JPS6127709B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は脂質測定用水溶性標準液に関するもの
である。 体液中の脂質の測定は、近年酵素的測定法の開
発により急速に普及し、臨床診断の分野での有用
性が増大している。しかるに測定のための標準と
なる脂質標準液には、従来、適当なものが存在し
なかつた。脂質は元来、水に溶解が困難なため、
従来、多くは有機溶媒に溶解したものが多く、そ
のため、その存在状態や液性が体液、例えば血清
と非常に異なる。そのことは測定試薬との反応性
やサンプリングの面で、検体となる血清との間に
大きな差を生じ、脂質を有機溶剤に溶解したもの
を標準液とした場合、測定値として大きな誤差と
なつてあらわれる。また、これらの欠点を改良す
べく脂質を界面活性剤に溶解して水溶性にするこ
とも知られていた。しかしながら、脂質を水溶性
にする場合には、界面活性剤を多量に必要とする
ために、非常に粘稠性の高いものとなり、取扱い
が困難であつた。さらに有機溶媒を多量に用い、
界面活性剤を少なくして粘稠性を下げたものは保
存安定性が悪かつた。 本発明者等はこのような従来の欠点を解決すべ
く種々鋭意検討の結果、脂質を胆汁酸またはその
塩とHLB値が10〜14を有する非イオン界面活性
剤、あるいはこれらに、さらに有機溶媒を組み合
せた系に溶解して標準液を調製することにより、
水溶性で粘稠性の低い、取扱い容易な保存安定性
のよい、体液によく類似した脂質標準液を得るこ
とを見出し、本発明を完成するに至つた。すなわ
ち本発明は脂質、胆汁酸またはその塩とHLB値
が10〜14を有する非イオン性界面活性剤を含有す
る脂質測定用水溶性標準液ならびに脂質、胆汁酸
またはその塩とHLB値が10〜14を有する非イオ
ン界面活性剤および有機溶媒を含有する脂質測定
用水溶性標準液である。 本発明では水溶性で、粘稠性の低い、取扱い容
易な保存安定性の極めて優れた脂質標準液の調製
が可能となり、体液中の脂質測定に極めて有用な
標準液を供給することが出来、測定の精度、正確
度の向上に貢献する所が大である。 本発明の標準液において胆汁酸またはその塩を
欠くと、粘稠性が高く実用に供さない。また、界
面活性剤を欠くと、保存安定性がきわめて悪い。 さらに本発明では従来、リン脂質の測定におい
て標準物質として塩化コリンが用いられていたの
に対して、リン脂質により類似するレシチンも標
準物質として用いることが可能となり、さらに正
確なリン脂質の測定ができるようになつた。 また従来、体液中のトリグリセライドの測定に
おいて、標準物としてグリセリンが用いられてい
たのに対して、体液中のトリグリセライドにより
類似するトリオレインを標準物質として用いるこ
とが可能となり、さらに正確なトリグリセライド
の測定ができるようになつた。 本発明における脂質としては、コレステロール
およびその誘導体、リン脂質、グリセリンの酸エ
ステル、脂肪酸、過酸化脂質等が挙げられる。 本発明に使用される胆汁酸としては、コール
酸、デオキシコール酸、グリココール酸、タウロ
コール酸、ケノデオキシコール酸、リトコール酸
およびその塩類がある。 また界面活性剤としては、HLB値が10〜14を
有する非イオン界面活性剤であればいかなる構造
を有するものでもよい。例えばポリオキシエチレ
ンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキ
ルフエノールエーテル、ポリオキシエチレントリ
ベンジルフエノールエーテル、ポリオキシエチレ
ンスチレン化フエノールエーテル等が挙げられ
る。界面活性剤のHLB値が10未満であると水溶
性にならない曇点が生じ均一な溶液にならない。
またHLB値が14を越ると脂質の溶解性が悪く、
標準液の保存は不可能となる。 さらに本発明に使用する有機溶媒とは水と１重
量／容量％以上の濃度で溶解する有機溶媒であ
り、低級アルコール類、例えばメタノール、エタ
ノール、イソプロパノール、ブタノール、ペンタ
ノール、ヘキサノールなどや低級アルカン類、例
えばペンタン、ヘキサン、ヘプタン等、その他、
上記非イオン界面活性剤と混合して水と均一な液
相を形成するものであればいかなるものでもよ
い。 本発明の脂質測定用水溶性標準液は脂質、胆汁
酸またはその塩と上記界面活性剤および必要によ
り上記有機溶剤を含有する。使用される胆汁酸ま
たはその塩、界面活性剤および有機溶剤の混合割
合は特に限定されるものではないが、好ましくは
脂質測定用水溶性標準液に対して、胆汁酸または
その塩としては0.01〜20重量％、界面活性剤とし
ては0.1〜20重量％、有機溶剤としては０〜20重
量％程度である。 上記標準液を調製する方法としては、脂質を有
機溶解し、次いで界面活性剤および胆汁酸または
その塩を溶解し、さらに水を添加する方法、界面
活性剤と胆汁酸またはその塩を含有する水溶液に
脂質を溶解する方法などがある。 本発明の標準液には必要により、さらに蛋白
質、例えばアルブミン、グロブリン等や防腐剤、
例えば食塩、ホウ酸、EDTA等のキレート剤、抗
生物質、窒化物、アルキルジメチルベンジルアン
モニウムクロライド等の防腐効果のある界面活性
剤等を添加してもよい。 また本発明の標準液調製時のPHについては特に
限定されない。酵素的測定法に影響がなければい
かなるPHでも良いが、特に好ましいPHは４〜10で
ある。その時のPH調整には緩衝液でも酸やアルカ
リの添加によつてもよい。 本発明の標準液は脂質の種類に応じてコレステ
ロール及びその誘導体、リン脂質、グリセリン等
の脂肪酸エステル、脂肪酸、過酸化脂質等の測定
に使用される。 次に本発明の標準液を用いて脂質を測定する方
法について簡単に説明する。本発明の標準液はこ
れらの測定法に限定して使用されるものではな
い。 脂質、例えば血清中のコレステロールを測定す
るには、試料にコレステロールオキシダーゼを作
用させ、生成する過酸化水素に４―アミノアンチ
ピリン、ジエチルアニリン等の色原体とともにペ
ルオキシダーゼを作用させ、生成するキノン色素
の可視部吸収の吸光度を測定する方法、又は生成
する過酸化水素を公知の電気化学的手段により測
定する方法等があり、濃度既知の本発明のコレス
テロール測定用標準液を試料に代えて、同様にし
て測定したデータを比較対照として、試料中のコ
レステロールの量を知る。 また、血清中のコレステロールエステルを測定
するには試料にコレステロールエステラーゼ、コ
レステロールオキシダーゼを作用させ、生成する
過酸化水素を上記方法と同様にして測定する方法
等がある。標準液としてはコレステロール測定用
標準液を用いる。 さらに血清中のリン脂質を測定するには、試料
にホスホリパーゼＤ、コリンオキシダーゼを作用
させ、生成する過酸化水素を上記方法と同様にし
て測定する方法等がある。標準液としてはリン脂
質例えばレシチンを使用したものを用いる。 その他、血清中のトリグリセライド、遊離脂肪
酸などの脂質も同様にして測定することができ
る。 本発明の水溶性で粘稠性の低い、吸扱い容易で
保存安定性の極めて優れた脂質測定用標準液を用
いることにより、体液中の脂質測定は精度高く、
正確に測定することができる。 以下、本発明を実施例によつて詳細に説明す
る。 実施例 １ コレステロール（再結晶）４ｇをエタノール
100mlに40℃で加温溶解し、次いでポリオキシエ
チンオクチルフエノールエーテル（HLB値12.4）
100ｇ、コール酸ナトリウム３ｇを加えて40℃で
加温溶解し、水を添加して全量１にした。 このようにして調製したコレステロール測定用
標準液は血清と同程度の粘稠性を示した。また、
この標準液は４℃にて１ケ月以上安定であつた。
ところが、ポリオキシエチレンオクチルフエノー
ルエーテルを添加しない以外同様にして標準液を
調製したところ、４℃にて１ケ月保存した後、コ
レステロールの析出が見られた。 またコール酸ナトリウムを添加しない以外は同
様にして標準液の調製を行なつたところ、粘稠性
が高く実用に供されなかつた。 実施例 ２ 卵レシチン３ｇをヘキサン30mlで溶解し、次い
でポリオキシエチレンラウリルエーテル（HLB
値12.1）40ｇ、タウロコール酸ナトリウム４ｇを
添加し、40℃にて加温溶解後、水を添加して全量
１にした。 このようにして調製したリン脂質測定用標準液
は血清と同程度の粘稠性を示した。。また、この
標準液は４℃にて１年間安定であつた。 実施例 ３ トリオレン300mgをポリオキシエンレンオクチ
ルフエーテル（HLB 12.7）10.0重量％およびコ
ール酸ナトリウム1.0重量％含有する水溶液90ml
に添加し、超音波処理を５分間行ない、可溶化し
た後、水を加えて全量100mlにした。 このようにして調製したトリグリセライド測定
用標準液は血清と同程の粘稠性を有していた。ま
た４℃で１年半保存しても、相分離、沈澱生成等
はなかつた。 比較のため、コール酸ナトリウムを添加しない
以外は同様にして調製した標準液は極めて粘稠で
マイクロピペツトでサンプリングする際、流動性
が悪く、排出時、残液がマイクロピペツトに多か
つた。 本発明のトリグリセライド測定用標準液20mlを
リポプロテインリパーゼ500単位、ATPのナトリ
ウム塩0.4mM、グリセロールキナーゼ３単位、
グリセロール―３―リン酸オキシダーゼ５単位、
ペルオキシダーゼ20単位、４―アミノアンチピリ
ン0.01％、ジエチルメタトルイジン0.02％を含む
試薬３mlに添加し、37℃で15分間加温し、545nm
における吸光度を測定したところ、0.325であつ
た。 一方、同標準液を４℃にて１年半保存した後の
ものを用いて、トリグリセライド測定用試薬を反
応させ、吸光度を測定したところ、前記値と変わ
りがなかつた。 比較例 １ コレステロール400mgを下記第１表に示される
組成を有する水溶液100mlに添加した。 その溶解性、保存安定性および標準液としての
取扱い性を第１表に示す。 なお使用した非イオン界面活性剤はいずれもポ
リオキシエチレンノニルフエノールエーテルであ
る。

【表】

【表】

【表】 第１表から明らかなように、非イオン界面活性
剤のHLB値が10未満であると水溶性にならない
曇点が生じ均一な溶液にならない。またHLB値
が14を越えると脂質の溶解性が悪く、標準液の保
存は不可能となる。また胆汁酸またはその塩以下
のイオン性洗剤を使用しても曇点が生じ混合不良
となる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 脂質、胆汁酸またはその塩とHLB値が10〜
   14を有する非イオン性界面活性剤を含有する脂質
   測定用水溶性標準液。 ２ 脂質、胆汁酸またはその塩とHLB値が10〜
   14を有する非イオン性界面活性剤および有機溶媒
   を含有する脂質測定用水溶性標準液。