JPS6133559B2 - - Google Patents

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JPS6133559B2
JPS6133559B2 JP53152052A JP15205278A JPS6133559B2 JP S6133559 B2 JPS6133559 B2 JP S6133559B2 JP 53152052 A JP53152052 A JP 53152052A JP 15205278 A JP15205278 A JP 15205278A JP S6133559 B2 JPS6133559 B2 JP S6133559B2
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JP
Japan
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tryptophan
ethanol
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serratia
medium
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JP53152052A
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JPS5581591A (en
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Hideaki Yugawa
Kazuoki Ookuma
Shoichi Nara
Yoshihiro Takayama
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Mitsubishi Petrochemical Co Ltd
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Mitsubishi Petrochemical Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
    • C12P13/227—Tryptophan
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/425—Serratia
    • C12R2001/43—Serratia marcescens
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
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    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
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  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は醗酵法によるＬ−トリプトフアンの製
造法に関する。Ｌ−トリプトフアンは必須アミノ
酸として有用であり、その安価なる工業的製法の
出現が期待されている。
従来醗酵法によるＬ−トリプトフアンの製造法
としては、前駆物質（インドール、アントラニル
酸、セリンなど）を培地中に添加する方法（特公
昭46−27353など）や、前駆体を用いないいわゆ
る直接醗酵法（特公昭51−38795など）が知られ
ているが、工業的製造法としては、高価な前駆体
を必要としない直接醗酵法が有利と考えられる。
本発明者は有利な直接醗酵法によるＬ−トリプト
フアン製造法に鋭意研究を進めた結果、セラチア
属に属する、エタノール資化性を有し、かつＬ−
トリプトフアンを生成する能力を有する微生物
を、エタノールを主炭素源とする培地に培養する
と著量のＬ−トリプトフアンを生成蓄積すること
を発見し、これを採取精製し本発明を完成した。
従来エタノールを主炭素源とした醗酵法によるア
ミノ酸の製造法としてはＬ−グルタミン酸製造法
（特公昭47−15746、特公昭47−675）、アミノ酸の
製造法（特公昭47−29）、Ｌ−イソロイシン製造
法（特開昭51−130592、特開昭53−75386）、Ｌ−
セリン製造法（特開昭52−130985、特開昭48−
87083）などが知られているが、Ｌ−トリプトフ
アン製造法としては、ブレビバクテリウム属、コ
リネバクテリウム属、アルスロバクター属、ミク
ロバクテリウム属、またはバチルス属による製造
法（特開昭50−135284）が知られているにすぎ
ず、セラチア属に属するエタノール資化性菌によ
る製造法は今まで知られていない。
本発明に使用する微生物にはセラチア属に属
し、エタノールからＬ−トリプトフアンを生成蓄
積する能力を有する微生物であれば、自然界から
分離されたいわゆる野生株もしくは人為的に変異
された変異株であれ含まれることは言うまでもな
い。本発明に使用される微生物の例としては、セ
ラチア・マルセツセンスMT−５が挙げられる。
この微生物はセラチア・マルマツセンスバラエテ
イ−MAY−110（微工研寄託番号第3521号）よ
り、５−メチル−DL−トリプトフアン耐性株と
して誘導分離されたものである。このセラチア・
マルセツセンスMT−５は、工業技術院微生物工
業技術研究所に保管委託を申請受理され、その後
微工研菌寄第4735号FERM−Ｐ No.4735として
受託された。
セラチア・マルセツセンスバラエテイ−MAY
−110は既に特開昭52−130985に開示されている
がその菌学的性質は次の通りである。
形態的性質 0.8〜1.2×1.0〜2.0μの短桿菌。周毛を有
し、運動性有。無胞子。グラム陰性。非抗酸
性。
培養的性質 １ 肉汁寒天培地 コロニー表面は、円錐状、色調ピンク、コ
ロニー周縁は破状。
２ 肉汁寒天斜面培地 糸状もしくは弱疣状。
３ 肉汁培地 皮膜形成有。液に濁り有。
４ 肉汁寒天穿刺 表面によく生育。内部生育は糸状。
生育条件 １ 生育温度：適温27〜35℃、範囲27〜35℃、
範囲12〜38℃ ２ 生育PH：最適PH６〜８、範囲PH５〜10 ３ 酸素要求性：好気的 ４ アンモニウム塩の利用性：有 ５ 尿素の利用性：無 ６ 硝酸塩の利用性：無 ７ 耐塩性：肉汁培地試験３％にて良好な生
育。
生理学的性質、その他 １ ゼラチンを液化せず ２ リトマスミルク変化無 ３ 硝酸塩の還元性：弱 ４ インドールの生成：無 ５ 硫化水素の生成：無 ６ でん粉の加水分解：無 ７ フオーゲル・ブロスカウエル反応：陰性 ８ メチルレツド反応：陰性 ９ カタラーゼの生成：陽性 10 ウレアーゼの生成：陰性 11 炭水化物の醗酵性 アラビノース、キシロース、グルコース、
マンノース、ガラクトース、フラクトース、
マルトース、サツカロース、ラククトース、
メレビオース、セロビオース、トレハロー
ス、ラフイノース、デンプン、イノシツト、
マンニツト、ソルビツト、グリセリン、エス
クリン、ザリシンから酸の生成およびガスの
発生は、いずれもみられない。
12 ビタミンの要求性：無 13 クコノ酸の利用性：無 14 脱窒素反応：陽性 本菌は、グラム陰性の桿菌で胞子形成は認めら
れず、周毛により運動性を有する。また本菌はピ
ンク色のコロニーを形成する特徴を有する。
従つて本菌は、セラチア属に属することは明白
であるが、各種糖質からの酸の生成が認められな
い事より、セラチア・マルセツセンス（Serratia
marcescens）のバラエテイーと判断し、セラチ
ア・マルセツセンスバラエテイ−MAY−110と命
名された。
次に本発明の具体的実施方法について述べる。
培地組成の炭素源としてはエタノールを使用する
が、初期濃度については使用する菌株により１〜
５％V/Vより適当条件を選定する。なお、エタノ
ールは菌株の生育もしくはＬ−トリプトフアン生
成に阻害を与えない適当なる濃度条件に注意しな
がら、消費にともない逐次添加を行う。窒素源と
しては硫安、硝安、塩安、リン安、尿素等より菌
株の利用能により選定する。この他必要量に応じ
てアミノ酸類、コーンステイープリカー、味液、
酵母エキス等の有機栄養源や無機塩類、ビタミン
類などを添加し培地とする。
培養条件においては温度20〜37℃、好ましくは
25〜35℃、PHは４〜10好ましくはPH６〜８とし培
養すればよいが、これらの条件についても使用菌
株により最適のものを選定するのが好ましい。培
養は大体２〜７日間を必要とする。培養終了後液
中より、イオン交換樹脂法、活性炭法、濃縮晶析
法等の公知の方法により生成したＬ−トリプトフ
アンを回収することが出来る。以下に実施例を示
す。
なお生成されたＬ−トリプトフアンの定量には
ロイコノストツクメセンテロイデスATCC8042を
用いる微生物定量法を使用した。又培地中に含有
するＬ−トリプトフアンをこの方法により予め定
量しこれを差引いて培養により生成したＬ−トリ
プトフアンを算出した。
実施例 前培養地（尿素2.0ｇ、硫安7.0ｇ、KH2PO40.5
ｇ、K2HPO40.5ｇ、MgSO4・7H2O0.5ｇ、酵母エ
キス0.5ｇ、カザミノ酸0.5ｇ、FeSO4・7H2O2
mg、MnSO44〜6H2O2mg、ZnSO4・7H2O2mg、
NaCl ２mg、CaCl2・2H2O2mg、ビオチン200μ
ｇ、チアミン塩酸塩100μｇ、水道水１）10ml
を口径24mmの大径試験管に分注し、120℃、10分
間滅菌し、無菌条件下にてエタノールを0.2ml添
加し、セラチア・マルセツセンスMT−５を植菌
し、30℃にて２日間振盪培養を行う。次に前培養
培地と同一の培地10mlを口径24mmの大型試験管に
分注し、120℃10分間滅菌し、あらかじめ乾熱滅
菌した炭酸カルシウム0.2ｇを添加し、次にエタ
ノール0.2mlを添加し、前培養液0.2mlを植菌し、
30℃にて７日間振盪培養を行う。エタノールは消
費にともない添加する。（この際エタノールは３
V/V％を越えないようにする）培養７日目にＬ−
トリプトフアンが12mg/蓄積された。このＬ−
トリプトフアンを公知の方法により回収した。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ セラチア属に属し、エタノール資化性を有
    し、かつＬ−トリプトフアンを生成する能力を有
    する微生物を、エタノールを主炭素源とする培地
    に培養してＬ−トリプトフアンを生成蓄積せし
    め、培養物からこれを採取することを特徴とする
    醗酵法によるＬ−トリプトフアンの製造法。
JP15205278A 1978-12-11 1978-12-11 Production of l-tryptophane by fermentation process Granted JPS5581591A (en)

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JP15205278A JPS5581591A (en) 1978-12-11 1978-12-11 Production of l-tryptophane by fermentation process
US06/101,041 US4271267A (en) 1978-12-11 1979-12-06 Preparation of L-trytophan by fermentation
DE19792949750 DE2949750A1 (de) 1978-12-11 1979-12-11 Verfahren zur fermentativen herstellung von l-tryptophan

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JPS5581591A (en) 1980-06-19
DE2949750A1 (de) 1980-06-19

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