JPS6131084A - 新規微生物 - Google Patents
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- JPS6131084A JPS6131084A JP15443784A JP15443784A JPS6131084A JP S6131084 A JPS6131084 A JP S6131084A JP 15443784 A JP15443784 A JP 15443784A JP 15443784 A JP15443784 A JP 15443784A JP S6131084 A JPS6131084 A JP S6131084A
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- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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- C12P19/12—Disaccharides
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/88—Torulopsis
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はトルロプシス属に属する新規な微生物に関する
。
。
微生物によるセルラーゼ生産の生産促進物質、化粧品原
料として有用なソホローズは、棟の木（５ｏｐｈｏｒａ
ｊａｐｏｎｉｃａ Ｌ、 ）の実のさや中のカンフェ
ロール配糖体の糖成分として最初に見い出されたが、自
然界では遊離状態の二塘として得られることは稀であっ
て、わずかにロイヤルゼリー中に存在することが知られ
ているＫすぎない。
料として有用なソホローズは、棟の木（５ｏｐｈｏｒａ
ｊａｐｏｎｉｃａ Ｌ、 ）の実のさや中のカンフェ
ロール配糖体の糖成分として最初に見い出されたが、自
然界では遊離状態の二塘として得られることは稀であっ
て、わずかにロイヤルゼリー中に存在することが知られ
ているＫすぎない。
また、微生物のンホローズ生産については、Ｋｈａｎ等
が細閑アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ）楓
に属する微生物によるオリゴ糖生成研死において少量の
ソホローズ生成を認めた以外忙知られていないＣＡ、
Ｗ、 Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ、＋Ｎａｔｕｒｅ。
が細閑アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ）楓
に属する微生物によるオリゴ糖生成研死において少量の
ソホローズ生成を認めた以外忙知られていないＣＡ、
Ｗ、 Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ、＋Ｎａｔｕｒｅ。
１８３．６８２（１９５９）、Ｔ、 Ｋ、 Ｗａｌｋｅ
ｒ ｅｔ ａｌ、。
ｒ ｅｔ ａｌ、。
Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｇ、、
８３ 、１６１ （１９５９））。
８３ 、１６１ （１９５９））。
斯かる実状において、ソホローズ生産微生物の早急な探
索が望まれていた。
索が望まれていた。
本発明者は、ソホローズ生産能を有する微生物を広く検
索した結果、酵母トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ
） 躯に属する微生物中に斯様な能力を有するもの
があることを見い出し、本発明を完成した。
索した結果、酵母トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ
） 躯に属する微生物中に斯様な能力を有するもの
があることを見い出し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、トルロプシス属に属し、ンホジーズ
生詑能を有する新７Ａなトルログシス・セロビオース（
Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｂｏｍｂｉｃｏｌａ ）ＫＳＭ
−３６（機工ｉ菌寄第７５８６号）を提供するもので
ある。
生詑能を有する新７Ａなトルログシス・セロビオース（
Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｂｏｍｂｉｃｏｌａ ）ＫＳＭ
−３６（機工ｉ菌寄第７５８６号）を提供するもので
ある。
トルロプシス・ボンピコ−７ＫＳＭ−３６１’ｉ下記の
菌学的性質を有する。
菌学的性質を有する。
（ａ） 各培地における生育状態
麦芽汁培地、麦芽汁寒天培地、ポテト−デキストロース
寒天培地及びコーンミール寒天培地上での生育状態は、
いずれも楕円乃至長楕円酵母で、（０，７５〜３．０
） Ｘ （１，５〜５．５）μの大きさを有し、多極出
芽方式で、真性菌糸、偽菌糸の形成は認められなかった
。
寒天培地及びコーンミール寒天培地上での生育状態は、
いずれも楕円乃至長楕円酵母で、（０，７５〜３．０
） Ｘ （１，５〜５．５）μの大きさを有し、多極出
芽方式で、真性菌糸、偽菌糸の形成は認められなかった
。
［有］） 子嚢胞子の形成
麦芽抽出液寒天培地を用いて子嚢胞子形成の有無を検討
した結果、子爵胞子の形ｈ！ｃを認めなかった。
した結果、子爵胞子の形ｈ！ｃを認めなかった。
（ｅ） 射出胞子の形成
麦芽汁寒天培地で培養して射出胞子の有無を検討した結
果、射出胞子の形成を認めなかった。
果、射出胞子の形成を認めなかった。
（ｄ） 各生理的性質
■ 生育条件 ｐＨ３〜８（最適５〜６）温度 ７〜３
８℃（最適２５〜３４℃）■ 硝酸塩の同化
− ■ 脂肪の分解 十 ■ 尿素の分解 − （０ゼラチンの液化 − ■ 塩化ナトリウム耐性 ６〜Ｌ％（／ ）■ ■ カロチノイドの生成 − ■ カスター培地における有機酸生成 士■ デンプ
ン様物質の生成 − ［有］ ビタミンの要求性 十 （ビオチン、チアミン要求性） （ｅ） 同化性、発酵性の有無 同化性 発酵性 ■ Ｄ−グルコース 士 十■ トレ
ハロース −−■ Ｄ−ガラクトース
− −■ ラクトース
− −■ シュクロース ＋ 十
■ ラフィノース − ＋Ａ■ Ｄ−
マンノース −−■ Ｄ−キシロース
−■ α−メチル−Ｄ−グルコシド
−［相］ メリビオース −■ Ｄ
−アラビノース −＠ ニスクリ／
−０エタノール ＋ Ｏめ イノジット −（１５）マルト
ース − −ｉ１φ メレゾトー
ス −ｊ？＋ グリセリン
＋０ セロビオース −■
イヌリン − ｃ！ｏｌＤ−マンニット ＋■ 可溶性
デンプン −ｏ Ｄ−ソルビット
＋（ｆ） 採集地 東京都武蔵野市のキャベツ畑のキャベツ葉から分離。
８℃（最適２５〜３４℃）■ 硝酸塩の同化
− ■ 脂肪の分解 十 ■ 尿素の分解 − （０ゼラチンの液化 − ■ 塩化ナトリウム耐性 ６〜Ｌ％（／ ）■ ■ カロチノイドの生成 − ■ カスター培地における有機酸生成 士■ デンプ
ン様物質の生成 − ［有］ ビタミンの要求性 十 （ビオチン、チアミン要求性） （ｅ） 同化性、発酵性の有無 同化性 発酵性 ■ Ｄ−グルコース 士 十■ トレ
ハロース −−■ Ｄ−ガラクトース
− −■ ラクトース
− −■ シュクロース ＋ 十
■ ラフィノース − ＋Ａ■ Ｄ−
マンノース −−■ Ｄ−キシロース
−■ α−メチル−Ｄ−グルコシド
−［相］ メリビオース −■ Ｄ
−アラビノース −＠ ニスクリ／
−０エタノール ＋ Ｏめ イノジット −（１５）マルト
ース − −ｉ１φ メレゾトー
ス −ｊ？＋ グリセリン
＋０ セロビオース −■
イヌリン − ｃ！ｏｌＤ−マンニット ＋■ 可溶性
デンプン −ｏ Ｄ−ソルビット
＋（ｆ） 採集地 東京都武蔵野市のキャベツ畑のキャベツ葉から分離。
以上の菌学的性状から、本ＫＳＭ −３６株はトルロプ
シス属に属すると判断される。更に該株は麦芽汁培地、
ＹＭ培地及びグルコース−酵母エキス−’？７’）ン培
地のいずれにおいて培養しても皮膜の形成は認められな
い；ＹＭ寒天培地での生育は良好で、コロニーの形状は
周縁において金縁で隆起して半レンズ状であり、表面は
平滑で、光沢は輝光、性状はバター質、色調はクリーム
色である；巨大コロニー培養でのコロニーの型は円型で
、そのほかコロニーの形態、形状は奮寒天培地でのもの
と同様である等の特徴を有する。
シス属に属すると判断される。更に該株は麦芽汁培地、
ＹＭ培地及びグルコース−酵母エキス−’？７’）ン培
地のいずれにおいて培養しても皮膜の形成は認められな
い；ＹＭ寒天培地での生育は良好で、コロニーの形状は
周縁において金縁で隆起して半レンズ状であり、表面は
平滑で、光沢は輝光、性状はバター質、色調はクリーム
色である；巨大コロニー培養でのコロニーの型は円型で
、そのほかコロニーの形態、形状は奮寒天培地でのもの
と同様である等の特徴を有する。
かかる菌学的性質を有する菌についてゾエイＴｏグー（
Ｊ、 Ｉ、ｏｄｄｅｒ ）の「ザ イースト」（ｒ Ｔ
ｈｅ Ｙｅａｓｔｓ Ｊ Ｎｏｒｔｈ −Ｈｏ１ｌａｎ
ｄ ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ、 ＋ Ａｍｓｔｅｒｄ
ａｍ −Ｌｏｎｄｏｎ、１９７１ ）、駒形和男編「微
生物の化学分類実験法」（学会センター、１９８２）、
飯塚広、後藤昭二著「酵母の分類同定法」（第２版、東
京大学出版会、１９７７）Ｋ基いて検索した結果、本菌
株ト類似の菌株としてはトルロプシス・ゴンピコーラＡ
ＴＣＣ２２２１４（ＧＢＳ ６００９ ）が認められた
。しかしながら、本発明のトルロプシス・ゼンピコーラ
邸Ｍ−３６は、ｎ−アルカンを唯一の炭素源基質とする
分離培地によってキャベツの葉から分離され九菌株であ
るのニ対シ、公知のトルロプシス・ボンビコーラ酵母株
は高濃度のグルコースを唯一の炭素源基質とする分離培
地によって、野花（例えばカナダのアルバータ地方のの
けし）の花蜜から分離された菌株である。そして、公知
のトルロプシス・ボンピコーラ酵母株トは、これが尿素
資化性、すなわちウレアーゼ活性「＋」であるのに対し
、本発明のトルロプシス・ゴンピコーラに！１１Ｍ−３
６ハウレアーゼ活性「−」である点で相違する。更に、
最も顕著な相違として、トルロプシス・ボンピコ−５Ｋ
ＢＭ −３６ｕ ７ホローズ生産性が公知のトルロプシ
ス・ポンピコーラ酵母株に比べ遥かに高いことが挙げら
れる。
Ｊ、 Ｉ、ｏｄｄｅｒ ）の「ザ イースト」（ｒ Ｔ
ｈｅ Ｙｅａｓｔｓ Ｊ Ｎｏｒｔｈ −Ｈｏ１ｌａｎ
ｄ ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ、 ＋ Ａｍｓｔｅｒｄ
ａｍ −Ｌｏｎｄｏｎ、１９７１ ）、駒形和男編「微
生物の化学分類実験法」（学会センター、１９８２）、
飯塚広、後藤昭二著「酵母の分類同定法」（第２版、東
京大学出版会、１９７７）Ｋ基いて検索した結果、本菌
株ト類似の菌株としてはトルロプシス・ゴンピコーラＡ
ＴＣＣ２２２１４（ＧＢＳ ６００９ ）が認められた
。しかしながら、本発明のトルロプシス・ゼンピコーラ
邸Ｍ−３６は、ｎ−アルカンを唯一の炭素源基質とする
分離培地によってキャベツの葉から分離され九菌株であ
るのニ対シ、公知のトルロプシス・ボンビコーラ酵母株
は高濃度のグルコースを唯一の炭素源基質とする分離培
地によって、野花（例えばカナダのアルバータ地方のの
けし）の花蜜から分離された菌株である。そして、公知
のトルロプシス・ボンピコーラ酵母株トは、これが尿素
資化性、すなわちウレアーゼ活性「＋」であるのに対し
、本発明のトルロプシス・ゴンピコーラに！１１Ｍ−３
６ハウレアーゼ活性「−」である点で相違する。更に、
最も顕著な相違として、トルロプシス・ボンピコ−５Ｋ
ＢＭ −３６ｕ ７ホローズ生産性が公知のトルロプシ
ス・ポンピコーラ酵母株に比べ遥かに高いことが挙げら
れる。
そこで、本発明者はＫｍ −３６株をトルロプシス属に
属する新酵母と判断し、トルロプシス・ボンビコーラ（
Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｂｏｍｂｉｃｏｌａ ）ＫＳＭ
−３６と命名し、前記し九如く工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託した。
属する新酵母と判断し、トルロプシス・ボンビコーラ（
Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｂｏｍｂｉｃｏｌａ ）ＫＳＭ
−３６と命名し、前記し九如く工業技術院微生物工業技
術研究所に寄託した。
このＫＳＭ −３６株を分離源であるキャベツの葉から
分離するＫは、例えば後記実施例に示す如く、ノルマル
ノ９ラフインを唯一の炭素源として含有する培地を用い
常法に従って行えばよい。
分離するＫは、例えば後記実施例に示す如く、ノルマル
ノ９ラフインを唯一の炭素源として含有する培地を用い
常法に従って行えばよい。
本発明のＫＳＭ −３６株を用いてソホローズを製造す
るには、ＫＳＭ −３６株が良好に生育し、ソホローズ
を順調に生産するために必要な炭素源、窒素源あるいは
有機栄養源、無機塩などを含む培地中でこれを培養する
。
るには、ＫＳＭ −３６株が良好に生育し、ソホローズ
を順調に生産するために必要な炭素源、窒素源あるいは
有機栄養源、無機塩などを含む培地中でこれを培養する
。
炭素源としては、炭水化物（例えば、グルコース、フラ
クトース、シュクロース、ソルビトール等）、有・幾濃
（例えば、クエン酸、コハク酸等）、炭化水素（例えば
、ｎ−ドデカン、ｎ−へキサデカン等）、油脂及びその
銹導体（例えば、動植物油脂、ジグリセライド、モノグ
リセライド、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪族アルコー
ル及びそのエステル等）、アルキル（又はアルケニル）
ハライドなど資化されるものならばいずれも使用できる
。また、窒素源あるいは有機栄養源としては、例えば硫
酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム等の無機窒素源化合物類、グルタミン酸等のアミノ＃
！類、酵母エキス、肉エキス、ペゾトン等の有機窒素源
物質類が堪けられる。また、無機塩としては各種リン酸
塩、硫酸マグネシウムなどが使用できる。
クトース、シュクロース、ソルビトール等）、有・幾濃
（例えば、クエン酸、コハク酸等）、炭化水素（例えば
、ｎ−ドデカン、ｎ−へキサデカン等）、油脂及びその
銹導体（例えば、動植物油脂、ジグリセライド、モノグ
リセライド、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪族アルコー
ル及びそのエステル等）、アルキル（又はアルケニル）
ハライドなど資化されるものならばいずれも使用できる
。また、窒素源あるいは有機栄養源としては、例えば硫
酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム等の無機窒素源化合物類、グルタミン酸等のアミノ＃
！類、酵母エキス、肉エキス、ペゾトン等の有機窒素源
物質類が堪けられる。また、無機塩としては各種リン酸
塩、硫酸マグネシウムなどが使用できる。
更に、微量の重金属塩類が使用されるが、天然物を含む
培地では必ずしも添加を必要としない。ビタミンとして
チアミンとピオチンを要求するが、やはり天然物ｔ−冨
む培地では必ずしも添加を必要としない。更にまた、栄
養要求を必要とする変異株を用いる場合には、その栄養
要求を満たす物質を培地に添加しなければならない。
培地では必ずしも添加を必要としない。ビタミンとして
チアミンとピオチンを要求するが、やはり天然物ｔ−冨
む培地では必ずしも添加を必要としない。更にまた、栄
養要求を必要とする変異株を用いる場合には、その栄養
要求を満たす物質を培地に添加しなければならない。
培養は培地を加熱等により殺菌後、菌を接種し、２０〜
３５℃で３〜５日振盪又は通気攪拌すればよいｅ、
ｐＨは初発ｐＨを５〜６．５に調整し、その後は培養に
まかせれば良い結果が得られる。水に難溶性の炭素源等
を使用する場合には、？リオキシエチレンソルピタン等
の各種界面活性剤を培地に添加することも可能である。
３５℃で３〜５日振盪又は通気攪拌すればよいｅ、
ｐＨは初発ｐＨを５〜６．５に調整し、その後は培養に
まかせれば良い結果が得られる。水に難溶性の炭素源等
を使用する場合には、？リオキシエチレンソルピタン等
の各種界面活性剤を培地に添加することも可能である。
紙上の如くして得られた培養物は、そのまま酵母源とし
て用いることができるが、通常の固数分離手段を用いて
培養物から菌体を分離し、得られる生菌体又はその処理
物（凍題乾燥菌体等）を酵母源とすることもできる。
て用いることができるが、通常の固数分離手段を用いて
培養物から菌体を分離し、得られる生菌体又はその処理
物（凍題乾燥菌体等）を酵母源とすることもできる。
更に、培養物中からソホローズを単離するには、後記参
考例に示す如く、ソホローズの理化学的性質を利用して
、一般の有機化合物の採取および精製の手段に準じて行
うことができる。
考例に示す如く、ソホローズの理化学的性質を利用して
、一般の有機化合物の採取および精製の手段に準じて行
うことができる。
すなわち、例えば培養物を遠心分離、濾過又は分相等に
付して培養液を分堆し、次いでこの培養液から抽出、イ
オン交換等の方法により不純物を取除いたのち、更に活
性炭カラム等を用いたカラムクロマトグラフィー等の方
法により分別精製する。
付して培養液を分堆し、次いでこの培養液から抽出、イ
オン交換等の方法により不純物を取除いたのち、更に活
性炭カラム等を用いたカラムクロマトグラフィー等の方
法により分別精製する。
本発明のトルロプシス・メンビコーラＫＳＭ−３６は、
後記参考例に示す如く、ソホローズを生産する。
後記参考例に示す如く、ソホローズを生産する。
前述の如く、微生物のソホローズ生産能については、僅
かに１例知られているのみで、しかも単に少量のソホロ
ーズ生成を認めたというに過ぎない。これに対し、本発
明のトルロプシス・ボンビコーラＫＳＭ −３６は極め
て高いソホローズ生産能を有する。
かに１例知られているのみで、しかも単に少量のソホロ
ーズ生成を認めたというに過ぎない。これに対し、本発
明のトルロプシス・ボンビコーラＫＳＭ −３６は極め
て高いソホローズ生産能を有する。
次に実施例及び参考例を挙げて本発明を説明する。
実施例１
１）東京都武蔵野市郊外のキャベツ畑のキャベツ葉１０
２を滅菌水３０−の入ったビーカーに入れ、ＩＯ分間マ
グネチツクスターラで懸濁分散させた。静置後、その上
澄液を１０ｍ採取し、これを下記組成の分離用液体培地
１００−を含有した５０〇−容坂ロフラスコに接種し、
３０℃、１２０ストローク、７分で７日間振盪培養した
。この操作を繰り返し行い、４回集積培養を行った。
２を滅菌水３０−の入ったビーカーに入れ、ＩＯ分間マ
グネチツクスターラで懸濁分散させた。静置後、その上
澄液を１０ｍ採取し、これを下記組成の分離用液体培地
１００−を含有した５０〇−容坂ロフラスコに接種し、
３０℃、１２０ストローク、７分で７日間振盪培養した
。この操作を繰り返し行い、４回集積培養を行った。
（分離用液体培地の組成）
ｎ−ヘキサデカン １０〇−硝酸アンモニウ
ム ２５９リン酸二水素カリウム
１０？硫酸マグネシウム・７水塩 ５．Ｏ
ｆ塩化カリウム ５．Ｏｆ酵母エキ
ス １．０ｆ水道水
１０００ｄｐＨ４，５ （１） 次いで、各段階の集積培地液から培養液０、
５ ｍ採取し、これを下記方法で調製された分離用寒天
培地の表面にコンラゾー棒で均一に塗布したのち、ｎ−
ヘキサデカンを含浸させた口紙で横いセロテープで密封
し、３０ｃで培養した。
ム ２５９リン酸二水素カリウム
１０？硫酸マグネシウム・７水塩 ５．Ｏ
ｆ塩化カリウム ５．Ｏｆ酵母エキ
ス １．０ｆ水道水
１０００ｄｐＨ４，５ （１） 次いで、各段階の集積培地液から培養液０、
５ ｍ採取し、これを下記方法で調製された分離用寒天
培地の表面にコンラゾー棒で均一に塗布したのち、ｎ−
ヘキサデカンを含浸させた口紙で横いセロテープで密封
し、３０ｃで培養した。
（分離用寒天培地のａ１４製）
ｎ−ヘキサデカンを除いた上記分離用液体培地に寒天ｆ
、ｇ体培地に対し外地で２．５重量％添加したのち蒸気
滅菌した。これを保温下で滅菌シャーレに一定量分注し
平板寒天培地とした。
、ｇ体培地に対し外地で２．５重量％添加したのち蒸気
滅菌した。これを保温下で滅菌シャーレに一定量分注し
平板寒天培地とした。
砿） 次いで、上記培養により生育したコロニーの一白
金耳を滅菌水で１００倍希釈し、この希釈液０．１−を
前述の分離用寒天培地と同組成の寒天培地に再度塗布し
、同様にｎ−ヘキサデカンを含浸させた口紙で覆うこと
によりｎ−ヘキサデカンを供給しながら３０℃で３日間
培養した。生じた複数のコロニーが相互に相異しないこ
とを肉眼的及び顕微鏡的に観察することにより確認した
。更に上記コロニーのうち１０個のコロニーをそれぞれ
分離用寒天培地と同組成の斜面寒天培地に接種し、ｎ−
へキサデカンを含浸させた口紙によりｎ−ヘキサデカン
を供給しつつ３０℃で３日間培養した。１０本の斜面培
地上の一株が肉眼旧及び顕微鏡的に同一菌株であること
を再確認し、また、これら１０Ｖ４株の各培地上の性状
及び生理学的性質が同一であることを確認した。上記菌
株の各培地上の性状及び生理学的性質は前述した辿りで
ある。
金耳を滅菌水で１００倍希釈し、この希釈液０．１−を
前述の分離用寒天培地と同組成の寒天培地に再度塗布し
、同様にｎ−ヘキサデカンを含浸させた口紙で覆うこと
によりｎ−ヘキサデカンを供給しながら３０℃で３日間
培養した。生じた複数のコロニーが相互に相異しないこ
とを肉眼的及び顕微鏡的に観察することにより確認した
。更に上記コロニーのうち１０個のコロニーをそれぞれ
分離用寒天培地と同組成の斜面寒天培地に接種し、ｎ−
へキサデカンを含浸させた口紙によりｎ−ヘキサデカン
を供給しつつ３０℃で３日間培養した。１０本の斜面培
地上の一株が肉眼旧及び顕微鏡的に同一菌株であること
を再確認し、また、これら１０Ｖ４株の各培地上の性状
及び生理学的性質が同一であることを確認した。上記菌
株の各培地上の性状及び生理学的性質は前述した辿りで
ある。
上記試験の結果、各１０本の培養菌はすべて自然界より
純粋に分離された単一菌株であることが判る。
純粋に分離された単一菌株であることが判る。
６ｖ） 次いで、上記で純粋ＰｊＩＩされｆｃ斜斜面
地地上菌株より一白金耳を滅菌し、ｌ’ｃｌＯ％グリセ
リン水溶液（２ｒｎりの入った凍結保存用バイアルに懸
濁し、−８０ＣＫで凍結保存する。
地地上菌株より一白金耳を滅菌し、ｌ’ｃｌＯ％グリセ
リン水溶液（２ｒｎりの入った凍結保存用バイアルに懸
濁し、−８０ＣＫで凍結保存する。
かくして３ケ月凍結保存後、迅速に解凍して得られる懸
濁液の一白金耳を普通寒天培地に蘇生後前記と同条件下
に各培地上での性状及び生理学的性質を調べた結果、凍
結前とは変化が認められなかった。
濁液の一白金耳を普通寒天培地に蘇生後前記と同条件下
に各培地上での性状及び生理学的性質を調べた結果、凍
結前とは変化が認められなかった。
また、上記凍結及び解凍を１ケ月毎に５度繰り返した１
株について同様に、各培地上での性状及び生理学的性質
を調べた結果変化は認められなかった。
株について同様に、各培地上での性状及び生理学的性質
を調べた結果変化は認められなかった。
参考例１
（１） 滅菌したグルコース５重置／容量％（以下、
Ｗ／ ％で示す）−コーンスターチシリツカ−■ ２ ／ 慢含有する橿培地（ｐＨ６，２）５００ゴ■ を入れた５ｊ容培養三角フラスコに、同組成の培地を入
れた５００−容坂ロフラスコ中で３０℃、４８時間培養
して得たトルロプシス・ボンビコーラＫＳＭ −３６培
養液を５０−接種し、３０℃で４８時間振盪培養した。
Ｗ／ ％で示す）−コーンスターチシリツカ−■ ２ ／ 慢含有する橿培地（ｐＨ６，２）５００ゴ■ を入れた５ｊ容培養三角フラスコに、同組成の培地を入
れた５００−容坂ロフラスコ中で３０℃、４８時間培養
して得たトルロプシス・ボンビコーラＫＳＭ −３６培
養液を５０−接種し、３０℃で４８時間振盪培養した。
次いで、この培養液３００ＷＬｔを、ノＱ−ム油１５
”／ ％■ 一グルコース１０”／ ％−酵母エキス０．５ｗ／ｖ
ｙチを含
有する本培地（ＰＨ５，６）１５１金入れた３０／容の
ツヤ−７アーメンターに接補し、温度＝３０℃、通気：
０．５ＶＶＭ、内圧：０．７５Ｋｔ ／ ｃｍ”、攪拌
： ３５０ ｒｐｍの条件下で５日間培養した、 ＜１） ｊ？！養液約１５７を内径１５ｍ、長さ１０
０圀の先端部が円錐状の保温ジャケット付分相管に入れ
、下部より空気を噴出させて攪拌しながら約７０℃で３
０分加温したのち通気を止め、３０分間培養液を放置沈
降させた。このとき培養液は４相に分相する。最下沈降
用及びその上の菌体相を下部ノズルから静かに抜きとっ
た後、その上相（分相時の上から第２相）にあたる水相
を静かに採取した。
”／ ％■ 一グルコース１０”／ ％−酵母エキス０．５ｗ／ｖ
ｙチを含
有する本培地（ＰＨ５，６）１５１金入れた３０／容の
ツヤ−７アーメンターに接補し、温度＝３０℃、通気：
０．５ＶＶＭ、内圧：０．７５Ｋｔ ／ ｃｍ”、攪拌
： ３５０ ｒｐｍの条件下で５日間培養した、 ＜１） ｊ？！養液約１５７を内径１５ｍ、長さ１０
０圀の先端部が円錐状の保温ジャケット付分相管に入れ
、下部より空気を噴出させて攪拌しながら約７０℃で３
０分加温したのち通気を止め、３０分間培養液を放置沈
降させた。このとき培養液は４相に分相する。最下沈降
用及びその上の菌体相を下部ノズルから静かに抜きとっ
た後、その上相（分相時の上から第２相）にあたる水相
を静かに採取した。
（ｍ） 次いで、採果水相部１１を採り、必要に応じ
て分液ロート中でクロロボルム−メタノール混液（２：
１）５００−で抽出操作を行い、水相中のクロロホルム
−メタノール可溶性物質を除去する。そして、この抽出
処理水相部を５℃、３５００ ｒｐｍで３０分間遠心分
離を行い上清液を得た。この上清液をロータ９−エバー
レータ−で３５℃温浴上にて混在するメタノール等を留
去するとともに減圧磯縮した。史に、得られた濃縮成約
５０ｍからイオン性物質を除去するために１これにカチ
オン交換樹脂とアニオン交換樹脂を添加し、２時間攪拌
したのちイオン交換樹脂を洗浄除去した。
て分液ロート中でクロロボルム−メタノール混液（２：
１）５００−で抽出操作を行い、水相中のクロロホルム
−メタノール可溶性物質を除去する。そして、この抽出
処理水相部を５℃、３５００ ｒｐｍで３０分間遠心分
離を行い上清液を得た。この上清液をロータ９−エバー
レータ−で３５℃温浴上にて混在するメタノール等を留
去するとともに減圧磯縮した。史に、得られた濃縮成約
５０ｍからイオン性物質を除去するために１これにカチ
オン交換樹脂とアニオン交換樹脂を添加し、２時間攪拌
したのちイオン交換樹脂を洗浄除去した。
（１ｖ） この脱イオン処理水相３２０−全量を活性
炭カラムに充填した。なお、活性炭カラムは内径２．５
ｃｒｓ 、長さ６０ｍのガラスカラムに１８０−容量
の活性炭〔クロマト用活性炭、和光紬薬■製〕を充填し
たのち、４現定−塩酸水溶液を１００〇−流し、次いで
蒸留水４０００−を流して調製したものを使用した。
炭カラムに充填した。なお、活性炭カラムは内径２．５
ｃｒｓ 、長さ６０ｍのガラスカラムに１８０−容量
の活性炭〔クロマト用活性炭、和光紬薬■製〕を充填し
たのち、４現定−塩酸水溶液を１００〇−流し、次いで
蒸留水４０００−を流して調製したものを使用した。
この活性炭カラムによる分離操作は、最初溶離液として
蒸留水１０００Ｔｎｔを流し、次に５チエタノール水溶
液２５００ｆｎｌ、１０％エタノール水溶液１０００ｍ
、２０％エタノール水溶液１０００ｄの順序でステツゾ
ワイズ（階段的）浴出を何い、最後に５０％エタノール
水浴液１０００−を流して終了した。溶出液は大型７ラ
クシヨンコレクターで１００？重量分画／７ラクシヨン
で分取した。分離された谷分画部を薄層クロマトグラフ
ィー、ガスクロマトグラフィー及びガスクロ−マススペ
クトロメトリー（ＧＣ−ＭＳ ）などで分析することＫ
よりＡｌｌ〜Ａ４０の画分に分離分画された物質がンホ
ローズであることが確認され九（第１図）。上記発酵条
件で得られ九ソホローズは発酵液１ｊあたり約３０？で
あった。また、Ａ１〜黒１００分離−分にはマンニラト
ールが存在することを確認した。
蒸留水１０００Ｔｎｔを流し、次に５チエタノール水溶
液２５００ｆｎｌ、１０％エタノール水溶液１０００ｍ
、２０％エタノール水溶液１０００ｄの順序でステツゾ
ワイズ（階段的）浴出を何い、最後に５０％エタノール
水浴液１０００−を流して終了した。溶出液は大型７ラ
クシヨンコレクターで１００？重量分画／７ラクシヨン
で分取した。分離された谷分画部を薄層クロマトグラフ
ィー、ガスクロマトグラフィー及びガスクロ−マススペ
クトロメトリー（ＧＣ−ＭＳ ）などで分析することＫ
よりＡｌｌ〜Ａ４０の画分に分離分画された物質がンホ
ローズであることが確認され九（第１図）。上記発酵条
件で得られ九ソホローズは発酵液１ｊあたり約３０？で
あった。また、Ａ１〜黒１００分離−分にはマンニラト
ールが存在することを確認した。
マンニラトールは発酵液１ｊあたり約１２２であった。
第１図は参考例１におけるカラムクロマトグラフィーの
結果を示す溶出曲線である。 以上
結果を示す溶出曲線である。 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、下記の菌学的性質を有するトルロプシス・ボンビコ
ーラ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｂｏｍｂｉｃｏｌａ）Ｋ
ＳＭ−３６（微工研菌寄第７５８６号）。 （ａ）各培地における生育状態 麦芽汁培地、麦芽汁寒天培地、ポテト−デキストロース
寒天培地及びコーンミール寒天培地上での生育状態は、
いずれも楕円乃至長楕円酵母で、（０．７５〜３．０）
×（１．５〜５．５）μの大きさを有し、多極出芽方式
で、真性菌糸、偽菌糸の形成は認められなかつた。 （ｂ）子嚢胞子の形成 麦芽抽出液寒天培地を用いて子嚢胞子形成の有無を検討
した結果、子嚢胞子の形成を認めなかつた （ｃ）射出胞子の形成 麦芽汁寒天培地で培養して射出胞子の有無を検討した結
果、射出胞子の形成を認めなかつた。 （ｄ）各生理的性質 （１）生育条件ｐＨ３〜８（最適５〜６） 温度７〜３８℃（最適２５〜３４℃） （２）硝酸塩の同化 − （３）脂肪の分解 ＋ （４）尿素の分解 − （５）ゼラチンの液化 − （６）塩化ナトリウム耐性６〜８％（Ｗ／Ｖ） （７）カロチノイドの生成 − （８）カスター培地における有機酸生成 ＋ （９）デンプン様物質の生成 − （１０）ビタミンの要求性 ＋ （ビオチン、チアミン要求性） （ｅ）同化性、発酵性の有無 同化性 発酵性 （１）Ｄ−グルコース ＋ ＋ （２）トレハロース − − （３）Ｄ−ガラクトース − − （４）ラクトース − − （５）シュクロース ＋ ＋ （６）ラフィノース − ＋＾１＾／＾３ （７）Ｄ−マンノース − − （８）Ｄ−キシロース − （９）α−メチル−Ｄ−グルコシド − （１０）メリビオース − （１１）Ｄ−アラビノース − （１２）エスクリン − （１３）エタノール ＋ （１４）イノシツト − （１５）マルトース − − （１６）メレジトース − （１７）グリセリン ＋ （１８）セロビオース − （１９）イヌリン − （２０）Ｄ−マンニット ＋ （２１）可溶性デンプン − （２２）Ｄ−ソルビット ＋
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15443784A JPS6131084A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | 新規微生物 |
| GB08516702A GB2162536B (en) | 1984-07-25 | 1985-07-02 | Novel microorganism |
| US06/755,092 US4782025A (en) | 1984-07-25 | 1985-07-15 | Novel microorganism |
| DE19853525411 DE3525411A1 (de) | 1984-07-25 | 1985-07-16 | Neuer mikroorganismus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15443784A JPS6131084A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | 新規微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6131084A true JPS6131084A (ja) | 1986-02-13 |
| JPH0449396B2 JPH0449396B2 (ja) | 1992-08-11 |
Family
ID=15584170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15443784A Granted JPS6131084A (ja) | 1984-07-25 | 1984-07-25 | 新規微生物 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4782025A (ja) |
| JP (1) | JPS6131084A (ja) |
| DE (1) | DE3525411A1 (ja) |
| GB (1) | GB2162536B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6825389B2 (en) | 2002-11-21 | 2004-11-30 | Dupont Dow Elastomers Llc | Process for manufacturing diiodoperfluoroalkanes |
| WO2015076423A1 (en) | 2013-11-21 | 2015-05-28 | Kao Corporation | Method for producing acetylated sphingoid base |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5280204A (en) * | 1992-07-02 | 1994-01-18 | International Business Machines Corporation | ECI compatible CMOS off-chip driver using feedback to set output levels |
| US5750363A (en) * | 1995-09-14 | 1998-05-12 | Infectech, Inc. | Method for determining the antimicrobial agent sensitivity of a nonparaffinophilic microorganism and an associated apparatus |
| US5639675A (en) * | 1995-11-09 | 1997-06-17 | Infectech, Inc. | Method of identifying a nonparaffinophilic microorganism using various milieus and an associated apparatus |
| US5641645A (en) * | 1995-11-09 | 1997-06-24 | Infectech, Inc. | Method for determining the antimicrobial agent sensitivity of a nonparaffinophilic microorganism using various milieus and an associated apparatus |
| WO2000024918A1 (en) * | 1998-10-27 | 2000-05-04 | Cargill, Incorporated | Method for purifying a polyol product stream |
| WO2011087743A2 (en) | 2009-12-22 | 2011-07-21 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Decellularized adipose cell growth scaffold |
| CA3125314A1 (en) * | 2018-12-28 | 2020-07-02 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Dihomo-.gamma.-linolenic acid-containing microbial oil/lipid with reduced arachidonic acid content |
-
1984
- 1984-07-25 JP JP15443784A patent/JPS6131084A/ja active Granted
-
1985
- 1985-07-02 GB GB08516702A patent/GB2162536B/en not_active Expired
- 1985-07-15 US US06/755,092 patent/US4782025A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-16 DE DE19853525411 patent/DE3525411A1/de active Granted
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6825389B2 (en) | 2002-11-21 | 2004-11-30 | Dupont Dow Elastomers Llc | Process for manufacturing diiodoperfluoroalkanes |
| WO2015076423A1 (en) | 2013-11-21 | 2015-05-28 | Kao Corporation | Method for producing acetylated sphingoid base |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0449396B2 (ja) | 1992-08-11 |
| GB2162536B (en) | 1987-09-30 |
| DE3525411C2 (ja) | 1993-07-22 |
| US4782025A (en) | 1988-11-01 |
| DE3525411A1 (de) | 1986-01-30 |
| GB8516702D0 (en) | 1985-08-07 |
| GB2162536A (en) | 1986-02-05 |
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