JPS61132178A - 変異バチルス・ズブチリス - Google Patents
変異バチルス・ズブチリスInfo
- Publication number
- JPS61132178A JPS61132178A JP25421584A JP25421584A JPS61132178A JP S61132178 A JPS61132178 A JP S61132178A JP 25421584 A JP25421584 A JP 25421584A JP 25421584 A JP25421584 A JP 25421584A JP S61132178 A JPS61132178 A JP S61132178A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- cyclodextrin glucanotransferase
- mutant
- phage
- bacillus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
- C12N9/1074—Cyclomaltodextrin glucanotransferase (2.4.1.19)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
一般にサイクロデキストリン グルカノトランスフェラ
ーゼ生産菌として、バチルス属やクレプンラ属の細菌な
どが用いられてきた。しかし、その生産は微量で、かつ
不安定であり、また培地中Ｋｔまれるきよう雑物が多く
、サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ
の分離精製が困難であった。本発明者らは、バチルス・
マセランスのサイクロデキストリン グルカノトランス
フェラーゼ構造遺伝子をバチルス・ズブーチリス内でり
Ｉ】−７化することに成功し、この変異株を培養したと
ころ、安定に短時間でサイクロデキストリン グルカノ
トランスフェラーゼを生産させることができたものであ
る。本発明は、サイクロデキストリン グルカノトラン
スフェラーゼを生産するバチルス串ズデチリスである。
ーゼ生産菌として、バチルス属やクレプンラ属の細菌な
どが用いられてきた。しかし、その生産は微量で、かつ
不安定であり、また培地中Ｋｔまれるきよう雑物が多く
、サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ
の分離精製が困難であった。本発明者らは、バチルス・
マセランスのサイクロデキストリン グルカノトランス
フェラーゼ構造遺伝子をバチルス・ズブーチリス内でり
Ｉ】−７化することに成功し、この変異株を培養したと
ころ、安定に短時間でサイクロデキストリン グルカノ
トランスフェラーゼを生産させることができたものであ
る。本発明は、サイクロデキストリン グルカノトラン
スフェラーゼを生産するバチルス串ズデチリスである。
本発明に用いるサイクロデキストリン グルカノトラン
ス７エラーｆを生産するバチルス−ズブチリスは次のよ
うにして創製することができる。
ス７エラーｆを生産するバチルス−ズブチリスは次のよ
うにして創製することができる。
サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ遺
伝子の調製は次のようにする。
伝子の調製は次のようにする。
バチルス・マセランスＩＡＭ１２４３株はサイクロデキ
ストリ／ グルカノトランスフェラーゼを菌体外に分泌
する細菌として知られている。本薗体から５ａｉｔｏ
、 Ｍｉｕｒａ法（５ａｉｔｏ 、 Ｈ，ａｎｄ Ｍｉ
ｕｒａ 、 Ｋ 、 。
ストリ／ グルカノトランスフェラーゼを菌体外に分泌
する細菌として知られている。本薗体から５ａｉｔｏ
、 Ｍｉｕｒａ法（５ａｉｔｏ 、 Ｈ，ａｎｄ Ｍｉ
ｕｒａ 、 Ｋ 、 。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ 、 Ａｃｔａ 、
７２ 、６１９ 、 （１９６４））により染色体Ｄ
ＮＡを調製する。これを制限酵素５ａｕ３Ａ１で部分分
解し、分解物からンヨ糖密度勾配超遠心法により約２Ｋ
ｂ以上の染色体ＤＮＮ唐金分離する。
７２ 、６１９ 、 （１９６４））により染色体Ｄ
ＮＡを調製する。これを制限酵素５ａｕ３Ａ１で部分分
解し、分解物からンヨ糖密度勾配超遠心法により約２Ｋ
ｂ以上の染色体ＤＮＮ唐金分離する。
別に、ファージλＤ６９ＤＮＡを制限酵素Ｂ ａ ｍＨ
ｌで切断し、これに先の染色体ＤＮＡ断片を混合し、更
にＴ４ＤＮＡすが一ゼを添加して、連結処理をする。
ｌで切断し、これに先の染色体ＤＮＡ断片を混合し、更
にＴ４ＤＮＡすが一ゼを添加して、連結処理をする。
・この処理液を用いてイン ビトロ パツケイジフグ法
（Ｈｏｒｎ 、 Ｂ 、 、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏ１９ｇｙ 、 ６８ 。
（Ｈｏｒｎ 、 Ｂ 、 、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏ１９ｇｙ 、 ６８ 。
２９９、（１９７９））Ｋよりλフアージ粒子を形成し
、このλフアージ粒子をエシェリヒア・コリＳＭ３２の
培養菌懸濁液に添加してサイクロデキストリングルカノ
トランスフェラーゼ生産能を保有する特殊形質導入ファ
ージを得る。得られた特殊形質導入ファージ粒子より、
サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ遺
伝子を含むλファージＤＮＡｔ−調製する。このＤＮＡ
を制限酵素５ａｕ３ＡＩで部分分解し、ゲラスミＰｐＵ
Ｂ１１０の制限酵素ＢａｍＨＩ切断部分にＴａ２）が−
ゼを用いて結合し、・・イブリッド プラスミー混合物
を得る。この混合物を用いてバチルス拳ズブチリスへプ
ロトプラスト形質導入法（Ｃｈａｎｇ＋ Ｓ、 ａｎｄ
ｃｏｈｅｎ、 Ｓ、Ｎ、。
、このλフアージ粒子をエシェリヒア・コリＳＭ３２の
培養菌懸濁液に添加してサイクロデキストリングルカノ
トランスフェラーゼ生産能を保有する特殊形質導入ファ
ージを得る。得られた特殊形質導入ファージ粒子より、
サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ遺
伝子を含むλファージＤＮＡｔ−調製する。このＤＮＡ
を制限酵素５ａｕ３ＡＩで部分分解し、ゲラスミＰｐＵ
Ｂ１１０の制限酵素ＢａｍＨＩ切断部分にＴａ２）が−
ゼを用いて結合し、・・イブリッド プラスミー混合物
を得る。この混合物を用いてバチルス拳ズブチリスへプ
ロトプラスト形質導入法（Ｃｈａｎｇ＋ Ｓ、 ａｎｄ
ｃｏｈｅｎ、 Ｓ、Ｎ、。
Ｍｏｌ 、 Ｇｅｎ 、 Ｇｅｎｅｔ 、１幻ｉ、１１
１．（１９７９））により形質転換する。形質転換株の
中からカナマイノン耐性（ｌＯμｇ／ｍｌ）かつサイク
ロデキストリングルカノトランスフェラーゼ活性のある
株を選択する。この菌株を培養し、培養菌体からゲラス
ミｖ ９ＤＳ １０を得た。
１．（１９７９））により形質転換する。形質転換株の
中からカナマイノン耐性（ｌＯμｇ／ｍｌ）かつサイク
ロデキストリングルカノトランスフェラーゼ活性のある
株を選択する。この菌株を培養し、培養菌体からゲラス
ミｖ ９ＤＳ １０を得た。
シラスミｒｐＤｓ１０のフィシカルマツプ（制限酵素切
断地図）は第４図に示した通りであり、白ぬきの部分は
ベクターｐＵＢ１１０由来、黒塗りの部分は染色体切断
部分で、このクローン化された断片の大きさは約２．２
Ｋｂである。ここに得られる形質転換体はサイクロデキ
ストリン グルカノトランスフェラーゼを菌体外に安定
によく分泌する優れた変異バチルス・ズブチリスである
。本菌はバチルス・ズブチリスＮＡμ−Ｐｒ）ＳＩＯ（
ＦＬＦＬＭ Ｐ−７１！；υとして微工研に寄託されて
いる。
断地図）は第４図に示した通りであり、白ぬきの部分は
ベクターｐＵＢ１１０由来、黒塗りの部分は染色体切断
部分で、このクローン化された断片の大きさは約２．２
Ｋｂである。ここに得られる形質転換体はサイクロデキ
ストリン グルカノトランスフェラーゼを菌体外に安定
によく分泌する優れた変異バチルス・ズブチリスである
。本菌はバチルス・ズブチリスＮＡμ−Ｐｒ）ＳＩＯ（
ＦＬＦＬＭ Ｐ−７１！；υとして微工研に寄託されて
いる。
この変異バチルス・ズブチリスはサイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼの生産性において全く新
規であり、サイクロデキストリングルカノトランスフェ
ラーゼの工業生産上極めて有用である。
グルカノトランスフェラーゼの生産性において全く新
規であり、サイクロデキストリングルカノトランスフェ
ラーゼの工業生産上極めて有用である。
次に本発明の実施例及び試験例を示す。
実ｍ 例 変異バチルス・ズブチリスの創製バチルス・
マセランスＩＡＭ１２４３＆をフスマ培Ｊｌｋ（６％７
２？抽出ｉ、０．５％マルト エキストラクト、０．５
％イースト エキストラクト、０．５％Ｉリペデトン、
０．０５％塩化力ルクウム）で４８時間培養し、遠心分
離にて集菌、洗浄して得られた菌体から５ａｉｔｏ ＋
Ｍｉｕｒａの方法（５ａｉｔｏ、Ｈ，ａｎｄＭｉｕｒ
ａ、に、 、Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃ
ｔａ、７２ 、６１９ 。
マセランスＩＡＭ１２４３＆をフスマ培Ｊｌｋ（６％７
２？抽出ｉ、０．５％マルト エキストラクト、０．５
％イースト エキストラクト、０．５％Ｉリペデトン、
０．０５％塩化力ルクウム）で４８時間培養し、遠心分
離にて集菌、洗浄して得られた菌体から５ａｉｔｏ ＋
Ｍｉｕｒａの方法（５ａｉｔｏ、Ｈ，ａｎｄＭｉｕｒ
ａ、に、 、Ｂｉｏｃｈｉｍ、 Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃ
ｔａ、７２ 、６１９ 。
（１９６４））によって染色体ＤＮＡを分離し、これを
トリス塩酸・ＥＤＴＡ緩衝液に溶解し、制限酵素５ａｕ
３ＡＩ（宝酒造社製品）を添加して、３７℃で部分分解
した後、分解物からショ糖密度勾配超遠心法で約２Ｋｂ
以上の染色体断片を分離、取得した。
トリス塩酸・ＥＤＴＡ緩衝液に溶解し、制限酵素５ａｕ
３ＡＩ（宝酒造社製品）を添加して、３７℃で部分分解
した後、分解物からショ糖密度勾配超遠心法で約２Ｋｂ
以上の染色体断片を分離、取得した。
用いた７アージベクターλＤ６９（東京大学医科学研究
所より分譲）の概略開裂地図は第１図に示した通りであ
り、このファージλＤ６９は３８．８Ｋｂで制限酵素Ｂ
ａｍＨＩによって１箇所切断されるものである。
所より分譲）の概略開裂地図は第１図に示した通りであ
り、このファージλＤ６９は３８．８Ｋｂで制限酵素Ｂ
ａｍＨＩによって１箇所切断されるものである。
ＢａｍＨＩで１箇所切断したλＤ６９と前記のバチルス
・マセランスＩＡＭ１２４３株から得られた約２Ｋｂ以
上の染色体断片を混合し、Ｔ４ＤＮＡ ＩＪが−ゼを添
加して連結処理した（ Ｗｅｉｓｓ、Ｂ、＋５ａｂｌｏ
ｎ、Ａ、Ｊ、。
・マセランスＩＡＭ１２４３株から得られた約２Ｋｂ以
上の染色体断片を混合し、Ｔ４ＤＮＡ ＩＪが−ゼを添
加して連結処理した（ Ｗｅｉｓｓ、Ｂ、＋５ａｂｌｏ
ｎ、Ａ、Ｊ、。
Ｌｉｖｅ、Ｔ、Ｒ，、Ｆａｒｅｅｄ、Ｇ、Ｃ，ａｎｄＲ
ｉｃｈａｒｄｓｏｎ、Ｃ，Ｃ，、Ｊ 。
ｉｃｈａｒｄｓｏｎ、Ｃ，Ｃ，、Ｊ 。
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２４３，４５４３．（１９６８
））。処理液を。
））。処理液を。
イン ビトロ パ・ノケイジング キット（宝酒造社製
品）に添加してイン ビトロ パッケイジフグ法（Ｈｏ
ｒｎ 、 Ｂ、 、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ 、 ６旦、 ２９９゜（１９７９））によ
り当該ＤＮＡをファージ粒子に導入した。このファージ
粒子をエシェリヒア・コリ５Ｍ３２の菌体懸濁液に添加
し、１チ可溶性澱粉。
品）に添加してイン ビトロ パッケイジフグ法（Ｈｏ
ｒｎ 、 Ｂ、 、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ
ｏｌｏｇｙ 、 ６旦、 ２９９゜（１９７９））によ
り当該ＤＮＡをファージ粒子に導入した。このファージ
粒子をエシェリヒア・コリ５Ｍ３２の菌体懸濁液に添加
し、１チ可溶性澱粉。
１．２％の寒天を含むλ培地（バクトトリプト７１０
ｔ 、 ＮａＣｌ２．５Ｐを水！ｔに溶解）に添加して
３７℃で培養し、出現したプラークにヨウ素液を噴霧し
て、ヨウ素反応を起こさなかったファージをサイクロデ
キストリン グルカノトランスフェラーゼ生産ファージ
として分離することができた。
ｔ 、 ＮａＣｌ２．５Ｐを水！ｔに溶解）に添加して
３７℃で培養し、出現したプラークにヨウ素液を噴霧し
て、ヨウ素反応を起こさなかったファージをサイクロデ
キストリン グルカノトランスフェラーゼ生産ファージ
として分離することができた。
得られたサイクロデキストリ／ グルカノトランスフェ
ラーゼ生産ファージを単離し、これをエシェリヒア・コ
リ５Ｍ３２とともにλ培地で３７°Ｃで培養した。培養
液を遠心分離して宿主菌体を除き。
ラーゼ生産ファージを単離し、これをエシェリヒア・コ
リ５Ｍ３２とともにλ培地で３７°Ｃで培養した。培養
液を遠心分離して宿主菌体を除き。
ポリエチレングリコールを加えてファージ粒子を凝集さ
せたのち、遠心分離によってファー２粒子を集め、新規
なファージを得た。このファージをλＣＤと名づけた。
せたのち、遠心分離によってファー２粒子を集め、新規
なファージを得た。このファージをλＣＤと名づけた。
このファージ粒子を、５０チホルムアミドを含むファー
ジ懸濁用緩衝液に対して透析し、λＣＤファージＤＮＡ
を得た。ファージλＣＤＤＮＡは４９．８Ｋｂノ大キサ
で、そのフィジカルマツプ（制限酵素切断地図）を第２
図に示す。ここで白ぬきの部分はベクターλＤ６９由来
で、黒塗りの部分は染色体断片部分である。各略記号は
すべて制限酵素である。
ジ懸濁用緩衝液に対して透析し、λＣＤファージＤＮＡ
を得た。ファージλＣＤＤＮＡは４９．８Ｋｂノ大キサ
で、そのフィジカルマツプ（制限酵素切断地図）を第２
図に示す。ここで白ぬきの部分はベクターλＤ６９由来
で、黒塗りの部分は染色体断片部分である。各略記号は
すべて制限酵素である。
このファージλＣＤＤＮＡをｊ２Ｐでラベルし、バチル
ス・マセランス■ＡＭ１２４３株染色体ＤＮＡ１エシェ
リヒア・コリＳＭ３２株染色体ＤＮＡおよびα−アミラ
ーゼ高生産株バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ ） ＮＡ６４染色体ＤＮＡのそれぞ
れのＥｃｏＲＩ分解物とサザンハイプリダイゼーション
（Ｓ ｏｕｔｈｅｒｎ 。
ス・マセランス■ＡＭ１２４３株染色体ＤＮＡ１エシェ
リヒア・コリＳＭ３２株染色体ＤＮＡおよびα−アミラ
ーゼ高生産株バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ ） ＮＡ６４染色体ＤＮＡのそれぞ
れのＥｃｏＲＩ分解物とサザンハイプリダイゼーション
（Ｓ ｏｕｔｈｅｒｎ 。
Ｅ、Ｍ、、Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、９８，５０３．
（１９７５））を行ったところ、エシェリヒア・コリ、
バチルス・ズブチリス染色体ＤＮＡとは全くハイブリダ
イズしなかったが、バチルス・マセランスＩＡＭ１２４
３株の染色体ＤＮＡとは２箇所で特異的にハイブリダイ
ズしており、クローン化した遺伝子はバチルス・マセラ
ンスＩＡＭ１２４３株由来であることが確かめられた。
（１９７５））を行ったところ、エシェリヒア・コリ、
バチルス・ズブチリス染色体ＤＮＡとは全くハイブリダ
イズしなかったが、バチルス・マセランスＩＡＭ１２４
３株の染色体ＤＮＡとは２箇所で特異的にハイブリダイ
ズしており、クローン化した遺伝子はバチルス・マセラ
ンスＩＡＭ１２４３株由来であることが確かめられた。
ここに得られたλＣＤファージＤＮＡを）リス塩酸・Ｅ
ＤＴＡ緩衝液に溶解し、制限酵素５ａｕ３ＡＩ （宝酒
造社製品）を添加し、３７℃で部分分解した。分解物か
らショ糖密度勾配超遠心法で約２Ｋｂ以上の染色体断片
を分離し、取得し、プラスミドｐＵＢ１１０を用いて再
クローン化を図った。
ＤＴＡ緩衝液に溶解し、制限酵素５ａｕ３ＡＩ （宝酒
造社製品）を添加し、３７℃で部分分解した。分解物か
らショ糖密度勾配超遠心法で約２Ｋｂ以上の染色体断片
を分離し、取得し、プラスミドｐＵＢ１１０を用いて再
クローン化を図った。
再クローン化に用いたプラスミドｐＵＢ１１０の概略開
裂地図は第３図に示すが、このプラスミドｐＵＢ１１０
は４．５ Ｋｂで去ナマイシン耐性（Ｋｍ’ ）を有し
、制限酵素ＢａｍＨＩによって１箇所切断されるもので
ある。
裂地図は第３図に示すが、このプラスミドｐＵＢ１１０
は４．５ Ｋｂで去ナマイシン耐性（Ｋｍ’ ）を有し
、制限酵素ＢａｍＨＩによって１箇所切断されるもので
ある。
Ｂ ａ ｍＨＩで１箇所切断したｐＵＢｌｌｏと前記の
λＣＤ７アージから得らｎた約２Ｋｂ以上の染色体断片
を混合し、Ｔ４ＤＮＡ リガーゼを添加して連結処理し
た。この処理液を用いてバチルス・ズブチリスＮＡ６４
株を宿主とするプロトプラスト形質転換法（Ｃｈａｎｇ
＋Ｓ、、Ｃｏｈｅｎ、Ｓ、Ｎ、、Ｍｏ１．ｇｅｎ、Ｇｅ
ｎｅｔ、、１６８゜１１１、（１９７９））を行い、当
該プラスミドを導入した。
λＣＤ７アージから得らｎた約２Ｋｂ以上の染色体断片
を混合し、Ｔ４ＤＮＡ リガーゼを添加して連結処理し
た。この処理液を用いてバチルス・ズブチリスＮＡ６４
株を宿主とするプロトプラスト形質転換法（Ｃｈａｎｇ
＋Ｓ、、Ｃｏｈｅｎ、Ｓ、Ｎ、、Ｍｏ１．ｇｅｎ、Ｇｅ
ｎｅｔ、、１６８゜１１１、（１９７９））を行い、当
該プラスミドを導入した。
得られた形質転換処理菌体を選択培地である可溶性澱粉
１チ、カナマイシン１００μｔ／ａｔ、 寒天０．８％
を含むＤＭ３培地（５チバクトヵザミノ酸１００ａｔ、
１Ｍクエン酸ナトリウム（ｐｉ−１７，３） ５００ｒ
ａｌ 、 ３．５チリン酸水素二カリウム５０ａｔ、
１．５％リン酸二水素カリウム５０ｎｔ／、１０％酵母
エキｘ５０ｘｌ、２０％グルコース２５ｓｒＡ’、ＩＭ
塩化マグネシウム２０ｍ／、２％牛血清アルブミン５ｍ
／を混合）に添加して３７°Ｃで培養し、カナマイシン
耐性株を得た。このカナマイツノ耐性株をカナマイン７
１０μ？／ａｔ、１％可溶性澱粉を含むＬＧ培地（バク
トドリプ） ７１（１，酵母エキス５ｉＰ、Ｎａ（Ｊ５
５’、グルコース２りをｌｔの水に溶解）にて３７°Ｃ
で２４時間培養し、培養液中のサイクロデキストリンの
有無をペーパークロマトクラフィーおよび高速液体クロ
マトグラフィーによって調べた。
１チ、カナマイシン１００μｔ／ａｔ、 寒天０．８％
を含むＤＭ３培地（５チバクトヵザミノ酸１００ａｔ、
１Ｍクエン酸ナトリウム（ｐｉ−１７，３） ５００ｒ
ａｌ 、 ３．５チリン酸水素二カリウム５０ａｔ、
１．５％リン酸二水素カリウム５０ｎｔ／、１０％酵母
エキｘ５０ｘｌ、２０％グルコース２５ｓｒＡ’、ＩＭ
塩化マグネシウム２０ｍ／、２％牛血清アルブミン５ｍ
／を混合）に添加して３７°Ｃで培養し、カナマイシン
耐性株を得た。このカナマイツノ耐性株をカナマイン７
１０μ？／ａｔ、１％可溶性澱粉を含むＬＧ培地（バク
トドリプ） ７１（１，酵母エキス５ｉＰ、Ｎａ（Ｊ５
５’、グルコース２りをｌｔの水に溶解）にて３７°Ｃ
で２４時間培養し、培養液中のサイクロデキストリンの
有無をペーパークロマトクラフィーおよび高速液体クロ
マトグラフィーによって調べた。
ペーパークロマトグラフィーは培養液をｎ−ブタノール
／ｎ−プロパツール／水（３１５／４ ）の溶媒系で６
０’α ２回上昇展開を行ったのち、 ９０％ア七ト
ンのヨウ素溶液にペーパークロマトグラムを浸してサイ
クロデキストリンの呈色を検索し、発色したものをサイ
クロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ分泌味
として分離することができた。
／ｎ−プロパツール／水（３１５／４ ）の溶媒系で６
０’α ２回上昇展開を行ったのち、 ９０％ア七ト
ンのヨウ素溶液にペーパークロマトグラムを浸してサイ
クロデキストリンの呈色を検索し、発色したものをサイ
クロデキストリン グルカノトランスフェラーゼ分泌味
として分離することができた。
得られたサイクロデキストリン グルカノトランスフェ
ラーゼ生産菌株を単離し、これをカナマイシン１０μ２
／−を含むＬＧ培地で３７℃で培養し、培養液を遠心分
離して集菌し、洗浄後、分離菌体からアルカリ抽出法（
Ｂｉｒｎｂｏｉｍ、 Ｈ，Ｃ，ａｎｄ Ｄｏｌｙ 。
ラーゼ生産菌株を単離し、これをカナマイシン１０μ２
／−を含むＬＧ培地で３７℃で培養し、培養液を遠心分
離して集菌し、洗浄後、分離菌体からアルカリ抽出法（
Ｂｉｒｎｂｏｉｍ、 Ｈ，Ｃ，ａｎｄ Ｄｏｌｙ 。
Ｊ、、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ、、７．１５１
３ 、 （１９７９） ）によってプラスミドを分離、
探索して新規なプラスミドを得た。このプラスミドをプ
ラスミドｐＤｓ１０と名づけだ。
３ 、 （１９７９） ）によってプラスミドを分離、
探索して新規なプラスミドを得た。このプラスミドをプ
ラスミドｐＤｓ１０と名づけだ。
プラスミドｐＤｓ１０は６．７Ｋｂの大きさで、そのフ
ィジカルマツプ（制限酵素切断地図）を第４図に示す。
ィジカルマツプ（制限酵素切断地図）を第４図に示す。
ここで白ぬきの部分はベクターｐＵＢ１１０由来で、黒
塗りの部分は染色体断片部分であり、各略記号はすべて
制限酵素である。
塗りの部分は染色体断片部分であり、各略記号はすべて
制限酵素である。
試験例１ サイクロデキストリン グルカノトランスフ
ェラーゼの生産 バチルス・ズブチリスＮＡ６４−ｐＤｓ１０ ｔ−カナ
マイシン１０μ？／ｌｌを含むＬＧ培地を用い、５００
ｍ１容の坂ロフラスコに１００ｘ１分注し、３７℃で３
０時時間表う培養した。その間培養物を１ｄずつ採取し
て、培地中のサイクロデキストリン グルカノトランス
フェラーゼの活性を測定した。
ェラーゼの生産 バチルス・ズブチリスＮＡ６４−ｐＤｓ１０ ｔ−カナ
マイシン１０μ？／ｌｌを含むＬＧ培地を用い、５００
ｍ１容の坂ロフラスコに１００ｘ１分注し、３７℃で３
０時時間表う培養した。その間培養物を１ｄずつ採取し
て、培地中のサイクロデキストリン グルカノトランス
フェラーゼの活性を測定した。
第５図は、サイクロデキストリン グルカノトランスフ
ェラーゼ活性の経時的変化を示すものである。ここでＡ
は菌の生育、Ｂはサイクロデキストリン グルカノトラ
ンスフェラーゼ活性を示している。
ェラーゼ活性の経時的変化を示すものである。ここでＡ
は菌の生育、Ｂはサイクロデキストリン グルカノトラ
ンスフェラーゼ活性を示している。
第５図から明らかなように、サイクロデキストリン グ
ルカノトランスフェラーゼ活性は培養後１２時間で最高
値に達する。
ルカノトランスフェラーゼ活性は培養後１２時間で最高
値に達する。
第１図はファージλＤ６９のフィジカルマツプ（制限酵
素切断地図）、第２図はファージλＣＤのフィジカルマ
ツプ％第３図はプラスミドｐＵＢ１１０のフィンカルマ
ツプ、第４図はｐＤｓｌｏのフィンカルマツプをそれぞ
れ示している。 第５図仕試験例におけるサイクロデキス） ＩＪングル
カノトランスフエラ−ゼ活性の経時変化および菌の生育
を示すグラフである。 特許出願人 農林水産省食品総合研究所長ＢａｍＨＩ 第４図 ８ｇ Ｌｒｌ 手続（甫正占岨発） 昭和６０年１月■０日
素切断地図）、第２図はファージλＣＤのフィジカルマ
ツプ％第３図はプラスミドｐＵＢ１１０のフィンカルマ
ツプ、第４図はｐＤｓｌｏのフィンカルマツプをそれぞ
れ示している。 第５図仕試験例におけるサイクロデキス） ＩＪングル
カノトランスフエラ−ゼ活性の経時変化および菌の生育
を示すグラフである。 特許出願人 農林水産省食品総合研究所長ＢａｍＨＩ 第４図 ８ｇ Ｌｒｌ 手続（甫正占岨発） 昭和６０年１月■０日
Claims (1)
- サイクロデキストリン グルカノトランスフェラーゼを
生産するバチルス・ズブチリス
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25421584A JPS61132178A (ja) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | 変異バチルス・ズブチリス |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25421584A JPS61132178A (ja) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | 変異バチルス・ズブチリス |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61132178A true JPS61132178A (ja) | 1986-06-19 |
| JPH0354551B2 JPH0354551B2 (ja) | 1991-08-20 |
Family
ID=17261857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25421584A Granted JPS61132178A (ja) | 1984-12-03 | 1984-12-03 | 変異バチルス・ズブチリス |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61132178A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2574081A1 (fr) * | 1984-12-03 | 1986-06-06 | Hayashibara Biochem Lab | Polypeptide a activite de cyclomaltodextrine glucanotransferase |
| US5278059A (en) * | 1985-12-04 | 1994-01-11 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaki Kenkyujo | Polypeptide possessing cyclomaltodextrin glucanotransferase activity |
-
1984
- 1984-12-03 JP JP25421584A patent/JPS61132178A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2574081A1 (fr) * | 1984-12-03 | 1986-06-06 | Hayashibara Biochem Lab | Polypeptide a activite de cyclomaltodextrine glucanotransferase |
| US5278059A (en) * | 1985-12-04 | 1994-01-11 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaki Kenkyujo | Polypeptide possessing cyclomaltodextrin glucanotransferase activity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0354551B2 (ja) | 1991-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2003523203A (ja) | Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属の細菌単離体およびそれから単離されたイソマルツロース・シンターゼ遺伝子 | |
| JPS61132178A (ja) | 変異バチルス・ズブチリス | |
| KR20190112484A (ko) | β-아가라아제 DagA 효소의 과발현 유도 기술의 개발 | |
| JPH0587234B2 (ja) | ||
| JPH062050B2 (ja) | 構成性クレアチンアミジノヒドロラーゼを形成する微生物及びその製法 | |
| JPS62262994A (ja) | Ｄ−アミノ酸オキシダ−ゼ遺伝子 | |
| JPS61181374A (ja) | 中性プロテア−ゼの産生法 | |
| JPH0559705B2 (ja) | ||
| JP3489604B2 (ja) | ５−アミノレブリン酸合成酵素遺伝子 | |
| JP2685125B2 (ja) | 新規遺伝子、それを用いた形質転換体及びその利用 | |
| JPH0355107B2 (ja) | ||
| JPH0533033B2 (ja) | ||
| JP2671008B2 (ja) | シクロマルトデキストリングルセノトランスフェラーゼをコードするｄｎａ，それを含む組換えプラスミド及びそのプラスミドを含む形質転換微生物 | |
| JPS6251987A (ja) | サイクロデキストリン グルカノトランスフエラ−ゼの製造法 | |
| JPH07213287A (ja) | 耐熱性ブランチングエンザイム遺伝子、それを含有する組換えプラスミド並びに耐熱性ブランチングエンザイム。 | |
| JP2728784B2 (ja) | 酢酸菌，該酢酸菌由来プラスミド及び該プラスミドから構築されるシャトルベクター | |
| JPH0928379A (ja) | 環状プラスミド | |
| KR20010037651A (ko) | 아스로박터 유레아휘션스로부터 분리된 레반 프룩토트랜스퍼라제 및 이를 이용하여 레반으로부터 디프룩토스 디언하이드라이드 4를 생산하는 방법 | |
| JPH0568567A (ja) | カンジダ・アルビカンス細胞膜（ｈ）ａｔｐアーゼについてコードする遺伝子 | |
| KR20000000623A (ko) | 재조합 대장균을 이용한 키토산아제의 제조방법 | |
| JPH02268685A (ja) | 新規遺伝子、ベクター、それを用いた形質転換体及びその利用 | |
| EP0576899A1 (en) | A gene coding a protein having a lipase activity and a process for producing the same | |
| JPS62122584A (ja) | 形質転換微生物 | |
| JPH0227988A (ja) | ヒトリゾチーム遺伝子の微生物内発現によるヒトリゾチームの大量生産方法 | |
| JPS59154991A (ja) | リボスタマイシン耐性遺伝子およびプラスミド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |