JPH06263802A - 分枝環状イヌロオリゴ糖及びその製造方法 - Google Patents
分枝環状イヌロオリゴ糖及びその製造方法Info
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- JPH06263802A JPH06263802A JP5569193A JP5569193A JPH06263802A JP H06263802 A JPH06263802 A JP H06263802A JP 5569193 A JP5569193 A JP 5569193A JP 5569193 A JP5569193 A JP 5569193A JP H06263802 A JPH06263802 A JP H06263802A
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- cyclic inulooligosaccharide
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 フルクトース６〜８分子がβ−２，１結合し
た環状イヌロオリゴ糖にフルクトースを転移反応させる
ことによりフルクトシル化された新規な分枝環状イヌロ
オリゴ糖を得る。 【効果】 本発明の分枝環状イヌロオリゴ糖は、クラウ
ンエーテルまたはサイクロデキストリンに代わる新しい
環状の包接化合物として、化学工業、食品工業、製薬工
業等の広い分野における利用が期待される。
た環状イヌロオリゴ糖にフルクトースを転移反応させる
ことによりフルクトシル化された新規な分枝環状イヌロ
オリゴ糖を得る。 【効果】 本発明の分枝環状イヌロオリゴ糖は、クラウ
ンエーテルまたはサイクロデキストリンに代わる新しい
環状の包接化合物として、化学工業、食品工業、製薬工
業等の広い分野における利用が期待される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規な分枝環状イヌロ
オリゴ糖及びその製造方法に関する。
オリゴ糖及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】フルク
トース６〜８分子がβ−２，１結合した環状イヌロオリ
ゴ糖（以下、「サイクロフラクタン」または「ＣＦＲ」
と略記することがある）は、その構造上、分子の骨格が
クラウンエーテルに類似していることから、金属イオン
の捕捉作用や各種の触媒として、また包接剤としても化
学工業、食品工業、製薬工業等の広い分野においての利
用が示唆されていることから、注目を集めている。ま
た、構成糖がグルコースの環状オリゴ糖であるサイクロ
デキストリンも、クラウンエーテルと同様に幅広い分野
において使用されてきた。しかし、クラウンエーテルに
は水に不溶であるという問題と人体に対する毒性が強い
という問題があり、サイクロデキストリンにも水に溶け
にくい等の問題があることから、その適用範囲には制限
があった。従って、これらの課題を解決し得る新しい環
状化合物の開発が望まれていた。
トース６〜８分子がβ−２，１結合した環状イヌロオリ
ゴ糖（以下、「サイクロフラクタン」または「ＣＦＲ」
と略記することがある）は、その構造上、分子の骨格が
クラウンエーテルに類似していることから、金属イオン
の捕捉作用や各種の触媒として、また包接剤としても化
学工業、食品工業、製薬工業等の広い分野においての利
用が示唆されていることから、注目を集めている。ま
た、構成糖がグルコースの環状オリゴ糖であるサイクロ
デキストリンも、クラウンエーテルと同様に幅広い分野
において使用されてきた。しかし、クラウンエーテルに
は水に不溶であるという問題と人体に対する毒性が強い
という問題があり、サイクロデキストリンにも水に溶け
にくい等の問題があることから、その適用範囲には制限
があった。従って、これらの課題を解決し得る新しい環
状化合物の開発が望まれていた。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは前記の課題
を解決するべく検討を重ねてきた結果、サイクロフラク
タンにフルクトースを転移導入した新規な分枝環状イヌ
ロオリゴ糖が所望の要件を満たし得ることを初めて見出
し、本発明を完成するに至った。即ち本発明の要旨は、
フルクトシル化された分枝環状イヌロオリゴ糖及びその
製造方法に存する。
を解決するべく検討を重ねてきた結果、サイクロフラク
タンにフルクトースを転移導入した新規な分枝環状イヌ
ロオリゴ糖が所望の要件を満たし得ることを初めて見出
し、本発明を完成するに至った。即ち本発明の要旨は、
フルクトシル化された分枝環状イヌロオリゴ糖及びその
製造方法に存する。
【０００４】以下、本発明につき詳細に説明する。本発
明の分枝環状イヌロオリゴ糖は、サイクロフラクタンを
構成するフルクトース分子の６位の炭素原子に置換して
いるヒドロキシル基の水素原子の代わりに、フルクトシ
ル基が独立して１〜８個置換された構造を有する。その
推定構造は、下記（Ｉ）式にて表される。
明の分枝環状イヌロオリゴ糖は、サイクロフラクタンを
構成するフルクトース分子の６位の炭素原子に置換して
いるヒドロキシル基の水素原子の代わりに、フルクトシ
ル基が独立して１〜８個置換された構造を有する。その
推定構造は、下記（Ｉ）式にて表される。
【０００５】
【化１】
【０００６】（式中、Ｒは水素原子またはβ−Ｄ−フル
クトフラノシル基（フルクトシル基）、即ち、
クトフラノシル基（フルクトシル基）、即ち、
【０００７】
【化２】
【０００８】を表すが、少なくとも１以上はβ−Ｄ−フ
ルクトフラノシル基を表す。ｎは６〜８の整数を表
す。）本発明の分枝環状イヌロオリゴ糖は、例えばＣＦ
Ｒにフルクトース分子を転移反応させることにより、製
造することができる。具体的には、レバンシュクラーゼ
（ＥＣ ２．４．１．１０）、インベルターゼ（ＥＣ
３．２．１．２６）等のフルクトシル基転移酵素または
かかる酵素を菌体内外に産生する微生物を作用させるこ
とにより、製造される。本発明においては、レバンシュ
クラーゼまたはそれを菌体内外に産生する微生物を使用
することが好ましい。
ルクトフラノシル基を表す。ｎは６〜８の整数を表
す。）本発明の分枝環状イヌロオリゴ糖は、例えばＣＦ
Ｒにフルクトース分子を転移反応させることにより、製
造することができる。具体的には、レバンシュクラーゼ
（ＥＣ ２．４．１．１０）、インベルターゼ（ＥＣ
３．２．１．２６）等のフルクトシル基転移酵素または
かかる酵素を菌体内外に産生する微生物を作用させるこ
とにより、製造される。本発明においては、レバンシュ
クラーゼまたはそれを菌体内外に産生する微生物を使用
することが好ましい。
【０００９】微生物菌体を作用させる場合は、通常の微
生物が利用し得る栄養源を含有する培地で微生物を培
養、増殖させる。栄養源としては、グルコース、水飴、
デキストリン、シュークロース、澱粉、糖蜜、動物油、
植物油等が使用できる。また窒素源としては、大豆粉、
小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エキ
ス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ナ
トリウム、尿素等を使用できる。その他必要に応じて、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コ
バルト、塩素、リン酸、硫酸等のイオン性の無機塩類を
添加することもできる。培養は、１２〜４８時間、２７
〜３７℃で行うことが望ましい。そして培養液を遠心分
離等の手段により集菌する。得られた菌体を、０．５％
以上のＣＦＲ及び０，５％以上のシュークロース、ラフ
ィノース、メリビオース、スタキオース等と２５〜５０
℃で反応させる。反応液は遠心分離等により除菌し、続
いて１００℃で５分程度処理することにより、酵素を失
活させる。この反応液から常法に従ってカラムクロマト
グラフィーを行うことにより、本発明の分枝環状イヌロ
オリゴ糖を単離精製することができる。
生物が利用し得る栄養源を含有する培地で微生物を培
養、増殖させる。栄養源としては、グルコース、水飴、
デキストリン、シュークロース、澱粉、糖蜜、動物油、
植物油等が使用できる。また窒素源としては、大豆粉、
小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エキ
ス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ナ
トリウム、尿素等を使用できる。その他必要に応じて、
ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、コ
バルト、塩素、リン酸、硫酸等のイオン性の無機塩類を
添加することもできる。培養は、１２〜４８時間、２７
〜３７℃で行うことが望ましい。そして培養液を遠心分
離等の手段により集菌する。得られた菌体を、０．５％
以上のＣＦＲ及び０，５％以上のシュークロース、ラフ
ィノース、メリビオース、スタキオース等と２５〜５０
℃で反応させる。反応液は遠心分離等により除菌し、続
いて１００℃で５分程度処理することにより、酵素を失
活させる。この反応液から常法に従ってカラムクロマト
グラフィーを行うことにより、本発明の分枝環状イヌロ
オリゴ糖を単離精製することができる。
【００１０】これらの酵素を産生する微生物としては、
バチルス ズブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉ
ｌｉｓ）、アエロバクター レバニカム（Ａｅｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｌｅｖａｎｉｃｕｍ）、アクチノマイセス
ビスコサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｉｓｃｏｓｕ
ｓ）、アエロバクター サブオキシダンス（Ａｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｓｕｂｏｘｙｄａｎｓ）、バチルス リケ
ニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏ
ｒｍｉｓ）、グルコノバクター オキシダンス（Ｇｌｕ
ｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ）、ストレプト
コッカス ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｍｕｔａｎｓ）、ストレプトコッカスサリバリウス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｌｉｕ
ｓ）、バチルス ナットー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔ
ｔｏ）、ザイモモナス モビリス（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ
ｍｏｂｉｌｉｓ）等が挙げられる。
バチルス ズブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉ
ｌｉｓ）、アエロバクター レバニカム（Ａｅｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｌｅｖａｎｉｃｕｍ）、アクチノマイセス
ビスコサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｉｓｃｏｓｕ
ｓ）、アエロバクター サブオキシダンス（Ａｅｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｓｕｂｏｘｙｄａｎｓ）、バチルス リケ
ニフォルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏ
ｒｍｉｓ）、グルコノバクター オキシダンス（Ｇｌｕ
ｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ）、ストレプト
コッカス ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｍｕｔａｎｓ）、ストレプトコッカスサリバリウス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｌｉｕ
ｓ）、バチルス ナットー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｎａｔ
ｔｏ）、ザイモモナス モビリス（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ
ｍｏｂｉｌｉｓ）等が挙げられる。
【００１１】酵素を反応に使用する場合は、市販されて
いる酵素を用いても、上記微生物の培養上清や菌体破砕
液（すなわち粗酵素）もしくはそこから精製した酵素を
用いても良い。微生物の培養物から酵素を精製する場合
は、ＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５０Ｍ（東ソー
製）、ＳＰ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５０Ｍ（東ソー
製）等によるイオン交換カラムクロマトグラフィーにて
精製を行った後、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ５５（東ソ
ー製）等のゲル濾過カラムクロマトグラフィーを行うこ
とにより、電気泳動で単一バンドを示す酵素標品を得る
ことができる。かかる酵素をＣＦＲに作用させて、本発
明の分枝環状イヌロオリゴ糖を生成させるためには、供
与体としてシュークロース、ラフィノース、メリビオー
ス、スタキオース等のフルクトシルアルドースを共存さ
せることが好ましい。具体的には、ｐＨ７．０付近に調
整した０．０１−０．１Ｍのリン酸緩衝液中で、約０．
５％以上の濃度のＣＦＲと約０．５％以上のシュークロ
ースに３０〜７０℃で０．１Ｕ以上の上記酵素を作用さ
せる。この反応液から、常法に従い、カラムクロマトグ
ラフィー等の処理を行うことにより、本発明の分枝環状
イヌロオリゴ糖を単離、精製することができる。なお、
微生物菌体、酵素のいずれを作用させるにせよ、これら
を適当な担体に固定化して反応に供することも可能であ
る。
いる酵素を用いても、上記微生物の培養上清や菌体破砕
液（すなわち粗酵素）もしくはそこから精製した酵素を
用いても良い。微生物の培養物から酵素を精製する場合
は、ＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５０Ｍ（東ソー
製）、ＳＰ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５０Ｍ（東ソー
製）等によるイオン交換カラムクロマトグラフィーにて
精製を行った後、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ＨＷ５５（東ソ
ー製）等のゲル濾過カラムクロマトグラフィーを行うこ
とにより、電気泳動で単一バンドを示す酵素標品を得る
ことができる。かかる酵素をＣＦＲに作用させて、本発
明の分枝環状イヌロオリゴ糖を生成させるためには、供
与体としてシュークロース、ラフィノース、メリビオー
ス、スタキオース等のフルクトシルアルドースを共存さ
せることが好ましい。具体的には、ｐＨ７．０付近に調
整した０．０１−０．１Ｍのリン酸緩衝液中で、約０．
５％以上の濃度のＣＦＲと約０．５％以上のシュークロ
ースに３０〜７０℃で０．１Ｕ以上の上記酵素を作用さ
せる。この反応液から、常法に従い、カラムクロマトグ
ラフィー等の処理を行うことにより、本発明の分枝環状
イヌロオリゴ糖を単離、精製することができる。なお、
微生物菌体、酵素のいずれを作用させるにせよ、これら
を適当な担体に固定化して反応に供することも可能であ
る。
【００１２】また出発原料となるＣＦＲは、特開平２−
２５２７０１号、同４−２３７４９６号公報等に記載の
方法に準じて、キクイモ、ゴボウ等のイヌリン含有量の
高い植物体の抽出液及び／又はイヌリンを炭素源として
含む溶液中で、ＣＦＲを産生する能力を有する微生物及
び／又は同菌体に含有される酵素を作用させることによ
り製造することができる。
２５２７０１号、同４−２３７４９６号公報等に記載の
方法に準じて、キクイモ、ゴボウ等のイヌリン含有量の
高い植物体の抽出液及び／又はイヌリンを炭素源として
含む溶液中で、ＣＦＲを産生する能力を有する微生物及
び／又は同菌体に含有される酵素を作用させることによ
り製造することができる。
【００１３】
【実施例】以下に、本発明を実施例を挙げて具体的に説
明するが、その要旨を越えない限り、下記に限定される
ものではない。 実施例１ （ＣＦＲの調製）イヌリン７％、イーストエクストラク
ト０．２％、マグネシウム０．０５％、塩化カリウム
０．０５％、リン酸１カリウム０．０５％および塩化第
二鉄０．００１％を含んだ培地１５００ｍｌをｐＨ７．
０に調整して、３００ｍｌずつを２Ｌの肩付きフラスコ
に分注した後、１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。この
滅菌した培養液に、バチルス サーキュランス ＭＣＩ
−２５５４号菌（ＦＥＲＭＰ−１１９４０）を同様の培
地で予め２０時間培養したものを２ｍｌ接種し、１６０
ｒｐｍ、３０℃、３６時間培養した。培養液の６６０ｎ
ｍでのＯＤは、約４．５であった。培養終了後、遠心分
離により菌体を除去して培養ろ液を得た。この培養ろ液
にイヌリン２００ｇを加え、４５℃で５時間反応させ
た。得られた反応液を１００℃で１０分間加熱処理する
ことにより酵素を失活させ、約１００ｍｌにまで減圧濃
縮した。この液は、活性炭カラム（活性炭５００ｇおよ
びセライトＮｏ．５３５ ５００ｇの混合物を蒸留水に
て充填）に吸着させ、蒸留水５Ｌを流した後、５％エタ
ノール水溶液で溶出した。溶出ピークを集めて減圧濃縮
し、少量の水で溶かし、エタノールを加えて晶析させ
た。得られた晶析物を濾過し、再び少量の水で溶かし、
エタノールを加えて晶析させた。この操作を３回繰り返
すことにより、サイクロイヌロヘキサオース（フルクト
ース単位６個からなるＣＦＲ）を得た。減圧濾過物の乾
燥後の重量は、３２ｇであった。
明するが、その要旨を越えない限り、下記に限定される
ものではない。 実施例１ （ＣＦＲの調製）イヌリン７％、イーストエクストラク
ト０．２％、マグネシウム０．０５％、塩化カリウム
０．０５％、リン酸１カリウム０．０５％および塩化第
二鉄０．００１％を含んだ培地１５００ｍｌをｐＨ７．
０に調整して、３００ｍｌずつを２Ｌの肩付きフラスコ
に分注した後、１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。この
滅菌した培養液に、バチルス サーキュランス ＭＣＩ
−２５５４号菌（ＦＥＲＭＰ−１１９４０）を同様の培
地で予め２０時間培養したものを２ｍｌ接種し、１６０
ｒｐｍ、３０℃、３６時間培養した。培養液の６６０ｎ
ｍでのＯＤは、約４．５であった。培養終了後、遠心分
離により菌体を除去して培養ろ液を得た。この培養ろ液
にイヌリン２００ｇを加え、４５℃で５時間反応させ
た。得られた反応液を１００℃で１０分間加熱処理する
ことにより酵素を失活させ、約１００ｍｌにまで減圧濃
縮した。この液は、活性炭カラム（活性炭５００ｇおよ
びセライトＮｏ．５３５ ５００ｇの混合物を蒸留水に
て充填）に吸着させ、蒸留水５Ｌを流した後、５％エタ
ノール水溶液で溶出した。溶出ピークを集めて減圧濃縮
し、少量の水で溶かし、エタノールを加えて晶析させ
た。得られた晶析物を濾過し、再び少量の水で溶かし、
エタノールを加えて晶析させた。この操作を３回繰り返
すことにより、サイクロイヌロヘキサオース（フルクト
ース単位６個からなるＣＦＲ）を得た。減圧濾過物の乾
燥後の重量は、３２ｇであった。
【００１４】（分枝環状イヌロオリゴ糖の調製）シュー
クロース２０％およびイーストエクストラクト５％を含
んだ培地５００ｍｌをｐＨ７．０に調整し、１Ｌのメデ
ィウムビンに入れて１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。
この滅菌した培養液にザイモモナス モビリス（Ｚｙｍ
ｏｍｏｎａｓ ｍｏｂｉｌｉｓ）ＩＦＯ １３７５６
を１白金耳植菌し、３０℃で静置培養した。培養終了
後、遠心分離により集めた菌体を６７ｍＭ ＫＨ2 ＰＯ
4 −ＮａＨＰＯ4 （ｐＨ６．９２）リン酸緩衝液で２回
洗浄し、その菌体に５ｍｌのリン酸緩衝液を加えて懸濁
した。懸濁液に実施例１で得たサイクロイヌロヘキサオ
ース１ｇおよび１ｇのシュークロースを加え、３７℃で
２４時間反応させた。１００℃で１０分間加熱処理する
ことにより酵素を失活させ、遠心分離により菌体を除去
して反応上清を得た。この液を活性炭カラム（活性炭１
００ｇおよびセライトＮｏ．５３５ １００ｇの混合物
を蒸留水にて充填）に吸着させ、蒸留水１Ｌを流した
後、５％エタノール水溶液で溶出した。溶出ピークを集
めて減圧濃縮乾固し、ＨＰＬＣ（ＭＣＩＧＥＬ ＣＫ０
４Ｓ：三菱化成社製）で分析したところ、３つのピーク
が得られた（Ｆ１、Ｆ２およびＦ３：図１参照）。これ
をゲル濾過クロマトグラフィー（ＨＷ−４０ ２．５×
１００ｃｍ，東ソー社製）にかけて水で溶出させた。そ
れぞれのピークを濃縮したところ、Ｆ１はサイクロイヌ
ロヘキサオースを示し、Ｆ２（ｆ1 −ＣＦＲ）およびＦ
３（ｆ2 −ＣＦＲ）に分枝環状イヌロオリゴ糖が得られ
た。ＨＰＬＣにより、得られた分枝環状イヌロオリゴ糖
を定量したところ、フルクトシル−サイクロヘキサオー
ス（ｆ1 −ＣＦＲ）が２３９ｍｇ得られた。
クロース２０％およびイーストエクストラクト５％を含
んだ培地５００ｍｌをｐＨ７．０に調整し、１Ｌのメデ
ィウムビンに入れて１２０℃で２０分間蒸気滅菌した。
この滅菌した培養液にザイモモナス モビリス（Ｚｙｍ
ｏｍｏｎａｓ ｍｏｂｉｌｉｓ）ＩＦＯ １３７５６
を１白金耳植菌し、３０℃で静置培養した。培養終了
後、遠心分離により集めた菌体を６７ｍＭ ＫＨ2 ＰＯ
4 −ＮａＨＰＯ4 （ｐＨ６．９２）リン酸緩衝液で２回
洗浄し、その菌体に５ｍｌのリン酸緩衝液を加えて懸濁
した。懸濁液に実施例１で得たサイクロイヌロヘキサオ
ース１ｇおよび１ｇのシュークロースを加え、３７℃で
２４時間反応させた。１００℃で１０分間加熱処理する
ことにより酵素を失活させ、遠心分離により菌体を除去
して反応上清を得た。この液を活性炭カラム（活性炭１
００ｇおよびセライトＮｏ．５３５ １００ｇの混合物
を蒸留水にて充填）に吸着させ、蒸留水１Ｌを流した
後、５％エタノール水溶液で溶出した。溶出ピークを集
めて減圧濃縮乾固し、ＨＰＬＣ（ＭＣＩＧＥＬ ＣＫ０
４Ｓ：三菱化成社製）で分析したところ、３つのピーク
が得られた（Ｆ１、Ｆ２およびＦ３：図１参照）。これ
をゲル濾過クロマトグラフィー（ＨＷ−４０ ２．５×
１００ｃｍ，東ソー社製）にかけて水で溶出させた。そ
れぞれのピークを濃縮したところ、Ｆ１はサイクロイヌ
ロヘキサオースを示し、Ｆ２（ｆ1 −ＣＦＲ）およびＦ
３（ｆ2 −ＣＦＲ）に分枝環状イヌロオリゴ糖が得られ
た。ＨＰＬＣにより、得られた分枝環状イヌロオリゴ糖
を定量したところ、フルクトシル−サイクロヘキサオー
ス（ｆ1 −ＣＦＲ）が２３９ｍｇ得られた。
【００１５】
【表１】Ｆ２ピーク（ｆ1 −ＣＦＲ）の理化学的性質 ＦＡＢ−ＭＡＳ ： ＭＨ+ ＝１１３５ （Ｍ＋Ｎａ）+ ＝１１５７ 分子式 ： Ｃ42Ｈ70Ｏ35 1 Ｈ−ＮＭＲ ： 図２13 Ｃ−ＮＭＲ ： 図３ Ｆ３ピーク（ｆ2 −ＣＦＲ）の理化学的性質 ＦＡＢ−ＭＡＳ ： ＭＨ+ ＝１２９７ （Ｍ＋Ｎａ）+ ＝１３１９ 分子式 ： Ｃ48Ｈ80Ｏ40 次に、単離精製したＦ２ピークのフルクトシル−サイク
ロヘキサオース ２００ｍｇにインベルターゼ（Ｓｉｇ
ｍａ社製；β−Ｄ−フルクトースのフルクトシド結合を
加水分解する）を加え、３７℃で２時間加温した。反応
は、１００℃で５分間処理を行うことにより停止させ
た。反応前後をＨＰＬＣ（ＭＣＩＧＥＬＣＫ０４Ｓ １
０×２００ｍｍ：三菱化成社製）で分析したところ、フ
ルクトシル−サイクロヘキサオース（ｆ1 −ＣＦＲ）が
ＣＦＲとフルクトースに分解され、生成物のモル比は約
１：１であった（図４参照）。
ロヘキサオース ２００ｍｇにインベルターゼ（Ｓｉｇ
ｍａ社製；β−Ｄ−フルクトースのフルクトシド結合を
加水分解する）を加え、３７℃で２時間加温した。反応
は、１００℃で５分間処理を行うことにより停止させ
た。反応前後をＨＰＬＣ（ＭＣＩＧＥＬＣＫ０４Ｓ １
０×２００ｍｍ：三菱化成社製）で分析したところ、フ
ルクトシル−サイクロヘキサオース（ｆ1 −ＣＦＲ）が
ＣＦＲとフルクトースに分解され、生成物のモル比は約
１：１であった（図４参照）。
【００１６】同様にＦ３ピークについてもインベルター
ゼ処理を行ったところ、生成物のモル比は約１：３であ
った。 実施例２ 実施例１と同様にして、培地２００ｍｌをへそ付フラス
コの１００ｍｌずつ分注し、１２０℃で２０分間蒸気滅
菌した。この滅菌した培養液に、バチルス ズブチルス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＩＦＯ ３０
３４ を１白金耳植菌し、３０℃、１６０ｒｐｍで振と
う培養した。２４時間培養後、遠心分離により菌体を回
収した。得られた菌体にｐＨ７．０のリン酸緩衝液５ｍ
ｌを加えて懸濁し、ＣＦＲ ２ｇ及びシュークロース
１ｇを加え、３７℃で４時間反応させた。１００℃で５
分間の加熱処理により反応を停止させた後、反応物を精
製したところ、４５０ｍｇのフルクトシル−サイクロヘ
キサオース（ｆ1 −ＣＦＲ）が得られた。
ゼ処理を行ったところ、生成物のモル比は約１：３であ
った。 実施例２ 実施例１と同様にして、培地２００ｍｌをへそ付フラス
コの１００ｍｌずつ分注し、１２０℃で２０分間蒸気滅
菌した。この滅菌した培養液に、バチルス ズブチルス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＩＦＯ ３０
３４ を１白金耳植菌し、３０℃、１６０ｒｐｍで振と
う培養した。２４時間培養後、遠心分離により菌体を回
収した。得られた菌体にｐＨ７．０のリン酸緩衝液５ｍ
ｌを加えて懸濁し、ＣＦＲ ２ｇ及びシュークロース
１ｇを加え、３７℃で４時間反応させた。１００℃で５
分間の加熱処理により反応を停止させた後、反応物を精
製したところ、４５０ｍｇのフルクトシル−サイクロヘ
キサオース（ｆ1 −ＣＦＲ）が得られた。
【００１７】
【発明の効果】本発明の分枝環状イヌロオリゴ糖は、ク
ラウンエーテルまたはサイクロデキストリンに代わる新
しい環状の包接化合物として、化学工業、食品工業、製
薬工業等の広い分野における利用が期待される。
ラウンエーテルまたはサイクロデキストリンに代わる新
しい環状の包接化合物として、化学工業、食品工業、製
薬工業等の広い分野における利用が期待される。
【図１】本発明の実施例１における反応液をＨＰＬＣに
て分析したチャートを表す。図中、Ｆ１のピークは原料
のサイクロイヌロヘキサオースを表し、Ｆ２及びＦ３の
ピークは分枝環状イヌロオリゴ糖のピークを表す。
て分析したチャートを表す。図中、Ｆ１のピークは原料
のサイクロイヌロヘキサオースを表し、Ｆ２及びＦ３の
ピークは分枝環状イヌロオリゴ糖のピークを表す。
【図２】本発明の実施例１で得られたＦ２ピークの分枝
環状イヌロオリゴ糖（ｆ1 −ＣＦＲ）における 1Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを表す。
環状イヌロオリゴ糖（ｆ1 −ＣＦＲ）における 1Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルを表す。
【図３】本発明の実施例１で得られたＦ３ピークの分枝
環状イヌロオリゴ糖（ｆ2 −ＣＦＲ）における13Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトルを表す。
環状イヌロオリゴ糖（ｆ2 −ＣＦＲ）における13Ｃ−Ｎ
ＭＲスペクトルを表す。
【図４】本発明の実施例１で得られたＦ２ピークの分枝
環状イヌロオリゴ糖（ｆ1 −ＣＦＲ）を、インベルター
ゼ処理前後においてＨＰＬＣ分析したチャートを表す。
図中、Ａは処理前を、Ｂは処理後をそれぞれ表し、Ｂに
おいてＣＦ６はサイクロイヌロヘキサオースを、ｆｕｒ
はフルクトースを表す。
環状イヌロオリゴ糖（ｆ1 −ＣＦＲ）を、インベルター
ゼ処理前後においてＨＰＬＣ分析したチャートを表す。
図中、Ａは処理前を、Ｂは処理後をそれぞれ表し、Ｂに
おいてＣＦ６はサイクロイヌロヘキサオースを、ｆｕｒ
はフルクトースを表す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (2)
- 【請求項１】 フルクトシル化された分枝環状イヌロオ
リゴ糖。 - 【請求項２】 フルクトース６〜８分子がβ−２，１結
合した環状イヌロオリゴ糖にフルクトースを転移反応さ
せることを特徴とする請求項１記載の分枝環状イヌロオ
リゴ糖の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5569193A JPH06263802A (ja) | 1993-03-16 | 1993-03-16 | 分枝環状イヌロオリゴ糖及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5569193A JPH06263802A (ja) | 1993-03-16 | 1993-03-16 | 分枝環状イヌロオリゴ糖及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06263802A true JPH06263802A (ja) | 1994-09-20 |
Family
ID=13005931
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5569193A Pending JPH06263802A (ja) | 1993-03-16 | 1993-03-16 | 分枝環状イヌロオリゴ糖及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06263802A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990013000A1 (en) * | 1989-04-21 | 1990-11-01 | Hitachi, Ltd. | Projection/exposure device and projection/exposure method |
| JP2009124994A (ja) * | 2007-11-22 | 2009-06-11 | Akita Prefectural Univ | 分岐糖類の製造方法および飲食品 |
-
1993
- 1993-03-16 JP JP5569193A patent/JPH06263802A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990013000A1 (en) * | 1989-04-21 | 1990-11-01 | Hitachi, Ltd. | Projection/exposure device and projection/exposure method |
| JP2009124994A (ja) * | 2007-11-22 | 2009-06-11 | Akita Prefectural Univ | 分岐糖類の製造方法および飲食品 |
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