JPS61128889A - 組換えｄｎａ及び該ｄｎａによる形質転換体 - Google Patents
組換えｄｎａ及び該ｄｎａによる形質転換体Info
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- JPS61128889A JPS61128889A JP25098884A JP25098884A JPS61128889A JP S61128889 A JPS61128889 A JP S61128889A JP 25098884 A JP25098884 A JP 25098884A JP 25098884 A JP25098884 A JP 25098884A JP S61128889 A JPS61128889 A JP S61128889A
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- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
- C12N9/6462—Plasminogen activators u-Plasminogen activator (3.4.21.73), i.e. urokinase
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、組換えＤＮＡ、形質転換体に関する。
更に詳しくは、インターフェロン（ＩＦＮという）をコ
ードするＤＮＡとヒトウロキナーゼをコードするＤＮＡ
とを連結したＤＮＡを含有することを特徴とする組換え
ＤＮＡ、及び当該組換えＤＮＡで形質転換された形質転
換体に関する。
ードするＤＮＡとヒトウロキナーゼをコードするＤＮＡ
とを連結したＤＮＡを含有することを特徴とする組換え
ＤＮＡ、及び当該組換えＤＮＡで形質転換された形質転
換体に関する。
ウロキナーゼは、ヒト尿より得られるブラスミノーゲン
アクチベータで、各種血栓や塞栓性疾患の治療および制
癌剤との併用などに用いられている。
アクチベータで、各種血栓や塞栓性疾患の治療および制
癌剤との併用などに用いられている。
ＴＦＮは、抗ウィルス活性、抗！Ｉａ瘍活性など多面的
生物活性を有する蛋白質で、生体防御機構の重要な役割
を担っている。ＩＦＮは、抗原性の性質から、α、β、
γ型に分類されている。
生物活性を有する蛋白質で、生体防御機構の重要な役割
を担っている。ＩＦＮは、抗原性の性質から、α、β、
γ型に分類されている。
本発明の目的は、遺伝子工学的手法を用いて、１、ＦＮ
をコードするＤＮＡとウロキナーゼをコードするＤＮＡ
を融合し、さらに融合蛋白質を得ることにより、これら
の蛋白質の性質を同時に利用することのできる医薬品を
堤供しようとするものである。
をコードするＤＮＡとウロキナーゼをコードするＤＮＡ
を融合し、さらに融合蛋白質を得ることにより、これら
の蛋白質の性質を同時に利用することのできる医薬品を
堤供しようとするものである。
本発明者らは、遺伝子組換えによって、かかる融合蛋白
質を得るべく、種々研究を重ねた結果、ＩＦＮをコード
するＤＮＡとヒトウロキナーゼをコー「するＤＮＡとを
連結し、新規ハイブリッド遺伝子を得ることに成功し、
更に当該ＤＮＡを含有する組換えＤＮＡを宿主に挿入し
、形質転換体を得、これによって発現された蛋白質がＩ
ＦＮとヒトウロキナーゼとの活性を有することを見出し
、本発明を完成した。
質を得るべく、種々研究を重ねた結果、ＩＦＮをコード
するＤＮＡとヒトウロキナーゼをコー「するＤＮＡとを
連結し、新規ハイブリッド遺伝子を得ることに成功し、
更に当該ＤＮＡを含有する組換えＤＮＡを宿主に挿入し
、形質転換体を得、これによって発現された蛋白質がＩ
ＦＮとヒトウロキナーゼとの活性を有することを見出し
、本発明を完成した。
Ｃ問題点を解決するための手段〕
本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものであり
、ＩＦＮをコードするＤＮＡとヒトウロキナーゼをコー
］するＤＮＡの連結ＤＮＡを挿入することを特徴とする
組換えＤＮＡおよび当該組換えＤＮＡで形質転換された
形質転換体に関する。
、ＩＦＮをコードするＤＮＡとヒトウロキナーゼをコー
］するＤＮＡの連結ＤＮＡを挿入することを特徴とする
組換えＤＮＡおよび当該組換えＤＮＡで形質転換された
形質転換体に関する。
ＩＦＮとしては、α、β、γのいずれでもよいが、好ま
しくは、ＩＦＮ−α、より好ましくは、ＩＦＮ−α２が
用いられる。そのｃＤＮＡの調製法としては、たとえば
、ＩＦＮ−αは特開昭５６−１５０１００、ＩＦＮ−β
は特開昭５６−６３９９６ ニ既に開示されている。
しくは、ＩＦＮ−α、より好ましくは、ＩＦＮ−α２が
用いられる。そのｃＤＮＡの調製法としては、たとえば
、ＩＦＮ−αは特開昭５６−１５０１００、ＩＦＮ−β
は特開昭５６−６３９９６ ニ既に開示されている。
また、ヒトウロキナーゼのｃＤＮＡの調製法としては、
特開昭５Ｌ−３７１１９にやはり開示されている。
特開昭５Ｌ−３７１１９にやはり開示されている。
これらの調製されたｃＤＮＡは、そのまま、あるいは適
当な制限酵素により一部を切り出した後、ＩＦＮとヒト
ウロキナーゼの両ｃＤＮＡを連結することにより、本発
明の連結ＤＮＡが得られる。
当な制限酵素により一部を切り出した後、ＩＦＮとヒト
ウロキナーゼの両ｃＤＮＡを連結することにより、本発
明の連結ＤＮＡが得られる。
なお、その連結は、ＩＦＮｃＤＮＡ−３”側とヒＩ・ウ
ロキナーゼｃＤＮＡ−５’側の連結、あるいは■ＦＮｃ
ＤＮＡ−５°側とヒトウロキナーゼｃＤＮＡ−３゛側の
連結のいずれでもよい。
ロキナーゼｃＤＮＡ−５’側の連結、あるいは■ＦＮｃ
ＤＮＡ−５°側とヒトウロキナーゼｃＤＮＡ−３゛側の
連結のいずれでもよい。
本発明のＤＮＡ中、たとえばウロキナーゼとＩＦＮ−α
２のバイブリソ１ζ遺伝子の構造は、第１図に示したと
おりである。
２のバイブリソ１ζ遺伝子の構造は、第１図に示したと
おりである。
第１図のハイブリット遺伝子ば、全長１４］９ ｂｐで
、そのうちＩＦＮ−α２遺伝子が４５０ｂｐ、ウロキナ
ーゼ遺伝子が９６９ｈｐから構成されている。
、そのうちＩＦＮ−α２遺伝子が４５０ｂｐ、ウロキナ
ーゼ遺伝子が９６９ｈｐから構成されている。
このハイブリッド遺伝子がコードする融合蛋白は、ＩＦ
Ｎ−α２の１６５アミノ酸のうちＮ末端を含む１４９ア
ミノ酸を有し、又ウロキナーゼ４］１アミノ酸のうちＣ
末端を含む３２３アミノ酸を有している。この３２３ア
ミノ酸のなかには、低分子ウロキナーゼを構成する２５
３アミノ酸を全て含んでいる。また、このハイブリッド
遺伝子の５゛末には、翻訳開始コドンであるＡＴＧがつ
いている。
Ｎ−α２の１６５アミノ酸のうちＮ末端を含む１４９ア
ミノ酸を有し、又ウロキナーゼ４］１アミノ酸のうちＣ
末端を含む３２３アミノ酸を有している。この３２３ア
ミノ酸のなかには、低分子ウロキナーゼを構成する２５
３アミノ酸を全て含んでいる。また、このハイブリッド
遺伝子の５゛末には、翻訳開始コドンであるＡＴＧがつ
いている。
当該ＤＮＡは、Ｉ Ｆ Ｎ −α２０）Ｎ末端から１５
０５０番目のアミノ酸とウロキナーゼの８９番目からＣ
末端までのアミノ酸の合計４７３個のアミノ酸からなる
融合蛋白をコードしている。
０５０番目のアミノ酸とウロキナーゼの８９番目からＣ
末端までのアミノ酸の合計４７３個のアミノ酸からなる
融合蛋白をコードしている。
ハイブリッド遺伝子のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列は
、第２図に示した通りである。
、第２図に示した通りである。
当８亥ＤＮＡば、プロモーター及びＳＤ（シャイン ア
ンド ダルガン）配列の下流に連結することが好ましい
。プロモーターとしては、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃ
プロモーター、アミラーゼプロモーター、Ｓν４０プロ
モーター、λフアージプロモーター及びそれらのハイブ
リッドプロモーター等が挙げられる。
ンド ダルガン）配列の下流に連結することが好ましい
。プロモーターとしては、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃ
プロモーター、アミラーゼプロモーター、Ｓν４０プロ
モーター、λフアージプロモーター及びそれらのハイブ
リッドプロモーター等が挙げられる。
当該ＤＮＡは、適当なヘクターと連結し、組換えＤＮＡ
が得られる。ヘクターとしては、例えばｐＢＲ３２２、
ｐｕｃ ９等が挙げられる。
が得られる。ヘクターとしては、例えばｐＢＲ３２２、
ｐｕｃ ９等が挙げられる。
当該組換えＤＮＡを宿主に挿入して形質転換体が得られ
る。宿主としては、たとえば大腸菌、枯草菌、酵母、動
物細胞等が挙げられる。
る。宿主としては、たとえば大腸菌、枯草菌、酵母、動
物細胞等が挙げられる。
このようにして得られた形質転換体を公知の培地で培養
する。培養後、公知の方法で菌体を集め、たとえば緩衝
液に懸濁させた後、菌体を破壊し、遠心分離により上清
を得る。
する。培養後、公知の方法で菌体を集め、たとえば緩衝
液に懸濁させた後、菌体を破壊し、遠心分離により上清
を得る。
この上清中の融合蛋白質のＩＦＮ活性は、たとえば、Ｐ
Ｌ−３ｉｎｄｖｉｓ ｖｉｒｕｓ系のＣＰＦ、阻止法に
ょって測定し、ウロキナーゼ活性は、たとえば、フィブ
リン平板法Ｃアストラノプら＾ｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ。
Ｌ−３ｉｎｄｖｉｓ ｖｉｒｕｓ系のＣＰＦ、阻止法に
ょって測定し、ウロキナーゼ活性は、たとえば、フィブ
リン平板法Ｃアストラノプら＾ｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、、 ４凱３４６−３５１． （１９５
２） ）で測定できる。
２） ）で測定できる。
本発明の組換えＤＮＡ及び形質転換体から得られるＩＦ
Ｎ−ヒトウロキナーゼ融合蛋白質は、ＩＦＮとヒトウロ
キナーゼの両者の生理活性を有しており、両帯白質の性
質を同時に利用できる医薬品として有用なものである。
Ｎ−ヒトウロキナーゼ融合蛋白質は、ＩＦＮとヒトウロ
キナーゼの両者の生理活性を有しており、両帯白質の性
質を同時に利用できる医薬品として有用なものである。
以下、実施例を以て、本発明をより具体的に説明するが
、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１：ＩＦＮ−αｚ発現ヘクターｐｌα２ｔｒｐ
１の作製 概略を第３図に示す。
１の作製 概略を第３図に示す。
特開昭５６−１５０１００の方法に準じて、ＩＦＮ〜α
２をコー１′するｃＤＮ、Ａ断片を得た。次に、ＡＴＧ
の結合した成熟ＩＦＮ−α２遺伝子を第４図の方法によ
り作製した。得られたＤＮＡ断片（８８３ｂｐ）の制限
酵素地図を第５図に示す。
２をコー１′するｃＤＮ、Ａ断片を得た。次に、ＡＴＧ
の結合した成熟ＩＦＮ−α２遺伝子を第４図の方法によ
り作製した。得られたＤＮＡ断片（８８３ｂｐ）の制限
酵素地図を第５図に示す。
ｐＹＮ６ （特願昭５９−１８１３３ ）をＥｃｏＲＩ
で消化した後、Ｂ Ａ’Ｐ （Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａ
ｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔ−ａｓｅ ）処理し
、さらにＢａｍ１ｌ Ｉで消化した。反応液を６％ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により、目的
の６９ｂｐの断片を単離した。
で消化した後、Ｂ Ａ’Ｐ （Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａ
ｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔ−ａｓｅ ）処理し
、さらにＢａｍ１ｌ Ｉで消化した。反応液を６％ポリ
アクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により、目的
の６９ｂｐの断片を単離した。
この６９ｂｐの断片と、ＩＦＮ−α２遺伝子を含有する
８’８３ｂｐの断片を連結し、５％ＰＡＧＥで目的の９
５２ｂρに相当する断片を単離した。
８’８３ｂｐの断片を連結し、５％ＰＡＧＥで目的の９
５２ｂρに相当する断片を単離した。
得られた断片をｐＢＲ３２２のＲｃｏＲＩ−Ｐｓｔ Ｉ
断片（３，６１０ｂｐ）と連結し、旦、蛋ｉ ＲＲＩを
形質転換した。
断片（３，６１０ｂｐ）と連結し、旦、蛋ｉ ＲＲＩを
形質転換した。
得られたテトラサイクリン耐性の形質転換株からプラス
ミドを抽出し、種々の制限酵素で分析したところ、目的
のプラスミドｐｌαｚ ｔｒｐ １ ’（４５６２１）
ｐ）が得られた。
ミドを抽出し、種々の制限酵素で分析したところ、目的
のプラスミドｐｌαｚ ｔｒｐ １ ’（４５６２１）
ｐ）が得られた。
実施例２：ＩＦＮ−α２とウロキナーゼの融合蛋白の作
製 概略を第６図に示す。
製 概略を第６図に示す。
実施例１で得たｐｌα２ｔｒｐ （１０Ｐｇ）を２０
ｕｎｉｔｓの制限酵素旧ｎｄｌｆ＋を用い、′３７°Ｃ
１４時間の反応で完全に切断した後、２ｕｎｉｔｓの制
限酵素Ｂｇｌ ｎを用い、３７°Ｃ１３０分、６０分
、９０分の各反応で部分切断を行う。このＤＮＡ溶液を
５％ポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、１００■
、２．５時間の泳動を行った。
ｕｎｉｔｓの制限酵素旧ｎｄｌｆ＋を用い、′３７°Ｃ
１４時間の反応で完全に切断した後、２ｕｎｉｔｓの制
限酵素Ｂｇｌ ｎを用い、３７°Ｃ１３０分、６０分
、９０分の各反応で部分切断を行う。このＤＮＡ溶液を
５％ポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけ、１００■
、２．５時間の泳動を行った。
泳動終了後、約５２０ｂｐ付近のパンＦを切り取り、ｅ
ｌｅｃｔｒｏ ｅｌｕｔｉｏｎにてＤＮＡを回収する。
ｌｅｃｔｒｏ ｅｌｕｔｉｏｎにてＤＮＡを回収する。
次に、ヒトウロキナーゼ遺伝子を含むプラスミドｐＵＫ
１ （特願昭５９−３７１１９ ） ２ｐｇを１ｌ
ｉｎｄ Ｉｎ（２ｕｎｉ’Ｌｓ）とＢｇｌ Ｈ（２ｕ
ｎｉｔｓ）で重複切断した後、このＤＮＡを１％アガロ
ースゲル電気泳動にかけ、約５．２ＫｂｐのＤ Ｎ Ａ
ハントを切り取り、ｅｌｅｃｔｒ。
１ （特願昭５９−３７１１９ ） ２ｐｇを１ｌ
ｉｎｄ Ｉｎ（２ｕｎｉ’Ｌｓ）とＢｇｌ Ｈ（２ｕ
ｎｉｔｓ）で重複切断した後、このＤＮＡを１％アガロ
ースゲル電気泳動にかけ、約５．２ＫｂｐのＤ Ｎ Ａ
ハントを切り取り、ｅｌｅｃｔｒ。
ｅｌｕｔｉｏｎにて、このｒ）ＮＡを抽出した。
これら２種のＤＮＡを１６℃、−夜のｔｉｇａｔｉｏｎ
（３ｕｎｉｔｓ Ｔａ ＤＮＡ ｌｌ（ｉａｓ
ｅ 、 ｌｉｇａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ（６６
ｍｌ（ｌ・リス塩酸ｐ＋ｎ、６．６．６ ｍＭ ＭｇＣ
Ｉｚ、１１０ ｍＭＤＴＴ 、Ｏ，’５ｍＭ’ＡＴＰ）
反応容量５０ｐａ〕にて連結し、ヘクターｐＲ１１］
ｔ”ｒｐ １を作製した。ここに得られるヘクターは、
ＩＦＮ−α２−ウロキナーゼバイブリソ［遺伝子を含む
ヘクターである。
（３ｕｎｉｔｓ Ｔａ ＤＮＡ ｌｌ（ｉａｓ
ｅ 、 ｌｉｇａｔｉｏｎ ｂｕｆｆｅｒ（６６
ｍｌ（ｌ・リス塩酸ｐ＋ｎ、６．６．６ ｍＭ ＭｇＣ
Ｉｚ、１１０ ｍＭＤＴＴ 、Ｏ，’５ｍＭ’ＡＴＰ）
反応容量５０ｐａ〕にて連結し、ヘクターｐＲ１１］
ｔ”ｒｐ １を作製した。ここに得られるヘクターは、
ＩＦＮ−α２−ウロキナーゼバイブリソ［遺伝子を含む
ヘクターである。
ウロキナーゼ−ＩＦＮ−α２ハイブリッド遺伝子発現ヘ
クターｐＲＩＩ １ ｔｒｐ ］の作成方法の概要は第
６図に示した。
クターｐＲＩＩ １ ｔｒｐ ］の作成方法の概要は第
６図に示した。
得られたｐＨｌｌ １ ｔｒｐ １を有する形質転換体
ｐＲ１１１’ｔｒｐ １／Ｉｆ旧旧株を］Ｏｍｇ／ｍｌ
のテトラサイクリンを含む５ｍ１Ｌ培地（培地１１当た
り１０ｇトリプトン、５ｇ酵母エキス、５ｇ食塩、１ｇ
グルコース：ｐＨ７、ＩＯ’ｐｇ／ｍ■テ（・ラサイク
リン）ニて、３７℃で一夜培養した後、この培養液２ｍ
ｌを２００ｍ１の大腸菌用最小培地（’Ｍ ９培地、０
．５％カザミノ酸、０，５％グルコース、１０’ｐｇ／
ｍｌテトラザイクリン）に移し、３７°Ｃにて培養を行
った。
ｐＲ１１１’ｔｒｐ １／Ｉｆ旧旧株を］Ｏｍｇ／ｍｌ
のテトラサイクリンを含む５ｍ１Ｌ培地（培地１１当た
り１０ｇトリプトン、５ｇ酵母エキス、５ｇ食塩、１ｇ
グルコース：ｐＨ７、ＩＯ’ｐｇ／ｍ■テ（・ラサイク
リン）ニて、３７℃で一夜培養した後、この培養液２ｍ
ｌを２００ｍ１の大腸菌用最小培地（’Ｍ ９培地、０
．５％カザミノ酸、０，５％グルコース、１０’ｐｇ／
ｍｌテトラザイクリン）に移し、３７°Ｃにて培養を行
った。
ＯＤ ６ｏｏ ＝ ０．２付近まで増殖した時点で、β
−インドールアクリル酸（ＩＡＡ）を最終濃度が１０ｐ
ｇ ／ ｍ ＋となるよう添加し、さらに培養を続げた
。
−インドールアクリル酸（ＩＡＡ）を最終濃度が１０ｐ
ｇ ／ ｍ ＋となるよう添加し、さらに培養を続げた
。
ＩＡＡ添加後、２．４．６．８時間目に集菌を行い、菌
体より融合蛋白の抽出を以下のように行った。
体より融合蛋白の抽出を以下のように行った。
培養液ｔ ＯｍｌをＩＯ，０００ｒｐｍ 、５分、Ｑ
’Ｃの遠心にて集菌した後、８ｍｌの３０ｍＭ１・リス
塩酸（ｐｌ（７，５）−３０ｍＭ ＮａＣｊ！４１衝
液で洗浄した。集菌後、」二記緩衝液３．５、ｍｌに懸
濁し、１０ｍｇ／ｍｌリゾチームを４００パ加え、さら
に０．２５Ｍ ＥＤＴ Ａ （ｐｌ＋７．０ ’）を
１００μ加え、軽く攪拌した後、氷上で３０分間放置し
た。次に凍結を５回繰り返して菌体を破壊した。これを
１５．００Ｏｒｐｍ 、 ６０分、０°Ｃの遠心操作に
付して、その上清を取り、融合蛋白を得た。
’Ｃの遠心にて集菌した後、８ｍｌの３０ｍＭ１・リス
塩酸（ｐｌ（７，５）−３０ｍＭ ＮａＣｊ！４１衝
液で洗浄した。集菌後、」二記緩衝液３．５、ｍｌに懸
濁し、１０ｍｇ／ｍｌリゾチームを４００パ加え、さら
に０．２５Ｍ ＥＤＴ Ａ （ｐｌ＋７．０ ’）を
１００μ加え、軽く攪拌した後、氷上で３０分間放置し
た。次に凍結を５回繰り返して菌体を破壊した。これを
１５．００Ｏｒｐｍ 、 ６０分、０°Ｃの遠心操作に
付して、その上清を取り、融合蛋白を得た。
この融合蛋白質のウロキナーゼ活性は、フィブリン平板
法にて測定した（第７図）。ウロキナーゼ活性は、ＩＡ
Ａ添加後、４時間目がピークとなり、４１Ｌｌ／ｍｌで
あった。
法にて測定した（第７図）。ウロキナーゼ活性は、ＩＡ
Ａ添加後、４時間目がピークとなり、４１Ｌｌ／ｍｌで
あった。
一方、大腸菌より産生された融合蛋白質のＩＦＮの生理
活性をＣＰＥ法により測定を行った。その結果、ＩＡＡ
添−加後、２時間目でｌ ’５ ｕｎｉｔｓ、４時間目
で４５’ ｕｎｉｔｓの活性がみられた。
活性をＣＰＥ法により測定を行った。その結果、ＩＡＡ
添−加後、２時間目でｌ ’５ ｕｎｉｔｓ、４時間目
で４５’ ｕｎｉｔｓの活性がみられた。
また、この融合蛋白質をＴＦＮ測定用ＲＰＨＡ試薬、ウ
ロキナーゼ測定用ＲＰＨＡ試薬にて各抗体との反応性の
有無を調べたところ、ＩＦＮ、ウロキナーゼの抗体とも
に反応がみられた。
ロキナーゼ測定用ＲＰＨＡ試薬にて各抗体との反応性の
有無を調べたところ、ＩＦＮ、ウロキナーゼの抗体とも
に反応がみられた。
ＩＦＮ、ウロキナーセ測定用ＲＰ ｌ（Ａ試薬は、とも
にミ［′り十字製のものを用いた。
にミ［′り十字製のものを用いた。
第１図 ウロキナーゼ（ＵＫ）−１ＦＮ−α２ハイブリ
ノ１−゛遺伝子の構造を示す。 第２図 ウロキナーゼ−ＩＦＮ−α２ハイブリノ１遺伝
子のＤＮＡ配列及びアミノ酸 配列を示す。 第３図 ｐｉα２ ｔｒｐ’ｌの調製の概略を示す。 第４図 ｍａ ＬｕｒｅＩ Ｆ Ｎ 、’−ｒｘ ｚの
作製法を示す。 第５図 ｍａｔｕｒｅ ｌ Ｆ Ｎ ｆｆｚの制限酵
素切断地図を示す。 第６図 ウロキナーゼ−＋ＦＮ−α２ハイブリット遺伝
子発現ヘクターの作製の概略 図を示す。 第７図 大腸菌の増殖と融合蛋白質の産生量の経時変化
を示す。白丸はウロキナーゼ 活性を、黒丸は増殖カーブである。 特許出願人 株式会社 ミトリ＋字 寝で３品イＥじ冑旨舅ｇと≧院じ５にｌ淀てコマ罎嶌３
ポ ３安８ｒ已壬し出訃こ８に寝；ｂ♀覧きｇ男ＰＹ
耳Ｂ墓牢冨ぐくφ く」 り乙 Ｑ＜ く− ヒα ω
Φ りく ←υベワ臼駐顔絋鉱ドに９運写う潜 實Ｉｌ！ｌ−ぼし淀占暮４ぼし１ｂオキδ妥已γ５４
筺ツ ａ品吊ギ８イ 曜萎し≦８に５５８γ Ｅ、Ｅ
冨イ 已讃ご招１１ しづ マ罐警計躍訝８ くス く 寝Ｅ ８ ＠Φ Φ Σ３ヲＩロ顔ミトロ窟フお閣附 ；壮昌妥こ〆＊撃斗５陀臼出呂窮 ！−１を彎殊肩にＪ嗣Ｈ止［司 Ｉ嘗羨嗣Ｉざゴトｇ５ｆｆｌ翁詠Ｅ ｂ １ｉＰｕｕじ
噂ｑ茹檜遼灰Ｖ駐じゴ滅姿旨迄 弱亘二曹配ヰに奇ｒ翳嚢訛眠旺富省 ｕ ’ｊＬＦ酢属壺Ｉ茗蒜郭馨エヨ眠暇不、ｌＪ８ジβ
乙８Ｊ１５出ポじとじ１−＝出ｄ呂イ訃５票「χｌ嗣哩
草ざ５３ｆｆｉ眠しトｒ豆ぎ］間開ど司Ｈ３’ｊｅ非渾
市繻調 手続（甫正書（自発）
ノ１−゛遺伝子の構造を示す。 第２図 ウロキナーゼ−ＩＦＮ−α２ハイブリノ１遺伝
子のＤＮＡ配列及びアミノ酸 配列を示す。 第３図 ｐｉα２ ｔｒｐ’ｌの調製の概略を示す。 第４図 ｍａ ＬｕｒｅＩ Ｆ Ｎ 、’−ｒｘ ｚの
作製法を示す。 第５図 ｍａｔｕｒｅ ｌ Ｆ Ｎ ｆｆｚの制限酵
素切断地図を示す。 第６図 ウロキナーゼ−＋ＦＮ−α２ハイブリット遺伝
子発現ヘクターの作製の概略 図を示す。 第７図 大腸菌の増殖と融合蛋白質の産生量の経時変化
を示す。白丸はウロキナーゼ 活性を、黒丸は増殖カーブである。 特許出願人 株式会社 ミトリ＋字 寝で３品イＥじ冑旨舅ｇと≧院じ５にｌ淀てコマ罎嶌３
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市繻調 手続（甫正書（自発）
Claims (4)
- （１）インターフェロンをコードするＤＮＡとヒトウロ
キナーゼをコードするＤＮＡの連結ＤＮＡを挿入するこ
とを特徴とする組換えＤＮＡ。 - （２）インターフェロンがインターフェロンα＿２であ
る特許請求の範囲第（１）項記載のＤＮＡ。 - （３）式（ I ）で示される塩基配列を含有することを
特徴とする特許請求の範囲第（２）項記載のＤＮＡ。 【遺伝子配列があります】 - （４）インターフェロンをコードするＤＮＡとヒトウロ
キナーゼをコードするＤＮＡの連結ＤＮＡを挿入した組
換えＤＮＡにより形質転換された形質転換体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25098884A JPS61128889A (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | 組換えｄｎａ及び該ｄｎａによる形質転換体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25098884A JPS61128889A (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | 組換えｄｎａ及び該ｄｎａによる形質転換体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61128889A true JPS61128889A (ja) | 1986-06-16 |
Family
ID=17215994
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25098884A Pending JPS61128889A (ja) | 1984-11-27 | 1984-11-27 | 組換えｄｎａ及び該ｄｎａによる形質転換体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61128889A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0225579A2 (en) * | 1985-12-02 | 1987-06-16 | G.D. Searle & Co. | Covalently linked polypeptide cell modulators |
| JPS63301898A (ja) * | 1987-04-16 | 1988-12-08 | ヘキスト、アクチエンゲゼルシャフト | 二機能性タンパク質 |
| US5567611A (en) * | 1989-04-19 | 1996-10-22 | Cetus Onocology Corporation | Multifunctional M-CSF proteins and genes encoding therefor |
-
1984
- 1984-11-27 JP JP25098884A patent/JPS61128889A/ja active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| EP0225579A2 (en) * | 1985-12-02 | 1987-06-16 | G.D. Searle & Co. | Covalently linked polypeptide cell modulators |
| JPS62282593A (ja) * | 1985-12-02 | 1987-12-08 | ジ−．デイ−．サ−ル アンド カンパニ− | 共有結合した細胞調節ポリペプチド |
| JPS63301898A (ja) * | 1987-04-16 | 1988-12-08 | ヘキスト、アクチエンゲゼルシャフト | 二機能性タンパク質 |
| JP2667193B2 (ja) * | 1987-04-16 | 1997-10-27 | ヘキスト、アクチエンゲゼルシャフト | 二機能性タンパク質 |
| US5567611A (en) * | 1989-04-19 | 1996-10-22 | Cetus Onocology Corporation | Multifunctional M-CSF proteins and genes encoding therefor |
| US6022953A (en) * | 1989-04-19 | 2000-02-08 | Chiron Corporation | Multifunctional M-CSF proteins and genes encoding therefor |
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