β−D−グルカン(以下
CGと略称する。)の製法に関し、詳しくはアグロバク
テリウム属またはりゾビウム属に属する微生物菌体を用
いて酵素的に環状−(1→2)−β−D−グルカンを製
造する方法に関する。
CGと略称する。)の製法に関し、詳しくはアグロバク
テリウム属またはりゾビウム属に属する微生物菌体を用
いて酵素的に環状−(1→2)−β−D−グルカンを製
造する方法に関する。
[従来技術1
従来、微生物を用いてCGを製造する方法としては、グ
ルコース、リン酸アンモニウム、リン酸カリウム等を含
む培地にリゾビウム属またはアグロバクテリウム属に属
する微生物を培養して、培地中にCGを生成蓄積させる
方法[J、Gen。
ルコース、リン酸アンモニウム、リン酸カリウム等を含
む培地にリゾビウム属またはアグロバクテリウム属に属
する微生物を培養して、培地中にCGを生成蓄積させる
方法[J、Gen。
Microl>iol、 、128.1873(198
2)およびCnrl+ol+ydr、 Res、、 1
2 L 31(1983) ]あるいは該方法の改良法
として、細胞外多糖類等を生産しなくなった突然変異株
を培養する方法(vj開明59−71686号および特
開昭82092号参照)などが知られている。
2)およびCnrl+ol+ydr、 Res、、 1
2 L 31(1983) ]あるいは該方法の改良法
として、細胞外多糖類等を生産しなくなった突然変異株
を培養する方法(vj開明59−71686号および特
開昭82092号参照)などが知られている。
上記公知方法はいずれも発酵法によるCGの製法である
が、発酵法による場合には、本質的に次の如き難点があ
る。発酵終了液に、必然的に培地成分や副生成物などの
夾雑物が混在するので、発酵終了液からCGを単離、精
製する際、これら夾雑物を除去しなければならないが、
これには非常に煩雑な繰作が必要であり、・多大な経費
と労力を必要とする。
が、発酵法による場合には、本質的に次の如き難点があ
る。発酵終了液に、必然的に培地成分や副生成物などの
夾雑物が混在するので、発酵終了液からCGを単離、精
製する際、これら夾雑物を除去しなければならないが、
これには非常に煩雑な繰作が必要であり、・多大な経費
と労力を必要とする。
本発明者らは、発酵法が本質的に有する上記の如き難点
を克服し、工業的に有利なCGの製法について種々研究
を重ねた結果、リゾビウム属またはアグロバクテリウム
属に属する微生物を常法に従って培養し、得られた菌体
もしくはその処理物を糖類のみもしくはそれと塩類とか
らなる水溶液に作用(いわゆる菌体反応)させれば前記
発酵法の欠点を解消し効率よ<CGを生産させることが
できることを見出し、本発明を完成するに至った。
を克服し、工業的に有利なCGの製法について種々研究
を重ねた結果、リゾビウム属またはアグロバクテリウム
属に属する微生物を常法に従って培養し、得られた菌体
もしくはその処理物を糖類のみもしくはそれと塩類とか
らなる水溶液に作用(いわゆる菌体反応)させれば前記
発酵法の欠点を解消し効率よ<CGを生産させることが
できることを見出し、本発明を完成するに至った。
[発明の構1]
本発明の要旨は、リゾビウム属またはアグロバクテリウ
ム属に属し、環状−(1→2)−β−D−グルカンを産
生しうる能力を有する微生物を培養し、次いで、該培養
液より分離した菌体もしくは該菌体の処理物を、糖類の
み、もしくはそれと塩類からなる水溶液に作用させ、生
成した環状−(1→2)−β−D−グルカンを採取する
ことを特徴とする環状−(1→2)−β−D−グルカン
の製法に存する。
ム属に属し、環状−(1→2)−β−D−グルカンを産
生しうる能力を有する微生物を培養し、次いで、該培養
液より分離した菌体もしくは該菌体の処理物を、糖類の
み、もしくはそれと塩類からなる水溶液に作用させ、生
成した環状−(1→2)−β−D−グルカンを採取する
ことを特徴とする環状−(1→2)−β−D−グルカン
の製法に存する。
本発明において使用する微生物としては、リゾビウム属
またはアグロバクテリウム属に属し、CGを産生する能
力を有するものであれば、いずれも使用でき、例えば、
リゾビウム・メリロッティIF013336、リゾビウ
ム・トリ7オりIF013337、リゾビウム・ジヤポ
ニカムIF01333B、リゾビウム・ファッセオリA
HU 1133、リゾビウム・ファッセオリRA−4(
特開昭59−71686号参照)、アグロバクテリウム
・ラジオバクターIF012665、アグロバクテリウ
ム・ラジオバクターAl−5(特開昭59−82092
号参照)、アグロバクテリウム・リゾゲネスIFO13
259、アグロバクテリウム・ツメ77シエンスIF0
3058などが挙ケられる。
またはアグロバクテリウム属に属し、CGを産生する能
力を有するものであれば、いずれも使用でき、例えば、
リゾビウム・メリロッティIF013336、リゾビウ
ム・トリ7オりIF013337、リゾビウム・ジヤポ
ニカムIF01333B、リゾビウム・ファッセオリA
HU 1133、リゾビウム・ファッセオリRA−4(
特開昭59−71686号参照)、アグロバクテリウム
・ラジオバクターIF012665、アグロバクテリウ
ム・ラジオバクターAl−5(特開昭59−82092
号参照)、アグロバクテリウム・リゾゲネスIFO13
259、アグロバクテリウム・ツメ77シエンスIF0
3058などが挙ケられる。
微生物を培養するための培地jIII&としては、炭素
源、窒素源、有機栄養源、無は物質などを適宜含有した
ものが使用される。炭素源および窒素源としては、使用
菌株が資化できる物質であれば、いずれも使用できるが
、好ましくは、炭素源として糖類、就中、グルコース、
′マルトース、シュークロースまたは糖蜜等、窒素源と
して黒磯窒素源、有機酸アンモニウム塩が使用できる。
源、窒素源、有機栄養源、無は物質などを適宜含有した
ものが使用される。炭素源および窒素源としては、使用
菌株が資化できる物質であれば、いずれも使用できるが
、好ましくは、炭素源として糖類、就中、グルコース、
′マルトース、シュークロースまたは糖蜜等、窒素源と
して黒磯窒素源、有機酸アンモニウム塩が使用できる。
有機栄養源として酵母エキス、コーンスチープリカー、
肉エキス、ポリペプトン、ビオチン、チアミン等がイ史
用できる。無機物質として通常の無機塩類などが使用で
きる。
肉エキス、ポリペプトン、ビオチン、チアミン等がイ史
用できる。無機物質として通常の無機塩類などが使用で
きる。
上記微生物の培養は、常法によればよい。例えば、培地
をpH5〜8とし、菌株を接種後、25〜30°Cで1
〜10日間好気的に培養するのが好ましい。
をpH5〜8とし、菌株を接種後、25〜30°Cで1
〜10日間好気的に培養するのが好ましい。
得られた培養液から遠心分離等によって分離した菌体ま
たは該菌体の処理物(例えば、洗浄菌体、乾燥菌体、お
よび菌体をアクリルアミド法やアルギン酸カルシウム法
などによって固定化した固定化菌体)を糖類のみ、好ま
しくはグルコース、シュークロースおよびマルトースか
ら選ばれた少なくとも1種のみ、もしくはそれと塩類か
らなる水溶液に作用させることにより、CGを生成させ
ることができる。この水溶液の濃度は通常2〜30%が
好ましい0反応温度は20〜50℃、特に25〜40°
Cが好ましい0反応液のpHは4〜8、特に5〜7が好
ましい0本発明で用いる塩類は、特に限定されず、本発
明の菌体反応および目的物の精製の妨げにならない塩類
であれば、無機塩、有磯塩を問わず全て使用しうる。例
えば、塩化ナトリウ4、塩化カリウム、リン酸塩、酢酸
塩およびグリシン塩等が挙げられる。これらは1種の単
独でも、2種以上を混合しても使用できる。
たは該菌体の処理物(例えば、洗浄菌体、乾燥菌体、お
よび菌体をアクリルアミド法やアルギン酸カルシウム法
などによって固定化した固定化菌体)を糖類のみ、好ま
しくはグルコース、シュークロースおよびマルトースか
ら選ばれた少なくとも1種のみ、もしくはそれと塩類か
らなる水溶液に作用させることにより、CGを生成させ
ることができる。この水溶液の濃度は通常2〜30%が
好ましい0反応温度は20〜50℃、特に25〜40°
Cが好ましい0反応液のpHは4〜8、特に5〜7が好
ましい0本発明で用いる塩類は、特に限定されず、本発
明の菌体反応および目的物の精製の妨げにならない塩類
であれば、無機塩、有磯塩を問わず全て使用しうる。例
えば、塩化ナトリウ4、塩化カリウム、リン酸塩、酢酸
塩およびグリシン塩等が挙げられる。これらは1種の単
独でも、2種以上を混合しても使用できる。
反応完結後、反応液中には実質的に菌体もしくは菌体処
理物お上びCGLか含まれていないので、反応液から菌
体もしくは反応液処理物を除いた後、活性炭カラムを使
用する方法[日本農芸化学会大会要旨集、585頁(1
984)]等の手段により容易にCGを回収することが
できる。また、イオン交換樹脂操作などの精製手段を行
なわなければならない場合でも、夾雑物の混在が少ない
ので、イオン交換樹脂の使用量が非常に少ない。本発明
の製法によれば、反応後に菌体および菌体処理物を除去
するだけの程作によって、はぼ純粋なCG水溶液が得ら
れる。反応液からのCGの回収精製操作が極めて簡略化
されるという利点がある。
理物お上びCGLか含まれていないので、反応液から菌
体もしくは反応液処理物を除いた後、活性炭カラムを使
用する方法[日本農芸化学会大会要旨集、585頁(1
984)]等の手段により容易にCGを回収することが
できる。また、イオン交換樹脂操作などの精製手段を行
なわなければならない場合でも、夾雑物の混在が少ない
ので、イオン交換樹脂の使用量が非常に少ない。本発明
の製法によれば、反応後に菌体および菌体処理物を除去
するだけの程作によって、はぼ純粋なCG水溶液が得ら
れる。反応液からのCGの回収精製操作が極めて簡略化
されるという利点がある。
[実施例]
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。実施
例中、CGの確認および定量は、高速液体クロマトグラ
フィ法[J、CI+romatogr、 26旦!89
(1983)]によった。
例中、CGの確認および定量は、高速液体クロマトグラ
フィ法[J、CI+romatogr、 26旦!89
(1983)]によった。
実施例1
リゾビウム・77ツセオリRA−4を下記組成の培地(
100x(1/ 500d容三角フラスコ)に接種し、
30℃にて48時間振とう培養した。
100x(1/ 500d容三角フラスコ)に接種し、
30℃にて48時間振とう培養した。
培地組成(100zn中)ニゲルコース2g、(Nl−
L)21−IPo、0.15g、KH2PO,O。
L)21−IPo、0.15g、KH2PO,O。
ly% MgSO4・7H200,05g、NaCfl
ag、CaCL 11fl、MnCN2’ 4H20
1mg、 F cs O4・7 H201lFI、ビチ
オン20μg1 チアミン2/jySCaC0,0,4
g。
ag、CaCL 11fl、MnCN2’ 4H20
1mg、 F cs O4・7 H201lFI、ビチ
オン20μg1 チアミン2/jySCaC0,0,4
g。
次いで、培養液100社から遠心分離によって菌体を集
め、2%グルコース水溶液100d’に懸濁しく+11
1は7.0であり、調整の必要がなかった。)、30°
Cにて48時間振とうしながら反応させた。
め、2%グルコース水溶液100d’に懸濁しく+11
1は7.0であり、調整の必要がなかった。)、30°
Cにて48時間振とうしながら反応させた。
その結果、反応液中にCG140ggが生1#、蓄積し
た。この反応液から遠心分離によって反応液を除去し、
上Iヒ液から活性炭を用いて粗CG13211gを得た
。
た。この反応液から遠心分離によって反応液を除去し、
上Iヒ液から活性炭を用いて粗CG13211gを得た
。
実施例2
ビオチンおよびチアミンを省く以外は実施例1と同一組
成の培地に実施例1と同一条件で7グロバクテリウム・
ラジオバクターA1−5を培養した。得られた培養液I
QOzj!から遠心分離によって菌体を集め、5%グル
コース水溶液100iNに懸濁し、30℃にて72時間
振とうしながら反応させた。その結果、反応液中にCG
355Hが生成蓄積した。この反応液から遠心分離によ
って菌体を除去し、上澄液から活性炭を用いて粗CG3
0Szgを得た。
成の培地に実施例1と同一条件で7グロバクテリウム・
ラジオバクターA1−5を培養した。得られた培養液I
QOzj!から遠心分離によって菌体を集め、5%グル
コース水溶液100iNに懸濁し、30℃にて72時間
振とうしながら反応させた。その結果、反応液中にCG
355Hが生成蓄積した。この反応液から遠心分離によ
って菌体を除去し、上澄液から活性炭を用いて粗CG3
0Szgを得た。
実施例3
実施例2と同一組成の培地に同一条件で7グロバクテリ
ウム・ラジオバクターA1−5を培養した。得られた培
養液1001I!がら遠心分離によって菌体を集め、こ
れを純水+’−6濁して5x1とした。
ウム・ラジオバクターA1−5を培養した。得られた培
養液1001I!がら遠心分離によって菌体を集め、こ
れを純水+’−6濁して5x1とした。
これにアクリル酸アミド0.94.、N、N’−メチレ
ンビスアクリル酸アミド0.05g、5%β−(ジメチ
ルアミノ)プロピオニトリル0.6dおよび1%過硫酸
カリウム0 、6 xlを加え、室温にて10分間静置
した。次いで、生成ゲルを粉砕し、純水で洗浄すること
によって、固定化菌体7.2gを得た。この固定化菌体
7.2gを5%グルフース液100*(lに添加し、3
0°Cにて72時間振とうしながら反応させた。その結
果、反応液中にCG230ggが生成蓄積した。
ンビスアクリル酸アミド0.05g、5%β−(ジメチ
ルアミノ)プロピオニトリル0.6dおよび1%過硫酸
カリウム0 、6 xlを加え、室温にて10分間静置
した。次いで、生成ゲルを粉砕し、純水で洗浄すること
によって、固定化菌体7.2gを得た。この固定化菌体
7.2gを5%グルフース液100*(lに添加し、3
0°Cにて72時間振とうしながら反応させた。その結
果、反応液中にCG230ggが生成蓄積した。
実施例4
5%グルコース水溶液に代わりにグルコースを5%含む
0.85%塩化ナトリウム水溶液を用いる以外は実施例
1と同条件で実験を行った。反応液中にCG155+9
が蓄積した。
0.85%塩化ナトリウム水溶液を用いる以外は実施例
1と同条件で実験を行った。反応液中にCG155+9
が蓄積した。
実施例5
!−%3%グルコース水溶液わりにグルコースを5%含
む0.05Mリン酸カリウム緩衝液(,87゜0)を用
いる以外は実施例2と同条件で実験を行なった。反応液
中にCG340gが蓄積した。
む0.05Mリン酸カリウム緩衝液(,87゜0)を用
いる以外は実施例2と同条件で実験を行なった。反応液
中にCG340gが蓄積した。
実施例6
グルコース水溶液の代わりにシュークロース水溶液j:
たはマルトース水溶液を用いる以外は実施例1と同4!
lに反応させたところ、いずれの場合も反応液中にCG
の生成が認められた。
たはマルトース水溶液を用いる以外は実施例1と同4!
lに反応させたところ、いずれの場合も反応液中にCG
の生成が認められた。
実施例7
リゾビウム・77ツセオリRA−4の代わりにリゾビウ
ム・メリロッティIt’013336を用いる以外は実
施例1と同様に反応させたところ、反応液中にCGの生
成が認められた。
ム・メリロッティIt’013336を用いる以外は実
施例1と同様に反応させたところ、反応液中にCGの生
成が認められた。
天施例8
リゾビウム・フ7ツセオリRA−4の代わりにリゾビウ
ム・トリ7オりIFO13337を用いる以外は実施例
1と同様に反応させたところ、反応液中にCGの生成が
認められた。
ム・トリ7オりIFO13337を用いる以外は実施例
1と同様に反応させたところ、反応液中にCGの生成が
認められた。
実施例9
アグロバクテリクム・ラノオバクターA1−5の代わり
に7グロバクテリウム争ツメ77シエンスI FO30
58を用いる以外は実施例2と同様に反応させたところ
、反応液中にCGの生成が認められた。
に7グロバクテリウム争ツメ77シエンスI FO30
58を用いる以外は実施例2と同様に反応させたところ
、反応液中にCGの生成が認められた。
特許出願人 ダイキン工業株式会社
代 理 人 弁理士 青 山 葆 他2名手続補正書(
1釦 昭和59年9月 4日
1釦 昭和59年9月 4日
Claims (3)
- (1)リゾビウム属またはアグロバクテリウム属に属し
、環状−(1→2)−β−D−グルカンを産生しうる能
力を有する微生物を培養し、次いで、該培養液より分離
した菌体もしくは該菌体の処理物を、糖類のみ、もしく
はそれと塩類からなる水溶液に作用させ、生成した環状
−(1→2)−β−D−グルカンを採取することを特徴
とする環状−(1→2)−β−D−グルカンの製法。 - (2)糖類がグルコース、シュークロースおよびマルト
ースから選ばれた少なくとも1種である特許請求の範囲
第1項記載の製法。 - (3)微生物は、環状−(1→2)−β−D−グルカン
を生産する能力を有するリゾビウム・メリロッティ、リ
ゾビウム・トリフォリ、リゾビウム・ジヤポニカム、リ
ゾビウム・ファッセオリ、リゾビウム・ルビニ、アグロ
バクテリウム・ラジオバクター、アグロバクテリウム・
リゾゲネスまたはアグロバクテリウム・ツメファシエン
スである特許請求の範囲第1項記載の製法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP16369084A JPS6140799A (ja) | 1984-08-02 | 1984-08-02 | 環状−(1→2)−β−D−グルカンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP16369084A JPS6140799A (ja) | 1984-08-02 | 1984-08-02 | 環状−(1→2)−β−D−グルカンの製法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS6140799A true JPS6140799A (ja) | 1986-02-27 |
Family
ID=15778747
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP16369084A Pending JPS6140799A (ja) | 1984-08-02 | 1984-08-02 | 環状−(1→2)−β−D−グルカンの製法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6140799A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1104504C (zh) * | 2000-05-23 | 2003-04-02 | 厦门大学 | 一种海洋细菌胞外多糖的生产工艺 |
KR20180121395A (ko) * | 2017-04-28 | 2018-11-07 | 베시 스위처랜드 아게 | 부품들을 기판 상에 실장하기 위한 장치 및 방법 |
-
1984
- 1984-08-02 JP JP16369084A patent/JPS6140799A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1104504C (zh) * | 2000-05-23 | 2003-04-02 | 厦门大学 | 一种海洋细菌胞外多糖的生产工艺 |
KR20180121395A (ko) * | 2017-04-28 | 2018-11-07 | 베시 스위처랜드 아게 | 부품들을 기판 상에 실장하기 위한 장치 및 방법 |
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