JPS61269068A - 免疫学的分析に使用する製品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫分析方法に使用する酵素性触媒もしくは非
酵素性触媒が共有結合している吸収性基体と免疫学的対
の一員とからなる製品に関する。

被分析物を含有すると予想される試料中の被分析物の存
在を測定するために、新規な、より簡単な、よシ迅速な
技術を発展させる研究が続けられている。被分析物は広
範囲にわたシ、例えば、医薬、天然に存在する生理学的
化合物、汚染物質、ファインケミカルス、異物等である
。多くの場合測定にはスピーｒが重要であシ、特に生理
学的に活性な化合物にとってはそうである。また簡便さ
も重要となる。

広く適用されている簡便な技術は”浸漬棒（ｄｉｐ　５
ｔｉｃｋ）”　である。試料中に浸漬し、次に初めの試
料中の被分析物の量に基づいた・信号を生成するように
処理することのできる固体の棒またはフィルムは非常に
簡便である。固体表面に結合した化合物の信号、例えば
光吸収や螢光を測定するのは大きな装置で行なう。浸漬
棒はまた取扱い、移動、分離等が便利である。

分析を開発す、るに当っては、分析を行なう際の工程お
よび移動が少ないこと、分離試薬が少ないことが望まし
い。浸漬棒は分離を簡便にするが、分離それ自体は望ま
しいものではない。さらに、包装し、加え、調製すべき
試薬が少なければ少ない程、分析にもたらされるエラー
は少なくなシ、かつ分析の経済性と簡便さは大きくなる
。

したがって新しい分析方法、特に測定用分析媒体から分
離してもしなくてもよい硬質の固体表面を用い、固体表
面上の観測信号に影響を与えるような溶液中の試薬の存
在に関係なく、信号が発生しうるような方法を開発する
ことが望ましい。

種々のテストストリップの種々の固定試薬に関する特許
は、米国特許第ａ９ｃ＋ａ４５ｔ；４０３８．４８５；
夷０４へ５１４；４１２３４１７；４１３３．６３９；
および４．１６ＱＯ０８号、およびドイツ公開第２，６
３６，２４４号である。結合および非結合抗体の分離を
含む種々の方法を開示している特許は、米国特許第Ｒｅ
・２９，１６９；３Ｉ９Ｂ０６４；ａ９８４１５３３；
３９８５８６７；４０２Ｑ１５１；４，０３ａ６５２；
４０６’ｚ９５９　　。

４１０ａ９７２；４１４５４ｏ６；　および４１６８．
１４６　　号である。（＊印は特に興味ある特許） 免疫学的対の一員（”ｍｉｐ”と略す）が結合している
比較的硬質で不溶性な、そして好ましくは吸収性の表面
を使用する方法が提供される。この免疫学的対はリガン
ド、およびリガントゞに特異的に結合している受容体あ
るいは本発明の目的にとってこれらの機能的等個物であ
るものからなっている。表面の他に、信号生成系が提供
され、これはその−員として触媒（通常は酵素）を有し
、触媒はｍｉｐに結合している。被分析物の量によって
、触媒で標識化したｍｉｐが、分析媒体のバルク溶液（
ｂｕｌｋ　５ｏｌｕｔｉｏｎ）と表面との間に分配され
る。

信号生成系は表面で信号発生化合物を生成し、これは信
号を発生する。この信号はメルク溶液中に生成または存
在するいかなる信号発生化合物にも大きく影響されない
。したがって、信号発生化合物は分析媒体中において非
結合触媒で標識化したｍｉｐの存在下に発生しうる。信
号生成系の触媒のみがｍｉｐを標識化する触媒である場
合、メルク溶液に比較して表面での信号発生化合物の生
成速度の差を高めるために種々の手段、（例えば表面で
の触媒転換速度を高める）を用いることができる。

このプロトコールを簡単にするために、信号発生系の最
後の成分はｎｉｐに結合した触媒の添加時または添加前
に加えられる。

分析の感度と精度を最適にするために、表面および若干
量の種々の試薬の組み合わせからなる組成物が分析を実
施するために提供される。

本発明の分析は、簡単な効果的な、再現性のある方法で
、広範な被分析物を検出および測定する便利な方法を提
供するものであシ、該方法は表面に結合した生成物の分
光光度性を測定する通常の装置または肉眼的検査を使用
しうるものである。

本発明により多様な被分析物を測定するための分析方法
および分析組成物が提供される。この場合、被分析物は
免疫学的対の一員（ｍｔｐ）であシ、該対は、リガンド
および該リガンドに特異的に結合する受容体（抗リガン
ド）からなるかまたは本分析にとって機能的に等価のも
のからなる。分析方法は２つの本質的要素：　ｍｉｐが
結合している表面；および信号生成系；を有する。該信
号生成系は該表面上に信号発生化合物をもたらし、これ
は分析媒体中の被分析物の量に相関した量で検出可能信
号を生成する。好ましくは信号生成系は一つまたはそれ
以上の化合物を有する二工程以上の転換を行なって信号
発生化合物を生成し、阻止しまたは破壊する。この場合
、信号発生化合物の濃度変化量は表面上の二個の分子間
の平均距離に関係する。この分子は同一でも異ってもよ
い。表面での免疫学的結合は表面での信号生成系の化合
物の濃度を局部的に高める。また第三成分として掃去剤
（スカベンジャー）を用いることもできる。これはバル
ク溶液中の中間体、触媒または信号発生化合物を掃去す
ることによって、メルク溶液中の信号生成系における活
動を阻害するように働く。

表面は実質的にその形状を保持するならばどのような構
造でもよいし、容器から分離可能でもよく、または容器
の一部であってもよい。ｎｉｐを表面に結合する方法は
、同族パートナ−に結合するに充分な量のｍｉｐが露出
していさえすれば限定的なものではない。

信号生成系は少なくとも二種の成分を有する。

それはｍｉｐに結合する触媒、通常は酵素；および溶質
であシ、溶質は表面に結合している物質と反応し、それ
によって検出可能信号の生成を直接的または間接的に増
すかまたは阻害する。信号生成系の一員と表面とを一緒
にすることによって不溶化、表面上の化合物との錯体形
成または表面上の化合物との相互作用（反応を含む）が
生ずる。

信号生成系により中間物質が溶解形でバルク溶液中およ
び表面の両方に生成する場合は、バルク溶液中に生じた
中間物質と表面との相互反応を実質上最少にするために
スカベンジャーが有効に使用しうる。

バルク溶液と比べて表面での生成物の生成度合を変える
ために、そしてバルク溶液中で生成されるかまたはバル
ク溶液中へ移動した中間体または生成物が表面と相互反
応するのを阻止するために、広範な種々の系が使用しう
る。ある種のプロトコールによっては、種々の添加物、
培養工程および試薬類が用いられる。

試料中の被分析物の量に相関した検知可能信号発生物質
を表面上に生成させることによって、表面から検知され
る信号レイルを溶液中の被分析物の量に関係づけること
ができる。既知量の被分析物を含有する標準体を未知量
の時と同一のまたは実質的に同一の条件下で用いること
によって、試料中の被分析物の量と検知信号レイルを定
量することができる。

本発明によれば、結合した触媒−結合−ｍｉｐと未結合
の触媒−結合−ｎｉｐの分離をする必要がなく、また試
料中の他の成分から被分析物を分離することが望ましい
としてもその必要もなく本方法を実施できる。これは分
析工程にとって好都合であり、かつきれいに分離するこ
との困難性を避けるに有益である。

本発明はりガンビおよびリガンド受容体を検出および測
定するための、正確、特異的かつ鋭敏な技術を達成する
。本方法は硬質表面での信号発生に関係する化合物を該
硬質表面で選択的に生成させ、生成を阻害し、あるいは
破壊する。この表面における信号発生化合物は表面上ま
たは表面中充分な深さにあシ、測定可能な信号を出す。

多数の被分析物にとって、対象の濃度範囲は１００μ９
〜１μ９／１ｔｔｌである。多くの被分析物にとって、
対象の濃度範囲は約２倍〜１００倍にわたるので、定量
分析は分析媒体中の被分析物の濃度のわずかな相違を識
別する能力が必要となる。

免疫分析はリガンドと受容体との間の錯化に基づくもの
であり、このうちの片方または両方を標識化しうる。被
分析物の濃度が低ければ、生成する錯体の数は少ない。

したがって生成した標識化錯体の数を正確に測定するこ
とができるためには、極めて低レベルでも効果的に計数
されるような信号を標識が出さねばならないか（例えば
放射性照射）、あるいは錯体が増幅または増加可能でな
ければならない（螢光または接触反応）。

増幅系を用いる時は、多くの問題が出現する。

一つの大きな問題は、錯体以外すなわちバックグランド
から生ずる信号である。パックグランド信号は試料中の
物質すなわち、免疫学的対のメンバーを標識化した時の
標識化された不純物および未結合の標識化メンバーに由
来する。分析の発展には、標識化した錯体によって生じ
る信号はバックグランドからの信号によって不明瞭にさ
れてはならないし、バックグランド信号より実質的に大
きくなければならない。したがって信号発生系によって
達成される増幅は、主に（もし一つでなければ）バック
グランド９標識にではなく標識化錯体に関係しなければ
ならない。

標識化した免疫錯体とバックグランド標識とをきれいに
分離することは、多くの分析手法において必要であシ、
その際、非特異的効果に充分な注意が向けられなければ
ならない。例えば、螢光標識が不均質系、例えば浸漬棒
に使用される場合、すべての試薬と浸漬棒とを結合させ
た後、浸漬棒をとシ出し、注意深く洗って非特異的に結
合している螢光体をすべて除去しなければならない。そ
の上、被分析物リガンドに第１受容体が結合し、第１受
容体に第２標識化受容体が結合することによって増幅を
行うことができるとしても、錯体に含まれる螢光体の数
は免疫対の一員に丁度結びつく数に制限される。この工
程は別の試薬をさらに加えたり、非特異的相互作用を避
けるために注意深く分離したシしなければならない。

本発明は他の方法の多くの短所を除くかまたは最小にす
る。触媒を使用することによって、各錯体に対して複数
の信号発生が行なわれる。触媒は分析媒体中の被分析物
の量に比例してバルク溶液と表面との間に分配される。

表面での接触反応から生じた信号発生生成物の生成は、
メルク溶液中で同時に生成した（もしあれば）信号発生
物の生成と実質的に無関係である。したがって、表面に
おける信号発生化合物の量を調整している間、分析はバ
ルク溶液中に存在する触媒で行なわれる。

たとえばバルク溶液から表面を分離することが好ましい
としても、本発明においては信号を測定するためにバル
ク溶液から注意深くあろうとなかろうと、表面を分離す
る必要がない。

その上、本発明においては、信号発生化合物は表面の上
または中に実質的に深く存在しうる。表面における触媒
の存在によシ、多くの信号発生化合物が析出または転換
して強い信号を生ずる。これは測定が肉眼的検査である
時、特に信号発生が光の吸収である際、重要である。

本発明をさらに説明する前に、用語を定義する。

定義 被分析物・・・・パ・測定すべき化合物または組成物で
あって、モノまたはポリエピトープ性、通常は抗原性ま
たはハプテン性のリガンド、少なくとも一つの共通なエ
ピトープ部位または決定基部位を共有する単一または複
数の化合物または受容体である。

特異結合対・・・・・・２種の異なる分子。そのうちの
一つの分子は表面上またはくぼみ中にもう一つの分子の
特定の空間および極性組織に特異的に結合している領域
をもっている。特異結合対のメンバーはリガンドおよび
受容体（抗リガンド）と称する。これらは本発明では免
疫学的対のメンバーと（ｍｅｍｂｅｒｓ　ｏｆ　ａｎ　
ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｉｒ　）称され、’
ｍｉｐ”と略される。同族（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）ま
たは補足ｎｉｐはリガンドおよび受容体であシ、一方相
似（ａｎａｌｏｇｏｕａ）ｍｉｐはりガンｒか受容体の
いずれかであって、これらは例えば標識のような方法で
区別される。

リガンド・・・・・・それに対する受容体が天然に存在
するかまたは生成しうるところの有機化合物。

受容体（抗リガンド）・・・・・・分子の特定の空間お
よび極性組織すなわちエピトープ部位または決定基部位
を認識しうる化合物または組成物。受容体の例示として
、例えばチロキシン結合性グロブリン、抗体、酵素、Ｆ
’ａｂ断片、レクチン、核酸等の天然に存在する受容体
がある。

リガンド相似体（Ｌｉａｎｄ　Ａｎａｌｏｇ）・・・・
・・受容体に対して相似リガｙ　）’　（ａｎａｌｏｇ
ｏｕｓ　ｌｉｇａｎｄ）と拮抗することのできる変性さ
れたりガント。この変性によシリガント相似体を他の分
子に結びつけることができる。リガンド相似体は水素を
置換してリガンド相似体をハブまたは標識へつなぐ結合
とした点でリガンドと通常相違する。

ポリ（リガンド相似体）・・・・・・複数のりガントま
たはりガント相似体が通常はハブ核（ｈｕｂ　ｎｕｃ−
１ｅｕｓ　）に−緒に共有結合したもの。ノ・プ核は多
官能性物質であって、通常は高分子性であシ、結合のた
めの部分として例えばヒドロキシ、アミノ、メルカプト
、エチレン性等の官能基を複数有している。ハブ核は水
溶性または少なくとも水分散性であシ、通常少なくとも
約３５，０００ダルトンでかつ約６０ＱＯＯＯダルトン
以下である。ハブ核の例には、多糖類、ポリ啄プチド、
（蛋白質を含む）、核酸、イオン交換樹脂等がある。

表面・・・・・・表面は非分散性で、少なくとも約１μ
イ、通常はそれ以上の大きさであシ、シばしば約１＋ｍ
以上、大ていは約０．５−〜１０ｄである。

これは水に不溶性の物質であって、　ｍｉｐに結合する
ために必要表性質を提供し、そして所望の信号レベルを
出すための検知可能な信号発生化合物を提供する。望ま
しくは、表面はゼラチン状、透過性、多孔性であるか、
または粗いもしくは不規則な構造であシ、溝またはぎざ
ぎざをもっていてもよく、通常全体積に比較して実質的
な空隙体積を有する。検知可能信号発生化合物の性質に
よって表面は吸着性または非吸着性であシ好ましくは弱
または非吸着性である。表面は透明または不透明であり
、単一物質または複数物質であるか、混合物または積層
体である。多種類の物質および形状が使用しうる。表面
は分析条件下でその完全性を留めることができるので、
表面に結合した物質は表面に結合したまま残シ、溶液中
に拡散しない。

信号生成系・・・・・・信号生成系は少なくとも次の二
つのメンバーをもっている：（１）触媒メンバー；およ
び（２）溶質。溶質は触媒メンバーによって触媒される
反応を行ない表面上または表面内において直接または間
接的に検知可能信号を提供する生成物となる。望ましく
は、バルク溶液に比べて表面の信号発生化合物の変化速
度を高める第三化合物が存在するとよい。これはこの成
分が表面に結合するかまたは信号生成系の別のメンバー
と相互作用する結果としてなシうるのである。

触媒メンバーは酵素性か非酵素性のものであるが、酵素
性が好ましい。一つまたはそれ以上の酵素が使用される
が少なくとも一つの酵素がｍｉｐに結合する。（触媒と
してはたらく酵素は受容体としてはたらく酵素と区別さ
れるべきである）。

溶質は信号生成系の触媒メンバーによって触媒される反
応を行うことができる化合物であればいかなるものでも
よい。この反応は表面において検知可能信号発生化合物
が生成するのを直接または間接的に調節する。信号発生
化合物が表面に付着するのは、溶質が接触反応を行なっ
た時生成した生成物が不溶性であること、この生成物が
表面上の化合物と錯化すること、または表面上の化合物
が接触反応の生成物と反応もしくは相互作用することの
結果であろう。

信号発生化合物は電磁性信号、例えば分光光度的または
可視的検知信号、電気化学的または電子的検知信号を出
す。信号発生化合物はその不溶解性によって、または表
面への共有または非共有結合によって、表面に付着する
。表面からの検知可能測定信号は、触媒−結合−ｍｉｐ
がｎ１ｐ−結合一表面に結合することによって表面に結
合した触媒の量に相関する。

表面での検知可能信号の生成を増し、一方バルク溶液中
の物質からの妨害を最小にするために種々の手法および
種々の試薬の組み合わせを用いうる。

標ｔｉｌｔ　（Ｌａｂｅｌ）・・・・・・標識は別の分
子に結合した分子であって、これらの分子の各々はそれ
以前には別々に存在したか存在しえたもの。大部分の場
合、標識はｍｉｐに結合した化合物である。抗リガンド
に結合した触媒の場合は、その試薬は触媒−結合−抗リ
ガンドと称され、一方、表面に結合したリガンドの場合
は、その試薬はりガント−結合−表面と称される。

方法 本分析方法は水性帯域または水性媒体中で行なわれる。

試薬を別々に添加するかまたは試薬の添加とインキュベ
ーションとを組み合わせて行なうか、水性媒体から表面
をと浸出して、一つ以上の試薬を含有する別の水性媒体
に移す分離工程を行なうかあるいはこれらの組み合わせ
の工程を行なつた後に最終の分析媒体となる。しかし、
本方法は、表面に結合した同族パートナ−（ｎ１ｐ−結
合一表面）に結合している触媒−結合−ｍｉｐから未結
合の触媒−結合−ｎｉｐを分離する必要はない。

媒体は液相と６表面”である非流体相とからなっている
。

分析を行なうには、同時にかまたは順次にかのいずれか
の方法でｎ１ｐ−結合一表面を試料に、信号生成系のメ
ンバーに、そして水性媒体中の補助物質に接触させ、表
面において検知可能信号を発生させる。検知可能信号は
表面に結合した触媒−結合−ｍｉｐの量に関係し、すな
わち試料中の被分析物の量に関係する。信号生成系の性
質および信号を測定する方法によって、表面を分析媒体
中で測定してもよいし、分析媒体から出して測定しても
よい。

分析を行なうには通常水性媒体が用いられる。

他の極性溶媒も用いられるが、通常は炭素原子数１〜６
、よシ普通には１〜４の酸素化有機溶媒が用いられ、ア
ルコール類、エーテル類等である。

これらの補助溶剤は通常約４０重量％以下、よシ普通に
は２０重量−以下で存在する。

媒体のｐＨは通常的４〜１１であるが、よシ普通には約
５〜１０であり、さらに好ましくは約６．５〜９．５で
ある。ｐＨは信号生成効果を最適にしながら、受容体に
よる特異結合の量を充分維持するように選択される。あ
る場合にはこの二つの条件の間で妥協するであろう。所
望のｐＨにし、かつ測定中ｐＨを維持するために種々の
緩衝剤が用いられる。緩衝剤の例としては、ホウ酸塩、
燐酸塩、炭酸塩、トリス（Ｔｒ　ｉ　ｓ　）、バルビタ
ール等がある。特に用いられる緩衝剤はこの発明として
は限定的なものはないが、個々の分析にとってはある緩
衝剤が他のものよシ好ましいということがある。

分析を行なうには通常穏和な温度が用いられる。

対照試料と比較せずに分析を行なう場合のみ、測定中の
温度を一定に保つ必要がある。測定温度は一般に約１０
〜５０℃の範囲であシ、より普通には１５〜４５℃であ
る。

分析される被分析物の濃度は一般に１０〜１０　モルで
あるが、より一般的には１０〜１Ｏ−ｔａモルである。

例えば分析が定性であるが、半定量でおるか、定量であ
るかを考慮し、また分析手段および被分析物の濃度を考
慮して他の試薬の濃度を決定する。

種々の試薬の濃度は、いかなる方法が用いられるかによ
シ、また、被分析物の性質、表面に結合しているｍｉｐ
の性質、触媒に結合しているｎｉｐの性質、分析の所望
感度等により広範囲にわたる。

ある場合には、ｍｉｐの片方または他の片方を過剰に用
いてもよい。一方あるプロトコールの場合には分析の感
度はｍｉｐ比の変化に応答する。

これを説明すると、被分析物がポリエピトープ性抗原で
ある場合、もし表面が初めに試料に接触し、次に信号生
成系に接触するなら、分析の感度に重大な影響を与えず
に抗リガンド−結合−表面としての抗リガンドと触媒−
結合一抗リガントとしての抗リガンドを過剰にすること
ができる。抗すガンＶが試料であシ、プロトコールが抗
原−結合一表面を接触させるに先だって被分析物と触媒
−結合一抗すガンビとを混合するものである時は、分析
感度は被分析物と触媒−結合一抗リガントの濃度の比に
関係する。

プロトコール以外にさらに考慮すれば、試薬の濃度は抗
リガンドの結合定数、特定の抗血清に対する結合定数特
性、所望の分析感度に依存する。

すべての信号生成系が液相中に存在する場合は、触媒基
質と補助試薬の濃度は、多量の信号生成性生成物が形成
される前に免疫対が結合するような濃度になるべきであ
る。分析の感度が濃度に関係する場合は、しばしば特定
の濃度が実験的に決定される。試料が同族触媒−結合部
ｎｉｐと混合される場合、一般に触媒−結合部ｍｉｐの
全結合部位濃度は被分析物の結合部位に基づく対象の最
小濃度の約０．１倍以上であり、かつ被分析物の結合部
位に基づく対称の最大濃度のＬ０００倍以下、通常は約
０．１〜１００倍、よシ普通には約０．３〜１０倍であ
る。被分析物がｍ１ｐ−結合一表面に予め吸着されてい
る時は、触媒−結合−ｍｉｐの濃度は、表面への所望の
結合速度、液相中の信号発生化合物に対する妨害、試薬
の価格等によってきまる。

表面に密着し、表面内で閉塞している無効液体中の触媒
−結合部ｎｉｐの量が、触媒−結合−ｍｉｐが表面に結
合した結果生じた表面での信号発生化合物の濃度変化の
測定を妨害しないように、触媒−結合部ｎｉｐの濃度を
選択する。この濃度選択は測定の感度、所望する定量の
度合、分析対象の最低濃度を識別することのできる正確
さ等によって影響を受ける。

大ていの場合、表面に結合しない無効な触媒−結合部ｍ
ｉｐの表面に結合している触媒−結合部ｍｉｐに対する
濃度比は、被分析物の最高濃度において、好ましくは中
程度の濃度範囲において約１００倍以下、通常は約１０
倍以下であるべきである。

触媒−結合−ｍｉｐ’ｉ試料と混合する前に、または同
時に、または後で、固体表面と試料を混合する。表面と
して単一ユニットまたはそのものを使用することによっ
て、大きな試料中で被分析物を濃縮することができる。

また表面は、測定結果を妨害する試料中の物質から被分
析物を分離することができる。したがって、表面を試料
と一緒にし、次に媒体を含有する試料から表面をとり出
し、分析媒体に移すのが好ましい方法である。

さもなくば、表面を試料と接触させたまま他の試薬を加
える。また、場合によっては望ましいことではないので
あるが、試料を触媒−結合部ｎｉｐと一緒にし、次に表
面を分析媒体に加えることも可能である。例えば、リガ
ンド被分析物、触媒−結合一抗リガントゝおよびリガン
ト９−結合一表面の場合にこの最後の方法は効果的であ
る。

しばしば、例えば表面を分離または洗浄するというよう
な中間工程なしに、触媒−結合部ｍｉｐとほぼ同時に信
号生成系の最後の成分を加える。

受容体が被分析物である場合には、単一の免疫学的対の
代りに２種の免疫学的対を使用することができる。その
場合、受容体は一つの対ではリガンドとしてはたらき、
他の対では受容体としてはたらく。例えば工ｇＥの場合
、アレルゲンすなわち抗原を表面に結合させ、触媒を抗
−工ｇＥに結合させることができる。この方法では、　
ＩｇＥは相互に作用しえない二種のｍｔｐの間の橋とし
て作用する。

ｍｉｐについていえば、この状態は存在することが予想
される特殊のケースと考えるべきである。

方法のプロトコールを開発するに当シ、ある基本的な考
えが試薬の添加順序および組み合わせを支配する。第一
の考えは、好ましくは表面−結合−ｍｉｐおよび触媒−
結合部ｎｉｐが異なるメンバーである場合（例えば一つ
がリガンドで一つが抗リガンドであれ）、この二つは表
面と混合する前または混合とほぼ同時に一緒になる。触
媒−結合部ｍｉｐおよび溶質は、溶質が、触媒−結合部
ｍｉｐの基質である時以外は単一の試薬として混合する
のが好ましい。しばしば表面および試料は、他の試薬を
添加する前または添加とほぼ同時に混合される。

種々のプロトコールは種々の程度の複雑さを有する。簡
単なプロトコールにおいては、信号生成系に２種の触媒
があり、その一つはｍｉｐに結合し、他は表面に結合す
る。一つの触媒、好ましくは表面−結合部触媒は、溶質
と反応して第１の生成物を成する。この第１の生成物は
第２の触媒によって作用を受け、第１の生成物自身でま
たは他の試薬と組み合わさって第２の生成物を生成し、
第２の生成物は、表面に接して生成した時、表面に選択
的に結合するかまたは表面に結合している化合物と相互
に作用する。これは不溶性の第２生成物を生成すること
によって有利に達せられる。不溶性とは約１０　モル以
下の溶解度を意味する。不溶性生成物は電気的性質例え
ば静電性の変化を生じさせ、或は、紫外線または可視光
線波長範囲における吸収、化学ルミネッセンス、反射率
およびけい光、（好ましくは吸収）を含む分光光度性を
有する。

反復回数を最少にするために、種々の例示プロトコール
を集めた表金用意する。表がポリエピトープ性抗原を指
示している場合、抗原に代ってハプテンが用いうる。し
かしハプテンでは受容体間を橋かけするのに通常は有利
でない。そこで橋かけを要求しているプロトコールでは
、橋かけ全提供するのにポリ（リガンド相似体）の添加
が必要となる。被分析物がハプテンである時は、通常ハ
プテン含有試料を受容体に加える。触媒−結合部ｍｉｐ
が受容体である時は、表面に結合するｎｉｐは通常ハプ
テンである。表面に結合するｍｉｐが受容体である時は
、触媒に結合するｎｉｐは通常ハプテンである。しだが
って通常受容体結合部位の一部をハプテン被分析物で飽
和し、残りの部位を表面か触媒かのいずれかに接合して
いるハプテンと結合させる。

抗原性またはポリエピトープ性被分析物はりガントとし
てさらに別の可撓性を現わし、ポリ（リガンド相似体）
を加えずに受容体が触媒と表面の両方に結合しうる。リ
ガンドが表面に結合している場合、リガンド被分析物お
よび表面上のりガンビは限られた標識化受容体の量また
は多価受容体の量に対して競合し、リガンド−結合−表
面と触媒−結合部リガントとの間の橋として作用する。

受容体が表面に結合している時は、触媒−結合一受容体
を表面に結合させるために、リガンドは受容体−結合一
表面と触媒−結合−受容体とは同時に結合する橋として
の作用をする。後者の場合、触媒−結合−受容体を添加
する前に受容体−結合一表面とリガント１含有試料とを
混合すると、大過剰の標識化受容体をうろことができる
。何故なら、表面に結合する標識化受容体の量は表面に
結合しているりガンビの量に直接関係するから。受容体
−結合一表面が受容体被分析物と共に用いられる場合は
、２つの受容体が限定量の触媒−緒合一抗原に対して競
合する。

リガンドが被分析物であって、かつリガンドが表面に結
合している場合、まず初めにリガント９を含有する試料
を触媒−結合−受容体と混合してリガンドと触媒−結合
−受容体とを結合させ、表面に結合したリガンドが掃去
しうる受容体の利用部位の数を減少させる。受容体が表
面に結合しておシ、かつリガンドが被分析物である場合
、通常は表面を触媒−緒合一受容体と接触させる前に試
料を表面と一緒にすることが好ましいのであるが、混合
順序を変更することもある。普通は信号発生化合物が形
成された後に表面上の信号の変化を時間と共に観察して
変化率を出す。変化率は表面に結合する標識の童に相関
するであろう。この測定は被分析物、触媒−結合−ｍｉ
ｐおよびｎ１ｐ−結合一表面の間の平衡が充分確立する
前に行なってもよい。そしてこの率は時間と共に変わシ
得る。

第１表 １１　　）／Ａｙ　Ａｈ−ＣａｔｌＡｇ　＋　　＋１［
１ｋｂ−Ｃａｔ１Ａｙ ２　７／Ａｙ　　　　　＋　　＋ ［［１／”Ａｈ　　Ａｈ−ＣａｔｌＡｙ　　＋　　　　
＋ＩＶＩ　　ＩＡｂ　　　　Ａｙ ２　　　　　　　　　　　　　ＡＡ−ＣａｔＩ　　　　
　　　　　＋　　　　　＋Ｖ　　Ｉ　Ｃａｔ２）’ｋｇ
　　Ａｈ−ＣａｔＩＡｙ　　＋　　　＋■Ｉ　　　　　
　　　Ａｈ−ＣａｔＩＡｙ　　＋　　　　＋２　Ｃａ　
ｔ２ｙ’Ａｙ ■　Ｉ　Ｃａｔ２／Ａｂ　　　Ａｂ−ＣａｔＩ　　　Ａ
！！　　　＋　　　　　＋■Ｉ　Ｃａ　ｔ　２／Ａ　ｂ
　　　　　　　　Ａｇ２　　　　　　　　Ａ、６−Ｃａ
ｔ０＋＋］）（１−Ｒ，／ＡｂＡｈ−ＣａｔＩＡｙ　　
＋　　　＋ＸＩ　　Ｒ，ＩＡｂ　　　　ＡＪ ２Ａｂ−ＣｃＬ’ｔ　　　＋　　＋ ’７１１　　　　　　　　Ａ　Ａ−Ｃａ　ｔ　Ｉ　　　
Ａｙ２　　Ｒ／／Ａｈ　　　　　＋　。

Ｘ１ｌｌ　１　　　　／Ａ、ｙ　　ｋｂ−Ｃａｔ、　　
　ＡＪ　　＋　　　　＋Ｘ■Ｉ　　　　Ｒ／′Ａｇ　　
　Ａｂ−ＣａｔＩ　　　Ａｂ　　　十　　　　　＋Ｘ　
Ｖ　Ｉ　Ｃａ’　２／Ａ！ｉ　　Ａ　ｂ−ＣｃＬｔ　ｓ
　　　Ａ　ｈ＋　　　　＋１　表面ｎｉｐ・・・・・・
免疫学的対の一員であって、信号生成系の他のメンバー
の他にさらに表面に結合している免疫学的対の一員。＋
は表面を表わす。

ＡｇおよびＡｂはそれぞれリガンドおよび抗リガンドで
あシ、表面に共有結合または非共有結合している・どの
プｏ）′−ルにおいてもＡｈお　　　　　　　ｔよびＡ
ｇ１の役割は逆転しうる。

Ｃａｔ２・・・・・・触媒を意味し、通常は酵素である
。信号生成系のメン・Ｚ−としての別の触媒（通常は酵
素）と協同する。

Ｒ・・・・・・試薬。表面に共有結合または非共有結合
しておシ、信号生成系の一部としての触媒の生成物と反
応する。

接合ｍｉｐ（Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ｎ１ｐ）−＝＝触
媒（通常は酵素）が共有結合しているりガントまたは抗
リガンド。

Ｃａｔ□・・・・・・触媒、通常は酵素である０信号生
成系の一部であって溶質または溶質から形成される生成
物と反応する。

溶質・・・・・・信号生成系の一部としてＣａｔｌまた
はＣｃＬｔ　２と反応する中程度の溶解性の化合物。

Ａｎｃ・試薬・・・・・・信号生成系に必要な別のすべ
ての試薬。酵素、酵素基質、酵素補因子、活性化剤、ス
カインジャー等である。

２各ラインは、そのライン上の物質が次のライン上の物
質を添加する前に配合されることを示している。多くの
場合、何等かの添加順序が好ましいとしても、各ライン
上の物質は同時にまたは連続して加えてもよい。接合ｍ
ｉｐを添加する前に表面と試料を混合する時は、表面を
接合Ｉｎ１ｐまたは他の試薬と接触させる前に表面を試
料から分離してもよいし、しなくてもよい。インキュベ
ーション工穆は工程と工程との間忙および一つの工程の
一部としての物質添加の間に含まれる。

一つ以上の触媒を信号生成系の一つ以上の中間体成分お
よび溶質と一緒に使用することによって種々のプロトコ
ールが存在しうる。プロトコールを開発する場合、信号
の生成の最大化をもくろみしたがって信号発生分子を表
面に優先的に生成させる。さらに測定および添加の必要
回数を最小にするために試薬はできるだけ分離調製を少
なくして配合するのが望ましい。

ｎｉｐに結合した触媒が溶質と反応して表面の孔または
溝の中に信号発生体を沈積生成する場合はその表面を測
定のために分析媒体から分離する必要はない。もし表面
上の信号発生体を測定する都合で分析媒体からとシ出す
場合は、非特異的に結合した信号発生体または触媒−結
合部ｎｉｐを除去するために洗浄する必要がない。

２種以上の触媒、特に酵素を用いて信号発生体を表面に
局部的に多く生成することもできる。溶質として酵素の
一つの基質、好ましくは表面に結合した酵素の基質を使
用することによシ、この溶質からできた生成物が別の酵
素（普通はｍｉｐに結合している）の基質である場合に
は、とのｎｉｐに結合した酵素によって生成するメルク
溶液中の信号発生化合物の生成率を最小にすることがで
きる。

結局、表面に生成した触媒−結合部ｎｉｐの基質を使っ
てバルク溶液中の信号発生化合物の生成率を最小にする
ことができる。何故なら、一般にバルク溶液中における
このような基質の濃度は極めて小さいからである。

表面で生成した基質を使うほかに、バルク溶液中の信号
発生化合物の生成を最小にするために他の方法が用いら
れる。例えば、上記例において、溶質・の生成物に作用
してそれ以上の反応を阻止するスカはンジャーをバルク
溶液中で使用する。さもなくば、酵素阻害剤を使用する
。酵素阻害剤は醪素−結合−ｎｉｐ　ｆ表面に結合させ
た後で加える。

これはバルク溶液中で酵素と一緒の場合有効であり、表
面に結合した酵素と一緒の場合に無効となる。さらに別
の方法は、表面に結合する試薬を使うもので、これは酵
素生成物と反応して信号発生化合物を生成する。

別のプロトコールは表面上で信号生成物質が生成するの
を阻害する酵素−結合部ｎｉｐ　ｆ使用するものである
。例えば、溶質が中間生成物に転換するのを触媒する酵
素を表面に結合する。表面に結合した第２の酵素をこの
中間生成物を信号発生化金物に転換するのに使用する。

酵素−結合部ｎｉｐには信号発生化合物を生成せずに中
間体と反応することのできる別の酵素を使用する。醪素
−結合　　　　　　１−　ｎｉｐが表面に結合した時、
それは表面上で信号発生化合物が生成するのを阻害する
。このプロトコールは、触媒−結合−１ｎｉｐが表面に
最大に結合する時、最小の信号が生ずるという利点を提
供する。したがって被分析物および触媒−結合部ｍｉｐ
　　　　　　　、’：がｎ１ｐ−結合一表面結合部位に
対して競合するようなプロトコールでは、被分析物が存
在しないと信号が最小になシ、存在すると信号が増大す
る。

上記プロトコールによれば、信号発生化合物は試料中の
被分析物の量に応じて生成したシ消失したシする。表面
に結合した信号発生化合物はパル２１に工、え。、あゎ
イ、。□イ、。　　　；１の量と実質的に無関係である
。すなわち、信号発生化合物がバルク溶液中に生成され
るが、バルク溶液から表面へ拡散し、表面に結合する量
は、被゛分析物の濃度範囲の最小の信号量でも固体表面
に　　　　　　゛□生成する信号発生化合物に比較して
無視しうる位少ない。

表面にリガンドか受容体かのどちらを結合させるかの選
択は因子の数による。ポリエピトープリガンドが被分析
物である時は、触媒−結合部受容体を用いると表面へ結
合する被分析物の各分子に多くの触媒が結合するように
なって分析応答を増加させる。リガンドまたは受容体の
純度もまた重要である。抗血清はしばしば不均質で、わ
ずかな割合の所望受容体しかもたないので、触媒−結合
−受容体は過剰量の信号発生化合物をバルク溶液内に生
成させる。したがって、触媒が結合すべきｍｉｐを決定
する際にリガンドの純度を受容体と比較しなければなら
ない。その上多くの場合１．対象被分析物の濃度が極め
て低いので、ｍｉｐのメンバーの結合は比較的遅いであ
ろう。したがって、もし表面上に被分析物と同種のｎｉ
ｐを大過剰使用すると、被分析物の結合速度は増し、そ
の結果、表面における信号発生化合物の生成が増大しつ
る。

他に考慮することは、最少数の処方に最大数の試薬を配
合することの便宜と効率である。溶質に関していえば２
種以上の触媒である系を使用することによって酵素触媒
を他の酵素の基質と結合することができる。さらに、２
種の触媒に必要な補助試薬を加えて単一試薬とすること
もできる。何故なら酵素の接触反応は他の酵素がその基
質を生成するまでおこらない′か＝９　、ｚ’Ａ　Ｂ　
。

明白なことであるが、種々の試薬の添加および組み合わ
せ（表面を分析媒体に入れることも含む）の順序は多様
である。リガンドか受容体のいずれかの限定された結合
部位に対して競合が存在すれば、試料が試料の同族ｍｉ
ｐ　（対の片方）・にまず結合し、次に競合する相似ｍ
１ｐｉ添加するのが普通である。あるいはすべての試薬
を同時に配合してもよい。次に信号発生化合物を生成す
るに必要な他の試薬を相似ｍｉｐと同時に加えるかまた
は相似ｍ１ｐｌ加えた後に加えてもよい。特に信号生成
系が単一触媒を用いている場合には、分析媒体中の信号
発生化合物の生成速度が、表面とメルク溶液との間で違
いを生ずるような成分によって影響を受けるのが望まし
い。表面上における局部的変化の制御、ｐＨｓ溶質濃度
等の如き因子を使用して酵素活性を相違させることがで
きる。

試料を表面に結合したその同族ｍｉｐに混合している時
にしばしばインキュベーション工程すって多量の被分析
物を結合させることができる。第２のインキュベーショ
ン工程は、触媒−結合部相似ｍｉｐが同族ｍ１ｐ−結合
一表面の残りの結合部位に結合する時、またはリガンド
が２種の受容体（一つは表面に接合し他は触媒標識に接
合している）の橋として作用する時に行なわれる。第２
のインキュベーション工程が行なわれるか否かは、結合
速度の程度、分析に要求される感度、および固体表面に
おける信号発生化合物の生成速度による。

都合のよいことに、触媒−結合部ｎｉｐと信号生成系の
残シのメンメー金はぼ同時に混合し、触媒−結合部ｎｉ
ｐが表面に結合している間に信号発生化合物を生成する
ことができる。

以下は数種の典型的プロトコールの説明である。

第１のプロトコールでは単一の酵素触媒が使用され、こ
れは受容体、例えば抗体に結合する。やはり受容体が結
合する多孔性表面が用いられる。ポリエピトープリガン
ド被分析物を含有する試料を抗体−結合一表面と混合し
、この混合物を充分な時間インキュベートすると、検出
可能量の被分析物が結合する機会を有するようになる。

次にこの混合物に酵素−結合一抗すガンｌ−”　ｉ加え
、この混合物を再び充分な時間インキュベートすると、
検出可能量の酵素接合体が表面に結合したリガンドに結
合する。酵素接合体のりガントに対する結合を増すため
に、酵素−結合一抗リガントと共に緩衝剤に加えてもよ
い。

充分にインキュベートした後、溶質と酵素活性測定用試
薬を単一試薬として加える。メルク溶液に比較して表面
での酵素活性を高める薬剤、例えば、巨大分子酵素阻害
剤例えば４す抗酵素、もこれに含まれる。この阻害剤は
表面に結合した酵素に結合することを立体的に阻まれる
。別の方法では、一つ以上またはすべての必要な基質ま
たは補因子を酵素−結合一抗リガントと混合し、醪素−
結合−抗リガントと一緒に分析媒体に加える。酵素反応
に必須の成分を使用しない限り、酵素反応に必要な他の
試薬を単一試薬として酵素と共に加えてもよい。酵素反
応に必要な試薬を加えた後、信号発生化合物が多孔表面
内に生成するに充分な時間待ち、そしてこのように生じ
た信号を対照信号、例えば既知量の被分析物により生じ
た信号と比較する。さもなくば二回の測定を行い、信号
強度の時間に関する変化を測る。もう一つの方法は酵素
に必要な補因子および基質のすべてを完全に添加してか
ら一定時間経過後、表面をとり出し分析媒体の外で測る
。

橋としてリガンドヲ使用することから明らかなように、
ハプテン被分析物は競合型の例である。

この典型的なプロトコールでは、ノーブテン被分析物を
含有する試料を、信号発生化合物への前駆体が結合して
いるハプテン−結合−表面および酵素−結合部受容体と
混合し、この混合物を適当にノ・ブテンが受容体に結合
し酵素−結合部受容体が表面に結合するのに充分な時間
イ“ノキュベートする。

次に溶質と補助試薬を分析媒体に加える。分析媒体では
前駆体と反応して信号発生化合物を生成する物質を酵素
が生成する。次に、信号発生化合物が固体表面上に生成
される速度を測定するために、一定間隔が１回以上の測
定を行なう。これは試料中のハプテン被分析物が結合し
た後の受容体の利用可能な結合部位数に相関する。

単一酵素を使用する別の方法は、オリゴマー性基質金エ
キソヒドロラーゼと共に使用するものである。例えば染
料に結合した三糖類を使用する。

これは無色の試薬であるが、糖が分離すると不溶性の着
色染料となる。三糖類は２つの酵素接触加水分解を要し
、結局一種の酵素が二種の異なった基質に作用するので
、第三成分が必要となる。したがって、二酵素系に類似
した状況であって、第１段階で一酵素が作用して第二酵
素に対する基質を生成し、第二酵素は第二段階で作用す
る。かかる基質により、バルク溶液に比較して表面での
酵素活性を高める薬剤を加えることは重要ではなくなる
。

第三の典型的プロトコールでは、二種の酵素触媒を用い
る。酵素と抗体は表面に結合する。（酵素および抗体−
結合部表面）。表面をポリエピトープ抗原被分析物と混
合し、この混合物を充分な時間インキュベートして抗原
を表面上で受容体と結合させる。通常は抗原の結合は希
釈しない試料中で行なわれる。次にこの混合物に受容体
に結合した酵素触媒、溶質（表面に結合した酵素の基質
）および残りの試薬（信号発生化合物への別のすべての
前駆体を含む）を単一試薬として加える。ここで溶質か
ら得られる生成物は信号発生化合物への前駆体のみでは
ない　別法としては表面をこの単一試薬に移入する。前
記した如く、信号は分析媒体中で表面の上でよみとられ
るかまたは表面を分析媒体からとシ出して、別の所でよ
みとられる。

表面から検出しうる信号は表面に結合した触媒−結合−
ｍｉｐの量に比例するであろう。いいかえれば試料中の
被分析物の量に比例するであろう。

表面上に第２酵素を使用する代シに、異なったｍｉｐ上
に二種の異った酵素を結合する（すなわち二つともリガ
ンド上か二つとも受容体上かのいずれかに結合する）か
、あるいは二つとも同じｍｉｐ上に結合することができ
る。重要なファクターは、免疫学的対結合は表面におけ
る信号生成系の二つのメンバーまたは分子の濃度を部分
的に高めることであシ、このメンバーは互に反応し合う
ことなく信号発生化合物の濃度変化を高めるように相互
作用する。

信号発生化合物を調整するために２段階工程を用いる場
合には信号生成系の成分として溶質および触媒−結合部
ｎｉｐの他にさらに第三試薬を加えてもよいしまたは加
えなくてもよい。重要なことは、表面での免疫学的結合
はバルク溶液と比較して表面での信号生成系の成分を濃
くする機会を生ずることである。

信号発生化合物の全体的な生成速度または破壊速度に関
する信号生成系成分の協同作用または相互作用が信号生
成系の成分の平均的な空間距離（近接さ）に関係する場
合、免疫学的対結合を介して触媒−結合−ｍｉｐｉ表面
に結合することは信号生成系の成分の濃度をバルク溶液
に比較して、部公的に高めさせ、その結果バルク溶液中
の信号発生化合物の発生が表面の信号発生化合物の量に
与える影響を最小にする。

別法として、あるいはさらに追加する方法として、バル
ク溶液中の溶質以外の信号生成系成分と選択的に反応ま
たは相互作用するスカベンジャーを加える方法がある。

スカベンジャーは触媒反応または非触媒反応の進行を防
げるかあるいは信号発生化合物が信号を発するのを妨げ
るかのいずれかによってバルク溶液中で信号生成系が作
動するのを妨害するようにはたらく。

通常、信号は電磁線（特に紫外線または可視光線）の吸
収または発光（特に吸収）または表面の電気的性質を観
測することによって行なわれる。

望ましくは光線は約２５０〜８００　ｎｍ％普通は約３
５０〜７００　ｎｍの範囲である。肉眼的な検査、レフ
レフトメーター、螢光計、分光光度計等が使用され、そ
れらは信号発生化合物によりまたは表面の性質（すなわ
ち不透明か透明か）による。

通常被分析物の量に関係するのは表面上の信号発生体の
強さく透過または放射）である。

信号観測温度は約−１９０〜５０℃、よシ普通には約１
５〜４０℃である。

既知量の被分析物濃度する標準試料が作られる。

次に濃度と信号を関係づけるために各標準試料の観測信
号をプロットしまたは肉眼的に比較する。

さもなければ、種々の濃度に対応していくつかの表面を
用意し、試料の表面と標準とを肉眼的にまたは分光的に
比較する。所望の精度によシ、標準金前カラーチャート
のように作つ忙もよいし、試料測定する分析者が作って
もよい。一度標準曲線ができ上ると、観測信号は直接被
分析物の濃度に関係づけられる。

カリブレーショノの好ましい方法は、分析に使用し九ｎ
ｉｐの結合していない表面と同一の表面を使用すること
である。受容体−結合一表面と触媒−結合−受容体を使
用して４　リエピトープ性抗原の分析をする場合、触媒
−緒合一受容体が表面に結合しないということは試料中
に抗原が存在しないことを示している。カリブレーショ
ン表面は抗原が存在する場合でも触媒−緒合一受容体に
結合できないから、試料と一緒にｍ１ｐ−結合一表面を
用いたのと同じプロトコールにしたがう時、この表面は
ネガティブな試料に対して適当な対照を提供する。カリ
ブレーション表面からの信号ｅｍｉｐ−結合−表面から
の信号と比較することによシ、その相違はすべて抗原の
存在を示すことになる。

もう一つの別法は、被分析物およびその同族ｍｉｐと異
なるｍｉｐを有するカリブレーション系を用いるもので
ある。触媒または触媒−緒合−ｎｉｐを、カリブレーシ
ョン表面に結合した受容体によって認識されたハプテン
で変性するか、あるいは特異ｎｉｐ結合に無関係な触媒
上または触媒−結合−ｍｉｐ上の自然部位（ｎａｔｕｒ
ａｌθｉｔｅ　）に対する受容体を用いるのが好都合で
ある。

カリブレーション表面上の受容体濃度を調整することに
よって、被分析物の予め定めた濃度（通常Ｏ）によって
作られた信号に一致する擬似分析応答が生じうる。

上述したように、カリズレ−ショア表面と分析表面（ｎ
１ｐ−結合一表面）とを同一の分析条件におき、信号を
比較する。被分析物濃度が高くなった結果、信号が増加
したか減少したかによって、そのどちらかの方向におけ
るカリブレーション表面と分析表面との間の信号の差が
被分析物の存在を示す。

所望感度、被分析物濃度、結合速度、信号生成系の性質
等の因子に基いて信号測定時間はきまる。

０時には初めの信号に変化がないので、１回の測定は最
後のインキュイージョンの終りにのみ行なわれる必要が
ある。よシよい定量ではイ・ンキュベーション中の合間
に測定が行なわれる。インキュベーション時間は５秒か
ら３６時間にわたる。

リガント９被分析物はモノ−またはポリエピ）　−プ性
であシうる。表面に結合した受容体と触媒−結合−受容
体との間の橋としてハプテンを用いることができない場
合をのぞいて、ハプテンと抗原被分析物は類似の扱いを
うける。もし橋が所望ならば、複数のハプテンが結合し
、限定量の触媒−結合−受容体を用いるポリ（リガンド
相似体）が使用される。このプロトコールでは、受容体
−結合一表面を試料およびポリ（リガンド相似体）と混
合し、次に触媒−結合−受容体を加える。勿論ポリ（リ
ガンド相似体）と触媒−結合−受容体を触媒に結合した
ハプテン（ハプテン−結合−触媒）で替えることができ
る。

受容体が被分析物の場合、限定量の触媒−結合−リガン
ドに対して受容体被分析物と受容体−結合一表面との間
で競合させることができる。さもなければ、前述したよ
うに受容体被分析物に対して橋として抗原を用いること
ができる。その場合受容体被分析物は受容体に結合した
抗原に対して受容体−結合一表面の場合と同じように触
媒゛−結合−受容体と競合する。

被分析物、ｍ１ｐ−結合一表面および触媒−結合−ｍｉ
ｐがすべて同じメンバーである場合には同族メンバーを
加えねばならない。そしてこの同族メンバーは例えば受
容体（例えば抗体または多価受容体・・・・・・この受
容体は抗体以外のもの）がリガンド（例えばポリハプテ
ン（ポリ（リガンド−相似体））またはポリエピトープ
性抗原１かのいずれかに対してポリエピトープ形でなけ
ればならない。

本方法は複数（２種またはそれ以上）の被分析物を同時
に測定するのに役立つ。異なった被分析物（例えば抗原
）に対して複数のｎｉｐ　ｔ−有する表面（例えばスト
リップ）を使用することによって、（したがって各ｍｉ
ｐは固体表面上の特定位置に置かれ、各被分析物に対し
て特異的な複数の触媒−結合−ｍｉｐと混合される）、
各部位の信号発生は別々の被分析物を示すことになる。

材料 本分析法に用いられる材料は、被分析物、表面、信号生
成系、および適当なポリ（リガンド相似体）または多価
受容体である。信号生成系は触媒−結合−ｍｉｐと溶質
との少なくとも二種のメンバーを有し、しばしば別のメ
ンバーも有する。

被分析物 本発明のりガント被分析物は、モノエピトープ性または
ポリエピトープ性であることで特徴づけられる。ポリエ
ピトープ性リガンド被分析物は通常ポリ（アミノ酸）、
す々わちポリペプチドおよびタンパク質、多糖類、核酸
およびこれらの組み合わせである。このような組み合わ
せとしては、細菌、ウィルス、染色体、遺伝子、ミドコ
ンビリア、核、細胞膜等がある。

大ていの場合、本発明で用いるポリエピトープ性リガン
ド被分析物は分子量が少なくとも約５０００　。

普通は約ＩＱＯＯＯ以上である。ポリ（アミノ酸）の範
囲では、対象ポリ（アミノ酸）は一般に分子量が約５，
０００〜５００ＱＯＯＯ，通常は約２ＱＯＯＯ〜１，０
ＯＱＯＯＯであシ；対象ホルモンの場合には分子量が通
常約５，０００〜６０，０００の範囲である。

類似構造のタンパク質、特定の生物学的機能をもつタン
パク質、特異な微生物特に病原性微生物に関係するタン
パク質等の一連のタンパク質に関して多種類のタンツク
質が存在しうる。細胞およびウィルスに対しては組織適
合抗原または表面抗原（ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅ
ｎｓ　）がしばしば重要である。

以下は構造に関するタンパク質の分類である。

プロタミン類 ヒストン類 アルブミン類 グロブリン類 硬タンパク質類 リポタンパク質類 ムコタンパク質類 色素タンパク質類 リポタンパク質類 核タンパク質類 糖タンパク質類 プロテオグリカン類 未分類タンパク質（例えば、ソマトトロピン、プロラク
チン、インシュリ ン、はプシン） 人の血漿中に存在する若干のタンパク質は臨床的に重要
であシ、次のものがある。

プレアルブミン アルブミン α□−リポタンパク質 α１−酸糖タンノξり質 α□−抗トリプシン α１−糖タンパク質 トランスコルチン ４１６Ｓ−ボストアルブミン ドリフトファン−欠乏　α□−糖タンパク質α□Ｘ−糖
タンパク質 チロキシン結合性グロブリン インター−α−トリプシン阻害因子 Ｇｃ−グロブリン （Ｇｃ　　１−１） ＣＧＱ　　２−１） （ＧＯ２−２） ハプトグロビン （ａｐ　　１−ｔ） （ａｐ　　２−１） （Ｈｐ　　２−２　） セルロプラスミン コリンエステラーゼ α２−リポタンパク質 ミオグロビン Ｃ−反応性タンパク質 α２−マクロプリン α２−Ｈ３−糖タンパク質 Ｚｎ−α２〜糖タンパク質 α２−ノイラミノー糖タンパク質 エリスロポイエチン β−リポタンパク質 トランス７エリン ヘモベキシン フィブリノーゲン プラスミノーゲン β２−糖タンパク質Ｉ β２−糖タンパク質■ 免疫グロブリンＧ１　（工ｇＧ）、またはγＧ−グロブ
リン 分子式：γ２に２またはγ２λ２ 免疫グロブリンＡ１　（工ｇＡ）またはγＡ−グロブリ
ン 分子式＝（α２に２）ｎまたは（α２λ２）ｎ免疫グロ
ブリンＭ１　（工ｇＭ）またはγＭ−グロブリン 分子式：（μ２に２）または（μ２λ２）５免疫グロブ
リンＤ、（工ｇＤ）またはγＤ−グロブリン（γＤ） 分子式：（δ２に２）！たは（ε６λ２）免疫グロブリ
ンＥ、（ＩｇＥ）またはγＥ−グロブリン（γＥ） 分子式：（ε２に２）または（ε２λ２）遊離におよび
λライト・チェイン（Ｌｉｇｈｔｃｈａｉｎｓ） 相補因子： Ｃ／Ｉ Ｃ／　Ｉｑ ”ｌｒ Ｃ′□８ Ｃ′２ Ｃ′３ β□Ａ α２Ｄ Ｃ１０ Ｃ１０ Ｃ′６ Ｃ′７ Ｃ′８ Ｃ′９ 重要な血液凝固因子には下記のものがある。

■　　　フィブリノーゲン ■　　　プロトロピン ■α　　トロンビン ■　　　組織性トロンボプラスチン ■と■　プロアクセレリン、促進剤グロブリン■　　　
プロコンパ−チン ■　　　抗血友病性グロブリン（ＡＨＧ）■　　　クリ
スマス因子、血ショウトロンボプラスチン成分（ＰＴＣ
） Ｘ　　　スチュアートープロワー因子、アウトプロトロ
ンビン■ Ｘ　　　血ショウトロンボプラスチン前駆体（ＰＴＡ） 刈　　　ハゲマン因子 Ｘ１ｌｌ　　　　フィブリン安定化因子重要なタンパク
質ホルモンには次のものがある。

上皮小体ホルモン チロカルシトニン インシュリン グルカゴン レラキシ／ エリスロポイエチン メラノトロピン（黒血球刺激ホルモン、インテルメジン
） ソマトトロピン（成長ホルモン） コルチロトロピン（向側腎皮質性ホルモン）テロトロピ
ン（向甲状腺性ホルモン） 卵胞刺激ホルモン 黄体形成ホルモン（間質細胞刺激ホルモン）黄体乳腺刺
激ホルモン（ルテオトロピン、プロラクチン）ダナト９
トロピン（胎盤性性腺刺激ホルモン）セクレチン ガストリン アンギオテ／シンｌおよび■ プラデイキニ／ 人胎盤性ラクトゲン オキシトシ／ パンプレツシン 放出因子（ＲＦ） ＣＲＦ’、ＬＲＦ％ＴＲＦ、ソマトトロピン−ＲＦ。

ＧＲＦ’、ＦＳＨ−ＲＦ、Ｐ工Ｆ’、ＭＩＦ対象となる
他の重合体物質はムコ多糖類および多糖類である。

微生物から誘導される抗原性多糖類の例を次に示す。

フラ／シセラ・ツラレ／シス　　　　　リポ多糖類（Ｆ
’ｒａｎｃｉｓｅｌｌａ　ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）ヘモ
フィルス・イルツツシス　　　　粗製（Ｈａｅｍｏｐｈ
ｉｌｕｓ　　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）シゲラ・デイセンテ
リアエ　　　　　多糖類（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｄｙａｅ
ｎｔｅｒｉａｅ）ゾンネ菌　　　　　　　　　　　　　
　粗製、多糖類（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　５ｏｎｎｅｉ） リケッチア類　　　　　　　　　　　　粗製エキス（Ｒ
ｉｃｋｅｔｔｓｉａｅ　） カンジグ・アルビカンス　　　　　　　多糖類（Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）エンタモエバーヒストリ
チカ　　　　　粗製エキス（Ｅｎｔａｍｏａｂａ　ｈｉ
ｓｔｏｌｙｔｉｃａ）分析金堂ける微生物は、そのまま
でも、或いは溶解、粉砕その他の破砕処理したものでも
よく、得られた組成物またはタンパク質（例、抽出によ
り）ｔ−分析する。対象となる微生物は下記を含む。

コリネノζクテリウム属 ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｄｉ
ｐｔｈｅｒｉａｅ　）肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃ
ｉ） 肺炎双球菌（Ｄｉｐｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｈｅｕｍｏｎ
ｉａｅ）連鎖球菌属 化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｙｏｇ
ｅｎｅｓ）ストレプトコックス・サリバルス（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｃｏｃｃｕｓｓａｌｉｖａｒｕｓ　） ブトつ球菌属 黄色プｒつ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕ
ｒｅｕｓ）白色ブト９つ球菌（ＳｔａｐｈｙｌｏｃＩ＝
、ｃｃｕｓ　ａｌｂｕｓ）ナイセリア属 髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｌｄ
ｉｓ）淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ　ｇｏｎｏｒｒｈｅａ
ｅ）腸内菌科 大腸菌群細菌： 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）アエロゲ
ネス菌（Ａｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）
肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ）サルモネラ属： 腸チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｘａ　ｔｙｐｈｏｓａ）
豚コレラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｃｈｃｏｌｅｒａ
ｅｓｕｉｓ）ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　
ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）シゲラ属： 赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）
シュミツッ菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｓｃｈｍｉｔｚｉｉ
）シゲラ・アラビノタルダ（Ｓｈｉｇｅｌ’１ａａｒａ
ｂｉｎｏｔａｒｄａ　） ７レキシナー菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　ｆｌｅｘｎｅｒｉ
）ボイド９菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　’ｂｏｙｄｉｉ）ゾ
ンネ菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ　５ｏｎｎｅｉ）その他の腸
内菌 プロテウス属： 尋常変形菌（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ）奇怪
変形菌（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ）モルガ
ン変形菌（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍｏｒｇａｎｉ）緑膿菌（
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏａａ）アル
カリ大便菌（Ａ’ｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｆａｅｃａｌ
ｉｓ）コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ　ｃｈｏｌｅｒａｓ）ヘ
モフィルス−ボルデテラ族 インフルエンザ菌（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　１ｎｆｌｕ
ｅｎｚａｅ）へモフイルスーＶウクレイ（Ｈ，ｄｕｃｒ
ｅｙｉ）ヘモフィルス・ヘモフィルス（Ｈ，ｈｅｍｏｐ
ｈｉ：Ｌｕ５）ヘモフイＡ’スーアエギプチクス（Ｌ　
ａｅｇｙｐｔｉｃｕｓ）パラインフルエンザ菌（Ｈ、ｐ
ａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ　）百日咳菌（Ｂｏｒｄｅ
ｔｅｌｌａ　ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）はスト菌（Ｐａａｔ
ｅｕｒｅｌｌａ　ｐｅｓｔｉｓ）野兎病菌（Ｐａｓｔｅ
ｕｒｅｌｘａ　ｔｕｌａｒｅｕｓｉａ）プルセラ属 マルタ熱菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ
）牛流産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　ａｂｏｒｔｕｓ）豚流
産菌（Ｂｒｕｃｅｌｌａ　５ｕｉｓ）好気性胞子形成菌 炭ソ菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｎｔｈｒａｃｉｓ　）枯
草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）巨大菌（
Ｂａｃｌｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）セレウス菌
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ）嫌気性ｍ＋＊ｇｍ
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　；ボツ
リヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｂｏｔｕｌｉｎｕ
ｍ）破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｅｔａｎｉ
）ウエルチ菌Ａ型（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆ
ｒｉｎｇｅｎｓ）ノービ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　
ｎｏｖｙｉ）　　　　　　　　　　　　　　　　Ｉ、）
。

セプチツクス菌（Ｃｌｏｓｔｒｌｄｉｕｍ　ｓｅｐｔｉ
ｃｕｍ）ヒストリチフス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　
ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）第三型ロデラ菌（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ　ｔｅｒｔｉｕｍ）クロストリジウム・
ビフエルメンタンス（Ｃ１ｏｔｒｉｄｉｕｍｂｉｆｅｒ
ｍｅｎｔａｎｓ） スポロゲネス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｓｐｏｒｏ
ｇｅｎｅｓ）ミコバクテリウム属 大型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒ
ｃｕｌｏｓｉｓｈｏｍｉｎｉｓ） 生型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｏｖｉｓ
）鳥屋結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｖｉｕ
ｍ）ライ菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　１ｅｐｒａ
ｅ）パラ結核性腸炎菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐ
ａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　）牛放線菌（Ａｃｔ
ｉｎｏｍｙｃｅｓ　１ｓｒａｅｌｉｉ）および（Ａｃｔ
ｉｎｏｍｙｃｅｅ　ｂｏｖｉｓ）アクチノマイセス・ナ
エスルソデイ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓｎａｅｓｌｕｎ
ｄｉｉ　） ノカルジア・アステロイデス（Ｎｏｃａｒａｄｉａ　ａ
ｓｔｅｒｏｉｄｅａ）ノカルジア・プラジリエ／シス（
Ｎｏｃａｒｄｉａｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ） スピロヘータ目 梅毒トレポネー−ｖ　（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｂａ’ｌ
ｌｉｄｕｍ）フラン（シア・トレポネー−ｑ　（Ｔｒｅ
ｐｏｎｅｍａ　ｐｅｒｔｅｎｕｅ）ピンク・トレポネー
）　（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｃａｒａｔｅｕｍ）小スピ
リルム（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ　ｍ１ｎｕｓ）ストレプト
バチルス・モニリホルミス （Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｏｎｉｌｉｆｏ
ｒｍｉｓ）オーベルマイエ回帰熱スピロヘータ（Ｂｏｒ
ｒｅｌｉａｒｅｃｕｒｒｅｎｔｌｇ　） 黄ン出血病レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａｉｃｔ
ｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ　）犬レプトスピラ（
Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ　ｃａｎｉｃｏｌａ）マイコプラ
ズマ属 マイコフラスマ・ニューモニアエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍ
ａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ） その他の病原菌 単球病リステリア（Ｌｉａｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔ
ｏｇｅｎｅｓ）豚丹毒菌（Ｅｒ７ｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉ
ｘ　ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）ストレプトバチルス
・モニリホルミン （Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｏｎｉｌｉｆｏ
ｒｍｉｓ）ソ径肉芽腫菌（Ｄｏｎｖａｎｉａ　ｇｒａｎ
ｕｌｏｍａｔｉｓ）バチルス型バルトネラ（ＢａｒｔＯ
ｎｅｌｌａｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｇ　） リケッチア属（細菌様寄生虫） 発疹熱リケッチア（Ｒｌｃｋｅｔｔｓｉａ　ｐｒｏｗａ
ｚｅｋｉｉ）リケッチア・ムーセリ（Ｒｌｃｋｅｔｔｓ
ｉａ　ｍｏｏｓｅｒｉ）斑点熱リケッチア（Ｒｌｃｋｅ
ｔｔａｉａ　ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）コノリ・リケッチ
ア（Ｒｌｃｋｅｔｔｓｉａ　ｃｏｎｏｒｉ）リケッチア
・オーストラリス（Ｒｌｃｋｅｔｔｓｉａａｕｓｔｒａ
ｌｉｓ　） リケッチア・シビリクス（Ｒｌｃｋｅｔｔｓｉａ　５ｉ
ｂｉｒｉｃｕａ）リケッチア・アカリ（Ｒｌｃｋｅｔｔ
ｓｉａ　ａｋａｒｉ）つつが虫リケッチア（Ｒｌｃｋｅ
ｔｔａｉａ　ｔａｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ）Ｑ熱すケッ
チア（Ｒｌｃｋｅｔｔｓｉａ　ｂｕｒｎｅｔｉｉ）リケ
ッチア・キンタナ（Ｒｌｃｋｅｔｔａｉａ　ｑｕｉｎｔ
ａｎａ）クラミジア（分類不可能なを生虫、細菌／ウィ
ルス性）クラミジア薬剤（名称未確定） 菌類 クリプトコックス・ネオフオルマンス （Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）
プラストマイセス・デルマチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃ
ｅｓｄｅｒｍａｔｉｄｉａ　） ヒストプラズマｅカブスラツム（Ｈｌｓｔｏｐｌａｓｍ
ａｃａｐａｕｌａｔｕｍ） コクシジオイデスーイミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｌｄｅ
ｓ　１ｍｍ１ｔｉｓ）バラコクシジオイデス・ブラジリ
エンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｌｉｏｉｄｅｓ　ｂｒａａ
ｉｌｉｅｎｓｉｓ）ガロ癒カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ　
ａｌｂｉｃａｎｓ）アスハルギルスーフミガラス（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ　） かさ状ケカビ（Ｍｕｃｏｒ　ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒ　　
Ａｂｓｉｂｉａｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒａ） 藻菌類： リゾプス・オリザｘ　（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｏｒｙｚａ
ｅ）　　　　　　　　　　　　　　　：”リゾプスーア
ルリズス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ａｒｒｈｉｚｕｓ）リゾ
プス番二グリカンス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｎｉｇｒｉｃ
ａｎｓ）スポロトリカム・ジエンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｒ
ｉｃｈｕｍｓｃｈｅｎｋｉｉ） フオンセカエアー４ドロシイ（Ｆ’ｏｎｓｅｃａｅａ　
ｐｅｄｒｏｓｏｉ）７オンセカエ７−コ７パクタ（Ｆｏ
ｎｓｅｃａｅａ　ｃｏｍｐａｃｔａ）７オンセカエア・
デルマチジス（Ｆ’ｏｎｓｅｃａｅａｄｅｒｍａｔｉｄ
ｉｓ　） クラドスポリウム・カルリオニイ （Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）フ
イアロフオラ・ベルルコサ（Ｐｈ１ａｌｏｐｈｏｒａｖ
ｅｒｒｕｃｏｓａ　） アスはルギルスー＝ズランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
　ｎ１ｄｕｌａｎｓ）マズレラ−”ｆイセトミ（Ｍａｄ
ｕｒｅｌｌａ　ｍｙｃｅｔｏｍｉ）マズレラ・グリセア
（Ｍａｂｕｒｅｌｌａ　ｇｒｉｓｅａ）アレシエリア・
ボイジイ（Ａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ　ｂｏｙｄｉｉ）フ
イアロスホラ・ゼアンセルメイ（Ｐｈｉａｌｏｓｐｈｏ
ｒａｊｅａｎｓｅｌｍｅｉ　） ミクロスポルムΦギプセウム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ
　ｇ５ｒｐｓｅｕｍ）トリコフィトン・メンタグロフィ
テス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎｍｅｎｔａｇｒｏｐｈ
ｙｔｅｓ　） ケラチノマイセス・アジニルロイ（Ｋｅｒａｔｉｎｏｍ
ｙｃｅｓａｊｅｌｌｏｉ） ミクロスボルム・カニメ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ　ｃ
ａｎｉｓ）トリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐ
ｈｙｔｏｎ　ｒｕｂｒｕｍ）ミクロスポ／ｌ／Ａ−アン
ドゥイ＝　（Ｍｌｃｒｏｓｐｏｒｕｍａｎｄｏｕｉｎｉ
　） ウィルス アデノウィルス類 単純性庖疹 水痘 帯状庖疹 ウィルスＢ シトメガロウイルス 庖疹ウィルス類 天然痘（痘癒） 種痘 牛痘ウィルス 変態痘 伝染性軟属腫 ポリオウィルス　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１コツクスサツキーウイルス エコーウィルス（−Ｅｃｈｏｖｉｒｕｓ　）リノウイル
ス（Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ　）インフルエンザ（ＡｌＢ
およびＣ） パラインフルエンザ（１〜４） 耳下腺炎ウィルス ニューカッスル病ウィルス 麻疹ウィルス 牛疫ウィルス 犬ジステンパーウィルス 呼吸シンシチウムウイルス 風疹ウィルス 東部馬脳炎ウィルス 西部馬脳炎ウイルス シフト９ビス（Ｓｉｎｄｂｉｓ）ウイルスチクグンヤ（
Ｃｈｉｋｕｇｕｎｙａ）ウイルスセムリキ森林ウイルス マヨラ（Ｍａｙｏｒａ）ウィルス セントルイス脳炎ウィルス カリフォルニア脳炎ウィルス コロラドチック熱ウィルス 黄熱病ウィルス デング熱ウイルス レオウイＡ／ス（Ｒｅｏｖｉｒｕｓ）類レオウィルス１
〜３型 月干炎ウィルス類 Ａ型肝炎ウィルス Ｂ型肝炎ウィルス 腫瘍ウィルス類 ラウシャー（Ｒａｕｓｃｈｅｒ　）白血病ウィルスグロ
ス（Ｇｒｏｓｓ）ウィルス マロニー（Ｍａｌｏｎｅｙ）白血病ウィルス、７ツー、
イ７，６ヤ（Ｅｐｓｔｅｉ。Ｂａｒｒ）ライい　　　　
　；ｊ′ ドッグハートワーム（ミクロフイラリア）マラリア 住血吸虫症 胞子虫症 施毛虫症 モノニブトープ性リガンド被分析物は一般に約１００〜
２０００の分子量であシ、普通には１２５〜ＬＯ００で
ある。対象被分析物は薬剤、代謝量　　　　　　　・′
物、毒物、汚染物質等である。対象薬剤には、アルカロ
イド類がある。アルカロイド類の中には、モルフイネ、
コディン、ヘロイン、デキストロメトルファン、これら
の誘導体および代謝産物であるモルフイネアルカロイド
；コカイン、ペンジルエクゴニン、これらの誘導体およ
び代謝産物であるコカインアルカロイド、リゼルグ酸の
ジエチルアミド金含む麦角アルカロイド；ステロイドア
ルカロイド；イミナゾイルアルカロイド；キナゾリンア
ルカロイド；イソキノリンアルカロイド；キノリンアル
カロイド（キニンおよびキニジ／を含ム）；ジテルペン
アルカロイド；これらの誘導体および代謝産物がある。

次の薬剤群はステロイド類である。ステロイド類にはエ
ストロゲン、ゲストデン、アンドロゲ／、アンドレノコ
ルチカルステロイド、胆汁酸、強心性の配糖体およびア
グリコ／（ジゴキシン、′）−１″キシゲニンを含む）
、サポニンおよびサポゲニン、これらの誘導体および代
謝産物がある。またジエチルスチルベストロールの如き
ステロイド擬似物質も含まれる。

次の薬剤群は５〜６員環のラクタムで、これには例えば
フエノバルビタールおよびセコバルビタールのようなバ
ルビッール酸塩、ジフェニルヒダントイン、プリミドン
、エトスフシイミドおよびそれらの代謝産物がある。

次の薬剤群はアルキル基に２〜３の炭素原子を有スるア
ミノアルキルベンゼン（例、アンフェタミン）、カテコ
ールアミン、（例エピネフリン）、Ｌ　−ト１１　　、
＠、エピネフリン、ナルセイ／、パパヘリン、これらの
代謝産物である。

次の薬剤群はインズ複素環類で、オキサゼパン、クロル
プロマジン、テグレトール、イミプラミン、これらの誘
導体および代謝産物金倉み、複素環はアゼピン、ジアゼ
ピンおよびフェノチアジン類である。

次の薬剤群はプリン類であって、テオフィリン、カフェ
イン、これらの誘導体および代謝産物金倉む。

次の薬剤群は大麻から誘導される薬剤であって、カンナ
ビノールおよびテトラヒドロカンナビノールを含む。

次の薬剤群はビタミン類であって、例えば、ビタミンＡ
、Ｂ（例、Ｂ□２）、Ｃ，Ｄ％Ｅおよびに１葉酸、チア
ミンである。

次の薬剤群はプロスタグランジン類であシ、これはヒト
９０キシル化および不飽和の程度や位置によって乳なる
。

次の薬剤群は抗生物質であって、ハニシリン、クロロマ
イセチン、アクチノマイシン、テトラサイクリン、テラ
マイシン、これらの代謝産物および誘導体がある。

次の薬剤群はヌクレオシドおよびヌクレオチドであって
、適当な糖およびリン酸塩置換基を有するＡＴＰ、ＮＡ
Ｄ、Ｆ’ＭＭ、アデノシン、グアノシン、チミジンおよ
びシチジンである。

次の薬剤群は、個々別々のいろいろな薬剤であって、メ
タトン、メプロバメート、セロトニン、メイリジン、ア
ミトリブチリン、ノルトリブチリン、リド９カイン、プ
ロカイ／アミド、アセチルプロカインアミド、プロプラ
ノ２−ル、グリセオフルヴイン、メルプロン酸、ブチロ
フェノン類、抗ヒスタミン類、コリン抑制剤（アトロピ
ン等）、これらの代謝産物および誘導体である。

次の化合物群はアミノ酸および小さなペプチドであって
、ポリョービチロニン類、例えばチロキシンおヨヒトリ
ョードチロニン、オキシトシン、ＡＣＴＨ，アンギオテ
／シン、メトおよびロイ−エンケファリン、これらの代
謝産物および誘導体である。

病気の状態に関連する代謝産物はスイルミン、ガラクト
ース、フェニルピルビン酸およびボルフ４．７．□ヶ１
．あ、。　　　　　　　　　　：”次の薬剤群はアミノ
グリコシド類であって、例エハケンタマイシン、カナマ
イシン、トフラマイ７−７およケア、ヵ’／’／Ｑああ
。　　　　　　　　　　ｉ。

２．。カイ０１ｉｊ、ア２．ヤ２アオ７゜８つ　　　　
［□゛１”シ・例え“７肩°イ１゛・７“″躯ｅ　）　
−１ル、シランチン、エピネフリン、Ｌ−ト―パ等の　
　　　　　　、１ような複素環構造の一部であってもよ
いし、なく　　　　　　　′□：：、′・： でもよい。構造上は類似性があるが、活性に関しては広
く相違する。

薬剤を使用する本来の目的に関して薬剤自体にも考慮が
払われる。多くの場合、ぜん息、てんかん性疾患、心臓
血管病、高血圧、細菌性またはウィルス性感染症、胃腸
感染症等の治療に使用する薬の薬量を監視して薬の機能
を維持するように調整することが望ましい。それぞれの
場合、血液、血清、唾液等の生理学的液体を検査して投
与した薬が個々の治療薬量の範囲内であることを確める
。

対象毒薬にはポリハロゲン化ビフェニル類、リン酸エス
テル類、チオリン酸エステル類、カーバメート類、ポリ
ハロゲン化スルフェンアミド類ζこれらの代謝産物およ
び誘導体がある。

受容体被分析物の場合、分子量は一般にＩＱＯＯＯ〜２
×１０の範囲であシ、普通ＩＱｏｏｏ〜１ｏ６である。

免疫グロブリン、工ｇＡ、工ｇＧ１工ｇＥおよび工ｇＭ
では分子量は一般に約１６ＱＯＯＯ〜１０’の範囲であ
る。酵素の分子量は一般に約１ｃｌｏｏ。

〜６０００，０００である。天然受容体は広範囲であっ
て、一般に分子量が少なくとも約２５，０００であシ、
１０またはそれ以上のものもちシうる。例えばアビジン
、チロキシン結合性グロブリン、チロキシン結合性フレ
アルフミン、トランスコルチン等の物質がある。

リガンド相似体 リガンド相似体は水素または官能基金結合の手または結
合基（例えばヒドロキシル、アミノ、アリール、チオ、
オレフィン等の活性な官能基金もつ他の分子に共有結合
するための官能基を有する）で置換されている点りガン
トと相違する。その結果生ずる化合物は水素が置換した
ことよりはむしろその化合物が結合した分子によってリ
ガンドと相違する。結合基は通常水素以外の原子を１〜
２０有し、これらの原子は炭素、酸素、硫黄、窒素およ
び原子番号１７〜３５のハロゲンである。

これに含有される官能基はカルボニル（オキソと非オキ
ソの両方）、活性ハロゲン、ジアゾ、メルカプト、エチ
レン、特別に活性化したエチレン、アミン等である。複
素原子の数は一般に約Ｏ〜６の範囲であり、普通は約１
〜６、好ましくは約１〜４でちる。結合基の詳細は米国
特許第３，８１７，８３７号にアシ、その記述をここに
参照引用する。。

大ていの場合、結合基は脂肪族であるが、ジアゾ基をも
つ芳香族基もある。一般に結合基は鎖中に約１〜１０の
原子、普通は約１〜６の原子全盲する２価の鎖である。

酸素は通常オキソまたはオキシとして存在し、炭素およ
び水素に結合しておシ、好ましくは炭素にのみ結合して
いる。一方窒素は通常アミンとして存在して炭素にのみ
結合しているかアミドであシ、また硫黄は酸素と類似し
ている。

結合すべき分子と結合基との間に共有結合全形成する官
能基はアルキルアミン、アミド、アミド／、チオアミド
、尿素、チオ尿素、グアニ：）／およびジアゾが普通で
ある。

ポリヘプチドとの結合に特に用いられる結合基はカルボ
ン酸類であシ、これはジイミド類と併用してもよいし、
または炭酸モノエステルとともに混合無水物として用い
てもよくまたはＮ−ヒドロキシコハク酸イミドまたはｐ
−ニトロフェニルの如き活性なカルボン酸エステルとし
て用いてもよい。窒素性類似化合物はイミドエステルと
して用いられる。還元的アミノ化条件、例えば水素化ホ
ウ素の存在下でイミン形成のためにアルデヒド９を用い
るとアルキルアミンが生成する。使用しうるその他の非
−オキソ力／ｌ／　４　：、　／ｌ／基はイソ′アネー
　　　　　　ｉト類およびインチオシアネート類である
。また活　　　　　　：性ハロゲン化物も使用すること
ができ、特にプロ　　　　　　　′ムアセチル基が用い
られる。

多くの場合、リガンドは結合基に結合するための部位と
して使用可能な官能基金１つまたはそれ以上もっている
。特にヒドロキシ、アミノおよび了り−ル基、特に活性
化したアリール基が使用される。また、オキソ官能基か
らオキシムも作られ、ヒドロキシルがカルボキシメチル
のような結合基に結合するための部位として用いられる
。

結合基の選択は非常に広範であ）、リガンドに存在する
官能基、リガンドが結合すべき化合物中の官能基、所望
の結合基の性質および長さ等によって選択がきまる。

固体表面 表面は多様である。通常、表面は信号生成系のメンバー
を強く吸着しないように（これは分析に悪影響を及ぼす
）、信号発生系によって発生した信号の測定を妨げない
ように、そして分析中表面の物理的完全性が保てるよう
に選ばれる。表面はいろいろな形をしていてよく、種々
の物理的特性をもっていてもよく、種々の化学組成をも
っていてもよく、組成物や積層体の混合物やまたはそれ
らの組み合わせのように１つまたはそれ以上の組成物で
あってもよい。特定の表面は、表面上に信号発生化合物
を不溶化することによって信号発生化合物と相互作用し
、あるいは表面に結合した化合物を錯化させ、反応させ
、または相互作用させて信号発生化合物を形成または破
かいする。

表面は使用方法および測定方法により種々の形状および
形態でよく、また種々の大きさをとシうる。表面は棒、
管またはカビラリ−１せんい、ストリップ、円板、プレ
ート、つぼ等によって支持されている。表面は適用層が
比較的厚みの小さいものである場合、すなわち通常０．
１μ以上、よシ通常は１μ以上、普通には１０μ以上ま
たは表面の性質、使い易さ、および所望の性質によって
はそれ以上の場合、支持体の必須部分であるかまたは支
持体と別になっている。

表面は不透明、半透明または透明である。また表面は固
体、ゲルまたは粘性液体であシ、透過性または不透過性
であり、多孔性または非多孔性であシ、吸収性、網状、
渦巻形溝形であシ、でこぼこであり平滑であシ、あるい
は連続、非連続層で被覆されていてもよい。表面は信号
発生化合物が少なくとも０．１μの深さまで、よシ好ま
しくは少なくとも１μ、さらに好ましくは少なくとも１
０μまで浸透できるものが好ましい。

また表面をその機能にしたがって考えてみる。

表面は媒体から識別しかつ通常は媒体から分離すること
ができるように、水性分析溶液中に別個の不連続の存在
を維持する基体または支持体として役立つ。表面は表面
に結合するｍｉｐ　ｔ−支持するのに役立つので、ｍｉ
ｐは表面と無関係に溶液中に拡散することが不可能であ
る。さらに、表面は信号発生化合物の支持体として、す
なわち、析出層の基体としてかあるいは共有または非共
有付着のための支持体としてはたらく。表面は表面を浸
漬する液体媒体から区別しうるという点で実際上非流動
的で非連続的であシ、ｎｉｐ、信号発生系のメンバーま
たは共有的または非共有的に結合している他の適当な化
合物を支持するための画然とした基体またはファンデー
ションを提供する。表面は帯電形または非帯電形で存在
してもよい。帯電が信号生成系の作動に有利な場合は帯
電する。

いろいろな材料が使用されるが、まず第１の条件は、信
号発生化合物を表面に結合させること信号発生を妨害し
ないこと、表面に容易に結合すること等である。

固体表面の材料としては、多様な有機および無機ポリマ
ー類（天然および合成の両方）が使用しうる。ポリマー
類の例としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ
（４−メチルブテン）、ポリスチレン、ポリメタクリレ
ート、ポリ（エチレンテレフタレート）、レーヨン、ナ
イロン、ポリ（ビニルブチレート）、シリコン類、ポリ
ホルム　　　　　　　ｉアルデヒド９、セルロース、酢
酸セルロース、ニトロセルロース等がある。その他の使
用可能な材料は、紙、ガラス、セラミック、金属、非金
属、半４４・ｒ−）７１−’＄”ｅ〜、　１６に／％＃
［＃＊’Ｊｔ　　　　。

があシ、例えば、ゼラチンのようなタンパク質、リポ多
糖類、シリケート、アガロースである。また′リアクリ
“アミ１゛あるいは数種の水性相を形　　　　　　１１
′ 成するポリマー類、例えばデキストラン、ボリア　　　
　　　：４ルキレングリコール（アルキレンは炭素原子
数２　　　　　　′：〜３）または両親媒性化合物の如
き表面活性剤、例えば燐脂質、長鎖（炭素数１２〜２４
）アルキルアンモニウム塩等である。

固体表面が多孔質である場合、系の性質により孔の大き
さはいろいろとなる。ある場合には、孔の大きさは表面
に結合した触媒に近づかないよう　　　　　　ｉに限定
される。カットオフサイズは致方例えば２ＱＯＯＯ〜数
百万ダルトン例えば２千万にわたシ、通常は５０００ダ
ルトン以上である。

固体表面に用いる特定の材料は分析媒体に不溶性であシ
、膨潤性でも非膨潤性でもよいが非膨潤性が好ましく、
疎水性でも親水性でもよく、すなわち極性でも非極性で
もよく、好ましくは親水性であり、薄い単分子層または
異った組成の多分子層で被覆されていてもよく核種され
ていなくてもよく、単一物質でも特に積層体やせんいの
ような複数の物質でもよく、織られていても、鋳造され
ていても、押出成型されていても、蝕刻されていても、
凝集されていてもよい。

表面を作る場合、積層体のように複数の材料を使って種
々の性質をうろことができる。例えば、多孔層を非多孔
性の透明なつぼ（ｃｕｖｅｔｔｅ）の壁に付着させる。

これは隣接層全保護しながら信号をみるだめの窓全提供
する。表面は、信号発生化合物の結合性音強め、特定方
向への移動を阻止し、半透過性膜として作用する等の目
的のために調整することができる。非特異的結合を阻止
し、共有結合を簡単にし、信号検知を高める等のために
、例えばゼラチンのよう外タンパク質被覆をしてもよい
。しかし、使用する物質が吸着性の強いものであっては
ならないということが理解されねばならない。何故なら
、バルク溶液中で生成して表面に拡散する信号発生化合
物全吸着してしまうためである。

表面支持体は、試料の大きさ、プロトコール、信号測定
手段等により特定の大きさのものが都合がよい。

ｎｉｐと表面との間、あるいは結合しなければならない
他の化合物の間に共有結合を生じさせるために、表面は
多官能性であるか、または多官能化されうるものである
のが普通である。表面上に存在し結合のために使用され
る官能基は、カルボン酸、アルデヒド９、アミノ基、シ
アノ基、エチレン基、ヒドロキシル基、メルカプト基等
である。多様な化合物を種々の表面に結合する方法は公
知であり、文献に充分説明されている。例えば”非可動
化酵素（Ｉｍｍｏｂｌｉｚｅｄ　Ｅｎｚｙｍｅｓ　）”
、（工Ｃｈｉｒ。

Ｃｈｉｂａｔａ、　Ｈａｌｓｔｅａ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎ
ｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１９７８　）およびＣｕａｔｒｅｃ
ａｓａｓ、　”　（Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２４
５３０５９（１９７０））参照）。

結合基の長さは結合される化合物の性質、結合される化
合物の表面との間の距離が結合される化合物の性質に及
ぼす効果、結合される化合物の架橋力等によって広範に
わたる。

結合基は結合の手であってもあるいは鎖中約１２以下、
通常は約１０以下の原子を有してもよい。結合基は脂肪
族、脂環族、芳香族、複素環族またはこれらの組み合わ
せでもよい。結合基の水素以外の全原子数は約２０以下
、通常は約１６以下であシ、これらは炭素、酸素（オキ
シまたはオキソをして、オキソ−カルボニルおよび非オ
キソ−カルボニル、の両方）、窒素（アミノまたはアミ
ドとして）およびイオウ（チオまたはチオノとして）で
ある。例えば、メチレンカルボニル、コハク酸イミド９
、α−ハロアセチル、チオメチレン、グリシルまたはポ
リグリシル、スクシンジオイル、マレジオイル、ゲルタ
ール、ジアルキルデン、メチレンフェニルジアゾおよび
ウレイドがある。

ｍｉｐは常に共有または非共有的に固体表面に結合され
る。プロトコールの性質によシ、結合ｍｉｐの量は、限
定されているかあるいは試料中に存在すると予想される
最高量の被分析物量（被分析物の結合部位に基づく）よ
り過剰である。さらに信号生成系の１またはそれ以上の
メンバーも固体表面に結合しうる。しばしば結合する信
号生成系のメンバーの量は比例的であるので、大過剰量
が用いられる。

信号生成系 信号生成系は少なくとも２種のメンバーを有する。触媒
（通常は酵素）；および溶質である。溶質は接触反応を
行なうことができ、接触反応は信号発生化合物を直接生
ずるか、信号発生化合物への前駆体を生ずるか、あるい
は、他の化合物と反応または相互作用して信号発生化合
物全生成、保護、破かいするような生成物全生成する。

すでに述べたように、１種または複数種の触媒が用いら
れ、通常、触媒の少なくとも１種は酵素である。２種以
上の触媒を用いる場合は、通常触媒の数が３種以上にな
るとその効果は急速に不利益によって相殺される。した
がって、一般に触媒は３種より多くはならない。追常は
２種よシ多くならない。

少なくとも１種の触媒は共有または非共有的に、例えば
特異結合対によシ、ｍｉｐに結合する。１種の触媒分子
または同一または異種の複数の触媒分子が１種またはそ
れ以上のｍｉｐに結合することができ、さもなくば複数
のｍｉｐが単一触媒分子に結合しうる。触媒が複数の場
合、どの触媒を固体表面および／またはｍｉｐに結合さ
せるかの選択は、試薬を作る際の便宜、結合の容易さお
よび分析感度への影響によってきまる。したがって、し
ばしばどの触媒を固体表面に結合し、どの触媒’ｉｚｍ
ｉｐに結合するかを選択することになる。

信号をバルク溶液よシも表面に優先的に伴わせるために
種々のテクニックが用いられる。例えば、信号発生化合
物の不溶化：表面で信号発生化合物全優先的に生成して
表面に結合させること、バルク溶液中の触媒−結合−ｍ
ｉｐｆ、掃去または防止すること；表面で信号生成系の
成分をスカベンジャーから保護しながら、バルク溶液中
の信号発生化合物、触媒または前駆体を掃去すること；
および表面で表面上の化合物と相互作用する（反応も含
む）化合物全生成することである。これらの方法は個々
に使われるだけでなく、一般に使われて効果を上げるこ
とができる。

不溶性の信号発生化合物を生成するために不溶化するに
は、化合物は溶解型から不溶解型へ接触的に転位する；
染料ではロイコ型から有色型へ；螢光体では非螢光化合
物から螢光化合物へ。

多くの染料は種々の天然せんいに結合する時有色に変る
ことに基づいて存在する。本発明の場合も染料が接触的
に（特に酵素作用により）不溶化する際に同じタイプの
変化がある。不溶化は酸化、還元、または加水分解、特
に水溶性基、例えば有機および無機エステル類、例えば
ホスフェート、ピロホスフェート、カルボキシレート（
例、ウロネート、サルフェート等）、またはエーテル類
（例、グリコシジルエーテル）の加水分解である。

種々の化合物をその疎水性−すなわち水性媒体中での溶
解性欠除−を高めるために変化させる。

次にこれらの化合物をその親水性を増すために変化させ
る。例えば、信号発生力をかく得した生成物を触媒除去
の際に生じさせるような水溶性置換基による置換である
。例えば、フェノール性化合物を有機または無機酸でエ
ステル化するか、糖類でエーテル化する。アミｙ類をア
シル化する。複素環乏酸化または還元して溶解性または
不溶解性を高める。それぞれの場合、生成物は信号発生
可能であるか信号発生に影響を与えることができるが、
反応物は信号発生することができない。

種々の化合物が溶質として用いられ、これらは接触転位
して（１または２工程）信号発生体としての不溶性の電
子活性分子または変化分子、発色団または発螢光団生成
物となる。

ある場合には、シト９ツクス反応が短波長の光吸収性全
盲する溶解性化合物音それよシ長波長の光吸収性全盲す
る不溶性化合物に変化させる。別の方法で溶質として用
いることのできる市販の化合物が不溶性生成物を生成し
ない場合には、このような市販化合物を慣用手段によシ
疎水性基、例えば炭化水素（例、アルキル）、ハロゲン
（例、クロルおよびブロム）、シアノ、ニトロまたはこ
れらの組み合わせで置換して変性することができる。

市販化合物が不溶性で信号発生化合物の要求を充たすこ
とができる場合には、このような市販化合物は、水溶性
全付与し化合物の電子活性発色性または螢光性に実質な
変化をもたらす接触的に除去可能な基で置換するならば
溶質として用いることができる。

また本発明は写真に使用する有色カップリング生成物を
用いるのにも役立つ。触媒−結合−ｍｉｐとして銀以外
の触媒を、活性化して表面に結合した化合物と反応して
有色カップリング生成物を生成する溶質と共に用いると
、信号生成系はカラー写真に匹敵する。本発明に用いら
れる組成物の優れた概説および表は６写真工程の理論（
ＴｈｅＴｈｅｏｒｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐｈｏｔｓｇｒａ
ｐｈｉｃ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　）″　第３版、Ｔ、Ｈ，、
Ｔａｍｅｓ著、Ｔｈｅ　Ｍａｃｍｉｌｌａｎ　Ｃｏ、、
　ＮｅｗＹｏｒｋ発行（１９６６）３８３〜３９６　頁
を参照されたい。この頁を参考のためここに記載する。

置換アニリン類（特にアミノ置換アニリン類）とフェノ
ール類（特にナフトール類）のような組み合わせが特に
興味がある。個々の化合物は、α−ベンゾイル−３−〔
α−（４−カルボキシメチルフェノキシ）アセタミドツ
ーアセタニリド；１−フェニル−３−Ｃ３−（４−シア
ノメチルフェノキシ）ペンヅアミド〕−５−ピラザロン
：１−［”４−（ａ５−ジメチルフェノキシ）フェニル
〕−３−（４−アミンエトキシ−３−メチルベンザミド
）−５−ピラプロ／；および１−ヒドロキシ−Ｎ−〔γ
−（２−１−アミル−４−カルボキシメチルフェノキシ
）プロピルクー２−ナフタミドである。これらの化合物
は表面に共有結合しうるか、またはさらに親油性基で変
性して表面に非共有結合するようになる。

次の表は溶質として用いられる化合物であシ、これらは
１または２工程の接触転位によシ信号発生化合物を生成
する。、ある場合には、化合物の溶解特性のために、所
望の°性質を得るための若干の置換が必要でおる。発色
団および発螢光団の表は表中の反応の性質のカテゴリー
に組みこまれている。

発色団および発螢光団反応 酸化還元 テトラゾリウム塩→ホルマザン ロイコメチレンブルー−メチレンズルーロイコメルトラ
ブル−→メルト９ラブルー４−　Ｃｆｌ　−１−ナフト
ール→有色酸化生成物ロイコフェナジンメトサルフェー
ト−フェナジンメトサルフェート Ｎ−３５−ジブロモまたはＮ−４５−ジクロロ−４ヒト
９０キシフェニル−ｐ−ジメチルアミノアニリ／→Ｎ−
（ｐ−ジメチルアミノフェニルつ４５−ジブロモ−また
はａ５−ジクロロキノンモノイミノジヒト９０ビオシア
ニン→ビオシアニン２−（２’−インジチアゾリル）−
５−スチリル−３−（４’７タルヒドラジジル）テトラ
ゾリウムクロリド−ホルマザン誘導体 ジヒドロサフラニ／→サフラニン※ ロイコベンジルヴイオロゲン→（ンジルヴイオロゲンジ
アミノベンジジン→有色酸化生成物 ０−トルイジン→有色酸化生成物 α−ナフトール＋ビロニン→螢光生成物５−アミノ−２
３−ジヒドロ−Ｌ４−７タラジンジオン→ｈｖ アミノアンチピレン＋Ｌ７−ヒドロキシナフトール→有
色カップリング生成物 加水分解 ウンベリフェリルホスフェート−ウンベリフェロンＺ４
−ジニトロナフチル−１β−Ｄ−ガラクトサイド→２．
４−ジニトロナフトール Ｎ−（２’−メトキシフェニル）６−プロモー３−カル
ボキサミド−ナフチル−２β−Ｄ−グルコシド９０／１
１！エーテル→Ｎ−（２’−メトキシフェニル）６−プ
ロモー３−カルボキサミド−２−す７トール※　水溶性 好ましい分光光度活性化合物（染料、螢光体および化学
発光体）はヒドロキシル基、特に１またはそれ以上のフ
ェノール性基含有しておシ、これらは親代合物中に存在
しているかあるいは導入されうる。ヒドロキシル基はエ
ステル化してエステル、例えばホスフェートおよびウロ
ネー）ｔ−形成したシ、エーテル、特にグリコシジルエ
ーテルを形成したシするのに都合のよい部位である。

すでに示したように、酵素性または非酵素性の触媒が用
いられる。酵素性触媒を用いるのが好ましい。何故なら
、それらはしばしば反応？促進し、多様な反応に・対し
て融通性があシ、且つよく特徴づけられた性質を有する
。

酵素を選ぶに当っては、対象となる反応に関するものの
他にさらに多くのことを考慮する。例えば酵素の安定性
、高い反覆率への所望、物理的環境の変化に対する変化
率の感度、基質および生成物の性質、酵素の有用性、酵
素の結合が酵素の性質に及ぼす影響、試料溶液中に偶然
存在するかもしれない物質の酵素活性に及ぼす影響、酵
素の分子量等である。

以下は国際生死学会の分類にしたがった前記酵素類のカ
テゴリーである。

第■表 １．酸化還元酵素 １．１　　供給体のＣＨ−ＯＨ基に作用するもの１、１
．１　　受容体としてＮＡＤまたはＮＡＤＰをもつもの １、１．２　　受容体としてチトクロームをもつもの １、１．３　　受容体として０□をもつもの１、１．９
９　　その他の受容体音もつもの１．２　　供給体のア
ルデヒドまたはケト基に作用するもの １、２．１　　受容体としてＮＡＰまたはＮＡＤＰ　ｔ
−もつもの １、２．２　　受容体としてチトクロームをもつもの １、２．３　　受容体としてｏ２ヲもつもの１、２．４
　　受容体としてリポエートをもつもの１、２．９９　
　その他の受容体をもつもの１．３　　供給体のＣＨ−
ＯＨ基に作用するもの１、３．１　　受容体としてＮＡ
ＤまたはＮＡＤＰｅ。

もつもの １．３．２　受容体としてチトクロームをもつもの １、３．３　　受容体として０２ｔ−もつもの１、３．
９９　　その他の受容体をもつもの１．４　　供給体の
ＣＨ−ＮＨ２基に作用するもの１、４．１　　受容体と
してＮＡＤまたはＮＡＤＰをもつもの １、４．３　　受容体としてｏ２ヲもつもの１．５　　
供給体のＣ−ＮＨ基に作用するもの１、５．１　　受容
体としてＮＡＤまたはＮＡＤＰ＠もつもの １、５．３　　受容体として０□をもつもの１．６　　
供給体としての還元ＮＡＤまたはＮＡＤＰに作用するも
の １、６．１　　受容体としてＮＡＤまたはＮＡＤＰをも
つもの １、６．２　　受容体としてチトクロームをもつもの １、６．４　　受容体としてジスルフィド化合物をもつ
もの １、６．５　　受容体としてキノンまたは関連化合物を
もつもの １．６．６　受容体として窒素基をもつもの１、６．９
９　　その他の受容体をもつもの１．７　　供給体とし
てのその他の窒素化合物に作用するもの １、７．３　　受容体として０□をもつもの１、７．９
９　　その他の受容体をもつもの１．８　　供給体のイ
オウ基に作用するもの１、８．１　　受容体としてＮＡ
ＤまたはＮＡＤＰ＠もつもの １、８．３　　受容体として０□をもつもの１、８．４
　　受容体としてジスルフィド化合物をもつもの １、８．５　　受容体としてキノンまたは関連化合物音
もつもの １、８．６　　受容体として窒素基をもつもの１．９　
　供給体のヘム基に作用するもの１、９．３　　受容体
として０２ヲもつもの１、９．６　　受容体として窒素
基金もつもの１．１０　供給体としてジフェノールおよ
び関連物質に作用するもの １、１０．３　　受容体としてｏ２ｔ−もつもの１．１
１　供給体としてのＨ２０□に作用するもの１．１２　
供給体としての水素に作用するもの１．１３　酸素を混
入して単一供給体に作用するもの（酸素酵素） １．１４　酸素を１種の供給体に混入して対の供給体に
作用するもの（ヒドロキラーゼ）１．１４．１　１種の
供給体として還元ＮＡＤまたはＮＡＤＰ’ｉ用いるもの １．１４．２　１種の供給体としてアスコルベートを用
いるもの １．１４．３　１種の供給体として還元プテリジンを用
いるもの ｚ　トランスフェラーゼ ２．１１炭素基金転移するもの パ°“″ｆ５７７．７”′−５・。

２、１．２　　ヒドロキシメチル−、ホルミル−および
関連トラ、ンスフエラーゼ ２．１．３　　カルボキシル−およびカルバモイルトラ
ンスフェラーゼ ２、１．４　　アミジノトランスフェラーゼ２．２　　
アルデヒドまたはケト／残基全転移するもの ２．３　　アシルトランスフェラーゼ ２、３．１　　アシルトランスフェラーゼ２３．２　ア
ミノアシルトランスフェラーゼ２．４　　グリコジルト
ランスフェラーゼ２、４．１　　へキソシルトランスフ
エラーゼ２．４．２　　ヘントシルトランスフェラーゼ
２．５　　アルキル基または関連基を転移するもの２．
６　　窒素基金転移するもの ２、６．１　　アミントランスフェラーゼ２、６．３　
　オキシミノトランスフェラーゼ２．７　　燐含有基金
転移するもの ２．７１　受容体としてアルコール基をもつホスホトラ
ンスフェラーゼ ２．７２　受容体としてカルボキシル基をもつホスホト
ランスフェラーゼ ２、７．３　　受容体として窒素基音もつホスホトラン
スフェラーゼ ２、７．４　　受容体としてホスホトランスフェラーゼ ２、７．５　　明らかに分子内であるホスホトランスフ
ェラーゼ ２．７６　ピロホスホトランスフェラーゼ２．７７　ヌ
クレオチジルトランスフエラーゼ２、７．８　　その他
の置換ホスホ基に対するトランスフェラーゼ ２．８　イオウ含有基を転移するもの ２、８．１　　サルファトランスフェラーゼ２、８．２
　　スルホトランスフェラーゼ２．８．３　　ＣｏＡ−
）ランスフェラーゼ３、　ヒドロラーゼ ３．１　　エステル結合に作用するもの３、１．１　　
カルボン酸エステルヒト９０ラーゼ３、１．２　　チオ
ールエステルヒト９０ラーゼ３．１．３　　燐酸モノエ
ステルヒドロラーゼ３、１．４　　燐酸ジエステルヒト
９０ラーゼ３、１．５　　三燐酸モノエステルヒドロラ
ーゼ３、１．６　　硫酸エステルヒドロラーセ３．２　
　グリコジル化合物に作用するもの３、２．１　　グリ
コシドヒドロ２−ゼ３．２．２　　Ｎ−グリコジル化合
物を加水分解するもの ３．２．３　　Ｂ−グリコジル化合物を加水分解するも
の ３．３　　エーテル結合に作用するもの３、３．１　　
チオエーテルヒドロラーゼ３．４　　ペプチド結合に作
用するもの（ペプチドヒト９０ラーゼ） ３、４．１　　α−アミノアシル−ペプチドヒドロラー
ゼ ３、４．２　　イブチジルーアミノ酸ヒドロラーゼ３、
４．３　　ジＲプチドヒト９０ラーゼ３、４．４　　ｋ
プチジルーベプチト９ヒドロラーゼ３．５ハプチド結合
以外のＣ−Ｎ結合に作用するも′の ３、５．１　　線状アミド中の ３、５．２　　環状アミド９中の ３、５．３　　線状アミジン中の ３、５．４　　環状アミジン中の ３、５．５　　シアニド中の ３、５．９９　　その他の化合物中の ３．６　　酸無水物結合に作用するもの３、６．１　　
燐含有無水物中の ３．７Ｃ−Ｃ結合に作用するもの ３．７１　ケトン系物質中の ３．８　　ハロゲン結合に作用するもの３．８．Ｉ　　
Ｃ−ハロゲン化化合物中の３．８．２　　Ｐ−ハロゲン
化化合物中の３．９　　Ｐ−ＩＪ結合に作用するもの４
、　リアーゼ ４．１　　炭素−炭素リアーゼ ４、１．１　　カロボキシーリアーゼ ４、１．２　　アルデヒド−リアーゼ ４、１．３　　ケト酸−リアーゼ ４．２　　炭素−酸素リアーゼ ４、２．１　　ヒドロ−リアーゼ ４．２．９９　　その他の炭素−酸素リアーゼ４．３　
　炭素−窒素リアーゼ ４、３．１　　アンモニア−リアーゼ ４、３．２　７ミジ／−リアーゼ ４．４　　炭素−イオウリアーゼ ４．５　　炭素−ハロゲンリアーゼ ４．９９　その他のリアーゼ ５、　イソメラーゼ ５．１　　ラセマーゼおよびエピメラーゼ５、１．１　
　アミノ酸および誘導体に作用するもの ５、１．２　　ヒドロキシ酸および誘導体に作用するも
の ５、１．３　　炭水化物および誘導体に作用するもの ５、１．９９　　その他の化合物に作用するもの５．２
　　シス−トランスイソメラーゼ５．３　　分子内酸化
還元酵素 ５、３．１　　アルドースおよびケトースを相互転位す
るもの ５、３．２　　ケトおよびエノール基を相互転位するも
の ５、３．３　　Ｃ＝　Ｃ結合全転位するもの５．４　　
分子内トランスフェラーゼ ５、４．１　　アシル基を転移するもの５、４．２　　
ホスホリル基金転移するもの５、４．９９　　その他の
基を転移するもの５．５　　分子内リアーゼ ５．９９　その他のイソメラーゼ ６、　リガーゼまたはシンセターゼ ６、ｌ　　Ｃ−０結合を形成するもの ６、１．１　　アミノ酸−ＲＮＡリガーゼ６．２　　Ｃ
−Ｓ結合を形成するもの ６、２．１　　酸−チオールリガーゼ ５．３　　Ｃ−Ｎ結合を形成するもの ６、３．１　　酸−アンモニアリガーゼ（アミドシンセ
ターゼ） ６、３．２　　酸−アミノ酸リガーゼ（ベプテドシ／セ
ターゼ ６、３．３　　シクロ−リガーゼ ６、３．４　　その他のＣ−Ｎリガーゼ６．３．５　　
Ｎ−供給体としてグルタミンをもっＣ−Ｎリガーゼ ６．４　　Ｃ−Ｃ結合を形成するもの 特に重要な酵素はクラス１の酸化還元酵素およびクラス
３のヒドロラーゼであるが、クラス２のトランスフェラ
ーゼ、クラス４のリアーゼおよびクラス５のイソメラー
ゼも特定の場合には重要である。

次の表は、特に重要な酵素のサブクラスおよび該サブク
ラス内の特異な酵素を示す。酸化還元酵素の中では、Ｎ
ＡＤまたはＮＡＤＰ、酸素または過酸化水素を有するも
のが特に重要である。ヒドロラーゼの中では、ホスフェ
ートおよびグリコシドを有するものが特に重要である。

第■表 １、酸化還元酵素 １．１　　供給体のＣＨ−ＯＨ基に作用するもの１、１
．１　　受容体としてＮＡＤまたはＮＡＤＰを有するも
の １、　アルコールデヒドロゲナーゼ ６、　グリセロールデヒドロゲナーゼ ２７　ラクテートデヒドロゲナーゼ ３７　マレートデヒドロゲナーゼ ４９、　　グルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナ
ーゼ １、１．３　　受容体として０゜を有するもの４°　グ
＃　：ｒ−，７、ｚキ′ダーゼ　　　　　　　　　　１
ガラクトースオキシダーゼ １．２　　供給体のアルデヒドまたはケト基に作用する
もの １、２．１　　受容体としてＮＡＤまたはＮＡＤＰ全有
するもの １２、　　グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒ
ドロゲナーゼ １、２．３　　受容体としてｏ２ヲ有するもの２、キサ
ンチンオキシダーゼ ルシフェラーゼ １．４　　供給体のＣＨ−ＮＨ２に作用するもの１゜４
．３　　受容体として０２＠ｆするもの２．　　Ｌ−ア
ミノ酸オキシダーゼ ３、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ １．６　　供給体としての還元したＮＡＤまたはＮＡＤ
Ｐに作用するもの １、６．９９　　その他の受容体全盲するものジアホラ
ーゼ １．７　　供給体としてのその他の窒素化合物に作用す
るもの １．７３　受容体として０□を有するもの３、　ウリカ
ーゼ １、１．１　　受容体としてのＨ２Ｏ２に作用するもの
１、１　１．１ ６、　カタラーゼ ７　ペルオキシダーゼ ２、トランスフェラーゼ ２．７　　燐含有基を転移するもの ２．７１　受容体としてＣＨ−ＯＨ？有するホスホトラ
ンスフェラーゼ １、　ヘキソキナーゼ ２、　グルコキナーゼ １５、　　リボキナーゼ ２８、トリオキナーゼ ４０、　　ピルベートキナーゼ ２、７．５　１．　　ホスホグルコムターゼ３、　ヒト
９０ラーゼ ３．１　　エステル結合に作用するもの３、１．１　　
カルボン酸エステルヒドロラーゼ７　コリンエステラー
ゼ ８、擬コリンエステラーゼ ３．１．３　１Ｊン酸モノエステルヒドロラーゼ１、　
アルカリホスファターゼ ２、酸ホスファターゼ ９、　グルコース−６−ホスファターゼ１１、　　フラ
クト−スジホスファターゼ３．１．４　　！Ｊン酸レジ
エステルヒト９０ラーゼ１　ホスホジェステラーゼ ３、　ホスホリノぐ一ゼＣ ３，２グリコジル化合物に作用するもの３、２．１　　
グリコシドヒドロラーゼ１、　アルファアミラーゼ ２、　ベータアミラーゼ ４゜セルラーゼ １７、　　ムラミダーゼ １８、　　ノイラミニダーゼ ２１、　　ベータグルコシダーゼ ２３、　　は−タガラクトシダーゼ ３１、　　ベータグルクロニダーゼ ３５、　　ヒアルロニダーゼ ３．２．２　　Ｎ−グリコジル化合物を加水分解するも
の ５、ＤＰＮアーゼ ４、　リアーゼ ４、１　　炭素−炭素リアーゼ ４、１．２　　アルデヒドリアーゼ １３　アルド９リアーゼ ４、２．１　　ヒドロ−リアーゼ １、炭酸脱水酵素 ５、　イソメラーゼ ５．４　　分子内トランスフェラーゼ ５、４．２　　ホスホリル基を転移するものトリオース
ホスフェートイソメ ラーゼ 非酵素触媒も使用しうるが、通常はそれ自体で使用する
のではなく酵素触媒と結合して使用する。

したがってそれらの使用は固体表面で信号発生化合物を
優先的に生成することに関連して討議される。

本発明で特に重要なことは、対の触媒（通常は２種また
はそれ以上）を使用することであシ、その場合、１種の
酵素の生成物は他の酵素の基質として役立つ。１種の酵
素は必らずｎｉｐに結合するが１種以上の酵素は表面に
結合する。さもなければ、２種の酵素がｍｉｐに結合し
、別の酵素は表面に結合する場合としない場合がある。

溶質はどれか１つの酵素の基質となるが、表面に結合し
た酵素の基質となるのが好ましい。酵素反応は溶質を別
の酵素の基質となる生成物にかえるか、あるいは溶質を
実質的に含有せず酵素基質として役立つ化合物全生成す
る。まず初めは、アルカリホスフアターゼによりグルコ
ース−６−ホスフニートヲ接触加水分解してグルコース
にし、このグルコースはグルコースオキシダーゼの基質
となる。次にグルコースをグルコースオキシダーゼによ
り酸化して過酸化水素を生成し、この過酸化水素が信号
発生前駆体と酵素的に反応して信号発生体を生成する。

対の触媒はまた非酵素触媒と酵素とを有する。

酵素は非酵素触媒によって触媒される反応する反応体を
生成するか、または非酵素触媒が酵素のための基質（補
酵素も含む）を生成する。例えばメルトラブル−はＮＡ
Ｄおよびノ為イドロキノンをＮＡＤＨに転換し、ＮＡＤ
Ｈは長鎖アルデヒドの存在下ＦＭＮ酸化還元酵素および
細菌性シシフエラーゼと反応して光音発生する。

本発明で用いられる多様な非酵素触媒は米国特許出願第
８１５６３６号に示されておシ、その一部をここに参照
した。非酵素触媒は１−電子転移によシ反応する第１化
合物および２−電子転移によシ反応する第２化合物を反
応体として用いる。

これら２つの反応体はもし触媒がないとしても互にゆつ
くシ反応することができる。

酵素の種々の組み合わせを使って表面に信号発生化合物
を生成することができる。特にヒドロラーゼ類の組み合
わせを使って不溶性の信号発生体を作ることができる。

単一のエキソヒドロラーゼは適当な基質を使うと一酵素
対と同等に作用することができる。またヒドロラーゼと
酸化還元酵素とを組み合わせると信号発生体を生ずるこ
とができる。また酸化還元酵素類の組み合わせも不溶性
の信号発生体を生成するのに用いられる。次表は信号発
生化合物を表面に優先的に生成するために用いられる種
々の組み合わせである。前述したように表面で触媒を適
当に選択すると多くの試薬が一製剤になるので、表面に
好ましい触媒があるようにするのが普通である。

以下の表において、第１酵素は表面に結合するものであ
シ、第２酵素はｎｉｐに結合するものである。ただし、
特定の場合には、逆転することが好ましいこともある。

上記の染料の多くを本発明に必要な溶解性をもつ他の染
料または本発明に必要な溶解性全もつように変りうる他
の染料に替えることは勿論可能である。さらに染料を局
部的に高濃度にすることによって染料が表面に急速に結
合することも認識すべきである。さらにバルク溶液から
表面へ拡散する染料の量が増加したとしても表面に沈積
する染料の量に殆んど影響を与えないであろう。染料の
性質によシ、染料による光吸収か、あるいは螢光体であ
れば光放射が測定される。染料の代シに電子活性化合物
全生成して電気的性質全表面で測定してもよい。

信号発生化合物全生成するための酵素生成物の化学反応
の代シに、酵素生成物全表面に結合する際に選択的に該
生成物の環境を変えて信号発生化合物を生成することが
できる。例えば、エステルまたはエーテルを加水分解し
て表面でｐＨ感応性の染料の不溶な無色形を生成するこ
とができる。

表面上に変色した基をおくことによって表面の局所ｐＥ
（ｉメルク溶液と実質的に相違させうる。プロトン濃度
に感応する信号発生化合物を用いることによって、表面
に結合した生成物からの観測信号はバルク溶液中すなわ
ち液相中の生成物からの信号と大きく相違する。また、
螢光物質消去剤の対を用いることもでき、その場合、溶
質は不溶性の消去剤分子を生成し、これが表面に結合す
る。

表面上の消去剤分子の量が増加すれば、表面に結合した
螢光分子からの螢光が実質的に減少する。

酸−塩基効果および螢光物質−消去剤対の他には、酵素
−阻害剤−酵素の組み合わせ、疎水結合によって起る媒
体効果、酸化還元反応、表面結合染料を作る共有カップ
リング等がある。

信号生成系の成分のためのスカベンジャーを使うことに
よって、固体表面における信号発生体の濃度と溶液中の
信号発生体の濃度との差をさらに増スことができる。ス
カベンジャーの役割は信号生成系の成分と相互作用して
該成分が検出可能信号全生成する機能を阻害することで
ある。使用するスカベンジャーは種々の方法で作用する
ことができる。

まず第１の方法は、スカベンジャーを信号発生体と相互
作用させて信号の形成全阻止するようにスカベンジャー
を使用することである。この阻止作用は化学反応または
特異的、非特異的結合の結果生ずる。化学反応に関する
限シ、信号発生体の性質により多様な化学反応が用いら
れる。例えば、もし酸化還元反応によってロイコ形から
有色形へ染料が移行するならば、）２ルク溶液中の反応
を逆行させることによってバルク溶液中の有色形を実質
的に最少にすることができる。使用するスカ（ンジャー
は表面上の信号発生体と極めてゆつくシ反応するか、あ
るいは全く反応しないかのいずれかでなければならない
。好都合のスカベンジャーは酸化還元反応を逆にする酵
素か、染料の吸着特性または放射特性を変化させる抗体
である。表面の信号発生体と相互作用する能力全減少さ
せるために、酵素または抗体は単量体または重合体（例
えば粒子に結合している）が用いられる。

信号発生体に対するスカベンジャーを用いる代りに、信
号発生系の別の成分または中間体に対するスカベンジャ
ーを用いてもよい。表面に結合した触媒とバルク溶液中
の触媒とを区別するために表面の立体的大きさを利用す
ることができる。粒子に結合した阻害性抗酵素を用いて
、抗酵素が酵素に結合する時バルク溶液中の酵素が反応
するのを阻害する。一方、表面に結合した酵素は自由に
反応する。同様に粒子に結合している別の阻害剤もあり
、これと酵素が反応して酵素活性を消滅させる。

２種の酵素があシ、したがって中間生成物が存在する場
合には、中間体を破かいする反応体をスカベンジャーと
して使用しうる。例えば、中間生成物が過酸化水素であ
る場合、カタラーゼを加えてバルク溶液中の過酸化水素
を破かいする。しかし、表面では表面に結合した比較的
高濃度の触媒が過酸化水素用カタラーゼとよシ効果的に
競合する。この競合は、表面から立体的に閉め出された
粒子にカタラーゼをつけることによってもつと有利に行
うことができる。所望の効果全達成するために本発明の
系を自白自在に使用した時、種々の系で種々の方法を用
いることができる。

最後に、接触反応の生成物と相互作用するであろう表面
結合化合物を提供することができる。例えば、表面上の
化合物と反応してこの化合物をロイコ形から有色形に変
える化合物を生成することができる。このような方法の
例は、非酵素性触媒と表面に結合したテトラゾリウム塩
でＮＡＤＨ’ｉ酸化することである。この触媒は例えば
フェナジンメトサルフェートまたはメルトラブル−であ
る。

ＮＡＤＨは触媒と反応し、これは表面上のテトラゾリウ
ム塩と反応して染料を作る。還元した触媒を再酸化する
酸化体の如きスカベンジャーとこれを有利にカップリン
グして、バルク溶液中に形成された還元した触媒を急速
に破かいする。別の例は例えば表面に結合したＬ７−ナ
フタレンジオールである。これはＨＲＰにより生成した
アミノアンチピリン酸化生成物を補かくする。色原性の
少ない求核電子はスカベンジャーとしてはたらく。

信号生成系の次の要素は溶質である。溶質は接触転移し
て生成物を作る初めの反応体である。すでに述べたよう
に、生成物は多くのさまざまな役割を演することができ
る。生成物は、固体表面に結合する信号発生体であシう
る。別の場合には、生成物は第２酵素の基質としてはた
らく中間体であり、該第２酵素さらに生成物を転移させ
て信号発生体を生ぜしめる。別の場合には、溶質は反応
全行なって化合物を作勺、この化合物は次に他の化合物
と反応して信号発生体全生成する。他の化合物は溶液中
に遊離しているか固体表面に結合しており、反応は接触
反応かまたは非接触反応である。

補助物質 本発明にはしばしば種々の補助物質が用いられる。特に
分析媒体中には酵素基質、補因子、活性化剤、スカベン
ジャー阻害剤等が含まれる。

さらに通常は緩衝剤や安定剤が存在する。さらにこれら
に加えて、しばしば追−〇のタン、４Ｂり質（例えばア
ルブミン）や表面活性剤特に非イオン性表面活性剤（例
えばポリアルキレングリコール）等も含まれる。

組成物 多様な被分析物の測定に使用するために、試薬類の混合
物の他に、新しい組成物および固体テストフィルムまた
はストリップが準備される。特に重要なのはハプテンで
あシ、ハプテンは生理学的活性を有し、酵素、特に酸化
還元酵素またはヒドロラーゼが共有結合している固体多
孔支持体にバブテンも共有結合している。・固体支持体
は酵素が結合している受容体と一緒に用いられ、その場
合酵素−結合−受容体は酵素−結合一固体支持体の生成
物を基質として用いる。酵素−結合受容体と一緒に酵素
−結合一固体支持体のための基質が用いられる。固体支
持体を含浸するのは固体支持体上の酵素のための緩衝剤
、基質および補因子でよく、酵素−緒合一受容体と混合
した基質または補因子ではない。種々の試薬の量は被分
析物の分析感度を高めるために適正化される。

抗原被分析物の場合、該抗原に対する受容体か該抗原か
が固体支持体に酵素と共に共有結合される。受容体また
は抗原および酵素を含有する固体支持体はハプテンを有
する固体支持体と相似（ａｎａｌｏｇｏｕｓ　）である
。

別の場合には、共有結合している親電子性または求核性
カップラーと一緒にモノ−またはポリーエ♂トープ性抗
原または受容体が結合している固体支持体が用いられる
。カップラーはその適当な相手と反応する。例えば、支
持体に結合した求核性カップラーと一緒に芳香族アミン
類のような現像剤の駿化形がカップリングの相手として
用いられて染料を生成する。染料の還元形が酵素−結合
−ｍｉｐと一緒に溶質として用いられる。この酵素はペ
ルオキシダーゼの如き酸化還元酵素である。

ペルオキシダーゼは現像剤の還元形、例えば芳香族アミ
ンを酸化させ、これが支持体上のカップリング剤と反応
して染料を生成する。カップリング剤の例はフェノール
類、β−ジケトン類、ピラゾロン類等である。

最後に、固体支持体に共有結合した化合物と共にハプテ
ン、抗原または抗体をもつ固体支持体が用いられる。こ
の化合物は還元形のメトラブル−１フェナジンメトサル
フェートまたはメチレンブルーと反応し、ロイコ形から
有色形に変化させる。

ス）　ＩＪツブを前述した還元剤の酸化形、酵素−抗体
、接合体と一緒に用いる。ここで酵素は、望ましくはＮ
ＡＤＨｌたはＮＡＤＰＨまたはその他の還元剤を生成し
、これらは前述の接触還元剤と反応し、すなわち固体支
持体上のロイコ形染料と反応する。

実験 次の例は説明のためのものであって、これに限定される
ものではない。

すべてのパーセントおよび部は他の方法で示されていな
い限り重量に基づく。ただしりガント混合物は容量で示
されている。溶媒は指示されていない場合、水を意味す
る。すべての温度は他の方法で指示されていない限り摂
氏である。次の省略形が用いられる。

ＣＭＭ・・・０−カルボキシメチルモルフイン；ＨＲＰ
−・・わさび（ｈｏｒｓｅ　ｒａａｉｓｈ）ａルオキシ
ダーゼ；　ＮＨ３・・・Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド
９；ＥＤＣ工・・・Ｎ−エチルＮ’−（３−ジメチルア
ミノプロピル）カルボジイミド”；ＤＭＦ・・・Ｎ、Ｎ
−ジメチルホルムアミド；　ＴＨＦ・・・テトラヒドロ
７ラン；ＢＳＡ・・・生型血清アルブミン；Ｈ工ｇＧ・
・・人の免疫グロブリンＧ　；　ＴＨＣ・・・テトラヒ
ビロカンナビノール誘導体：ＲＴ・・・室温；Ｇｏ・・
・グルコースオキシダーゼ。

１０μモルの０−カルボキシメチルモルフイン、１１μ
モルのＮ−ヒドロキシスクシンイミド９および１２μモ
ルのＥＤＣＩ七−緒にし、ＤＭＦ中全量１２．１ｄとし
て反応フラスコに入れた。これらの試薬を混合した後、
この混合物を窒素でフラッシュし、冷室で一夜撹拌した
。５　Ｑ　ｍＭの炭酸ナトリウム水溶液（ｐＨ９，５）
中ＨＲＰ　（２７７９）０．５ｄに１５０ｄのＤＭＦを
加え、次に上記エステル溶液３００μρを加え、この混
合物音一夜４゜においた。次に反応混合物ｔＧｓｏセフ
ァデックスの２×３０ｃＷＬカラムに入れ、’０．０５
Ｍ）リス、ｐＨ７，６，０，１且Ｋ（Ｊ　　で溶出し、
タンパク質をモニターした。空白のフラクションを集め
て０．５ｄを得た。これは０．２■／ｄの濃度を有した
。放射性トレーーヲ使ってモルフイン／ＨＲＰのモル比
力１．８６−１’あシ、ＨＲＰ（７）濃度力２００　ｆ
ｉｇ／ｌｄであること全検出した。

例　２．　円形Ｆ紙−モルフィンへのタンツク質力′ツ
ブリング 以下は紙支持体へタンパク質をカップリングするために
使われる代表的なプロトコールである。

直径７ｃｍのＷｈａｔｍａｎ　＃　２円形Ｆｉｔ０．Ｉ
Ｍの過ヨウ素酸ナトリウム中で室温で５時間活性化した
。

水で広範に洗い、ＴＨＦ’中で乾燥させた後、０．２Ｍ
ホウ酸塩、ｐＥｉｓ、ｓ、０．５　Ｍ　ＮａＣ１，０，
１見Ｎ　ａ　ＢＨａ　ＣＮ中の適当なタンノξり質溶液
１ｍＪｖｉ−この円形１紙に加え、この混合物を４°で
一夜おいた。

次にこの混合物に２■のＮａＢＨ４を含有するビシン緩
衝液（ｐＨ８，５）全１．４ｍ！＋加え、これ全室温で
３時間放置し、次に１Ｍホウ酸塩（ｐＨ８，５）、５０
　ｍＭビシン、０．２　Ｍ　ＫＣｆｉ中で円形１紙を洗
った。洗浄液は約２０ｒｎｌであシ、洗浄液中のタンパ
ク質を測定し、円形１紙に結合したタンパク質の量をそ
の差によって決定した。

次の表は使用した種々のタンパク質と円形濾紙上のタン
パク質濃度（μ９／、−１１り　ｔ−示すものである。

第■表 １０■ＡｂＭ２４．３ １０”９　Ａｔ）Ｍ／　５Ａ２８０Ｇ＜）　　　　　　
　４５．６５１ｎｇＡｂＢ４　／　５Ａ２　ｓ　ｏＧｏ
６．５３５７９　ＡｂＨｌｇＧｚ　５Ａ２８ｏＧｏ　　
　　　７．３９５■ＡｂＧ（ＲＩｇ）１５Ａ２８ｏＧｏ
８．６９ＡｂＭ−モルフインに対する抗体 ５Ａ２８０Ｇｏ　−ｇｌｕｃｏｓｅ　ｏｘｉｄａｓｅ　
ａｔ　ａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｈａｖｉｎｇ　
ａｎ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　５　ａｔ　Ａ２８
０ｎｍ　　　　　イｐｅｒ　　ｃｍ ＡｂＨ工ｇＧ−人のγ−グロブリンＧに対する抗体Ａｂ
Ｇ（ＲＩｇ）−兎のγ−グロブリンＧに対する山羊の抗
血清から得た抗体 本発明を説明するために多くの測定が行なわれ、分析媒
体中に存在するりガント被分析物を測定した。

以下の試料溶液が調製された。円形７紙は濾紙に結合し
ている特定のタンパク質（１種または２種以上）により
指示化されている。

第Ｖ光 １、　Ａｂｙ　　　３０　０−− ２、ＡｂＭ３０　０−一 ３、ＡｂＭ３０　　３０−− ４、ＡＩ）Ｍ　　　３０　３０−− ５、ＡｂＭＧＯ（２：１）　　３０　　　０−−６、Ａ
ｂＭＧＯ（２：１）　　３０　　　０　　　　　　　−
７、ＡｂＭＧＯ（２：１）　　３０　　３０’　　　−
−８、ＡｂＭＧＯ（２：１）　　３０　　３０　　　−
　　　−９・ＡｂＧＡＲＧＯ４号　　　０ １０、　ＡｂＧＡＲＧＯ−−４４０ １１、ＡｂＧＡＲＧＯ−４４１０ １２、ＡｂＧＡＲＧｏ　　　　　　　　　　　　４４　
　１０Ｉ　　Ｗｈａｔｍａｎ　濾紙（直径６ｍ＋＋＋ま
で）Ａｔ）Ｍ−モルフイン抗血清（円形７紙当り６．０
８μ９Ａｂまで） ＡｂｐρＯ（２：１）−モルフイン抗血清＋グルフース
オキシダーゼ；反応媒体中２：１モ ル比（円形Ｆ紙尚シフ、６μ９Ａｂ） ＡｂＧＡＲＧＯ−山羊抗（兎ＩｇＧ）＋グルコースオキ
シダーゼ；反応媒体中１＝１モル比 （円形Ｆ紙当シ２．２μ９Ａｂまで） ２　　ＨＲＰ−Ｍ−わさびペルオキシダーゼに接合した
モルフインおよび希釈生成物（２０ μ９７ｍｌ） ３０ＭＭ−０−カルボキシメチルモルフイン（９０μ９
　／ｒｔｔｌ　） ４　　Ｒｌｇ−ＨＲＰ−わさびにルオキシダーゼに接合
した兎免疫グロブリンＧ（１３，８μ９　Ａｂ／Ｂｇ）
５　　ＲＡｂＨ工ｇＧ−兎免疫グロブリンＧプロトコー
ルは次のとうシである。円形７紙（ディスク）およびＣ
ＭＭまたはＲｌｇを０．９４μ２の緩衝剤を使用して混
合した。緩衝剤は５０　ｍＭトリス、ｐＨ７，６，１０
０ｍＭＫｃＵ、および０．１■／ｍ／ＢＳＡである。こ
の混合物全５時間インキュベートし、つづいて適当な反
応緩衝液１　ｍｌ中のＨＲＰ−ＭまたはＲＩｇ−ＨＲＰ
をインキュイージョン緩衝液に加えるか、あるいはディ
スクをインキュイージョン緩衝液からとり出して水１　
ｍｌで洗い、次に反応緩衝液中の）（ＲＰ−ＭまたばＲ
ｌｇ−）（ＲＰと混合する。紙上にグルコースオキシダ
ーゼが存在するか否かにより反応緩衝液は異なシ、グル
コースオキシダーゼが存在しない場合には９　Ｑ　ｍＭ
過酸化水素２０μρを充分な０−ジアニシジンに加えて
０．１７１１ｇ／　ｒｔｔｌとし、グルコースオキシダ
ーゼが存在する場合には、緩衝剤をグルコース中５０ｍ
Ｍに調製し、過度化水素を加えなかった。

奇数番号例はディスクをインキュイージョン緩衝液に保
持しそして反応緩衝液を加えて実施したものであｐｌ一
方偶数番号例はディスク全インキュベーション緩衝液か
らとり出し、洗い、次にこのディスクと反応緩衝液とを
混合して実施したものである。

各々の場合、１ゴの反応緩衝液を用いた。奇数番号例の
場合は６０分間のインキュベーションを行なった。例１
．３．５および７では２０蝿の３、９　ｍｌ　／　ｒｕ
ｔカタラーゼ（３００００μ／７＃）？加え、例９およ
び１１ではこのカタラーゼ液ｔ１０μ立だけ加えた。偶
数番号例ではカタラーゼを加えなかった。

例１．５および９ではディスクが例３．７および１１に
比べて暗色であった。この差はリガンドの存在によって
起ったこと含水している。

偶数番号例では、２．４．６および８の反応は５分間行
い、１０および１２では１０分間行った。

偶数番号例では結果に一層差異があり、ディスクはリガ
ンドが存在した場合は明らかに白色であり、リガンドが
不在の場合は暗褐色であった。

これらの結果は、リガンド（ハプテン性および抗原性の
両方）または受容体の分析１ｍ１ｐに結合した触媒を用
いて行なうことができることを示しており、ｍｉｐに結
合した触媒はメルク分析媒体中に存在するりガントまた
は受容体の量に比例して表面とバルク分析媒体との間に
分配される。本発明の場合、不溶性の信号発生体が生成
してこれが表面に結合し、そして分析媒体中の被分析物
の量に応じて信号全測定することを可能にする。

次の問題は、被分析物の濃度を変化させることによって
信号発生体の生成量に与える効果？評定することである
。結果として、媒体中の被分析物量に表面で生成する信
号発生体を開基づける標準曲線を作った。プロトコール
は次のとうシであった。

５００　μｍの緩衝液（５０ｍＭ）リス、ｐ　Ｈ７，６
，２００ｍＭＫｃｆｌ、　２”Ｖ／ｍｌ！ＢｓＡ　）ノ
はイッテイる管に、２０μ旦のＨＲＰ−モルフイン接合
体（０，２μ９）を加え、次に２０μＡの〇−カルボキ
シメチルモルフイン溶液を種々の濃度で加えた。

次にこの管にＡｔ＋ＭＧｏ　（２：　１　）の６ｍディ
スクを加え、この混合物全室温で３時間インキュベート
した。

次にこのディスクを３通シの方法で現像した。

第１の方法ではディスクから上澄液をとシ除き、ｌ　ｒ
ｔｔｌの緩衝液を加え、除去した。次に１−の現像緩衝
液（１０ＱｍＭホスフェート、ｐＥ（６，ｏ、２００　
ｍＭＫＣ，（，０，１ｍｙ／　ｍＡ’　Ｏ−ジアニシジ
ン）と１ｃｎ党の９　Ｑ　ｍＭ過過酸化水素金兄、この
混合物を５分間反応させ、次に洗った。第２の方法では
同じ方法を用いたが、ただし過酸化水素全含有せず１、
β−Ｄグルコース中に１５ｍＭで存在する緩衝液’５ｒ
２１に１に使った点が相違した。反応を３０分間つづけ
、次にディスクをとり出し、洗い、乾燥した。第３の方
法では第２の方法をくり返したが、ただし１０μ旦の３
．９ｍｇ／ｄカタラーゼ溶液を加えた。

各々の場合、９０μ９／ｒｒｔｌの０−カルボキシメチ
ルモルフインの原料溶液から１：５の連続希釈を経て最
後に１．６Ｘ１０　　　モルの量に達するまでに、固体
表面の暗色が確実に増加した。中点は１．２Ｘ１０　　
　モルすなわち〇−カルボキシメチルモルフインが約４
０μ９であることがわかった。

研究の第２シリーズは代表的リガンドとしてモルフイン
全周いて行なった。この研究は、分析を行なう時に種々
のバックグランドヲ生ずる種々の試料液を使用した。試
薬を次のように調製した。

０、１　Ｍ　Ｎａ工０４　中で１２．５ｃｎのＷｈａｔ
ｍａｎ　＃　２　Ｆ紙全５時間室温でインキュベートし
た。次にこのｐ紙を１エエチレングリコール中で２０分
間インキュベートし、つづいて６ｆ／、の脱イオン水で
洗った。次にこのＦ紙に、５　Ｑ　ｍＭホウ酸塩、０．
２Ｍ−ＮａＣ，９、ｐＨ８，６中に適当なタンパク質を
加えた溶液１．８　ｒｎｇ　ｆ加え、ｐ紙全タンツク質
溶液と２時間室温で接触させた。次表はタンパク質溶液
の組成全示す。

タンパク質溶液 （３）　　０．２５　　　　１　　　　　３．７５（５
）　　１　　　　　０．２５　　　３．７５１．２８０
ｎｍにおける１　ｃｍ当た９の吸収度次に同じ緩衝液中
ＮａＢＨ４２■／罰の２ｒｔｔｌｆＦ紙に加え、この混
合物を室温で１時間放置した。

次にν紙を水および緩衝液で洗い、５７１１９　／　ｍ
ｌ　ＢＳＡ。

１５％スクロースの溶液に浸漬し、除去し、凍結乾燥し
た。

分析に使用するために、ｉ“のディスクに抜孔し、この
ディスクを尿中に７分間室温でインキュベートした。尿
はモルフイン全含有しないかまたｉｊ　１００　ｎ！Ｉ
／ｍｌのモルフインを含有したものである。次にこのデ
ィスク２１　ｍｌの現像溶液に移した。

現像溶液は、０．１■／ｍ７！４−ＣＱ−１−ナフトー
ル、２１９ＦｍＡ’Ｂ’ｓ　Ａ、　　５０　ｍＭグルコ
ース、０．ＩＭＰ０４、ｐＨ７，０，０，２ＭＮａ（Ｊ
オ！び０．１１ｎｇ／ｄＯ−ジアニシジンからなる。こ
の溶液に４μｐのＨＲＰ−Ｍ（２０μ９／ｄ）を加え、
この混合物全室温で３０分間放置した。このテストを１
５μｆｉ　ＨＲＰ−Ｍで６０分間くり返した。

両方の場合とも、（１１および（４）に対して明らかに
モルフインの存在を検出し、他の試料も差異が少なかっ
た。したがって複合タンパク質尿混合物中のモルフイン
の微量をこの分析で検出しうる。

次の研究は牛乳中のモルフイン全検出できるかどうか？
決定することであった。１００　ｎｌ／１１１１のモル
フインを有する全粗乳および有しない全粗孔ｌｄｆ：用
いて上記工程ヲ＜シ返した。工程は１００μ皇の２μ９
／ｄ　ＨＲＰ−Ｍおよ沙μ旦の３．９７７＋９／ｄカタ
ラーゼを用い、室温で６０分間インキュベートし、以下
の組成の現像液を使用した点が相違した。現像液；　５
０　ｍＭビシン、ｐＨ８，０，２００ｍＭ　ＭＣＩ、　
　２”９／１ｔｌＢＳＡ、５ＱｍＭ　β−り一グルコー
スおよび０．１η／ゴ４−　Ｃｆｆ１−１−ナフトール
。１：１のＡｂｙ　：　Ｇｏ　溶液を使用して調製した
ディスクを用いて、モルフイン含有および不含有試料間
の相違が明らかに検出された。（第■表参照） 次の研究ではＨ工ｇＧの測定のためにｍｉｐ　ｆ結合し
た固体表面を用いた。適当な濃度のＨ工ｇＧ・２０μｆ
ｌｔ−有する緩衝液０．５ｄ中に６ＷのＦ紙ディスク（
ＡｂＨ工ｇＧＧｏ）全室温で３時間インキュイードした
。上澄液を除去し、ディスクを洗い、０．５ｒｔｌの緩
衝液とＡｂＨＩｇ−ＨＲＰ（ＤＡＫＯ）の１３．８μｇ
／ｍｌ溶液５０μｌとを加えた。次にこの混合物全３時
間室温でインキュ＜−）　Ｌ、次に１００　ｍＭ燐酸塩
、２００ｍＭ　ＫＣＪＩ、５０ｍＭグ＃　＝＋　−／（
オヨび０．１η／　ｒｔｔｌ　ｏ　−’）アニンジンの
１ｄを加えた。室温で３０分経過後、ディスクをと９出
し、洗った。

Ｈ工ｇＧ　０．１６μ９から２０μ９になるにつれてデ
ィスクの色が明らかに推移した。

例　４．　　ＴＨＣ−ＨＲＰ接合体 反応フラスコ中に７．９．１２−へキサヒドロ−！３＋
６−シメチルー９−オキンー３−ペンチルジベンゾｌ”
ｂ、ａ）ビラン−１−オルの０−カルボキシメチルオキ
シムのＮＨＳエステルｔ　Ｄ　Ｍ　Ｆ”　Ｋ溶解した０
、　０４　Ｍ溶液０．１９１４！、　０．２８−のＨＲ
Ｐ（１，５１１Ｆ）、０．１　ｍｊのＩＭＮａＣＯａ９
．ｓお３１ｐ よび０，３耐のＨ２０ヲ入れ、この混合物を一夜撹拌し
た。遠心分離して不溶性物質を除去した後、上澄液ｆ　
０．１　Ｍ　ＮａＨＣＯａ、０．５　Ｍ　ＮａＣ４（４
１）に対して透析した。残査全セファデックスＧ５０の
２゜Ｘ　１．５　ｃｍのカラムで５０ｍＭ）リス、ｐＨ
７，６，０゜２−でクロマトグラフィーし、空白部のピ
ーク（ｖｏｃｄ　ｖｏｌｕｍｅｐｃａｋ）　ｆ単離した
。０，２６〜／ｌｄで３ｍ／以下。

例　５１円形Ｆ紙−ＴＨＣにタンパク質をカップリング
する。

５０　ｍＭホウ酸塩、ｐＨ８，５，０，２ＭＫＣｆｉ　
中に溶解した次のタンツク質溶液を用いた：抗テトラヒ
ドロカンナビノール、■ｇＧ、２３■／ｄ；グルコース
オキシダーゼ、１８　Ａ２Ｂｏ／ｒｔｔｌ。

円形Ｆ紙（Ｗｈａｔｍａｎ　＃　１．９　ｍ）　　”ｉ
：　Ｏ−Ｉ　Ｍ　ＮａＩＯ３中で室温で４時間活性化し
、つづいて３ρ以下のＨ２Ｏで洗った。活性化したディ
スクに、３．８３Ａ２Ｂｏ／Ｃ１１ｇ　　グルコースオ
キシダーゼとテトラヒドロカンナビノールに対する抗血
清０．７５■とを含有するタンパク質溶液２．５ｄ’＆
加え、この混合物を１時間室温で反応させ、つづいて４
７１９　／　ｒｔｔｌＮ　ａ　ＢＨ４溶液０．５ｄを加
え、ディおりを２０分毎に回しながらこの反応混合物全
室温で１．５時間放置した。次にディスクＴｈ０．５　
ＭＮａ（４３００ｍｌとＨ２Ｏ（２回）で洗い、４°で
湿気全保持した。

ＴＨＣに対する本方法を示すために、ディスク（６ｍ！
以下）と種々の濃度のＴＨＣｉ混入した１ｄの尿とを用
いた。尿試料をディスクと室温で１０分間接触させ、次
にこのディスクｋｓ　５０　ｍＭグルコース、５０ｍＭ
酢酸バルビトール緩衝液、ｐＨ７，６，０，１■／１ｔ
１４−　ａｆＬ−ｔ−ナフトールの１ｄ中に上記ＴＨＣ
−ＨＲＰ２し□。０に希釈した希釈液１０μｎｔ−含有
する現像液に移し、反応を室温で１時間進行させた。そ
の終点において、４，７η／ゴのＴＨＣＱ含有する尿中
のディスクは陰性の尿試料と明らかに区別しえた。

本発明によれば、極めて低濃度で被分析物全測定し、結
果を半永久的に記録する簡単な感度の高い技術を提供す
ることができる。本技術は高度に教育された人でなくて
も分析を実施できるものである。免疫学的対のメンバが
結合する速さによシ種々のインキュベーション時間が必
要とされ、−力信号の現像は比較的短い時間で実施でき
る。その上、試料はそのままかまたはわずかに希釈する
だけで用いられるので、免疫学的対のメンノＺ−が固体
表面に結合する速度金高めることができる。

本発明の方法はハプテン、抗原および受容体の定性およ
び定量測定を提供するものであり、標準は信号を濃度に
関係づけるようにする。表面の可視的観察により定性ま
たは半定量的測定が充分性われ得るし、一方器具類を使
用して結果の定量性を高めることもできる。また種々多
様なテクニックを使って表面で生成した信号発生体とノ
之ルク溶液中で生成した信号発生体を区別することがで
きる。したがって表面に発生した信号は直接媒体中の被
分析物の量に関係づけられる。

しうろことは明らかである。

本発明の方法は最少の工程数と最少の試薬調製数をもつ
簡単なプロトコールにより極めて低濃度の被分析物全測
定する方法全提供する点で従来方法と相違するものであ
る。さらに本発明の方法は、　　表面に接触的に結合し
て表面に信号発生化合物全生成するｎｉｐの結合部位に
対する競合または該結合部位間の協力？有するものであ
る。これは表面に結合した触媒と溶液中の触媒と全分離
する必要なく達成される。

被分析物を測定するために表面を”浸漬棒”として使用
することによシ、非技術者でも使用できる一家庭でさえ
も使用できるーようにしたので、この方法ができる限り
個々のステップが少ないこと、同一条件下で対照全実施
することを差引き考慮してもこの方法がだれでもわかる
程簡単明瞭であること、できる限シ測定が少ないことは
重要なことである。本発明はこれらの目的をかなりの程
度まで達成する。

本発明全理解するために説明および例示で詳細に示した
が、特許請求の範囲内で変更および修正特許出願人　サ
イバー・カンノミニー （外２名）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）酵素性触媒もしくは非酵素性触媒が共有結合して
   いる吸収性基体と免疫学的対の一員とからなる製品。
2. （２）触媒が酵素である特許請求の範囲第１項記載の製
   品。
3. （３）酵素が酸化還元酵素である特許請求の範囲第１項
   記載の製品。
4. （４）酵素がグルコースオキシダーゼである特許請求の
   範囲第３項記載の製品。
5. （５）酵素がヒドロラーゼである特許請求の範囲第２項
   記載の製品。