JPS61247387A - インタ−ロイキン２ポリペプチドをコ−ドするｄｎａ断片および該ｄｎａ断片を組み込んだ組み換え体ｄｎａ - Google Patents
インタ−ロイキン２ポリペプチドをコ−ドするｄｎａ断片および該ｄｎａ断片を組み込んだ組み換え体ｄｎａInfo
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- JPS61247387A JPS61247387A JP8889685A JP8889685A JPS61247387A JP S61247387 A JPS61247387 A JP S61247387A JP 8889685 A JP8889685 A JP 8889685A JP 8889685 A JP8889685 A JP 8889685A JP S61247387 A JPS61247387 A JP S61247387A
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- fragment
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は大腸菌におけるインターロイキン２ポリペプチ
ド生産性向上のための、インターロイキン２ポリペプチ
ドをコードするＤＮＡ断片および、該ＤＮＡ断片を組み
込んだ組み換え体ＤＮＡに関する。・ 〔従来の技術〕 インターロイキン２（以下、１ｍ−２と略す）はレクチ
ンや抗原の刺激を受けたＴリンパ球が生産するリンホカ
インの一種であり、その機能は、Ｔ細胞の分化・増殖、
Ｂ細胞の分化・増殖、ナチュラルキラー細胞の増殖など
であるといわれており、免疫賦活剤、免疫療法剤として
の臨床応用や診断薬、試薬等への利用が期待されている
。
ド生産性向上のための、インターロイキン２ポリペプチ
ドをコードするＤＮＡ断片および、該ＤＮＡ断片を組み
込んだ組み換え体ＤＮＡに関する。・ 〔従来の技術〕 インターロイキン２（以下、１ｍ−２と略す）はレクチ
ンや抗原の刺激を受けたＴリンパ球が生産するリンホカ
インの一種であり、その機能は、Ｔ細胞の分化・増殖、
Ｂ細胞の分化・増殖、ナチュラルキラー細胞の増殖など
であるといわれており、免疫賦活剤、免疫療法剤として
の臨床応用や診断薬、試薬等への利用が期待されている
。
ＩＬ−２の生産は従来は細胞培養の技術に依っていたが
、この方法では量産が困難であり、また生産濃度が低い
ため純粋なＩＬ−２を得るためには複雑な精製工程が必
要であった。このため現在では遺伝子操作の手法により
［Ｌ−２ポリペプチドをコードするＤＮＡをクローン化
し、ＩＬ−２を大量に得る試みがなされている。
、この方法では量産が困難であり、また生産濃度が低い
ため純粋なＩＬ−２を得るためには複雑な精製工程が必
要であった。このため現在では遺伝子操作の手法により
［Ｌ−２ポリペプチドをコードするＤＮＡをクローン化
し、ＩＬ−２を大量に得る試みがなされている。
ＩＬ−２は最初、呑口らによってｃＤＮＡがクローニン
グされ、サル細胞での発現が報告された（Ｎａｔｕｒｅ
、３０２．３０５ （１９８３））。その後Ｒｅｎｅ
Ｄ ｅｖｏｓら（Ｎ ｕｃｌｅｉｃＡａｉｄｓ Ｒｅ
ｓ、、１上、４３０７ （１９８３））、 ３ｔｅｖ
ｅｎ Ａ、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（Ｓ ｃｉｅｎｃ
ｅ。
グされ、サル細胞での発現が報告された（Ｎａｔｕｒｅ
、３０２．３０５ （１９８３））。その後Ｒｅｎｅ
Ｄ ｅｖｏｓら（Ｎ ｕｃｌｅｉｃＡａｉｄｓ Ｒｅ
ｓ、、１上、４３０７ （１９８３））、 ３ｔｅｖ
ｅｎ Ａ、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（Ｓ ｃｉｅｎｃ
ｅ。
２２３．１４１２ （１９８４））によってそれぞれｃ
Ｄ Ｎ Ａのクローニングと大腸菌での発現が報告され
ている。ＩＬ−２ポリペプチドを大量に得る目的のため
には、他のポリペプチド生産の例から考えてみても、大
腸菌を宿主とする系が最も有効である。
Ｄ Ｎ Ａのクローニングと大腸菌での発現が報告され
ている。ＩＬ−２ポリペプチドを大量に得る目的のため
には、他のポリペプチド生産の例から考えてみても、大
腸菌を宿主とする系が最も有効である。
大腸菌内でのＩＬ−２ポリペプチド生産を効率的に行わ
せる方法として、前記のＲｅｎｅＤ ｅｖｏｓら、３
ｔｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇらは Ｃ［
）ＮＡをコピー数の多いプラスミドｐＢＲ３２２に連結
し、また発現系として、ＴｒｐプロモーターやＰＬプロ
モーターのような大腸菌でのいわゆる強いブロモ−ター
を用いている。
せる方法として、前記のＲｅｎｅＤ ｅｖｏｓら、３
ｔｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇらは Ｃ［
）ＮＡをコピー数の多いプラスミドｐＢＲ３２２に連結
し、また発現系として、ＴｒｐプロモーターやＰＬプロ
モーターのような大腸菌でのいわゆる強いブロモ−ター
を用いている。
これらの手法によりＩＬ−２ポリペプチドの生産量は、
あるレベルに達するが、まだ生産量を増加させるための
検討の余地は残されており、他の条件の検討によりＩＬ
−２ポリペプチド生産量を増加させることが望まれてい
た。
あるレベルに達するが、まだ生産量を増加させるための
検討の余地は残されており、他の条件の検討によりＩＬ
−２ポリペプチド生産量を増加させることが望まれてい
た。
また本発明者らの経験から前記ｆｆＲｅｎｅＤｅＶＯ３
ら、Ｓ ｔｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｏらの
方法に準じて作製したプラスミドを保持する大腸菌株は
、生育が悪く、乾燥菌体重量で３ｇ／２と通常の場合の
約１／３〜１／４にしか達しない。このため単位培養液
あたりのＩＬ−２生産量が低く、ＩＬ−２ポリペプチド
生産量を増加させるには、この点についても改善する必
要があった。
ら、Ｓ ｔｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｏらの
方法に準じて作製したプラスミドを保持する大腸菌株は
、生育が悪く、乾燥菌体重量で３ｇ／２と通常の場合の
約１／３〜１／４にしか達しない。このため単位培養液
あたりのＩＬ−２生産量が低く、ＩＬ−２ポリペプチド
生産量を増加させるには、この点についても改善する必
要があった。
本発明者らは、大腸菌を宿主としてＩＬ−２ポリペプチ
ドの生産性を増大させることを目的にＩＬ−２ｃＤＮＡ
について検討を加えた結果、ＩＬ−２ｃＤＮＡの３′側
のポリペ・ブチドをコードしない塩基配列を部分的に除
去したＤＮＡ断片をクローン化する大腸菌株では生育が
通常の大腸菌株と同程度まで回復し、また単位菌体あた
りのＩＬ−２ポリペプチド生産性が約１００倍に向上す
るという特異な効果を見出し、更にこのＤＮＡ断片を改
良したＴｒｐプロモーター下流に連結することにより、
ＩＬ−２ポリペプチドの高発現プラスミド作製を達成し
た。
ドの生産性を増大させることを目的にＩＬ−２ｃＤＮＡ
について検討を加えた結果、ＩＬ−２ｃＤＮＡの３′側
のポリペ・ブチドをコードしない塩基配列を部分的に除
去したＤＮＡ断片をクローン化する大腸菌株では生育が
通常の大腸菌株と同程度まで回復し、また単位菌体あた
りのＩＬ−２ポリペプチド生産性が約１００倍に向上す
るという特異な効果を見出し、更にこのＤＮＡ断片を改
良したＴｒｐプロモーター下流に連結することにより、
ＩＬ−２ポリペプチドの高発現プラスミド作製を達成し
た。
本発明は、インターロイキン２ポリペプチドをコードす
るＤＮＡの３′末端にＴＧＡＴＡＡ ＴＴＡ ＡＧ
Ｔ ＧＣＴ ＴＣＣＣＡＣＴＴＡ ＡＡＡ Ｃ
ＡＴ ＡＴＣＡＧＧの塩基配列を有するＤＮＡ断片、
および該ＤＮＡ断片を組み込んだ組み換え体ＤＮＡに関
する。
るＤＮＡの３′末端にＴＧＡＴＡＡ ＴＴＡ ＡＧ
Ｔ ＧＣＴ ＴＣＣＣＡＣＴＴＡ ＡＡＡ Ｃ
ＡＴ ＡＴＣＡＧＧの塩基配列を有するＤＮＡ断片、
および該ＤＮＡ断片を組み込んだ組み換え体ＤＮＡに関
する。
インターロイキン２０ＤＮＡのクローニングはすでに呑
口ら（Ｎａｔｕｒｅ 、 ３０２．３０５ （１９８
３） ） 、 Ｒｅｎｅ Ｄｅｖｏｓら（Ｎ ｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、、１１．４３０７
（１９８３） ） 、 Ｓ ｔｅｖｅｎ Ａ 、
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（３ｃｒｅｎｃｅ、２２３．
１４１２（１９８４））によって報告されている方法に
より達成される。すなわちヒト白血病Ｔ細胞株、ヒト牌
細胞、ヒト末梢血リンパ球など［Ｌ−２を生産し得る細
胞よりＥ）ＯＩＶ（Ａ）ＩＲＮＡを調製し、これより逆
転写酵素を用いてｃＤ Ｎ Ａを合成し、大腸菌にクロ
ーン化する。得られた大腸菌株についてＩＲＮ Ａハイ
ブリダイゼーショントランスレーションアッセイ法によ
りＩＬ−２ｃＤＮＡを選択できるしく呑口ら、Ｒｅｎｅ
（） ｅｖｏｓら）、またすでに報告されている■し一
２ｃＤＮＡの一部の塩基配列を有するＤＮＡオリゴマー
をプローブとして、コロニーハイブリダイゼーションに
より、陽性の株を選択し、ＩＬ−２ｃＤＮＡを得ること
もできる（ Ｓ ｔｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂ
ｅｒｇら）。
口ら（Ｎａｔｕｒｅ 、 ３０２．３０５ （１９８
３） ） 、 Ｒｅｎｅ Ｄｅｖｏｓら（Ｎ ｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃ１ｄｓ Ｒｅｓ、、１１．４３０７
（１９８３） ） 、 Ｓ ｔｅｖｅｎ Ａ 、
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（３ｃｒｅｎｃｅ、２２３．
１４１２（１９８４））によって報告されている方法に
より達成される。すなわちヒト白血病Ｔ細胞株、ヒト牌
細胞、ヒト末梢血リンパ球など［Ｌ−２を生産し得る細
胞よりＥ）ＯＩＶ（Ａ）ＩＲＮＡを調製し、これより逆
転写酵素を用いてｃＤ Ｎ Ａを合成し、大腸菌にクロ
ーン化する。得られた大腸菌株についてＩＲＮ Ａハイ
ブリダイゼーショントランスレーションアッセイ法によ
りＩＬ−２ｃＤＮＡを選択できるしく呑口ら、Ｒｅｎｅ
（） ｅｖｏｓら）、またすでに報告されている■し一
２ｃＤＮＡの一部の塩基配列を有するＤＮＡオリゴマー
をプローブとして、コロニーハイブリダイゼーションに
より、陽性の株を選択し、ＩＬ−２ｃＤＮＡを得ること
もできる（ Ｓ ｔｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂ
ｅｒｇら）。
ここで得られるｃＤ Ｎ Ａの構造を第１図に示す。ｐ
ｏｌｙ（Ａ）ｉＲＮＡを鋳型として合成するためＩＬ−
２ポリペプチドをコードする塩基配列の３′側にポリペ
プチドをコードしない塩基配列がつながった構造のｃＱ
Ｎ Ａが得られる。ＩＬ−２ポリペプチドをコードす
る塩基配列には、同じアミノ酸配列をコードしながら、
塩基配列の異なる場合のあることが知られているが、本
発明は、このような塩基配列の違いによって限定される
ものではなくＩＬ−２活性を有するポリペプチドをコー
ドする塩基配列であれば、どのようなものでも良い。
ｏｌｙ（Ａ）ｉＲＮＡを鋳型として合成するためＩＬ−
２ポリペプチドをコードする塩基配列の３′側にポリペ
プチドをコードしない塩基配列がつながった構造のｃＱ
Ｎ Ａが得られる。ＩＬ−２ポリペプチドをコードす
る塩基配列には、同じアミノ酸配列をコードしながら、
塩基配列の異なる場合のあることが知られているが、本
発明は、このような塩基配列の違いによって限定される
ものではなくＩＬ−２活性を有するポリペプチドをコー
ドする塩基配列であれば、どのようなものでも良い。
大腸菌内でのＩＬ−２ポリペプチドの発現はすでにＲ，
ｅｎｅ Ｄｅｖｏｓら（Ｎ ｕｃｌｅｉｃ Ａ ａｉ
ｄｓＲｅｓ、、１１．４３０７ （１９８３））、５ｔ
ｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ、 ２２３ 。
ｅｎｅ Ｄｅｖｏｓら（Ｎ ｕｃｌｅｉｃ Ａ ａｉ
ｄｓＲｅｓ、、１１．４３０７ （１９８３））、５ｔ
ｅｖｅｎ Ａ 、 Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ、 ２２３ 。
１４１２（１９８４））によって報告されている方法に
より達成される。すなわち得られたＩＬ−２ｃＤＮＡの
ＩＬ−２ポリペプチドをコードする塩基配列の前に大腸
菌での翻訳開始コドンＡＴＧを付与し、更にその前に大
腸菌におけるプロモーター、ＳＤ配列を連結すれば、大
腸菌内でのＩＬ−２ポリペプチド発現は達成される。好
ましくはこれらのＤＮＡをコピー数の多いプラスミド、
例えばｐＢＲ３２２に組み込めばＩＬ−２の生産量は増
加する。
より達成される。すなわち得られたＩＬ−２ｃＤＮＡの
ＩＬ−２ポリペプチドをコードする塩基配列の前に大腸
菌での翻訳開始コドンＡＴＧを付与し、更にその前に大
腸菌におけるプロモーター、ＳＤ配列を連結すれば、大
腸菌内でのＩＬ−２ポリペプチド発現は達成される。好
ましくはこれらのＤＮＡをコピー数の多いプラスミド、
例えばｐＢＲ３２２に組み込めばＩＬ−２の生産量は増
加する。
以上のように構成された大腸菌における■Ｌ−２ポリペ
プチド発現系において、ＩＬ−２ポリペプチドをコード
するＤＮＡの３′側にあるポリペプチドをコードしない
塩基配列の一部を除去することによりＩＬ−２ポリペプ
チドの生産性が約１００倍に増加するという特異な効果
が見られた。さらに詳しくはＩＬ−：２ＣＤＮＡに１ケ
所存在する制限酵素５ｔｕＩの切断部位より３′側の配
列を全て除去すればこの効果は達成される。５ｔＵ１部
位での切断による３′側塩基配列の除去により、ＩＬ−
２ポリペプチドをコードするＤＮＡの３′末端にＴＧＡ
ＴＡＡ ＴＴＡ ＡＧＴＧＣＴ ＴＣＣＣＡ
ＣＴＴＡ ＡＡＡＣＡＴ ＡＴＣＡＧＧの塩基配列
を有するＤＮＡ断片が得られる。５ｔｔ１１切断部位以
降の塩基配列を保持する元のＩＬ−２ｃＤＮＡをクロー
ニングしている大腸菌株では生育が悪く、乾燥菌体重級
約３ｇ／ｌにしか到達せず、また１１−２ポリペプチド
の生産性も低いが、３ｔＬＩｌ切断部位以降の配列を除
去した前記のＤＮＡ断片をクローニングした大腸菌株で
は、約９ｇ／ｌに回復し、菌体あたりのＩＬ−２ポリペ
プチド生産性も約１００倍となる。このことは、ｌ−２
０ＤＮＡにおいて、５ｔｕｉ切断部位以降の塩基配列が
、ＩＬ−２ポリペプチドの菌体あたりの生産性および大
腸菌株の生育に悪影響を及ぼしていることを示唆してお
り、ＩＬ−２生産量の向上はＳｔｕ■切断部位以降の配
列を含まないＤＮＡ断片に特異な効果であるといえる。
プチド発現系において、ＩＬ−２ポリペプチドをコード
するＤＮＡの３′側にあるポリペプチドをコードしない
塩基配列の一部を除去することによりＩＬ−２ポリペプ
チドの生産性が約１００倍に増加するという特異な効果
が見られた。さらに詳しくはＩＬ−：２ＣＤＮＡに１ケ
所存在する制限酵素５ｔｕＩの切断部位より３′側の配
列を全て除去すればこの効果は達成される。５ｔＵ１部
位での切断による３′側塩基配列の除去により、ＩＬ−
２ポリペプチドをコードするＤＮＡの３′末端にＴＧＡ
ＴＡＡ ＴＴＡ ＡＧＴＧＣＴ ＴＣＣＣＡ
ＣＴＴＡ ＡＡＡＣＡＴ ＡＴＣＡＧＧの塩基配列
を有するＤＮＡ断片が得られる。５ｔｔ１１切断部位以
降の塩基配列を保持する元のＩＬ−２ｃＤＮＡをクロー
ニングしている大腸菌株では生育が悪く、乾燥菌体重級
約３ｇ／ｌにしか到達せず、また１１−２ポリペプチド
の生産性も低いが、３ｔＬＩｌ切断部位以降の配列を除
去した前記のＤＮＡ断片をクローニングした大腸菌株で
は、約９ｇ／ｌに回復し、菌体あたりのＩＬ−２ポリペ
プチド生産性も約１００倍となる。このことは、ｌ−２
０ＤＮＡにおいて、５ｔｕｉ切断部位以降の塩基配列が
、ＩＬ−２ポリペプチドの菌体あたりの生産性および大
腸菌株の生育に悪影響を及ぼしていることを示唆してお
り、ＩＬ−２生産量の向上はＳｔｕ■切断部位以降の配
列を含まないＤＮＡ断片に特異な効果であるといえる。
この効果はＩＬ−２ポリペプチドを発現しようとするプ
ロモーターやベクターの種類、宿主大腸菌の種類によっ
て限定されるものではない。ＩＬ−２ポリペプチドをコ
ードするＤＮＡの３′末端にＴＧＡ ＴＡＡ ＴＴ
Ａ ＡＧＴＧＣＴ 丁ＣＣＣＡＣＴＴＡ ＡＡＡ
ＣＡＴ ＡＴＣＡＧＧの配列を有するＤＮＡ断片は、
元のＩＬ−２０ＤＮＡを制限酵素５ｔＬＩＩにより切断
し得られる。またＳ ｔｕ １部位より下流の制限酵素
部位で切断した後、Ｂａｌ ３１で処理する方法や、
ＤＮＡ合成により目的のＤＮＡ断片を合成する方法を用
いても良い。このＤＮＡ断片を用いて大腸菌での［Ｌ−
２ポリペプチド発現系を構成するためには、ｒＬ−２ポ
リペプチドをコードする塩基配列の前に、大腸菌での翻
訳開始を指示するＡＴＧまたはＧＴＧコドンを付与し、
その前にプロモーター配列、ＳＤ配列を連結すればよい
。
ロモーターやベクターの種類、宿主大腸菌の種類によっ
て限定されるものではない。ＩＬ−２ポリペプチドをコ
ードするＤＮＡの３′末端にＴＧＡ ＴＡＡ ＴＴ
Ａ ＡＧＴＧＣＴ 丁ＣＣＣＡＣＴＴＡ ＡＡＡ
ＣＡＴ ＡＴＣＡＧＧの配列を有するＤＮＡ断片は、
元のＩＬ−２０ＤＮＡを制限酵素５ｔＬＩＩにより切断
し得られる。またＳ ｔｕ １部位より下流の制限酵素
部位で切断した後、Ｂａｌ ３１で処理する方法や、
ＤＮＡ合成により目的のＤＮＡ断片を合成する方法を用
いても良い。このＤＮＡ断片を用いて大腸菌での［Ｌ−
２ポリペプチド発現系を構成するためには、ｒＬ−２ポ
リペプチドをコードする塩基配列の前に、大腸菌での翻
訳開始を指示するＡＴＧまたはＧＴＧコドンを付与し、
その前にプロモーター配列、ＳＤ配列を連結すればよい
。
大腸菌内でのＩＬ−２ポリペプチド生産量を増加させる
ためには、発現効率の高いプロモーター、ＳＤ配列に接
続することが好ましい。大腸菌内での発現効率の高いプ
ロモーター、ＳＤ配列としては５Ｄ−ＡＴＧ間の配列が
ＧＧＴ ＴＴＧ ＡＡＡ ＴＣＧ ＡＴＧであ
る改良Ｔｒｉ）プロモーターがあり、この下流に前記の
ＤＮＡ断片澄連結したプラスミドがｐＴｈｌＬ２−ΔＳ
Ｂである。ｐＴｈｌＬ２−△ＳＢの製作により大腸菌内
でのＩＬ−２ポリペプチド大量生産を実施し得る。
ためには、発現効率の高いプロモーター、ＳＤ配列に接
続することが好ましい。大腸菌内での発現効率の高いプ
ロモーター、ＳＤ配列としては５Ｄ−ＡＴＧ間の配列が
ＧＧＴ ＴＴＧ ＡＡＡ ＴＣＧ ＡＴＧであ
る改良Ｔｒｉ）プロモーターがあり、この下流に前記の
ＤＮＡ断片澄連結したプラスミドがｐＴｈｌＬ２−ΔＳ
Ｂである。ｐＴｈｌＬ２−△ＳＢの製作により大腸菌内
でのＩＬ−２ポリペプチド大量生産を実施し得る。
本発明はＩＬ−２ポリペプチドをコードするＤＮＡの３
′末端にＴＧＡ ＴＡＡＴＴＡ ＡＧＴ Ｇ
ＣＴ ＴＣＣＣＡＣＴＴＡ ＡＡＡ ＣＡＴ
ＡＴＣＡＧＧの塩基配列を有するＤＮＡ断片の特異な
効果を見出し、このＤＮＡ断片をクローン化した大腸菌
株を用いて、ＩＬ−２ポリペプチドの大量生産系を構築
したものである。このＤＮＡ断片を用いたことにより、
従来のＣＤ Ｎ Ａをクローン化したものに較べ、大腸
菌株の生育が約３倍になり通常のレベルに回復するとと
もに、ＩＬ−２ポリペプチドの菌体あたりの生産量は約
１００倍に増加した。更にこのＤＮＡ断片を効率の良い
発現系に組み込んだ組み換え体プラスミド１）ＴｈＩＬ
２−ΔＳＢを保持する大腸菌株では、培養液あたりのＩ
Ｌ−２ポリペプチド生産量が約４００万Ｕ／ｄを示し、
この時の大腸菌たんぽ（質の約２０％がＩＬ−２ポリペ
プチドであった。このようにＩＬ−２ポリペプチドが高
濃度で蓄積すれば、ＩＬ−２ポリペプチドの純化も容易
であり、研究等の目的のために大量の標品を供給し得る
。
′末端にＴＧＡ ＴＡＡＴＴＡ ＡＧＴ Ｇ
ＣＴ ＴＣＣＣＡＣＴＴＡ ＡＡＡ ＣＡＴ
ＡＴＣＡＧＧの塩基配列を有するＤＮＡ断片の特異な
効果を見出し、このＤＮＡ断片をクローン化した大腸菌
株を用いて、ＩＬ−２ポリペプチドの大量生産系を構築
したものである。このＤＮＡ断片を用いたことにより、
従来のＣＤ Ｎ Ａをクローン化したものに較べ、大腸
菌株の生育が約３倍になり通常のレベルに回復するとと
もに、ＩＬ−２ポリペプチドの菌体あたりの生産量は約
１００倍に増加した。更にこのＤＮＡ断片を効率の良い
発現系に組み込んだ組み換え体プラスミド１）ＴｈＩＬ
２−ΔＳＢを保持する大腸菌株では、培養液あたりのＩ
Ｌ−２ポリペプチド生産量が約４００万Ｕ／ｄを示し、
この時の大腸菌たんぽ（質の約２０％がＩＬ−２ポリペ
プチドであった。このようにＩＬ−２ポリペプチドが高
濃度で蓄積すれば、ＩＬ−２ポリペプチドの純化も容易
であり、研究等の目的のために大量の標品を供給し得る
。
以下、実施例を挙げて本発明のプラスミド ・１）Ｔｈ
［Ｌ２−ΔＳＢ作製の詳細を述べる。
［Ｌ２−ΔＳＢ作製の詳細を述べる。
実施例１
プラスミドｐＴｈＩＬ２−△ＳＳの作製方法を以下に示
す。基本的な遺伝子操作の手法は“Ｍｏ１ｅｃＵｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ” （ＭａｎｉａｔｉＳら（１９８２
） Ｃｏ１ｄ ５ｐｒｉｒ＋ａ ｈａｒｂｏｒ １ａｂ
ｏｒａｔ。
す。基本的な遺伝子操作の手法は“Ｍｏ１ｅｃＵｌａｒ
ｃｌｏｎｉｎｇ” （ＭａｎｉａｔｉＳら（１９８２
） Ｃｏ１ｄ ５ｐｒｉｒ＋ａ ｈａｒｂｏｒ １ａｂ
ｏｒａｔ。
ｒｙ）に依った。
（１） プラスミドｐｆ Ｌ２−２８．３の作製ヒト
ＩＬ−２ｃＤＮＡをクローン化するプラスミドｐＩ Ｌ
２−２８．３の作製は以下のようにして行った。ヒト扁
桃由来リンパ球にツイテＰ ＨＡ （１）ｈＶｔｏｈｅ
ｉａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）とＴＰＡ （１２−０−ｔｅ
ｔｒａ ｄｅｃａｎｏｙｌ ｐｈｏｒｂｏｒ −１３−
ａｃｅｔａｔｅ ）を用いてＩＬ−２生産を誘導した後
（Ｖ ｉ Ｉｃｈｅｋら（ｎｒｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ
ｉ ｍｌ１ｌｕｎｉｔｙ、３４，１３１ （１９８１
））、細胞よりｍＲＮ Ａを調製した。ｍＲＮＡの調製
と、ｃＤ Ｎ Ａの作製およびプラスミドへのクローニ
ングは公知の方法（岡山らＭ ｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎ
ｄＣｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ 、３．２８０
（１９８３））に従った。得られたｃＤ Ｎ Ａライブ
ラリーの中から公知のＩＬ−２ｃＤＮＡ （呑口らＮａ
ｔｕｒｅ 、３０２，３０５ （１９８３））に相補的
な塩基配列ＧＡＴ ＧＣＴ ＴＴＧＡＣＡ ＡＡ
Ａ ＧＧＴをプローブとしてコロニーハイブリダイゼ
ーションにより（Ｑ ｒｕｎｓｔｅｉｎらＰ ｒｏｃ、
Ｎ ａｔｌ、Ａ ｃａｄ、Ｓ ｃｉ、、 ７２ 。
ＩＬ−２ｃＤＮＡをクローン化するプラスミドｐＩ Ｌ
２−２８．３の作製は以下のようにして行った。ヒト扁
桃由来リンパ球にツイテＰ ＨＡ （１）ｈＶｔｏｈｅ
ｉａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）とＴＰＡ （１２−０−ｔｅ
ｔｒａ ｄｅｃａｎｏｙｌ ｐｈｏｒｂｏｒ −１３−
ａｃｅｔａｔｅ ）を用いてＩＬ−２生産を誘導した後
（Ｖ ｉ Ｉｃｈｅｋら（ｎｒｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ
ｉ ｍｌ１ｌｕｎｉｔｙ、３４，１３１ （１９８１
））、細胞よりｍＲＮ Ａを調製した。ｍＲＮＡの調製
と、ｃＤ Ｎ Ａの作製およびプラスミドへのクローニ
ングは公知の方法（岡山らＭ ｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎ
ｄＣｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ 、３．２８０
（１９８３））に従った。得られたｃＤ Ｎ Ａライブ
ラリーの中から公知のＩＬ−２ｃＤＮＡ （呑口らＮａ
ｔｕｒｅ 、３０２，３０５ （１９８３））に相補的
な塩基配列ＧＡＴ ＧＣＴ ＴＴＧＡＣＡ ＡＡ
Ａ ＧＧＴをプローブとしてコロニーハイブリダイゼ
ーションにより（Ｑ ｒｕｎｓｔｅｉｎらＰ ｒｏｃ、
Ｎ ａｔｌ、Ａ ｃａｄ、Ｓ ｃｉ、、 ７２ 。
３９６１ （１９７５））陽性の株を選択し、プラスミ
ドＤ１ ｍ２−２８．３を得た。
ドＤ１ ｍ２−２８．３を得た。
（２）プラスミドｐＴｈＩＬ２の作製
大腸菌におけるＩＬ−２ポリペプチド発現プラスミドｐ
ＴｈｌＬ２は次のようにして作製した。概略を第２図に
示す。Ｅ）ＩＬ２−２８．３を制限醇素ＡｃｃＩＩによ
り切断し、アガロースゲル電気泳動により、約１７００
ｂｐのＤＮＡ断片を分取する。このＤＮＡ断片をＨＣｌ
１Ａ＋により切断した後、各々２ ｍＭのｄＮＴＰヲ含
ム反応１中チーｒ’４ＤＮＡ Ｄｏｌｙｍｅｒａｓｅ処
理し、平滑末端とした後、１３ａｎＨＩにより切断し、
反応物をアガロースゲル電気泳動にかけ、約７００ ｂ
ｐのＤＮＡ断片を分取した。これを断片１とする（第２
図の（ａ））。
ＴｈｌＬ２は次のようにして作製した。概略を第２図に
示す。Ｅ）ＩＬ２−２８．３を制限醇素ＡｃｃＩＩによ
り切断し、アガロースゲル電気泳動により、約１７００
ｂｐのＤＮＡ断片を分取する。このＤＮＡ断片をＨＣｌ
１Ａ＋により切断した後、各々２ ｍＭのｄＮＴＰヲ含
ム反応１中チーｒ’４ＤＮＡ Ｄｏｌｙｍｅｒａｓｅ処
理し、平滑末端とした後、１３ａｎＨＩにより切断し、
反応物をアガロースゲル電気泳動にかけ、約７００ ｂ
ｐのＤＮＡ断片を分取した。これを断片１とする（第２
図の（ａ））。
発現系としてはプラスミドｌ）ＫＭ６の持つ改良Ｔｒｐ
プロモーターを用いた。ｐＫ、Ｍ６はプラスミド１）Ｋ
Ｔｌ−９の５Ｄ−ＡＴＧ間塩基配列を修飾することによ
り得られる。ｐＫＴｌ−９はＴｕｆＢプロモータ支配下
にヒトインターフェロンβポリペプチドを発現するブラ
、スミド１）ＴｔｌＢ１ＦＮβ−５（呑口 生化学５４
．３６３（１９８２））をＥＣ０ＲＩとＣ１ａｌで処理
しＴｕｆＢプロモーター断片を除去した後、その部分に
λｔｒｐＮＭ７７８−６（Ａ 、 Ｓ 、 Ｈ０ｆ
）ｋｉｎｓらＪ、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、、 １
−０７．５４９ （１９７６））由来のＴｒｔ＋プロモ
ーター、ＳＤ配列を含むＥｃｏＲＩ −Ｔａｑｌ断片を
挿入することにより得られる。ｐＫＴｌ−９の５Ｄ−Ａ
ＴＧ間塩基配列は、ＡＧＧＴ ＡＴＣＴＡＣＡＴＧで
あるが、本配列について合成りＮＡオリゴマーを用いて
修飾を加え、ＡＧＧＴ ＴＴＧ ＡＡＡ ＴＣＧ
ＡＴＧとしたものがｐＫＭ６である。ｐＫＭ６麿Ｃ
１ａｌと３ａｍＨＩで切断し、アガロースゲル電気泳動
により約４５００ｂｐのＤＮＡ断片を分取した。これを
断片２とする（第２図の（ｂ））。更に既知の方法で化
学的に合成された下記の合成オリゴマー２種 ■−ＣＧ ＡＴＧ ＧＣＡ ＴＡＣＣＧＴ＝■ 各々３ｐｍＯ１を混合し、６５℃に熱した後水浴で急冷
し、再度６５℃に熱した後徐々に冷やすことによりアニ
ーリングした。これを断片３とする（第２図の（Ｃ））
。次に断片１をＱ、３ｐＩＩｌｏｌ、断片２をＱ、１ｐ
Ｈｉｏ＋、断片３を８１１１００１混合し、Ｔ ４ Ｄ
Ｎ Ａ ｌ ｉｇａｓｅを用いて、連結し、Ｅ、ｃ
ｏｌｉ ＭＣ１０６１（Ｍ、Ｊ、Ｃ。
プロモーターを用いた。ｐＫ、Ｍ６はプラスミド１）Ｋ
Ｔｌ−９の５Ｄ−ＡＴＧ間塩基配列を修飾することによ
り得られる。ｐＫＴｌ−９はＴｕｆＢプロモータ支配下
にヒトインターフェロンβポリペプチドを発現するブラ
、スミド１）ＴｔｌＢ１ＦＮβ−５（呑口 生化学５４
．３６３（１９８２））をＥＣ０ＲＩとＣ１ａｌで処理
しＴｕｆＢプロモーター断片を除去した後、その部分に
λｔｒｐＮＭ７７８−６（Ａ 、 Ｓ 、 Ｈ０ｆ
）ｋｉｎｓらＪ、 Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、、 １
−０７．５４９ （１９７６））由来のＴｒｔ＋プロモ
ーター、ＳＤ配列を含むＥｃｏＲＩ −Ｔａｑｌ断片を
挿入することにより得られる。ｐＫＴｌ−９の５Ｄ−Ａ
ＴＧ間塩基配列は、ＡＧＧＴ ＡＴＣＴＡＣＡＴＧで
あるが、本配列について合成りＮＡオリゴマーを用いて
修飾を加え、ＡＧＧＴ ＴＴＧ ＡＡＡ ＴＣＧ
ＡＴＧとしたものがｐＫＭ６である。ｐＫＭ６麿Ｃ
１ａｌと３ａｍＨＩで切断し、アガロースゲル電気泳動
により約４５００ｂｐのＤＮＡ断片を分取した。これを
断片２とする（第２図の（ｂ））。更に既知の方法で化
学的に合成された下記の合成オリゴマー２種 ■−ＣＧ ＡＴＧ ＧＣＡ ＴＡＣＣＧＴ＝■ 各々３ｐｍＯ１を混合し、６５℃に熱した後水浴で急冷
し、再度６５℃に熱した後徐々に冷やすことによりアニ
ーリングした。これを断片３とする（第２図の（Ｃ））
。次に断片１をＱ、３ｐＩＩｌｏｌ、断片２をＱ、１ｐ
Ｈｉｏ＋、断片３を８１１１００１混合し、Ｔ ４ Ｄ
Ｎ Ａ ｌ ｉｇａｓｅを用いて、連結し、Ｅ、ｃ
ｏｌｉ ＭＣ１０６１（Ｍ、Ｊ、Ｃ。
ａｓａｄａｂａｎ Ｊ、 Ｍｏ１．３ｉｏ１．、１３
８．１７９ （１９８０））を形質転換した。得られた
アンピシリン１００μｇ／ＩＲＩｌに耐性を示す株より
プラスミドＤＮＡを抽出し、Ｃ１ａｌ切断部位周辺の塩
基配列をＭａｘａｍ Ｇ １ｌｂｅｒｔ法（Ｍｅｔｈ
Ｅｎｚｙｎ＋、、６５．４９９ （１９８０） ）に
より決定し目的のプラスミドｐＴｈｌＬ２を得た。
８．１７９ （１９８０））を形質転換した。得られた
アンピシリン１００μｇ／ＩＲＩｌに耐性を示す株より
プラスミドＤＮＡを抽出し、Ｃ１ａｌ切断部位周辺の塩
基配列をＭａｘａｍ Ｇ １ｌｂｅｒｔ法（Ｍｅｔｈ
Ｅｎｚｙｎ＋、、６５．４９９ （１９８０） ）に
より決定し目的のプラスミドｐＴｈｌＬ２を得た。
（３プラスミドｐＴｈｌＬ２−ΔＳＢの作製ｐＴｈｌＬ
２−ΔＳＢの作製は以下のように実施した。概略を第３
図に示す。ｐＴｈｌＬ２を３ａｍＨＩにより切断した後
、各々２ｎ＋ＭｄＮＴＰ存在下、Ｔ ４ Ｄ Ｎ Ａ
ｐｏｌｙｌｅｒａｓｅ Ｋ Ｉｅｎｏｗ断片で処理し、
平滑末端とした後、３ｔｕｌで切断する。得られたＤＮ
Ａ＠Ｔ４ＤＮ Ａ ｌ １（ＪａＳｅを用いて環化した
後、ｌ：、ｃｏｌｉＭＣ１０６１を形質転換した。得ら
れたアンピシリン耐性形質転換株よりＨ，０，３ｉｒｎ
ｂｏｉｎらの方法（Ｎ ｕｃｌｅｉｃ Ａ ａｉｄｓ
Ｒｅｓ、、 ７ 。
２−ΔＳＢの作製は以下のように実施した。概略を第３
図に示す。ｐＴｈｌＬ２を３ａｍＨＩにより切断した後
、各々２ｎ＋ＭｄＮＴＰ存在下、Ｔ ４ Ｄ Ｎ Ａ
ｐｏｌｙｌｅｒａｓｅ Ｋ Ｉｅｎｏｗ断片で処理し、
平滑末端とした後、３ｔｕｌで切断する。得られたＤＮ
Ａ＠Ｔ４ＤＮ Ａ ｌ １（ＪａＳｅを用いて環化した
後、ｌ：、ｃｏｌｉＭＣ１０６１を形質転換した。得ら
れたアンピシリン耐性形質転換株よりＨ，０，３ｉｒｎ
ｂｏｉｎらの方法（Ｎ ｕｃｌｅｉｃ Ａ ａｉｄｓ
Ｒｅｓ、、 ７ 。
１５１３（１９７９））に従いプラスミドＤＮＡを調製
し、アガロース電気泳動により、３ａｇｌＨＩ切断部位
が再生していること、およびＢａｍＨＩと５ ｊｕ ｌ
で処理しても約３５０ｂｐのＤＮＡ断片を生成しないこ
とを確認し、ｐＴｈｌＬ２−Δ８Ｂを得た。更ニＯｉｄ
ｅｏｘｙｓｅｑｕｅｎｃｔｎｇ法（Ｍｅｔｈ 、 Ｅ
ｎｚｙｍ、、６５ 、５６０（１９８０））による塩基
配列決定によっても目的物であることを確認した。
し、アガロース電気泳動により、３ａｇｌＨＩ切断部位
が再生していること、およびＢａｍＨＩと５ ｊｕ ｌ
で処理しても約３５０ｂｐのＤＮＡ断片を生成しないこ
とを確認し、ｐＴｈｌＬ２−Δ８Ｂを得た。更ニＯｉｄ
ｅｏｘｙｓｅｑｕｅｎｃｔｎｇ法（Ｍｅｔｈ 、 Ｅ
ｎｚｙｍ、、６５ 、５６０（１９８０））による塩基
配列決定によっても目的物であることを確認した。
（４）ＴＬ−２ポリペプチドの発現
ｐＴｈｌＬ２およびｐＴｈｌＬ２−ΔＳＢを用いて、Ｅ
、 ｃｏｌｉ ＨＢｌｏｌ （Ｍｅｔｈ。
、 ｃｏｌｉ ＨＢｌｏｌ （Ｍｅｔｈ。
Ｅｎｚｙｉ、、６８．２６２ （１９７９））を形質転
換した。ｐＴｈｌＬ２−ΔＳＢを含有する形質転換体Ｅ
、ｃｏｌｉ ＨＢＩ ０１ （ｐＴｈ ＩＬ２−Δ５Ｂ
）は、微工研菌寄第８１８９号として工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されている。形質転換した大腸菌
株をアンピシリン１００μ９７ｄを含むＬＢ培地（バタ
トトリプトン１％、酵母エキス０．５％、食塩０．５％
、グルコース０．２％、水酸化ナトリウムでｐＨ７，０
〜７．１に調整）５〇−に接種し、３０℃で１４時間培
養した後、全量を１１のＭ９培地（リン酸１カリウム０
゜３％、リン酸２ナトリウム０．６％、食塩０゜５％、
塩化アンモニウム０．１％、カザミノ酸１％に終濃度硫
酸マグネシウム１ ｍＭ、ビタミンＢ＋５η／Ｌ１グ
ルコース１％１．アンピシリン２００μｇ／１ｒｄｌを
別添する）を含む２．５９容のミニジャーに植菌する。
換した。ｐＴｈｌＬ２−ΔＳＢを含有する形質転換体Ｅ
、ｃｏｌｉ ＨＢＩ ０１ （ｐＴｈ ＩＬ２−Δ５Ｂ
）は、微工研菌寄第８１８９号として工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されている。形質転換した大腸菌
株をアンピシリン１００μ９７ｄを含むＬＢ培地（バタ
トトリプトン１％、酵母エキス０．５％、食塩０．５％
、グルコース０．２％、水酸化ナトリウムでｐＨ７，０
〜７．１に調整）５〇−に接種し、３０℃で１４時間培
養した後、全量を１１のＭ９培地（リン酸１カリウム０
゜３％、リン酸２ナトリウム０．６％、食塩０゜５％、
塩化アンモニウム０．１％、カザミノ酸１％に終濃度硫
酸マグネシウム１ ｍＭ、ビタミンＢ＋５η／Ｌ１グ
ルコース１％１．アンピシリン２００μｇ／１ｒｄｌを
別添する）を含む２．５９容のミニジャーに植菌する。
培養は３０℃、通気ｉ１１にｖ、ｖ、ｅ、ｆｉ拌数６０
０ ｒｐｍで行い、１４％アンモニア水によりｐＨを６
゜５にコントロールした。培養開始後５時間目にインド
ールアクリル酸を終濃度１０μｇ／−添加し、更に１０
〜１５時間培養を継続した後、菌体を集菌した。ＩＬ−
２活性測定用ノ大ｖｉ、ｍ抽出液ノｙａ製ハＰ、Ｔ、
Ｌｏａ＋ｅｄｉｃ。
０ ｒｐｍで行い、１４％アンモニア水によりｐＨを６
゜５にコントロールした。培養開始後５時間目にインド
ールアクリル酸を終濃度１０μｇ／−添加し、更に１０
〜１５時間培養を継続した後、菌体を集菌した。ＩＬ−
２活性測定用ノ大ｖｉ、ｍ抽出液ノｙａ製ハＰ、Ｔ、
Ｌｏａ＋ｅｄｉｃ。
らの方法（Ｎａｔｕｒｅ、３１２．４５８ （１９８４
））に準じた。すなわち、１ｄの培養液により得た菌体
にｌｉｄのリゾチーム３η、ＥＤＴＡ２１Ｍ、食塩３０
ｍＭを含むトリス−塩！ｉＩｍｍ液（ｐＨ７，５）を加
え、懸濁した後に水中に６０分間放置する。凍結溶解を
２回繰り返した後、５ｍの７Ｍ塩酸グアニジン溶液を加
え、これをＰＢＳ−で２０倍希釈したものを活性測定用
サンプルとした。ＩＬ−２活性の測定はＣＴＬＬ−２細
ＩＩ （Ｓ、 Ｇ１１ｌｉＳらＪ、 ［ｍｕｎｏｌ、
、１２０．２０２７ （１９７８））を用い、Ｔ、 Ｍ
Ｏ３Ｉａｎｎの方法（Ｊ。
））に準じた。すなわち、１ｄの培養液により得た菌体
にｌｉｄのリゾチーム３η、ＥＤＴＡ２１Ｍ、食塩３０
ｍＭを含むトリス−塩！ｉＩｍｍ液（ｐＨ７，５）を加
え、懸濁した後に水中に６０分間放置する。凍結溶解を
２回繰り返した後、５ｍの７Ｍ塩酸グアニジン溶液を加
え、これをＰＢＳ−で２０倍希釈したものを活性測定用
サンプルとした。ＩＬ−２活性の測定はＣＴＬＬ−２細
ＩＩ （Ｓ、 Ｇ１１ｌｉＳらＪ、 ［ｍｕｎｏｌ、
、１２０．２０２７ （１９７８））を用い、Ｔ、 Ｍ
Ｏ３Ｉａｎｎの方法（Ｊ。
［ｍｍｕｎｏ １ｏｏｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、 ６
５ 、５５ （１９８３））に従った。対照としては、
末梢血リンパ球より得たＩＬ−２，５０００単位／ｄを
希釈して用いた。また乾燥菌体重量は、あらかじめ秤量
した容器中に蒸留水で洗浄した大腸菌菌体を取り、９０
℃で１４時間乾燥させた後、デシケータ−中に５時間放
置し、これを秤量することにより菌体重量を求めた。
５ 、５５ （１９８３））に従った。対照としては、
末梢血リンパ球より得たＩＬ−２，５０００単位／ｄを
希釈して用いた。また乾燥菌体重量は、あらかじめ秤量
した容器中に蒸留水で洗浄した大腸菌菌体を取り、９０
℃で１４時間乾燥させた後、デシケータ−中に５時間放
置し、これを秤量することにより菌体重量を求めた。
結果を第１表に示す。
第１表
第１図はＩＬ−２ｃＤＮＡの構造を示す。第２図は実施
例１で示したプラスミドｐＴｈｌＬ２の作製方法の概要
を示すものであり（ａ ）は断片１を、（ｂ ）は断片
２を、＜Ｏ）は断片３を示す。第３図はプラスミドｐＴ
ｌｌＬ２−ΔＳＢの作製方法の概要を示す。 １ ・・・・・・ ［Ｌ−２ポリペプチドをコードする
ＤＮＡ ２ ・・・・・・ ＩＬ−２ポリペプチドを細胞外へ分
泌させるだめのポリペプチドを コードするＤＮＡ ３ ・・・・・・ ＩＬ−２ポリペプチドをコードしな
いＤＮＡ ４ ・・・・・・ ヒトインターフェロンβポリペプチ
ドをコードするＤＮＡ
例１で示したプラスミドｐＴｈｌＬ２の作製方法の概要
を示すものであり（ａ ）は断片１を、（ｂ ）は断片
２を、＜Ｏ）は断片３を示す。第３図はプラスミドｐＴ
ｌｌＬ２−ΔＳＢの作製方法の概要を示す。 １ ・・・・・・ ［Ｌ−２ポリペプチドをコードする
ＤＮＡ ２ ・・・・・・ ＩＬ−２ポリペプチドを細胞外へ分
泌させるだめのポリペプチドを コードするＤＮＡ ３ ・・・・・・ ＩＬ−２ポリペプチドをコードしな
いＤＮＡ ４ ・・・・・・ ヒトインターフェロンβポリペプチ
ドをコードするＤＮＡ
Claims (4)
- （１）インターロイキン２ポリペプチドをコードするＤ
ＮＡの３′末端に【塩基配列があります】塩基配列を有
するＤＮＡ断片。 - （２）インターロイキン２ポリペプチドをコードするＤ
ＮＡが 【塩基配列があります】 である特許請求の範囲第（１）項記載のＤＮＡ断片。 - （３）インターロイキン２ポリペプチドをコードするＤ
ＮＡ断片を組み込んだ組み換え体ＤＮＡ。 - （４）組み換え体ＤＮＡがプラスミド ｐＴｈ ＩＬ２
−ΔＳＢである特許請求の範囲第（３）項記載の組み換
え体ＤＮＡ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8889685A JPS61247387A (ja) | 1985-04-26 | 1985-04-26 | インタ−ロイキン２ポリペプチドをコ−ドするｄｎａ断片および該ｄｎａ断片を組み込んだ組み換え体ｄｎａ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8889685A JPS61247387A (ja) | 1985-04-26 | 1985-04-26 | インタ−ロイキン２ポリペプチドをコ−ドするｄｎａ断片および該ｄｎａ断片を組み込んだ組み換え体ｄｎａ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61247387A true JPS61247387A (ja) | 1986-11-04 |
Family
ID=13955725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8889685A Pending JPS61247387A (ja) | 1985-04-26 | 1985-04-26 | インタ−ロイキン２ポリペプチドをコ−ドするｄｎａ断片および該ｄｎａ断片を組み込んだ組み換え体ｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61247387A (ja) |
-
1985
- 1985-04-26 JP JP8889685A patent/JPS61247387A/ja active Pending
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