JPS61260899A - 胃ペプシン及び尿ペプシンの測定法 - Google Patents
胃ペプシン及び尿ペプシンの測定法Info
- Publication number
- JPS61260899A JPS61260899A JP10477985A JP10477985A JPS61260899A JP S61260899 A JPS61260899 A JP S61260899A JP 10477985 A JP10477985 A JP 10477985A JP 10477985 A JP10477985 A JP 10477985A JP S61260899 A JPS61260899 A JP S61260899A
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- Japan
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- pepsin
- acid
- sample
- protein
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- Pending
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、胃液中及び尿中のペプシン測定方法詳しくは
試料中の酸可溶性蛋白量変化Ｉこよってペプシンを測定
する方法に関する。
試料中の酸可溶性蛋白量変化Ｉこよってペプシンを測定
する方法に関する。
従 来 の 技 術
ペプシノーゲンの分泌量は、胃酸分泌量にほぼ平行して
おり、尿のペプシノーゲンも胃ペプシノーゲン分泌量に
平行していることが知られている胃癌・萎縮性胃炎では
減少し十二指腸潰瘍・肥厚性胃炎では増量する。また内
分泌機能と密接１こ関係し、粘液水腫・アディソン病で
は減少、甲状腺機能亢進・クッシング症候群・ストレス
・ステロイド投与等では増量する。また胃切除例では切
除の大きいほど減少し、胃機能の回復とと６１こ増量す
る・ことが知られている。
おり、尿のペプシノーゲンも胃ペプシノーゲン分泌量に
平行していることが知られている胃癌・萎縮性胃炎では
減少し十二指腸潰瘍・肥厚性胃炎では増量する。また内
分泌機能と密接１こ関係し、粘液水腫・アディソン病で
は減少、甲状腺機能亢進・クッシング症候群・ストレス
・ステロイド投与等では増量する。また胃切除例では切
除の大きいほど減少し、胃機能の回復とと６１こ増量す
る・ことが知られている。
上記ペプシンの測定によれば、各種疾患の診断を始めと
して病中・病後患者の経過調査等が可能であり、その１
症的意義は非１１こ大きい。従来の測定法としては、牛
乳を基質として試料に加え試験管壁にカゼイン粒子の凝
集が生じるまでの時間を肉眼観察する方法がよく知られ
ている。
して病中・病後患者の経過調査等が可能であり、その１
症的意義は非１１こ大きい。従来の測定法としては、牛
乳を基質として試料に加え試験管壁にカゼイン粒子の凝
集が生じるまでの時間を肉眼観察する方法がよく知られ
ている。
※（Ｌｅｅ変法・Ｗｅｓｔ変法文献：別添−１〕しかし
ながら該方法は、試験誤差（バラツキ）が大きく正確な
測定が困難であること、試験操作が繁雑であること等、
臨床検査法としては不都合な面が多く、実際にはさほど
実施されていｆぽいのが現状である。
ながら該方法は、試験誤差（バラツキ）が大きく正確な
測定が困難であること、試験操作が繁雑であること等、
臨床検査法としては不都合な面が多く、実際にはさほど
実施されていｆぽいのが現状である。
発明が解決しようとする問題点
本発明は、上記のように臨床的意義が大きいにもかかわ
らず、従来有効な検査法が確立されておらず、さほど実
用されるに至っていないペプシンの測定技術に着目し、
これをより簡便にかつより正確に実施可能とする改良さ
れた方法を提供することを目的とする。
らず、従来有効な検査法が確立されておらず、さほど実
用されるに至っていないペプシンの測定技術に着目し、
これをより簡便にかつより正確に実施可能とする改良さ
れた方法を提供することを目的とする。
上記目的は、ペプシノーゲン活性化試薬によって測定用
試料を調整し、これに蛋白基質を添加し該添加前後の試
料中酸可溶性蛋白量を測定してその変化を求め、該変化
により試料中に含有するペプシン力価量を測定する方法
により達成されろ。
試料を調整し、これに蛋白基質を添加し該添加前後の試
料中酸可溶性蛋白量を測定してその変化を求め、該変化
により試料中に含有するペプシン力価量を測定する方法
により達成されろ。
本発明は、上記のとおり胃液中または尿中のペプシンを
酸可溶性蛋白量変化として求めるものであり、ペプシン
酵素反応本来の反応型式によってより簡便な操作でより
正確に上記測定が可能である。従って本発明方法は臨床
検査法として非常に有用であり、これによって各種疾患
の診断等が行ない得ろ。
酸可溶性蛋白量変化として求めるものであり、ペプシン
酵素反応本来の反応型式によってより簡便な操作でより
正確に上記測定が可能である。従って本発明方法は臨床
検査法として非常に有用であり、これによって各種疾患
の診断等が行ない得ろ。
本発明においては、試料１こペプシノーゲン活性化試薬
を添加レペプシンの不活性前駆体であるペプシノーゲン
を活性化してペプシンする。ペプシノーゲン活性化物質
としては、例えば側１硫酸リン酸！過塩素酸・酢酸・蓚
酸・マレイン酸・トリクロル酸争ジクロ酢酸・Ｐ−トル
エンスルポン酸等が例示でき、無機酸・有機酸の別なく
水素イオン濃度（ＰＨ） ｓ、ｓ以下にできる酸性物質
はいずれも使用可能である。また上記酸性物質は適当な
緩衝液と酵素反応補助剤に溶解していることが好ましく
、該緩衝液としては、例えばリン酸緩衝液・酢酸緩衝液
・バルビタール緩衝液・トリス緩衝液重炭酸緩衝液・ベ
ルナーロ緩衝液・等張緩衝食塩液等が例示でき、該酵素
反応補助剤としては、例えば食塩・マグネシウム・カル
シウム・リン・鉄鋼・マシガン・ビタミン類等が例示で
き、特に好適な上記ペプシノーゲン活性化試薬の例とし
ては以下の組成のものをあげることができる。
を添加レペプシンの不活性前駆体であるペプシノーゲン
を活性化してペプシンする。ペプシノーゲン活性化物質
としては、例えば側１硫酸リン酸！過塩素酸・酢酸・蓚
酸・マレイン酸・トリクロル酸争ジクロ酢酸・Ｐ−トル
エンスルポン酸等が例示でき、無機酸・有機酸の別なく
水素イオン濃度（ＰＨ） ｓ、ｓ以下にできる酸性物質
はいずれも使用可能である。また上記酸性物質は適当な
緩衝液と酵素反応補助剤に溶解していることが好ましく
、該緩衝液としては、例えばリン酸緩衝液・酢酸緩衝液
・バルビタール緩衝液・トリス緩衝液重炭酸緩衝液・ベ
ルナーロ緩衝液・等張緩衝食塩液等が例示でき、該酵素
反応補助剤としては、例えば食塩・マグネシウム・カル
シウム・リン・鉄鋼・マシガン・ビタミン類等が例示で
き、特に好適な上記ペプシノーゲン活性化試薬の例とし
ては以下の組成のものをあげることができる。
１）リン酸緩衝液（ＰＨ７，５） ５０ ｍＡ２）生
理食塩水 ４〇− ３）硫酸マグネシウム溶液 ５− ４）ｔｌ化カルシウム溶液 ３ｇｔ５）濃塩酸
２− 上記活性化試薬は、試料のＰＨを５．５以下、好ましく
は約２．５前後の酸性条件になるよう該試料Ｉこ添加さ
れる。
理食塩水 ４〇− ３）硫酸マグネシウム溶液 ５− ４）ｔｌ化カルシウム溶液 ３ｇｔ５）濃塩酸
２− 上記活性化試薬は、試料のＰＨを５．５以下、好ましく
は約２．５前後の酸性条件になるよう該試料Ｉこ添加さ
れる。
本発明では次いで上記試料に基質蛋白を添加レペプシン
酵素反応をおこさせそこに生成される酸可溶性蛋白量を
測定してペプシン量を求める。該基質蛋白は特に精製品
を用いろ必要はなく、ヒト及び動物の血清または血漿を
用いるのが簡便である。なお、被験者の検体自体（゛試
料中）にかなりの蛋白量が含有している場合があり、か
かる場合は該基質蛋白を添加せずとも目的が達成できる
。
酵素反応をおこさせそこに生成される酸可溶性蛋白量を
測定してペプシン量を求める。該基質蛋白は特に精製品
を用いろ必要はなく、ヒト及び動物の血清または血漿を
用いるのが簡便である。なお、被験者の検体自体（゛試
料中）にかなりの蛋白量が含有している場合があり、か
かる場合は該基質蛋白を添加せずとも目的が達成できる
。
一般１こは試料中の蛋白濃度が胃液で２５０〜ｓｏｏ
ｔｑ ／ｄｉ好ましくは約４００Ｗ／ｄ１尿テ３０〜１
００ＩＩＰ／ｄｔ、好ましくは約６０ｍ９／ｄｔＩｃな
るよう蛋白基質を添加する。
ｔｑ ／ｄｉ好ましくは約４００Ｗ／ｄ１尿テ３０〜１
００ＩＩＰ／ｄｔ、好ましくは約６０ｍ９／ｄｔＩｃな
るよう蛋白基質を添加する。
本発明者は、かかるＰＨ条件で試料中に存在するペプシ
ノーゲンがペプシンとなり、これが基質蛋白に作用して
対応する量の酸可溶性蛋白を生成しこの生成された酸可
溶性蛋白量がペプシノーゲン乃至ペプシン量に比例する
ことを見出した。この酸可溶性蛋白は、ペプシン作用に
よって生成される蛋白代謝の中間産物であるアルブモー
ゼ（別名プロテオーズｐｒｏｔｅａｓｅ ）であるが、
本来検体とする試料中にムコ蛋白（別名糖蛋白）と呼
ばれる酸可溶性蛋白が若干量存在する。従って本発明方
法では、ペプシン作用により生成される酸可溶性蛋白量
のみを正確に測定するために、試料中に含有する該ムコ
蛋白量をブランクとして予め測定しておく必要があり、
またペプシンを目的とする酸可溶性蛋白の測′定では、
ペプシンと基質蛋白の作用を充分に行なわせるため３７
℃で３０分間反応させるのが望ましい。
ノーゲンがペプシンとなり、これが基質蛋白に作用して
対応する量の酸可溶性蛋白を生成しこの生成された酸可
溶性蛋白量がペプシノーゲン乃至ペプシン量に比例する
ことを見出した。この酸可溶性蛋白は、ペプシン作用に
よって生成される蛋白代謝の中間産物であるアルブモー
ゼ（別名プロテオーズｐｒｏｔｅａｓｅ ）であるが、
本来検体とする試料中にムコ蛋白（別名糖蛋白）と呼
ばれる酸可溶性蛋白が若干量存在する。従って本発明方
法では、ペプシン作用により生成される酸可溶性蛋白量
のみを正確に測定するために、試料中に含有する該ムコ
蛋白量をブランクとして予め測定しておく必要があり、
またペプシンを目的とする酸可溶性蛋白の測′定では、
ペプシンと基質蛋白の作用を充分に行なわせるため３７
℃で３０分間反応させるのが望ましい。
上記活性化試薬添加前後の酸可溶性蛋白量の測定は、そ
れ自体公知の各種方法により行なうことができる。その
具体例としては、例えば試料］こ前記例示の酸性物質、
好ましくは３％スルホサリチル酸溶液を加え攪拌静置後
遠心分離して（すなわち酸可溶性蛋白）を採取し、その
蛋白量を常法に従い測定する。
れ自体公知の各種方法により行なうことができる。その
具体例としては、例えば試料］こ前記例示の酸性物質、
好ましくは３％スルホサリチル酸溶液を加え攪拌静置後
遠心分離して（すなわち酸可溶性蛋白）を採取し、その
蛋白量を常法に従い測定する。
例えば、通常の蛋白呈色・電気泳動または屈折計等によ
り定量することにより実施される。
り定量することにより実施される。
該蛋白呈色法の具体的例として、例えば特開昭５６〜６
９５５６号公報（こ記載の方法を例示できる。該法はク
マーシー・ブリリアントブルーＧ−２５０、メチルセル
ロース及び酸を有効成分とする試薬で、これに試料を加
えろと蛋白量に応じて呈色するものである。
９５５６号公報（こ記載の方法を例示できる。該法はク
マーシー・ブリリアントブルーＧ−２５０、メチルセル
ロース及び酸を有効成分とする試薬で、これに試料を加
えろと蛋白量に応じて呈色するものである。
かくして本発明は、胃液ペプシン及び尿中ペプシン量を
容易かつ正確に測定することができる。
容易かつ正確に測定することができる。
実 施 例
以下、本発明を更に詳しく説明するため実施例をあげる
。
。
■ 試料の活性化：ペプシノーゲン活性化試薬を必要試
験管数に各々１．０−分注し、これに胃液を０．２５＋
ｄ （尿はＸ、０ｒｌＬｔ）を加え攪拌混和。■へ〈ペ
プシン活性化試薬組成〉 リン酸緩衝液（ＰＨ７，５） ５０．０ ｍ生理食
塩水 ４０．０ｄ １％硫酸マグネシウム溶液 ５．〇− １％塩化カルシウム浴液 ３．０− 濃塩酸（比重１．１８） （３５％） ２．Ｏｄ※全
愈のＰＨを１．５に調整し、ブランク試薬はリン酸緩衝
液と生理食塩水を等量混合。
験管数に各々１．０−分注し、これに胃液を０．２５＋
ｄ （尿はＸ、０ｒｌＬｔ）を加え攪拌混和。■へ〈ペ
プシン活性化試薬組成〉 リン酸緩衝液（ＰＨ７，５） ５０．０ ｍ生理食
塩水 ４０．０ｄ １％硫酸マグネシウム溶液 ５．〇− １％塩化カルシウム浴液 ３．０− 濃塩酸（比重１．１８） （３５％） ２．Ｏｄ※全
愈のＰＨを１．５に調整し、ブランク試薬はリン酸緩衝
液と生理食塩水を等量混合。
■ ペプシン反応：活性化試料に基質（胃液には０．２
５ ｍ、尿は０．０５１Ｒ１）を加え攪拌混和し、３７
℃３０分間反応。■へ く基質：ヒト血清蛋白ａ、ｏｏｏ ｑ／ｌｉｔ ）■
反応停止と分画：遠心用試験管を本試験用とブランク試
験用の２本を検体数用意し、それぞれに３％スルホサリ
チル酸１．５ ｗｊを分注して、これにペプシン反応試
料とブランク試料をそれぞれ０．５−添加して攪拌混和
、室温に１０分間静置したのち３．０００回転１０分間
遠心する。■へ※３％スルホサリチル酸にペプシン反応
試料を添加することによって、試料ＰＨは必然的に１６
５以下となりペプシン反応は停止することになる。
５ ｍ、尿は０．０５１Ｒ１）を加え攪拌混和し、３７
℃３０分間反応。■へ く基質：ヒト血清蛋白ａ、ｏｏｏ ｑ／ｌｉｔ ）■
反応停止と分画：遠心用試験管を本試験用とブランク試
験用の２本を検体数用意し、それぞれに３％スルホサリ
チル酸１．５ ｗｊを分注して、これにペプシン反応試
料とブランク試料をそれぞれ０．５−添加して攪拌混和
、室温に１０分間静置したのち３．０００回転１０分間
遠心する。■へ※３％スルホサリチル酸にペプシン反応
試料を添加することによって、試料ＰＨは必然的に１６
５以下となりペプシン反応は停止することになる。
■ 呈色と比色：本試験用とブランク試験用の試験管２
本を検体数用意し、容管に、クマーシーブリリアントー
ブルーＧ −２５０を３．０−分注し、これに遠心分離
した上清をＯ，Ｓ−を加えて混和呈色させ１０分後に分
光光度計を用いて５９０■で吸光度を測定し、酸可溶性
蛋白量を求めた。その結果は第１表のとおりであった。
本を検体数用意し、容管に、クマーシーブリリアントー
ブルーＧ −２５０を３．０−分注し、これに遠心分離
した上清をＯ，Ｓ−を加えて混和呈色させ１０分後に分
光光度計を用いて５９０■で吸光度を測定し、酸可溶性
蛋白量を求めた。その結果は第１表のとおりであった。
（※次頁に続く）
上記、第１表が示すとおり、本発明方法によって胃液ペ
プシン及び尿ペプシン量を測定できろことが明らかであ
る。
プシン及び尿ペプシン量を測定できろことが明らかであ
る。
（以上）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、胃液または尿中に含有するペプシノーゲンを活性化
試薬の添加によって活性化レペプシンとしたのち、蛋白
基質を加えて酵素作用をおこさせ、そこに生成されるア
ルブモーゼ （ａｌｂｕｍｏｓｅ）を酸可溶性蛋白として測定し、該
添加の前後の酸可溶性蛋白量変化から試料中のペプシン
量を測定する方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10477985A JPS61260899A (ja) | 1985-05-15 | 1985-05-15 | 胃ペプシン及び尿ペプシンの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10477985A JPS61260899A (ja) | 1985-05-15 | 1985-05-15 | 胃ペプシン及び尿ペプシンの測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61260899A true JPS61260899A (ja) | 1986-11-19 |
Family
ID=14389959
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10477985A Pending JPS61260899A (ja) | 1985-05-15 | 1985-05-15 | 胃ペプシン及び尿ペプシンの測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61260899A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998025952A1 (fr) * | 1996-12-12 | 1998-06-18 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Peptides, procedes pour le dosage de la pepsine i humaine ou du pepsinogene i humain, et kits de dosage |
| CN104422772A (zh) * | 2013-09-10 | 2015-03-18 | 江苏省原子医学研究所 | 一种定量检测胃蛋白酶原i的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN104422773A (zh) * | 2013-08-22 | 2015-03-18 | 朱建安 | 检测人pgi蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法 |
| CN107727861A (zh) * | 2017-08-22 | 2018-02-23 | 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 | 一种胃蛋白酶测定试剂盒及测定方法 |
-
1985
- 1985-05-15 JP JP10477985A patent/JPS61260899A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998025952A1 (fr) * | 1996-12-12 | 1998-06-18 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Peptides, procedes pour le dosage de la pepsine i humaine ou du pepsinogene i humain, et kits de dosage |
| US6407206B1 (en) | 1996-12-12 | 2002-06-18 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Peptides, methods for assaying human pepsinogen I or human pepsin I and assay kits |
| CN104422773A (zh) * | 2013-08-22 | 2015-03-18 | 朱建安 | 检测人pgi蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法 |
| CN104422773B (zh) * | 2013-08-22 | 2016-08-24 | 朱建安 | 检测人pgi蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法 |
| CN104422772A (zh) * | 2013-09-10 | 2015-03-18 | 江苏省原子医学研究所 | 一种定量检测胃蛋白酶原i的时间分辨免疫层析试纸条及其制备方法 |
| CN107727861A (zh) * | 2017-08-22 | 2018-02-23 | 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 | 一种胃蛋白酶测定试剂盒及测定方法 |
| CN107727861B (zh) * | 2017-08-22 | 2019-10-22 | 厦门依柯利斯医疗科技有限公司 | 一种胃蛋白酶测定试剂盒及测定方法 |
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