JPS61119195A - クラブラン酸の製法 - Google Patents
クラブラン酸の製法Info
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- JPS61119195A JPS61119195A JP60242586A JP24258685A JPS61119195A JP S61119195 A JPS61119195 A JP S61119195A JP 60242586 A JP60242586 A JP 60242586A JP 24258685 A JP24258685 A JP 24258685A JP S61119195 A JPS61119195 A JP S61119195A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D503/00—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、クラブラン酸およびその医薬上許容される塩
およびエステルの製法に関する。
およびエステルの製法に関する。
発明の背景
クラブラン酸、すなわち、（２Ｒ，５Ｒ，Ｚ）−３−（
２−ヒドロキシエチリデン〕−７−オキソ−４−オキサ
−１−アザビシクロＣ３，２，０］へブタン−２−カル
ボン酸は式： Ｃ０ＯＨ で示される公知の化合物である。
２−ヒドロキシエチリデン〕−７−オキソ−４−オキサ
−１−アザビシクロＣ３，２，０］へブタン−２−カル
ボン酸は式： Ｃ０ＯＨ で示される公知の化合物である。
この化合物、その塩およびエステルはβ−ラクタマーゼ
阻害剤として作用し、グラム陽性およびグラム陰性生物
の両方によって産生されるβ−ラクタマーゼの作用を阻
害する。したがって、これらは、β−ラクタム抗生物質
の不活性化を防ぐために医薬組成物に用いられる。さら
に、クラブラン酸自体が抗菌活性を有するものと考えら
れている。
阻害剤として作用し、グラム陽性およびグラム陰性生物
の両方によって産生されるβ−ラクタマーゼの作用を阻
害する。したがって、これらは、β−ラクタム抗生物質
の不活性化を防ぐために医薬組成物に用いられる。さら
に、クラブラン酸自体が抗菌活性を有するものと考えら
れている。
先行技術
クラブラン酸は種々の微生物株１例えば、ストお
レプトマイセス・クラブリゲルス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ）ＮＲＲＬ３
５８５ （米国特許第４１１０１６５号）、ストレプ
トマイセス・ジュモンジネンシス（Ｓ、ｊｕｍｏｎｊｉ
ｎｅｎｓｉｓ）ＮＲＲＬ ５７４１（英国特許第１５６
３１０３号）、ストレプトマイセス・カツラハマヌス（
Ｓ 、 Ｋａｔ ｓｕｒａｈａｍａｎｕｓ）ＩＦ０１３
７１６（特願昭５８−（１０）９５７９号〕およびスト
レプトマイセス・ニス・ビイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｓｐ、） Ｐ ５６２１ Ｆ ＥＲＭ２８０４
（特開昭５５−１６２９９３号〕のようなストレプトマ
イセス属に属する株から製造されている。
レプトマイセス・クラブリゲルス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ）ＮＲＲＬ３
５８５ （米国特許第４１１０１６５号）、ストレプ
トマイセス・ジュモンジネンシス（Ｓ、ｊｕｍｏｎｊｉ
ｎｅｎｓｉｓ）ＮＲＲＬ ５７４１（英国特許第１５６
３１０３号）、ストレプトマイセス・カツラハマヌス（
Ｓ 、 Ｋａｔ ｓｕｒａｈａｍａｎｕｓ）ＩＦ０１３
７１６（特願昭５８−（１０）９５７９号〕およびスト
レプトマイセス・ニス・ビイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｓｐ、） Ｐ ５６２１ Ｆ ＥＲＭ２８０４
（特開昭５５−１６２９９３号〕のようなストレプトマ
イセス属に属する株から製造されている。
クラブラン酸の収率を増加させるため、醗酵法において
種々の修飾が行なわれている。例えば、英国特許第１５
７１８８８号は−ｐＨを６．３〜６゜７に厳密に調整す
ると収率を著しく増加できることを開示している。
種々の修飾が行なわれている。例えば、英国特許第１５
７１８８８号は−ｐＨを６．３〜６゜７に厳密に調整す
ると収率を著しく増加できることを開示している。
さらに、収率を増加される試みは、しばしば。
精製方法も包含している。例えば、クラブラン酸塩は、
一般に、遊離の酸よりも安定である。したがって、アル
カリ金属塩やアルカリ土類金属塩のｊ、、 ような塩が抽出収率を向上させるために用いられている
。
一般に、遊離の酸よりも安定である。したがって、アル
カリ金属塩やアルカリ土類金属塩のｊ、、 ような塩が抽出収率を向上させるために用いられている
。
米国特許第４１１０１６５号は、クラブラン酸およびそ
の塩の水性相と有機相の間の溶解度の差に基づく抽出を
記載している。抽出後、吸着剤中で数回精製し、したが
って、時間および経費がかかる。
の塩の水性相と有機相の間の溶解度の差に基づく抽出を
記載している。抽出後、吸着剤中で数回精製し、したが
って、時間および経費がかかる。
かくして、有機相からクラブラン酸を直接結晶させるこ
とが望ましい。スペイン特許第４９４４３１号において
、（−ブチルアミンのようなアミ、 、ンを添加し、
ついで、塩基交換によりカリウム塩に変えることにより
、クラブラン酸を有機相から直接結晶化している。
とが望ましい。スペイン特許第４９４４３１号において
、（−ブチルアミンのようなアミ、 、ンを添加し、
ついで、塩基交換によりカリウム塩に変えることにより
、クラブラン酸を有機相から直接結晶化している。
その低溶解度および製剤処方に許容される塩またはエス
テルに容易に変換できることから、リチウム塩もクラブ
ラン酸の調製に有用な中間体と考えられている。例えば
、米国特許第４４９０２９４号はクラブラン酸の溶液と
、水性イオン性リチウム化合物との反応により、クラブ
ラン酸リチウム塩を得ることを開示している。英国特許
第１５４３５６３号は、濾過したブロスの頼粒状炭素へ
の吸着、イオン交換樹脂処理およびクラブラン酸リチウ
ムの結晶化を利用したクラブラン酸リチウムを得る他の
経路を開示している。
テルに容易に変換できることから、リチウム塩もクラブ
ラン酸の調製に有用な中間体と考えられている。例えば
、米国特許第４４９０２９４号はクラブラン酸の溶液と
、水性イオン性リチウム化合物との反応により、クラブ
ラン酸リチウム塩を得ることを開示している。英国特許
第１５４３５６３号は、濾過したブロスの頼粒状炭素へ
の吸着、イオン交換樹脂処理およびクラブラン酸リチウ
ムの結晶化を利用したクラブラン酸リチウムを得る他の
経路を開示している。
醗酵ブロスを樹脂に直接吸着させた後、クラブラン酸リ
チウムをインプロパツールから結晶させることも示唆さ
れている。そのような方法は困難で、低い収率しか与え
ない。
チウムをインプロパツールから結晶させることも示唆さ
れている。そのような方法は困難で、低い収率しか与え
ない。
このように、従来利用できる醗酵および精製法は純度の
低いクラブラン酸を比較的低収率で製造している。
低いクラブラン酸を比較的低収率で製造している。
発明の開示
本発明の第１の態様によれば、本発明は生産微生物によ
る培地中での醗酵によるクラブラン酸の製法を提供する
もので、この方法、においては、少なくとも同化炭素源
の一部を醗酵の間に添加する。
る培地中での醗酵によるクラブラン酸の製法を提供する
もので、この方法、においては、少なくとも同化炭素源
の一部を醗酵の間に添加する。
特定の理論に限定するものではないが、炭素源を調節し
て添加することは異化調節の欠如を導く。
て添加することは異化調節の欠如を導く。
理論１こかかわりすく、醗酵の間、常時、炭素レベルが
比較的高くなるのを注意しながら防止することにより、
著しい改良を達成することができる。
比較的高くなるのを注意しながら防止することにより、
著しい改良を達成することができる。
好ましい態様
好ましくは、同化炭素源のレベルを２％以下、さらに好
ましくは、１％以下１こ保持する（％は、固体炭素源に
ついては重量／容量チ、液体炭素源については容量／容
量％〕。それに対応して、生産培地シこバッチ式で、ま
たは連続的に少量の炭素源を加える。いずれの炭素源の
添加も、好ましくは、培地に対して１％以下、さらに好
ましくは、０．５％以下とする。事実、培地中における
炭素レベルは、好ましくは、０．２５％より低く１例え
ば、＜０．１５％に保持する。
ましくは、１％以下１こ保持する（％は、固体炭素源に
ついては重量／容量チ、液体炭素源については容量／容
量％〕。それに対応して、生産培地シこバッチ式で、ま
たは連続的に少量の炭素源を加える。いずれの炭素源の
添加も、好ましくは、培地に対して１％以下、さらに好
ましくは、０．５％以下とする。事実、培地中における
炭素レベルは、好ましくは、０．２５％より低く１例え
ば、＜０．１５％に保持する。
ポリオールまたは炭水化物を含め、いずれの同化炭素源
も使用でき、特に、化学的番こ明確な炭素源（すなわち
、化学的に公知の構造の炭素化合物）が用いられる。明
確な炭素源は、典型的には、分子量５（１０）より小さ
く、好適には、単糖類、二糖類または線型ポリオールの
ような、分子中の炭素数１２までのものである。このよ
うな化合物の２ 例には、マルトースおよびグ
リセロールが包含される。本発明の他の好ましい形態に
おいては、同化炭素源はデキストリン、澱粉またはデキ
ストリン化澱粉である。さらに一般的には、炭素源は、
通常、水溶性または水混和性である。
も使用でき、特に、化学的番こ明確な炭素源（すなわち
、化学的に公知の構造の炭素化合物）が用いられる。明
確な炭素源は、典型的には、分子量５（１０）より小さ
く、好適には、単糖類、二糖類または線型ポリオールの
ような、分子中の炭素数１２までのものである。このよ
うな化合物の２ 例には、マルトースおよびグ
リセロールが包含される。本発明の他の好ましい形態に
おいては、同化炭素源はデキストリン、澱粉またはデキ
ストリン化澱粉である。さらに一般的には、炭素源は、
通常、水溶性または水混和性である。
現在、ストレプトマイセス・クラブリゲルス、ことに、
ストレプトマイセス・クラブリゲルスＮＲＲ−Ｌ３５８
５の使用が好ましい。そのような微生物について、好ま
しい炭素源には、マルトース、グリセロール、デキスト
リンおよび、所望により、デキストリン化澱粉が包含さ
れる。グルコース、フルクトース、シュークロースおよ
びラクトースはストレプトマイセス・クラブリゲルスに
よって、そんなに容易には同化されず、したがって、そ
のような微生物には、あまり好ましくない。
ストレプトマイセス・クラブリゲルスＮＲＲ−Ｌ３５８
５の使用が好ましい。そのような微生物について、好ま
しい炭素源には、マルトース、グリセロール、デキスト
リンおよび、所望により、デキストリン化澱粉が包含さ
れる。グルコース、フルクトース、シュークロースおよ
びラクトースはストレプトマイセス・クラブリゲルスに
よって、そんなに容易には同化されず、したがって、そ
のような微生物には、あまり好ましくない。
炭素源は、好ましくは、いつでも、炭素源のレベルが２
チを超さないように制御しながら、連続的または間けつ
的に添加できる。例えば、小量の炭素源を一定量づつ計
量する手段を用い、培地１こ連続的に添加できる。連続
添加は、約０．０１〜０゜１％時間の速度で好適に行な
え、さらに好ましくは、約０．５〜１，５％／日、こと
に、約０．０５％／時間である。別法として、添加は所
定の方法に従ってバッチ式で行なうことができる。例え
ば、通常、１分〜６時間ごとの間隔で間けつ的添加を行
なうことができる。１日の合計添加量は０．２５％〜１
．５％とすることができるが、好ましい範囲は０．５〜
１．５％である。
チを超さないように制御しながら、連続的または間けつ
的に添加できる。例えば、小量の炭素源を一定量づつ計
量する手段を用い、培地１こ連続的に添加できる。連続
添加は、約０．０１〜０゜１％時間の速度で好適に行な
え、さらに好ましくは、約０．５〜１，５％／日、こと
に、約０．０５％／時間である。別法として、添加は所
定の方法に従ってバッチ式で行なうことができる。例え
ば、通常、１分〜６時間ごとの間隔で間けつ的添加を行
なうことができる。１日の合計添加量は０．２５％〜１
．５％とすることができるが、好ましい範囲は０．５〜
１．５％である。
添加は一定のパターンに従う必要はない。例えば、０．
５または１％／日の添加を最初の６０時間にわたって維
持し、ついで、残りの醗酵の間、各々、１または０．５
％／日とすることができる。さらに、接種時、培地中に
当初存在する炭素源の量は、好ましくは、０〜２％、さ
らに好ましくは、０〜０．５％、もつとも好ましくは、
０〜０．０５％とすることができる。
５または１％／日の添加を最初の６０時間にわたって維
持し、ついで、残りの醗酵の間、各々、１または０．５
％／日とすることができる。さらに、接種時、培地中に
当初存在する炭素源の量は、好ましくは、０〜２％、さ
らに好ましくは、０〜０．５％、もつとも好ましくは、
０〜０．０５％とすることができる。
炭素源は無菌的な方法で連続的に、または間けつ的に添
加し、この無菌性を保証し、維持する手段を与えること
が好ましい。さらに、固体炭素源は水溶液の状態で加え
ることが好ましい。液体炭素源は直接または適宜希釈し
て加えることができる。
加し、この無菌性を保証し、維持する手段を与えること
が好ましい。さらに、固体炭素源は水溶液の状態で加え
ることが好ましい。液体炭素源は直接または適宜希釈し
て加えることができる。
醗酵培地は、有機窒素源を含む他の適当な培地成分を含
有することができる。このような窒素源は、油質種子、
所望により脱脂されたミール、蛋白氷解物または抽出物
からなる。鉱物塩（特に、塩化物、硫酸塩、炭酸塩また
はリン酸塩）および無機または有機起源の脱泡剤も、他
の公知の培地成分と共に、適宜添加することができる。
有することができる。このような窒素源は、油質種子、
所望により脱脂されたミール、蛋白氷解物または抽出物
からなる。鉱物塩（特に、塩化物、硫酸塩、炭酸塩また
はリン酸塩）および無機または有機起源の脱泡剤も、他
の公知の培地成分と共に、適宜添加することができる。
至適醗酵温度は、通常、２４〜３０℃、好ましくは、２
６〜２８℃であるが、これらの範囲より上または下でも
該醗酵が起るので１本発明では温度は特に限定するもの
ではない。典型的には、醗酵はバッチ系で１日〜複数日
、通常、２４〜２４０時間、特に、１（１０）〜２（１
０）時間行なわれる。
６〜２８℃であるが、これらの範囲より上または下でも
該醗酵が起るので１本発明では温度は特に限定するもの
ではない。典型的には、醗酵はバッチ系で１日〜複数日
、通常、２４〜２４０時間、特に、１（１０）〜２（１
０）時間行なわれる。
本発明におけるもつとも適した醗酵容器は、撹拌および
通気手段を備えた通常の好気的醗酵容器である。このよ
うな容器の容量は１例えば、１１〜２２５Ｒの範囲で変
えることができる。運転容量は、好ましくは、総容量の
２５〜７５％である。
通気手段を備えた通常の好気的醗酵容器である。このよ
うな容器の容量は１例えば、１１〜２２５Ｒの範囲で変
えることができる。運転容量は、好ましくは、総容量の
２５〜７５％である。
ブロスを処理するに際して、好ましくは、まず、固体を
ｐ過または遠心分離により醗酵ブロスから除去する。ま
た、ブロスを声１〜３、好ましくは、約声２の酸性とし
、水非混和性溶媒を加え、例えば、遠心分離により２相
に分け、クラブラン酸を水葬混和相中に得ることにより
、クラブラン酸を抽出することも好ましい。
ｐ過または遠心分離により醗酵ブロスから除去する。ま
た、ブロスを声１〜３、好ましくは、約声２の酸性とし
、水非混和性溶媒を加え、例えば、遠心分離により２相
に分け、クラブラン酸を水葬混和相中に得ることにより
、クラブラン酸を抽出することも好ましい。
本発明はさらに、クラブラン酸をそのリチウム塩として
得、所望番こより、クラブラン酸リチウムをクラブラン
酸の他の塩またはエステルに変える新規方法にも関する
。
得、所望番こより、クラブラン酸リチウムをクラブラン
酸の他の塩またはエステルに変える新規方法にも関する
。
すなわち、さらに詳しくは、本発明の第２の態様によれ
ば。
ば。
（ｉ）溶解した純度の低いクラブラン酸と、溶解した２
−エチルヘキサン酸リチウムを混合しく好ましくは、核
酸および塩の各々は水非混和性溶媒、ざら番こ好ましく
は、同じ溶媒に溶解しである〕、＋ｉ＋クラブラン酸リ
チウムを単離し、＋（ｉｉｉ）所望により、該リチウム
塩を池の塩またはエステル（こ変える。
−エチルヘキサン酸リチウムを混合しく好ましくは、核
酸および塩の各々は水非混和性溶媒、ざら番こ好ましく
は、同じ溶媒に溶解しである〕、＋ｉ＋クラブラン酸リ
チウムを単離し、＋（ｉｉｉ）所望により、該リチウム
塩を池の塩またはエステル（こ変える。
舷
仔 ことからなるクラブラン酸の精製法が
提供される。
提供される。
この方法により、向上した収率および純度が得られる。
この方法はクラブラン酸醗酵ブロスの精製に一般的に適
用できるが、ことに、本発明の第１の態様の方法によっ
て得られた抽出物を精製するために研究されたものであ
る。前記のごとく、そのような醗酵から、工程１ｉ＋で
用いるのに適したクラブラン酸の水非混和性溶媒溶液を
容易に得ることができる。
用できるが、ことに、本発明の第１の態様の方法によっ
て得られた抽出物を精製するために研究されたものであ
る。前記のごとく、そのような醗酵から、工程１ｉ＋で
用いるのに適したクラブラン酸の水非混和性溶媒溶液を
容易に得ることができる。
好ましい有機溶媒は酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸アミ
ル、メチルイソブチルケトンまたはｎ −ブチルアルコ
ールでありｖｎ−ブチルアルコールからっとも好ましい
。ブロスの抽出は、好ましくは、クラブラン酸の分解に
よる損失を最小にするため、４〜１０℃の温度で行なう
。
ル、メチルイソブチルケトンまたはｎ −ブチルアルコ
ールでありｖｎ−ブチルアルコールからっとも好ましい
。ブロスの抽出は、好ましくは、クラブラン酸の分解に
よる損失を最小にするため、４〜１０℃の温度で行なう
。
抽出後、公知の方法で適宜調製した２−エチルヘキサン
酸リチウム溶液の添加により、結晶化を行なうことがで
きる。好ましくは、有機溶媒中のクラブラン酸の濃度は
１０η／ Ｒ１以上である。結晶化は低温、通常、４〜
１０℃でもつとも良好ｔこ行なわれる。クラブラン酸リ
チウムは１／４分子 １．。
酸リチウム溶液の添加により、結晶化を行なうことがで
きる。好ましくは、有機溶媒中のクラブラン酸の濃度は
１０η／ Ｒ１以上である。結晶化は低温、通常、４〜
１０℃でもつとも良好ｔこ行なわれる。クラブラン酸リ
チウムは１／４分子 １．。
の水と共に結晶化するので、結晶化は、有機溶媒中２〜
４チのような、少量の水の存在下で行なうことが好まし
い。過剰の２−エチルヘキサン酸リチウムを用いること
が好ましい。添加は撹拌、冷却下、ゆっくりと行なうこ
とかで、きる。撹拌は、全ての２−エチルヘキサン酸リ
チウムを添加後、さらにある時間維持することが望まし
い。
４チのような、少量の水の存在下で行なうことが好まし
い。過剰の２−エチルヘキサン酸リチウムを用いること
が好ましい。添加は撹拌、冷却下、ゆっくりと行なうこ
とかで、きる。撹拌は、全ての２−エチルヘキサン酸リ
チウムを添加後、さらにある時間維持することが望まし
い。
生成したクラブラン酸リチウムは、さらに処理すること
ができ、好ましくは、ガラス・プレートを通して濾過し
、イソプロパツール、アセトンおよびエーテルで洗浄し
、真空下で乾燥する。
ができ、好ましくは、ガラス・プレートを通して濾過し
、イソプロパツール、アセトンおよびエーテルで洗浄し
、真空下で乾燥する。
クラブラン酸リチウムは再結晶できる。再結晶は水性ク
ラブラン酸リチウムに、該リチウム塩の溶解度が非常に
低い有機溶媒、好ましくは、イソプロパツールを過剰に
加えて行なうことができる。
ラブラン酸リチウムに、該リチウム塩の溶解度が非常に
低い有機溶媒、好ましくは、イソプロパツールを過剰に
加えて行なうことができる。
別法として、かつ、より好ましくは、他のリチウム塩の
濃厚溶液を水性クラブラン酸リチウムに加えて再結晶を
生じさせる。適当なリチウム塩には水に対する溶解度の
高い有機または無１ｆｉ ＩＪチウム塩が包含される。
濃厚溶液を水性クラブラン酸リチウムに加えて再結晶を
生じさせる。適当なリチウム塩には水に対する溶解度の
高い有機または無１ｆｉ ＩＪチウム塩が包含される。
塩化リチウムがもつとも好ましい。好適には、該リチウ
ム塩溶液の濃度は５０％以上であり、最終濃度が２５％
以上になるような充分量加える。リチウム塩溶液の添加
は、好ましくは、クラブラン酸リチウム溶液を撹拌しな
がらゆっくりと行なう。
ム塩溶液の濃度は５０％以上であり、最終濃度が２５％
以上になるような充分量加える。リチウム塩溶液の添加
は、好ましくは、クラブラン酸リチウム溶液を撹拌しな
がらゆっくりと行なう。
再結晶したクラブラン酸リチウムは、さらに精製でき、
例えば、戸別し、アセトンで洗浄し、真空下で乾燥し、
これにより、８０％以上の収率と２８５％以上の純度が
得られる。
例えば、戸別し、アセトンで洗浄し、真空下で乾燥し、
これにより、８０％以上の収率と２８５％以上の純度が
得られる。
本発明によって調製されたクラブラン酸リチウムは、所
望のカチオンの型、好ましくは、ナトリウムまたはカリ
ウム型のカチオン交換樹脂を用い、水で溶出するイオン
交換操作により、他の塩に変えることができる。さらに
、エステルは公知の方法により調製することができる。
望のカチオンの型、好ましくは、ナトリウムまたはカリ
ウム型のカチオン交換樹脂を用い、水で溶出するイオン
交換操作により、他の塩に変えることができる。さらに
、エステルは公知の方法により調製することができる。
リチウム塩形成の代りに、あるいは、シ番スしばそれに
加えて、本発明はさらに、より高い交換樹脂容量を可能
番こするイオン交換樹脂を用いるクラブラン酸の抽出に
おける一連の改良を提供Ｔる。
加えて、本発明はさらに、より高い交換樹脂容量を可能
番こするイオン交換樹脂を用いるクラブラン酸の抽出に
おける一連の改良を提供Ｔる。
適当な樹脂の例は、例えば、英国特許第１５４３５６３
号に記載されている。該樹脂は、好ましくは、ＩＲＡ−
６８型の弱塩基性イオン交換樹脂で。
号に記載されている。該樹脂は、好ましくは、ＩＲＡ−
６８型の弱塩基性イオン交換樹脂で。
好ましくは、アセテート型である。
醗酵フロスをイオン交換樹脂に吸着し、リチウム塩で溶
出させ、ついで、例えば、インプロパツールから結晶さ
せて、クラブラン酸リチウムの良好な結晶化を行なうた
め、好適（こは、醗酵ブロスは８（１０）μｙｌｒｔｔ
ｌ ｎ上のクラブラン酸の初期活性を有する。
出させ、ついで、例えば、インプロパツールから結晶さ
せて、クラブラン酸リチウムの良好な結晶化を行なうた
め、好適（こは、醗酵ブロスは８（１０）μｙｌｒｔｔ
ｌ ｎ上のクラブラン酸の初期活性を有する。
ブロスを樹脂に吸着させる前に清澄化を行なうことが好
ましい。
ましい。
本発明の第３の態様によれば、醗酵ブロスを凝集剤で処
理して菌糸を凝集させる。
理して菌糸を凝集させる。
菌糸の凝集は濾過をより良好にする。適当な凝集剤はフ
ィルター・コアシュバント、プラエストール（西独バイ
エルＡＧの商標Ｐｒａｅｓｔｏｌ）である。コアシュバ
ントは、好ましくは、０．１〜０．５チの濃度でブロス
に加え、濾過前に、約１５分間撹拌する。濾過自体は、
好適には、ブフナーＰ斗１１ 中、ダイカラ
イド（ダイカライド・リミテッドの商標Ｄｉｃａｌ １
ｔｅ）のような無機Ｐ材（典型的には約６％Ｗ／ｖ）の
ベッドを通して行なう。もし。
ィルター・コアシュバント、プラエストール（西独バイ
エルＡＧの商標Ｐｒａｅｓｔｏｌ）である。コアシュバ
ントは、好ましくは、０．１〜０．５チの濃度でブロス
に加え、濾過前に、約１５分間撹拌する。濾過自体は、
好適には、ブフナーＰ斗１１ 中、ダイカラ
イド（ダイカライド・リミテッドの商標Ｄｉｃａｌ １
ｔｅ）のような無機Ｐ材（典型的には約６％Ｗ／ｖ）の
ベッドを通して行なう。もし。
１回の濾過で良好に清澄化しない場合、同じグイカライ
ド層を通して再濾過できる。ブロスはまた。
ド層を通して再濾過できる。ブロスはまた。
濾過後、遠心分離（典型的には１（１０）（１０） ｒ
ｐｍで３０分間）によっても清澄化できる。
ｐｍで３０分間）によっても清澄化できる。
本発明のもう１つの改良は、濾過したブロスの除蛋白に
よるイオン交換樹脂の吸着能の増大であるっ 除蛋白は、好ましくは、酸性化、通常２約ｐＨ４までの
酸性化、あるいは、アセトンのような沈澱溶媒による処
理で行なう。
よるイオン交換樹脂の吸着能の増大であるっ 除蛋白は、好ましくは、酸性化、通常２約ｐＨ４までの
酸性化、あるいは、アセトンのような沈澱溶媒による処
理で行なう。
本発明の一具体例において、濾過したブロスのｐＨは、
塩酸または硫酸のような鉱酸で約４．０に調整する。声
を調整したら、上澄液を樹脂に吸着させる。−６におけ
るアセテート型の樹脂の吸着能はこのよう番こして増大
させる。濾過ブロス：樹脂（Ｖ／Ｖ）の好ましい比率は
１０二１１２を下である。
塩酸または硫酸のような鉱酸で約４．０に調整する。声
を調整したら、上澄液を樹脂に吸着させる。−６におけ
るアセテート型の樹脂の吸着能はこのよう番こして増大
させる。濾過ブロス：樹脂（Ｖ／Ｖ）の好ましい比率は
１０二１１２を下である。
濾過ブロスはアセトンのような沈澱溶媒で処理しても除
蛋白できる。本発明の具体例において、
（□ブロス１容を約１容のアセトンと混合する。好まし
くは、ブロスをアセトンと共に５〜１０分間撹拌し、２
０分間放置し、沈澱を遠心分離または濾過で分離する。
蛋白できる。本発明の具体例において、
（□ブロス１容を約１容のアセトンと混合する。好まし
くは、ブロスをアセトンと共に５〜１０分間撹拌し、２
０分間放置し、沈澱を遠心分離または濾過で分離する。
このように清澄化されたブロスが樹脂に吸着させるのに
適している。アセトンは、ブロス吸着前、？ｔｉ、圧下
、蒸留により回収できる。
適している。アセトンは、ブロス吸着前、？ｔｉ、圧下
、蒸留により回収できる。
アセトンを回収し、または回収せずして、濾過ブロスは
、著しい損失なしに１０＝１〜１２：１の割合（濾過ブ
ロスの当りの容量：樹脂の容量）で樹脂に吸着できる。
、著しい損失なしに１０＝１〜１２：１の割合（濾過ブ
ロスの当りの容量：樹脂の容量）で樹脂に吸着できる。
イオン交換樹脂の溶出液からのクラブラン酸リチウムの
結晶化は、従来、ガムの形成および、いくつかの場合に
は、低純度をもたらしていた。この問題を最少にするた
め、５％塩叱リチウムのようなリチウム塩での溶出前に
、樹脂を０．５％塩化すｌ−ＩＪウム、ついで水で洗浄
または予備洗浄することが好ましい。
結晶化は、従来、ガムの形成および、いくつかの場合に
は、低純度をもたらしていた。この問題を最少にするた
め、５％塩叱リチウムのようなリチウム塩での溶出前に
、樹脂を０．５％塩化すｌ−ＩＪウム、ついで水で洗浄
または予備洗浄することが好ましい。
クラブラン酸リチウムの結晶化は、アセトンでの溶出液
の処理により、さらに改良できる。樹脂からの溶出液を
、例えば、２容のアセトンと共に撹拌し、１５分間放置
する。沈澱を遠心分離し、アセトンを除去後、インプロ
パツールからクラブラン酸リチウムを結晶化させる。
の処理により、さらに改良できる。樹脂からの溶出液を
、例えば、２容のアセトンと共に撹拌し、１５分間放置
する。沈澱を遠心分離し、アセトンを除去後、インプロ
パツールからクラブラン酸リチウムを結晶化させる。
より一般的には１本発明は医薬として処方するのに適し
た形のクラブラン酸、その塩およびエステルを容易に与
えることができる。
た形のクラブラン酸、その塩およびエステルを容易に与
えることができる。
実施例
つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが
、これらに限定されるものではない。
、これらに限定されるものではない。
実施例１
つぎの組成の培地を調製した。
フィッシュ・ミール ２．０ｙグリ
セロール １．５ｙ可溶性澱粉
１．５ｆＪ炭酸カルシウ
ム ０．２１蒸留水
１（１０）ａＪに調製ｐＨを７に調整し
、４Ｏａｌづつを２５０ｍ１！エルレンマイヤー・フラ
スコに入れ、滅菌した。
セロール １．５ｙ可溶性澱粉
１．５ｆＪ炭酸カルシウ
ム ０．２１蒸留水
１（１０）ａＪに調製ｐＨを７に調整し
、４Ｏａｌづつを２５０ｍ１！エルレンマイヤー・フラ
スコに入れ、滅菌した。
ついで、この培地にストレプトマイセス・クラブリゲル
スＮＲＲＬ３８５８の胞子懸濁液を接種し、撹拌下２２
８℃で２日間培養した。この培養物を、２１エルレンマ
イヤー・フラスコ中、５（１０）ｒｕｇの同じ培地に２
チの濃度で接種した。ロータリー・シェーカー上、同様
に２８℃で２日間培養した。
スＮＲＲＬ３８５８の胞子懸濁液を接種し、撹拌下２２
８℃で２日間培養した。この培養物を、２１エルレンマ
イヤー・フラスコ中、５（１０）ｒｕｇの同じ培地に２
チの濃度で接種した。ロータリー・シェーカー上、同様
に２８℃で２日間培養した。
得られた培養物５（１０） ａｔｅを、撹拌、通気およ
び温度調節装置を付した３４０１！のステンレス・スチ
ール容器に接種した。容器ｆこは、っぎの組成の滅菌培
地１（１０）１！を入れた。
び温度調節装置を付した３４０１！のステンレス・スチ
ール容器に接種した。容器ｆこは、っぎの組成の滅菌培
地１（１０）１！を入れた。
大豆ミール ３％コーン
・デキストリン ３％大豆油
０．５チＫＨ２ＰＯ４０
，１％ 脱泡剤〔ニーコン（ｕｃｏｎ）］ Ｏ，ＯＯ
５％水道水 最終審”量まで
接種した培地を２８°℃で、撹拌下、空気を送りなから
４５時間培養した。ついで、さらに、同じ培地１５０１
！を用い、３４０１！容器中で７％の濃ぺ ａ 度で接種した。培養は撹拌下、通気しな
がら２８℃で３０時間行なった。
・デキストリン ３％大豆油
０．５チＫＨ２ＰＯ４０
，１％ 脱泡剤〔ニーコン（ｕｃｏｎ）］ Ｏ，ＯＯ
５％水道水 最終審”量まで
接種した培地を２８°℃で、撹拌下、空気を送りなから
４５時間培養した。ついで、さらに、同じ培地１５０１
！を用い、３４０１！容器中で７％の濃ぺ ａ 度で接種した。培養は撹拌下、通気しな
がら２８℃で３０時間行なった。
終了後、この培養物を、タンクに入れたクラブラン酸生
産培地に７チの濃度で接種した。タンクは総容量８（１
０）１！で、４２５ｅのつぎの培地を入れた。
産培地に７チの濃度で接種した。タンクは総容量８（１
０）１！で、４２５ｅのつぎの培地を入れた。
大豆ミール １，２５％落花
生ミール １．２５％デイステ
イラーズ乾燥グレイン ０．５％Ｋ Ｈ２Ｐ
Ｏ４０，１％ 脱泡剤（ニーコン） ０．（１０）５
％水道水 最終容量まで滅菌
は、ｐＨ６，７に調整後、１２１℃で２０分間行なった
。グリセロールを１時間ごとに、つぎのように間けつ的
に加えた。
生ミール １．２５％デイステ
イラーズ乾燥グレイン ０．５％Ｋ Ｈ２Ｐ
Ｏ４０，１％ 脱泡剤（ニーコン） ０．（１０）５
％水道水 最終容量まで滅菌
は、ｐＨ６，７に調整後、１２１℃で２０分間行なった
。グリセロールを１時間ごとに、つぎのように間けつ的
に加えた。
０〜１２ １８０ ０．５％１３〜９
６ １９０ ３．７％９７〜１６０
１（１０） １．５％−醗酵は撹拌下、
通気しながら２６℃で行なった。
６ １９０ ３．７％９７〜１６０
１（１０） １．５％−醗酵は撹拌下、
通気しながら２６℃で行なった。
１６０時間後１２．ア、７酸。濃度、よ、４ｏ３□
′／ｄもの高濃度であった。
′／ｄもの高濃度であった。
実施例２および３、比較例１および２
醗酵の間にグリセロールを徐々に加える効果を、醗酵の
開始時点で全てのグリセロールを含有させる場合の効果
と直接比較した。
開始時点で全てのグリセロールを含有させる場合の効果
と直接比較した。
つぎの表に結果を示す。
同化炭素源を醗酵の間に加えた場合、著しい生産の向上
が認められる。
が認められる。
実施例４
実施例１と同じ醗酵生産培地４０／に７５１ファーメン
タ−中で同じ接種物を接種した。５０％７ ｋ ｌ−−
スの滅菌水性溶液を、１日８（１０）ｍＡ’の割合（１
チマルト一ス／日）で１１２時間、連続添加ダイアフラ
ム・ポンプを用い、連続的に添加し、ついで、ブロスを
収集した。ファーメンタ−は常法番こより、撹拌し、通
気した。１１２時間後、ブロス中で観察されたクラブラ
ン酸の濃度は１４２４μｆ／ｄ であった。
タ−中で同じ接種物を接種した。５０％７ ｋ ｌ−−
スの滅菌水性溶液を、１日８（１０）ｍＡ’の割合（１
チマルト一ス／日）で１１２時間、連続添加ダイアフラ
ム・ポンプを用い、連続的に添加し、ついで、ブロスを
収集した。ファーメンタ−は常法番こより、撹拌し、通
気した。１１２時間後、ブロス中で観察されたクラブラ
ン酸の濃度は１４２４μｆ／ｄ であった。
実施例５
ｎ−ブタノール７．５１を実施例１の濾過ブロス７．５
１！に加え、冷４Ｎ硫酸でＰＨ２に調整した。混合液を
１６（１０）０ＩＪで遠心分離し、水性相とブタノール
相の２相に分離した。ブタノール相を減圧下、３５℃で
２（１０）１１Ｌｅに濃縮した。
１！に加え、冷４Ｎ硫酸でＰＨ２に調整した。混合液を
１６（１０）０ＩＪで遠心分離し、水性相とブタノール
相の２相に分離した。ブタノール相を減圧下、３５℃で
２（１０）１１Ｌｅに濃縮した。
このようにして濃度２６．７ ’９／ｒｕｇのｎ−ブタ
ノール２（１０）ｍ１中のクラブラン酸溶液を得た。
ノール２（１０）ｍ１中のクラブラン酸溶液を得た。
水５ａｌを加え、水分濃度を２．５２％とした。この溶
液に、撹拌下、ｎ−ブタノール中、２−エチルヘキサン
酸リチウムの１０％溶１ｌ１（１０）ａを加えた。
液に、撹拌下、ｎ−ブタノール中、２−エチルヘキサン
酸リチウムの１０％溶１ｌ１（１０）ａを加えた。
全体を１５０ｙｔｌに濃翻し、５℃で２時間撹拌し、濾
過プレートで濾過した。得られた結晶をインプロパツー
ル１（１０）ｍＣアセトン１（１０）扉ｅ１ついで。
過プレートで濾過した。得られた結晶をインプロパツー
ル１（１０）ｍＣアセトン１（１０）扉ｅ１ついで。
エーテル１（１０）Ｒ１で洗浄し、真空下、４０℃で乾
燥して生成物７．５７１を得た。純度５４％、水分３．
２％、灰分（硫酸リチウムとして）２３．５％実施例６ 実施例５で得られたクラブラン酸１０ノを水５０＃！ｅ
に溶解し、撹拌下、塩化リチウムの５０％Ｗ／Ｖ溶液７
５ｍ／をゆっくりと添加する。結晶化が始まり、混合物
を５℃で３０分間撹拌し、ガラスフラスコに濾過し、ア
セトンで洗浄し、真空下、４０℃で乾燥し、生成物５．
２７ｐを得た。収￥Ａ８４％、純度８０％ 再結晶したクラブラン酸リチウムの物性はっぎのとおり
である。
燥して生成物７．５７１を得た。純度５４％、水分３．
２％、灰分（硫酸リチウムとして）２３．５％実施例６ 実施例５で得られたクラブラン酸１０ノを水５０＃！ｅ
に溶解し、撹拌下、塩化リチウムの５０％Ｗ／Ｖ溶液７
５ｍ／をゆっくりと添加する。結晶化が始まり、混合物
を５℃で３０分間撹拌し、ガラスフラスコに濾過し、ア
セトンで洗浄し、真空下、４０℃で乾燥し、生成物５．
２７ｐを得た。収￥Ａ８４％、純度８０％ 再結晶したクラブラン酸リチウムの物性はっぎのとおり
である。
ＩＲ（ｃｌＩ 、ヌジＥｌ −／ｌ／ ） ：３４２
０．３０１０ 。
０．３０１０ 。
１７６５．１６８０，１６２０，１４（１０），１３４
０．１３２５．１３（１０）．１２２０．１２（１０）
゜１１３０．１１（１０），１０６０，１０５０，１０
２０．９９０．９７０．９５０．９（１０）．８８０゜
８５０．７３０．７０８＞ ２吐ｃｔ ＩＩ
） ＝ ４５１ （Ｃ＝ １４５μｆｉ’／Ｋｅ、水）
ＵＶ −＝２５９ （Ｃ＝ １０ｕｆ／ｍｌ、０．ｌＮ
Ｎａ０Ｈ）（吸光モル係数ε＝１９４５１） リチウム含量（吸収による）＝３．３％灰分＝２６．５
％（硫酸リチウムとして〕実施例７ 実施例１または４で得られた全醗酵ブロス８（１０）０
ｔｔｔｌＣクラブラン酸の活性１２８０ ａｆ／ｍｅ
）を０．５％プラエストールのようｆＡ Ｉ濾過コアシ
ュバントと共に１５分間撹拌した。ブロスを５：ｌ（ｗ
／ｖ）の比率でダイカライドと混合し、ｐ紙でブフナー
フラスコ中に注意しながら濾過した。
０．１３２５．１３（１０）．１２２０．１２（１０）
゜１１３０．１１（１０），１０６０，１０５０，１０
２０．９９０．９７０．９５０．９（１０）．８８０゜
８５０．７３０．７０８＞ ２吐ｃｔ ＩＩ
） ＝ ４５１ （Ｃ＝ １４５μｆｉ’／Ｋｅ、水）
ＵＶ −＝２５９ （Ｃ＝ １０ｕｆ／ｍｌ、０．ｌＮ
Ｎａ０Ｈ）（吸光モル係数ε＝１９４５１） リチウム含量（吸収による）＝３．３％灰分＝２６．５
％（硫酸リチウムとして〕実施例７ 実施例１または４で得られた全醗酵ブロス８（１０）０
ｔｔｔｌＣクラブラン酸の活性１２８０ ａｆ／ｍｅ
）を０．５％プラエストールのようｆＡ Ｉ濾過コアシ
ュバントと共に１５分間撹拌した。ブロスを５：ｌ（ｗ
／ｖ）の比率でダイカライドと混合し、ｐ紙でブフナー
フラスコ中に注意しながら濾過した。
ブロスをろ過、清澄化した後、声を４．０に調整して除
蛋白した。沈澱を遠心分離した。濾過ブロス：樹脂の比
率ＩＱ：ｌ（ｖ／ｖ）のカラム中、塩基性ＩＲＡ−５３
樹脂に１ｌｆ（５，Ｑで上澄液を吸着させた。
蛋白した。沈澱を遠心分離した。濾過ブロス：樹脂の比
率ＩＱ：ｌ（ｖ／ｖ）のカラム中、塩基性ＩＲＡ−５３
樹脂に１ｌｆ（５，Ｑで上澄液を吸着させた。
この樹脂はアセテート型のｐＨ４，０のものであった。
ブロスを吸着させたら、樹脂を０゜５％塩化ナトリウム
、ついで水で洗浄した。塩化リチウムを用い、クラブラ
ン酸をリチウム塩として溶出した。
、ついで水で洗浄した。塩化リチウムを用い、クラブラ
ン酸をリチウム塩として溶出した。
樹脂の溶出液５１０Ｒｇ（クラブラン酸の活性＝４５（
１０）μｆ／／ａｔ ）をアセトン２容で処理し、沈澱
□を遠心分離する。上置液をインプロパ
ツール５容と混合し、再度、沈澱を遠心分離した。上澄
液を！）ＭＬ、、４℃で２４時間、リチウム塩を結晶さ
せた。収量１１８２ＩＩＩＰ、収率１１．５％、純度９
６．９２％ 実施例８ 実施例７と同様に、全醗専ブロス５（１０）０ａｉ（ク
ラブラン酸の活性１３９６μｙ／ｒｕｅ ）をろ過した
。
１０）μｆ／／ａｔ ）をアセトン２容で処理し、沈澱
□を遠心分離する。上置液をインプロパ
ツール５容と混合し、再度、沈澱を遠心分離した。上澄
液を！）ＭＬ、、４℃で２４時間、リチウム塩を結晶さ
せた。収量１１８２ＩＩＩＰ、収率１１．５％、純度９
６．９２％ 実施例８ 実施例７と同様に、全醗専ブロス５（１０）０ａｉ（ク
ラブラン酸の活性１３９６μｙ／ｒｕｅ ）をろ過した
。
連続撹拌下、ｐ液をアセトン１容と混合し、１５〜２０
分間沈澱させる。沈澱を遠心分離して除去し、アセトン
をロータリーエバポレータで除去した。
分間沈澱させる。沈澱を遠心分離して除去し、アセトン
をロータリーエバポレータで除去した。
清澄化したブロスを実施例７と同様に、ＩＲＡ−６８イ
オン交換樹脂に吸着させた（ブロス：樹脂比ＩＱ：ｌｖ
／ｖ）。同様に、樹脂を、洗浄し、インプロパツールか
ら結晶させるため、クラブラン酸リチウムを溶出させた
。収率は２０％であった。溶出液を２つのフラクション
に分ｍした。第１のフラクションは、生成物６５０岬を
与えた（純度６９．３％、総収率９％）。第２のフラク
ションは生成物７７０１ｒ９を与えた（純度９８％、総
収率１１％）。
オン交換樹脂に吸着させた（ブロス：樹脂比ＩＱ：ｌｖ
／ｖ）。同様に、樹脂を、洗浄し、インプロパツールか
ら結晶させるため、クラブラン酸リチウムを溶出させた
。収率は２０％であった。溶出液を２つのフラクション
に分ｍした。第１のフラクションは、生成物６５０岬を
与えた（純度６９．３％、総収率９％）。第２のフラク
ションは生成物７７０１ｒ９を与えた（純度９８％、総
収率１１％）。
純度６９．３％の結晶クラブラン酸リチウムは。
リチウム５チおよび、硫酸リチウムとして灰分３５．４
チを含有していた。クラブラン酸リチウムを５５％塩化
リチウムから再結晶させて、つぎの物性の生成物を得た
。
チを含有していた。クラブラン酸リチウムを５５％塩化
リチウムから再結晶させて、つぎの物性の生成物を得た
。
ｇ＝１５９０８（（ＩＩＮ Ｎａ０Ｈ）リチウム含量
＝３．６％ 灰分＝２５％（硫酸リチウムとして） 純度＝９５％ ＩＲ（ヌジョール、０１１’）３４３０．３０１０゜１
７６０．１６８０，１６１５，１３７５，１３（１０）
．１２１０，１１３０，１１０５，１０６５゜１０５０
．１０３０，９９５，９８０，９５０゜９（１０）．８
８５．８５５．７４０．７１０実施例９・ 全ブロス４（１０）０ａＡ’（クラブ５７酸３（１０）
ｕｌ／／ｌｎｌ ）をプラエストールで処理し、実施
例７と同様に濾過する。ブロスをｐＨ５，Ｑで清澄化し
、混合比４０：１（濾過ブロス容量：樹脂容量）でＩＲ
Ａ−６８およびＸＡＤ−２樹脂の混合カラムを通した。
＝３．６％ 灰分＝２５％（硫酸リチウムとして） 純度＝９５％ ＩＲ（ヌジョール、０１１’）３４３０．３０１０゜１
７６０．１６８０，１６１５，１３７５，１３（１０）
．１２１０，１１３０，１１０５，１０６５゜１０５０
．１０３０，９９５，９８０，９５０゜９（１０）．８
８５．８５５．７４０．７１０実施例９・ 全ブロス４（１０）０ａＡ’（クラブ５７酸３（１０）
ｕｌ／／ｌｎｌ ）をプラエストールで処理し、実施
例７と同様に濾過する。ブロスをｐＨ５，Ｑで清澄化し
、混合比４０：１（濾過ブロス容量：樹脂容量）でＩＲ
Ａ−６８およびＸＡＤ−２樹脂の混合カラムを通した。
当初のクラブラン酸活性の実質的；こ１（１０）％を含
有するプレカラム溶出物をブロス：樹脂比１０：ｌ（ｖ
／ｖ）でカラムに吸着させた。樹脂を０゜５％塩化ナト
リウム、ついで水で洗浄した。
有するプレカラム溶出物をブロス：樹脂比１０：ｌ（ｖ
／ｖ）でカラムに吸着させた。樹脂を０゜５％塩化ナト
リウム、ついで水で洗浄した。
クラブラン酸リチウムを塩化リチウムで溶出させた。
クラブラン酸塩が溶出したら、実施例７と同様に、第１
の生成物１８１■（純度９５．３％、収率１５゜０８％
）を得た。物性は実施例７の生成物と同様であった。
の生成物１８１■（純度９５．３％、収率１５゜０８％
）を得た。物性は実施例７の生成物と同様であった。
実施例１０〜１５
ＩＲＡ−６８樹脂アセテート型にブロスの吸着の一部と
して、異なった処理を試みた。実施例１０では、ブロス
をろ過し、樹脂処理を作用した。実施例１１では、まず
、樹脂を塩化す） ＩＪウム溶液で洗浄した。実施例１
２では、ブロスをコアシュｊ バントと共
に濾過した。実施例１３では、実施例１２の操作に加え
て、Ｉｆ″Ｉ４でブロスの除蛋白を行なった。実施例１
４では、実施例１２の操作に加えて、アセトンでブロス
を除蛋白した。実施例１５では、実施例１３の操作を加
えて、アセトンで溶出液を後処理した。
して、異なった処理を試みた。実施例１０では、ブロス
をろ過し、樹脂処理を作用した。実施例１１では、まず
、樹脂を塩化す） ＩＪウム溶液で洗浄した。実施例１
２では、ブロスをコアシュｊ バントと共
に濾過した。実施例１３では、実施例１２の操作に加え
て、Ｉｆ″Ｉ４でブロスの除蛋白を行なった。実施例１
４では、実施例１２の操作に加えて、アセトンでブロス
を除蛋白した。実施例１５では、実施例１３の操作を加
えて、アセトンで溶出液を後処理した。
最適な方法は、コアシュバントの存在下における濾過、
ＰＨ４，０における除蛋白および結晶化（こ先立つアセ
トン処理を包含する。
ＰＨ４，０における除蛋白および結晶化（こ先立つアセ
トン処理を包含する。
実施例１６および１７
前記の実施例の方法は、まず、濾過ブロスをＩＲＡ−５
３樹脂またはＩＲＡ−６８とＸＡＳ−２混合樹脂のプレ
カラムに通し、ＰＨ４，０にて、も １）施例
１６では、プレカラム処理か実施例１２の操作に含まれ
、実施例１７では、ｐＨ４における除蛋白およびアセト
ン後処理が実施例１２の操作に包含されていた。
３樹脂またはＩＲＡ−６８とＸＡＳ−２混合樹脂のプレ
カラムに通し、ＰＨ４，０にて、も １）施例
１６では、プレカラム処理か実施例１２の操作に含まれ
、実施例１７では、ｐＨ４における除蛋白およびアセト
ン後処理が実施例１２の操作に包含されていた。
実施例１６および１７では、樹脂の吸着能の増加および
目的生成物のより良好な収率および純度が得られた。
目的生成物のより良好な収率および純度が得られた。
特許出願人 アンナビオチコス・ソシエタート・γノ
ニマ
ニマ
Claims (10)
- （１）同化炭素源の少なくとも一部を醗酵の間に添加す
ることを特徴とする生産微生物による培地中での醗酵に
よるクラブラン酸の製法。 - （２）同化炭素源のレベルを２％以下に保つ前記第（１
）項の製法。 - （３）生産醗酵の間、炭素レベルを０．２５％以下に保
つ前記第（２）項の製法。 - （４）炭素源が、少なくとも、グリセロールおよびマル
トースのうちの１つからなる前記第（１）項〜第（３）
項いずれか１つの製法。 - （５）炭素源を０．５〜１．５％／日の速度で連続的ま
たは間けつ的に添加する前記第（１）項〜第（４）項い
ずれか１つの製法。 - （６）炭素源を約０．０５％／時間の速度で添加する前
記第（５）項の製法。 - （７）（ｉ）純度の低いクラブラン酸溶液を２−エチル
ヘキサン酸リチウム溶液と混合し、 （ｉｉ）クラブラン酸リチウムを単離し、 （ｉｉｉ）所望により、リチウム塩を他の塩またはエス
テルに変える、 工程を用いてクラブラン酸を溶液から精製する前記第（
１）項〜第（６）項いずれか１つの製法。 - （８）イオン交換樹脂を用いてクラブラン酸を精製する
前記第（１）項〜第（７）項いずれか１つの製法。 - （９）醗酵ブロスを凝集剤で処理して菌糸を凝集させる
前記第（１）項〜第（８）項いずれか１つの製法。 - （１０）醗酵ブロスをろ過し、除蛋白する前記第（１）
項〜第（９）項いずれか１つの製法。
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